2种高通量核酸检测方法多种呼吸道病原体检测效能比较

目的比较多重荧光定量聚合酶链反应(PCR)和TaqMan微流体芯片(TAC)技术检测呼吸道病原体的效能。方法收集419例急性呼吸道感染患者临床样本,分别采用TAC技术和多重荧光定量PCR进行多种呼吸道病毒核酸检测,比较2种方法的敏感性和特异性。结果多重荧光定量PCR多种呼吸道病毒的阳性检出率为30.1%,敏感性为93.4%,特异性为98.9%;TAC技术多种呼吸道病毒阳性检出率为27.9%,敏感性为87.4%,特异性为98.9%。2种方法检测结果的一致性为92.8%,且敏感性和特异性差异均无统计学意义(P0.05)。结论 TAC技术与多重荧光定量PCR检测常见呼吸道病毒的敏感性和特异性相近,但TAC技术检测病原谱范围更广,在紧急情况下可作为快速筛查多种呼吸道病原体的有效方法。     

22种呼吸道病原体核酸多重联检试剂盒检测效能评估

目的 通过对1种新型呼吸道病原体核酸多重联检试剂盒检测效能评价,为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、流行性感冒(流感)病毒等叠加流行的大规模检测提供适宜技术方法.方法 收集北京地区急性呼吸道感染病例阳性标本252份,采用4种核酸检测试剂盒(3种核酸多重检测试剂盒A、B、C及1种SARS-CoV-2检测试剂盒D)分别...     

多重不对称PCR-电化学芯片技术检测感染性腹泻病原体的临床价值

目的 探索基于多重不对称PCR-电化学芯片技术检测感染性腹泻病原体的临床价值.方法 收集2018年10月至2019年6月该院住院及门诊腹泻患儿标本,以细菌培养鉴定和测序结果作为感染性腹泻病原体诊断的"金标准",采用多重不对称PCR-电化学芯片技术和Film Array gastrointestinal panel法(以...     

多重实时PCR与常规方法检测主要性病病原体的比较

目的 比较多重实时PCR检测解脲支原体(UU)、沙眼衣原体(CT)和淋病奈瑟氏菌(NG)与常规检测方法(培养法,金标法)在结果上的差异,探讨多重实时PCR在临床上的应用.方法 用多重实时PCR法和常规检测方法分别检测可疑患者宫颈分泌物、尿道分泌物标本中的UU、CT和NG.结果 多重实时PCR检测UU、CT阳性率分别达到35.6%,14.4%,二种方法间有显著差异(P<0.05),NG阳性率6.7%也有提高.显示多重实时PCR具有良好的特异性和准确性,可以对患者进行灵敏、准确、快速的检测.     

CRISPR-Cas技术在病原体核酸检测中的研究进展

规律成簇的间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白(Cas)简称CRISPR-Cas,是原核生物的一种适应性免疫系统,因其强大的基因编辑功能及核酸切割活性成为近年来的研究热点。感染性疾病的传统检测方法虽然特异度高,但存在灵敏度不够高、操作复杂、检测周期长等不足。随着CRISPR-Cas系统的发现及深入研究,目前依赖特异性识别靶标后所激发的Cas蛋白“附带切割”活性,已经开发出多项基于CRISPR-Cas的核酸检测方法,它们高效、简便、快速的优点弥补了传统诊断方法的不足。该文对CRISPR-Cas技术及其在感染性疾病核酸检测中的现状进行综述,旨在为开发更多基于CRISPR-Cas技术的检测新方法提供新思路。     

性病病原体多重聚合酶链反应检测方法的建立和验证

目的建立同时检测淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体和单纯疱疹病毒-2致病微生物的多重聚合酶链反应（PCR）方法,用于四种性病的诊断和治疗监测。方法根据淋球菌外膜孔蛋白基因、沙眼衣原体基因、解脲支原体尿素酶基因和单纯疱疹病毒-2的DNA聚合酶基因序列,各设计一对特异性引物,优化反应体系和条件进行多重PCR反应。结果4对引物分别扩增出327、167、426、391bp的目的条带,并且特异性强,与其他非目的病原体基因不发生反应。结论本研究建立的多重PCR方法为相关病原体的快速检测提供方法。     

开展病原体去除技术后核酸检测技术的价值

<正>欧美等发达国家于20世纪90年代末相继采用核酸扩增技术(nucleic acid amplification technology,NAT),也称核酸检测技术(nucleic acid testing,NAT)对献血者血液做HIV和HCV检测,部分国家还检测HBV,目的在于缩短检测"窗口期(