原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中Tim-1表达增高及其意义

目的 检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血Tim-1,IFN-γ和IL-4的表达水平,分析其相关性,初步探讨Tim-1在PBC诊治中的临床意义。方法 收集2013年6月～2015年11月来长海医院就诊的32例PBC患者和32例同期就诊的健康成人的外周血,分离外周血单个核细胞(PBMC),反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法检测PBMC中Tim-1 mRNA,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆中Tim-1蛋白表达量,对Tim-1和IFN-γ,IL-4之间的关系进行Pearson相关性分析。结果患者组和对照组Tim-1 mRNA分别为0.63±0.40和0.36±0.32,差异具有统计学意义(t=3.005,P=0.003,P<0.01)。患者组与对照组Tim-1蛋白表达水平分别为62.72±38.60和35.66±30.55 pg/ml(t=3.11,P=0.002 8),IFN-γ表达水平分别为200.81±18.06和79.23±20.02 pg/ml(t=25.51,P<0.000 1),IL-4表达水平分别为99.22±14.67和30.18±20.56 pg/ml,差异均具有统计学意义(t=15.46,P<0.000 1)。Pearson相关分析结果提示Tim-1与IFN-γ呈负相关(r=-0.552,P=0.001 1),与IL-4呈正相关(r=0.652,P<0.000 1)。结论Tim-1可能参与了PBC的发病机制,是该病潜在的标志物和治疗靶点。     

免疫性血小板减少症患者外周血中滤泡辅助性T细胞和IL-21的水平及临床意义

目的探讨滤泡辅助性T细胞(Tfh细胞)和IL-21在免疫性血小板减少症(ITP)中的作用。方法采集15例ITP患者及20例健康对照者外周血,用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR5+CD4+Tfh细胞的百分率,ELISA法检测血清IL-21水平;用实时荧光定量PCR检测PBMC中IL-21 mRNA的表达。结果 ITP组PBMC中CXCR5+CD4+Tfh细胞比例(17.55±1.015)%显著高于健康人对照组(10.19±0.343)%,差异有统计学意义(t=7.657,P0.01);ITP组血清中IL-21水平(100.7±3.71)pg/mL显著高于健康人对照组(64.6±0.81)pg/mL,差异有统计学意义(t=10.84,P0.01),且两者之间存在明显相关性(r=0.689 3,P0.01)。ITP患者IL-21 mRNA的相对表达量4.319±0.767明显高于健康人对照组1.125±0.052,差异有统计学意义(t=4.813,P0.01)。结论 ITP患者外周血Tfh细胞比例、IL-21水平及IL-21 mRNA表达均增高,可能在ITP的发病机制中发挥重要作用。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中IL-37表达增高及临床意义

目的检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中IL-37的表达水平,进一步探究其在PBC致病过程中的临床意义。方法收集2013年6月~2015年8月于长海医院确诊的42例PBC患者和38例同期体检的健康对照者外周血,采用蔗糖密度梯度离心法分离PBMCs,以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PBMCs中IL-37的mRNA表达水平,以酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆中IL-37,IL-6,IL-17,TNF-α,TGF-β,IL-18和IL-23的蛋白水平,同时记录PBC患者的病理性分期。对IL-37与IL-6,TNF-α,IL-17,TGF-β,IL-18,IL-23进行Pearson相关性分析,对IL-37与PBC疾病分期进行Spearman秩相关性分析。结果实验组与对照组IL-37的mRNA水平和蛋白水平分别为2.81±0.94 vs 1.09±0.56,356.14±169.36 pg/ml vs 86.68±48.23 pg/ml,差异具有统计学意义(t=9.811,9.462,P均0.000 1)。相关性分析表明:IL-37与IL-17,TNF-α,IL-6,TGF-β呈正相关(r=0.561 2,0.661 9,0.672 1,0.765 3;P值均0.001),与疾病分期(Ⅰ~Ⅳ)呈正相关(r_s=0.348 9,P0.05)。结论 IL-37可能参与了PBC的致病过程,对疾病预测与诊断有重要意义。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中趋化因子受体CXCR3 mRNA表达水平变化

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR3mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系.方法 采用逆转录实时荧光定量(FQ-RT)-PCR的方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测59例PBC患者(活动期29例、缓解期30例)、结缔组织病(CTD)患者20例(疾病对照组)、健康体检者29名(健康对照组)外周血PBMC中CXCR3 mRNA的表达水平和含量.以Act=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)比较基因表达水平的变化.结果 活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于缓解期PBC患者(Act=7.77±2.74,t=3.39,P＜0.01);活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于正常对照组(Act=7.16±2.76,t=2.45,P＜0.01)和疾病对照组(Act:7.24±2.75,t=2.53,P＜0.01);缓解期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PBC患者CXCR3 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示CXCR3的表达与PBC的发生发展存在一定关联性.     

MIF在隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞中升高及临床意义

目的检测巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)在隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞(PBMCs)中的表达水平,进一步探讨其临床意义。方法收集2012年8月~2015年11月到上海长海医院确诊的42例新型隐球菌脑膜炎患者及同期体检的42例健康个体外周血,以密度梯度离心法分离PBMCs,以PCR方法检测PBMCs中MIF的mRNA相对表达量,以ELISA法检测血浆中MIF,IL-17,IL-1β,TNF-α,IFN-γ和IL-4水平,两组间细胞因子表达的比较采用两独立样本t检验,MIF与细胞因子间的关系以Pearson相关系数表示。结果 MIF在实验组与对照组的蛋白表达水平为34.17±7.88 ng/ml vs 10.89±2.76 ng/ml(t=18.07,P0.0001);mRNA相对表达量为2.87±0.94 vs 1.95±0.89(t=4.606,P0.0001),差异具有统计学意义(P0.05)。Pearson相关性分析显示实验组MIF与IL-1β,IL-17呈正相关(r=0.467,0.401,P0.01),差异具有统计学意义。结论 MIF可能通过影响IL-1β和IL-17等细胞因子的分泌及功能参与了隐球菌脑膜炎的免疫调节过程,是该病潜在的靶位点和疾病监测指标。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞IL-23p19表达增高及意义

目的 研究IL-23p19在原发性胆汁性肝硬化(PBC)外周血单个核细胞中的表达及意义。方法 采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了60例PBC患者及60例疾病对照和60例健康对照外周血单个核细胞(PBMC)中IL-23p19基因表达量,应用统计学软件分析PBC IL-23p19基因表达与疾病分期及肝功能指标间的相关性。结果 PBC患者外周血PBMC中IL-23p19基因表达较健康对照和疾病对照均明显增高,且在疾病的I/II期表达高于III/IV期; IL-23p19表达与谷氨酰转肽酶(GGT)正相关。结论 IL-23p19基因在PBC中表达升高,通过促炎反应参与PBC发病。     

围绝经期及绝经后期女性外周血单个核细胞中CD28、CTLA-4、PD-1、PD-L1 mRNA的表达及其意义

目的分析围绝经期及绝经后期女性外周血单个核细胞(PBMC)中共刺激分子白细胞分化抗原28(CD28)、细胞毒T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)、程序性死亡受体1(PD-1)、PD-1配体(PD-L1)mRNA水平的表达及其意义。方法用Taq Man探针实时荧光定量PCR法检测70例围绝经期组、40例绝经后期组和30例育龄期组PBMC中CD28、CTLA-4、PD-1、PD-L1 mRNA水平的表达。结果围绝经期组和绝经后期组CD28 mRNA表达分别为6.64±0.57和6.84±0.56,与育龄期组(6.37±0.54)比较,差异有统计学意义(P分别0.05、0.01);围绝经期组CTLA-4 mRNA表达(5.32±0.90)显著低于绝经后期组(6.80±1.01)和育龄期组(5.81±1.11),差异有统计学意义(P分别0.01、0.05);绝经后期组和围绝经期组PD-1 mRNA表达量分别为5.46±0.68和5.07±0.88,与育龄期组(4.43±0.89)比较,差异有统计学意义(P均0.01);围绝经期组和绝经后期组PD-L1 mRNA表达量分别为4.52±0.68和5.07±0.85,与育龄期组(3.82±0.68)比较,差异有统计学意义(P均0.01)。结论围绝经期及绝经后期女性PBMC中共刺激分子mRNA表达异常,可能在免疫功能紊乱中发挥一定作用。     

实时荧光定量PCR测定人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因表达

目的 建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达含量的实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR法,探讨其在健康对照者、乙型病毒性肝炎肝硬化患者及原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达状况.方法 设计TRAIL基因的特异性引物和TaqMan-MGB探针,以β-actin基因为内参,RT-PCR扩增目的 片段.胶同收纯化目的 片段,构建克隆载体作为定最模板,在ABI Prism7000型荧光定量分析仪上进行扩增,建立标准曲线;同时检测30名健康对照者、30例PBC患者及25例乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中TRAIL基因的荧光强度和循环阈值,计算样本中TRAIL基因的起始拷贝数.结果 FQ-RT-PCR检测TRAIL mRNA的线性范围为103-106拷贝/ug RNA(r=-0.997);高浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为5.6%和6.3%.低浓度样本批内及批间CV分别为12.5%和14.6%.PBC患者TRAIL mRNA表达量为[(3.3±2.5)×105拷贝ug RNA],高于健康对照组[(0.5±0.2)×105拷贝/ug RNA],两组差异有统计学意义(t=5.994,P<0.01);乙型病毒性肝炎肝硬化患者TRAIL mRNA的表达[(2.1±0.9)×105拷贝/ug RNA]亦高于健康对照组,且差异有统计学意义(t=8.536,P<0.01),而两疾病组间差异无统计学意义(t=1.988,P>0.05).结论 成功建立检测TRAIL mRNA的FQ-RT-PCR法,并初步发现TRAIL mRNA在PBC及乙型病毒性肝炎肝硬化患者外周血PBMC中表达升高,这将对肝硬化肝损伤机制研究提供新的思路.     

重症肌无力患者外周血单个核细胞中KLF4、RORγt与miR-206水平变化的临床意义

目的检测重症肌无力患者外周血单个核细胞(PBMC)中锌指样转录因子4(KLF4)、孤儿核受体γt(RORγt)、microRNA-206的表达水平,探讨它们在重症肌无力患者发病中的作用。方法采集重症肌无力患者及健康对照者清晨空腹外周血标本,梯度离心得到人PBMC。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测PBMC中KLF4、RORγt mRNA、microRNA-206的相对表达量。结果重症肌无力患者PBMC中KLF4mRNA为0.594±0.181,健康对照者为0.089±0.025;重症肌无力患者PBMC中RORγt mRNA表达水平为0.570±0.266,健康对照者为0.067±0.016,重症肌无力患者均显著高于健康对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。重症肌无力患者PBMC中microRNA-206表达水平为0.053±0.018,健康对照者为0.134±0.056,重症肌无力患者显著低于健康对照组,差异有统计学意义(P0.05)。重症肌无力患者PBMC中KLF4、RORγt相对表达量与microRNA-206表达水平均呈负相关(r=-0.675,P0.05,r=-0.806,P0.05)。结论重症肌无力患者PBMC中KLF4mRNA、RORγtmRNA的表达水平增高及microRNA-206表达水平下降,和疾病的发生和发展有密切的关系。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血IL-8及其受体CXCR1、CXCR2的表达及临床意义

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血浆白介素-8(IL-8)和外周血单个核细胞(PBMC)中IL-8、白介素-8受体1(CXCR1)、白介素-8受体2(CXCR2)、G蛋白耦联受体激酶5(G protein-coupled receptor kinase 5,GRK5)的表达变化及其临床意义。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测25例PBC患者和25例健康人对照组PBMCs中IL-8、CXCR1、CXCR2、GRK5的mRNA水平,western blot检测CXCR1、CXCR2蛋白表达水平,ELISA法检测血浆IL-8的含量,连续监测法测定血清碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)含量,并对各指标进行相关性分析。结果 PBC组血浆中IL-8浓度[(73.43±13.24)pg/mL]明显高于对照组[(34.76±10.12)pg/mL](P0.01)。PBC组IL-8、CXCR1、CXCR2、GRK5的mRNA相对表达水平[M(P25,P75)]为2.17(0.96,2.84)、1.71(0.97,3.26)、1.64(0.95,2.56)、1.86(1.34,2.30),高于对照组的0.99(0.48,1.35)、0.99(0.39,1.24)、1.06(0.56,1.32)、0.99(0.53,1.28),差异有统计学意义(P均0.05)。western blot结果提示,CXCR1、CXCR2的蛋白质水平也较对照组升高。PBC组血清ALP活性为128.0(99.5,164.5)IU/mL,对照组为51.0(42.3,62.0)IU/mL,P0.01;PBC组GGT活性为85.0(43.5,138.0)IU/mL,对照组为14.0(12.0,16.8)IU/mL,P0.01。PBMC中IL-8 mRNA表达水平与CXCR1存在正相关,相关系数(r)=0.420,P0.05;CXCR1与CXCR2呈正相关(r=0.441,P0.05);CXCR2与GRK5呈正相关(r=0.515,P0.01);血清ALP与GGT呈正相关(r=0.702,P0.01),其他指标之间无相关关系。结论 PBC患者外周血IL-8及其受体水平升高,推测IL-8及其受体信号转导过程可能在PBC的发病过程中起重要作用,为PBC的免疫干预治疗途径提供新的方向,但其与PBC的严重程度并无明显相关关系。     

隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞PILRα升高及意义

目的探究Ⅱ型成对免疫球蛋白样受体(paired immunogobin-like type 2ceceptor alpha,PILRα)在隐球菌脑膜炎患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中的表达情况,初步讨论其临床意义。方法收集2014年5月~2016年11月到长海医院就诊的30例隐球菌脑膜炎患者外周血作为实验组,诊断标准为脑脊液染色新生隐球菌阳性或培养阳性,同期体检的30例健康人外周血作为对照组。以密度梯度离心法获得标本PBMCs,以PCR检测PBMCs中PILRα的基因表达情况,以ELISA法检测血浆中PILRα及相关细胞因子的表达情况。以独立样本t检验进行两组间变量的比较,以Pearson相关系数表示两变量间的相关性。结果实验组与对照组PBMCs中PILRα相对mRNA水平为2.49±0.74vs 1.77±0.69(t=3.898,P=0.000 3),血浆中PILRα的蛋白表达水平为33.81±10.21ng/ml vs 20.01±6.74ng/ml,差异均具有统计学意义(t=6.178,P0.000 1)。实验组血浆中PILRα的蛋白表达量与IL-1,IL-6和IFN-γ呈正比(r=0.456,0.521,0.467,P0.05),差异具有统计学意义。结论 PILRα可能参与了隐球菌脑膜炎的免疫炎症过程,是该病潜在的监测标志物和治疗靶点。     

特应性皮炎患者外周血Th17细胞比例及不同细胞因子微环境对其分化的影响

目的探讨Th17细胞在特应性皮炎(AD)发病机制中的作用。方法采用流式细胞术检测39例AD患者外周血单一核细胞(PBMC)中Th17细胞的比例,实时定量RT-PCR(real-timeRT-PCR)检测PB-MC中Th17细胞相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、IL-23和TGF-βmRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中上述细胞因子的含量;同时以34例性别、年龄匹配的健康儿童做对照。分离AD患者PBMC体外培养,加入不同细胞因子微环境,观察其对Th17细胞数量及特异性转录因子RORγt表达的影响。结果 AD患者外周血Th17细胞比例(CD4+IL17+T细胞/CD4+T细胞%)显著高于正常对照者(P<0.01)。PBMC中IL-1β、IL-6、IL-17和IL-23mRNA表达水平及血清中相应细胞因子含量均显著高于正常对照者(P<0.01),PBMC中TGF-βmRNA表达水平及其血清中含量与正常对照者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AD患者PBMC在不同细胞因子微环境中培养,IL-1β+IL-23+IL-6处理组Th17细胞比例及RORγtmRNA表达最高,TGF-β处理组表达最低,与其余处理组比较差异均具有统计学意义(P均<0.05)。IL-1β+IL-6、IL-1β+IL-23、IL-6+IL-23处理组Th17细胞比例及RORγtmRNA表达水平低于IL-1β+IL-23+IL-6处理组,高于TGF-β处理组和未处理组,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。IL-1β+IL-6、IL-1β+IL-23、IL-6+IL-23处理组间差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 AD患者外周血Th17细胞比例及相应促分化细胞因子表达水平升高,IL-1β+IL-23+IL-6对Th17细胞具有明显的促分化作用,Th17细胞在AD发病机制中发挥作用。     

重度子痫前期患者外周血Th17和Treg细胞及相关细胞因子的表达及意义

目的探讨重度子痫前期(sPE)患者外周血Th17及CD4+CD25+Treg细胞及相关细胞因子白细胞介素(IL)-17、IL-21、IL-10和转化生长因子β(TGF-β)的水平变化及意义。方法选取30例sPE患者(sPE组)及30例正常妊娠者(对照组)作为研究对象。采用流式细胞术检测外周血单个核细胞中Th17及CD4+CD25+Treg细胞水平。采用QRT-PCR检测维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)mRNA和Foxp3 mRNA的表达水平。采用ELISA法检测血浆IL-17、IL-21、IL-10和TGF-β水平。结果 sPE组外周血Th17细胞水平为(1.16±0.78)%,显著高于对照组的(0.68±0.35)%,差异有统计学意义(t=3.447,P=0.002)。sPE组外周血CD4+CD25+Treg细胞水平为(1.65±0.49)%,显著低于对照组的(2.42±0.91)%,差异有统计学意义(t=-4.25,P=0.000)。sPE组RORγt mRNA表达水平为0.190±0.063,高于对照组的0.136±0.037,差异有统计学意义(t=3.776,P=0.001)。而sPE组Foxp3mRNA表达水平为0.069±0.025,低于对照组的0.127±0.027,差异有统计学意义(t=-8.218,P=0.000)。sPE组IL-17、IL-21、IL-10水平分别为(82.03±37.61)、(63.29±27.42)、(56.89±17.28)ng/L,高于对照组的(30.81±21.87)、(33.87±13.73)、(33.24±11.93)ng/L,差异有统计学意义(P0.01),TGF-β水平为(24.34±6.51)ng/L,低于对照组的(46.97±15.81)ng/L,差异有统计学意义(t=-7.781,P=0.000)。sPE患者血浆IL-17、IL-21水平与Th17细胞水平呈正相关(r分别为0.695、0.586,P0.01)。结论 sPE患者Th17细胞数量升高,CD4+CD25+Treg细胞数量减少,以及相关细胞因子的紊乱在sPE的发病机制中可能起到重要作用。     

GP210与原发性胆汁性肝硬化患者TLR3表达的关系及其临床意义

目的探讨原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血细胞TLR3的表达及其在GP210抗体阳性和阴性患者之间的表达差异。方法选择初次确诊的PBC患者65例,其中男15例,女50例。GP210抗体阳性患者21例,阴性患者44例。对照组选择性别和年龄相匹配的慢性乙肝(chronic hepatitis B,CHB)患者22例。对所有患者分离外周血单个核细胞(peripheral blood monuclear cell,PBMC),抽提总RNA,定量PCR分析其TLR3的mRNA表达水平。分别以anti-CD3、anti-CD4、anti-CD8和anti-TLR3抗体对PBMC进行染色,流式细胞术分析各细胞亚群中TLR3的表达情况。结果 PBC组患者血清碱性磷酸酶(ALP)显著高于CHB组(P=0.002),而且GP210阳性PBC患者ALP高于阴性患者(P=0.004)。PCR结果表明,PBC组PBMC中TLR3的mRNA表达量显著高于CHB组(P=0.01),而且PBC组内GP210阳性患者表达高于阴性患者的表达水平(P0.001)。流式细胞术分析结果发现,PBC组PBMC、CD3+、CD4+、CD8+T细胞表面的TLR3表达量均显著高于CHB组,差异有统计学意义(P0.05);其中PBC组GP210阳性患者PBMC、CD3+和CD8+T细胞表达量较GP210患者均显著升高,差异有统计学意义(P0.05),而CD4+T细胞无显著差异(P0.05)。结论 GP210阳性PBC患者中PBMC和T细胞表面TLR3的基因和蛋白表达水平均高于GP210阴性患者,TLR3的表达差异对于PBC的诊断和预后判断具有一定临床价值。     

原发性胆汁性肝硬化患者B淋巴细胞刺激因子基因表达的测定及临床意义

目的建立检测人B淋巴细胞刺激因子(BLyS)mRNA的相对定量方法,探讨其基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性。方法基于TaqM an-MGB探针技术,以18SrRNA为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差(△CT值)定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30名正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)BLyS基因的表达。结果PBC患者外周血单个核细胞BLyS mRNA表达的△CT值为9.5±2.5,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其原始模板浓度为正常对照组的4.3倍。PBC患者中抗核抗体(ANA)阳性占80%;其中ANA 1∶100组BLyS检测的△CT为11.4±0.9,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);而ANA 1∶1 000和ANA 1∶10 000组BLyS的△CT值与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001),两组间△CT值比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论PBC患者PBMC BLyS mRNA表达水平明显升高,且与ANA滴度相关。     

原发性胆汁性肝硬化患者B淋巴细胞刺激因子基因表达的测定及临床意义

目的 建立检测人B淋巴细胞刺激因子(BLyS)mRNA的相对定量方法,探讨其基因表达水平与原发性胆汁性肝硬化(PBC)的相关性.方法 基于TaqMan-MGB探针技术,以18SrRNA为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差(△CT值)定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)相对定量方法,检测30名正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞(PBMC)BLyS基因的表达.结果 PBC患者外周血单个核细胞BLyS mRNA表达的△CT值为9.5±2.5,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),其原始模板浓度为正常对照组的4.3倍.PBC患者中抗核抗体(ANA)阳性占80%;其中ANA 1∶100组BLyS检测的△CT为11.4±0.9,与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而ANA 1∶1 000和ANA 1∶10 000组BLyS的△CT值与正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.001),两组间△CT值比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 PBC患者PBMC BLyS mRNA表达水平明显升高,且与ANA滴度相关.     

新生儿呼吸窘迫综合征患儿外周血CD24及炎症因子mRNA表达水平及其意义

目的检测新生儿呼吸窘迫综合症(NRDS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中CD24和炎症因子(TNF-α、MCP-1、IL-6、IL-17A)mRNA的表达水平,并探讨其在NRDS诊断及预后中的意义。方法采集30例NRDS患儿治疗前后和30例健康新生儿外周血标本,分离PBMC,用实时定量PCR检测CD24、TNF-α、MCP-1、IL-6、IL-17A mRNA表达水平。结果与健康新生儿比较,NRDS患儿CD24 mRNA水平明显升高(P0.01),而TNF-α、MCP-1、IL-6、IL-17A mRNA水平差异无统计学意义(P均0.05)。与治疗前相比,治疗后NRDS患儿外周血PBMC中IL-6、MCP-1和TNF-αmRNA表达水平无明显变化(P0.05),但CD24有下降趋势,而IL-17A呈上升趋势,差异均有统计学意义(P均0.01)。结论 CD24可能成为NRDS诊断及预后评估的分子标志物。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血NKT细胞体外活化及相关细胞因子表达分析

目的 分析与评价PBC患者外周血TCRVα24+Vβ11+NKT数量和功能状态及其与PBC发生的关系.方法 制备60例PBC患者(PBC组)和60名年龄及性别匹配健康人(健康对照组)PBMC,以FACS检测TCRVα24+Vβ11+NKT数量;以α半乳糖酰基鞘胺醇(α-galcer)和IL-2诱导PBMC中NKT的扩增活化,用ICS-FC检测细胞内表达IL-4和IFN-γ的NKT比值;用ELISpot和ELISA定量检测细胞内及上清液IL4和IFN-γ的表达量.结果 FACS检测PBC组和健康对照组TCRVα24+Vβ11+NKT扩增前后的比率分别为[0.16(0.11～0.26)]%、[0.82(0.61～0.89)]%、[0.33(0.27～0.38)]%、[27.40(23.52～33.87)]%,前组显著低于后组(Z值分别为6.563、7.707,P＜均0.01).扩增活化后PBC组和健康对照组TCRVα24+Vβ11+NKT的扩增倍数分别为扩增活化前的[96.05(80.50～100.27)]倍和[134.65(121.60～142.13)]倍,PBC组明显低于健康对照组(Z=6.462,P＜0.01).同时于活化后用ICS-FC检测细胞内细胞因子,PBC组和健康对照组IFN-γ+与TCRVα24+Vβ11+NKT比分别为[38.98(36.73～42.98)]%、[34.56(30.12～36.78)]%,前组显著高于后组(Z=3.158,P＜0.05);PBC组和健康对照组IL-4+与TCRVα24+Vβ11+NKT细胞比分别为[0.193(0.179～0.218)]%和[34.36(30.93～38.77)]%,前组显著低于后组(Z=6.476,P＜0.01).ELISpot和ELISA定量检测扩增活化后PBC组分泌IFN-γ的斑点形成细胞数(SFC)和上清液IFN-γ分泌量分别为[410(380～500)]SFC/1×106 PBMC、(67.21±11.27)ng/L,健康对照组[340(280～390)]SFC/1×106PBMC、(31.45±8.17)ng/L,前组的IFN-γ斑点形成细胞数及分泌量显著高于后组(Z=4.312,P＜0.05、t=27.25,P＜0.01);PBC组的IL-4斑点形成细胞数和分泌量分别为[73(60～100)]SFC/1×106PBMC、(12.65±4.17)μg/L,健康对照组[245(230～280)]SFC/1×106PBMC、(28.31±6.31)μg/L,PBC组IL-4却显著低于健康对照组(Z=5.112,P＜0.01、t=25.34,P＜0.01).结论 PBC组外周血TCRVα24+Vβ11+NKT数量较健康对照组明显减少,经α-galcer及IL-2体外活化后扩增倍数及分泌细胞因子IL-4的功能较健康对照组显著降低,而分泌IFN-γ能力却显著高于健康对照组,NKT数量的减少及免疫调节功能的紊乱可能是PBC发病的重要因素之一.     

慢性荨麻疹患者外周血IL-17和IL-23的表达及临床意义

目的分析慢性荨麻疹患者外周血IL-17,IL-23的表达及临床意义。方法分析2009年1月～2013年1月在荆门市康复医院接受治疗的慢性荨麻疹患者的临床资料,并列为观察组。另纳入同期健康体检者作为对照组。结果该研究共纳入研究对象91例,其中观察组患者61例,对照组30例。观察组患者外周血IL-17及IL-23水平显著高于对照组,相比较差异具有统计学意义(P＜0.001)。Pearson相关性检验显示:观察组患者外周血IL-23与IL-17水平呈现显著正相关,差异具有统计学意义(r=0.504,P＜0.001)。经4周治疗后,观察组患者外周血IL-17水平显著降低,与治疗前比较差异具有统计学意义(65.31±18.75pg/ml vs 121.53±31.19 pg/ml,t=10.710,P＜0.001)。以治疗后IL-17水平的中位数(66.79 pg/ml)为界,将患者分为A(IL-17＜66.79 pg/ml),B(IL-17≥66.79 pg/ml)两组。Kaplan-Meier分析显示:治疗后1年,A组患者累积复发率显著低于B组,相比较差异具有统计学意义［13.79%,(4/29) vs 37.93%,(11/29)Log-rank χ2=4.344,P=0.037］。结论慢性荨麻疹患者外周血IL-17,IL-23表达升高,且可以一定程度判断预后。     

载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G在不同慢性乙肝病毒感染者外周血单个核细胞中的表达

目的 研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肤样3G(APOBEC3G)在不同慢性乙肝病毒(HBV)感染类型患者的外周血单个核细胞(PBMC)中的表达水平.方法 以健康体检者为对照组,应用荧光定量PCR检测不同慢性HBV感染类型患者(慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、肝癌)的PBMC中APOBEC3G的表达状况.结果 不同慢性HBV感染者中慢性乙型肝炎组、肝炎肝硬化组、肝癌组的APOBEC3G mRNA水平分别为6.62±0.17、6.58±0.32、6.69±0.25,均高于对照组,差异均有统计学意义(t分别=18.32、11.07、15.60,P均<0.05),但不同慢性HBV感染者之间PBMC中APOBEC3G的mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(t分别=0.45、0.86、0.69,P均>0.05).结论 慢性HBV感染患者虽有APOBEC3G的表达升高,可能只是HBV慢性感染的伴随表现.APOBEC3G在人体内对HBV复制的影响可能不是直接的抑制作用.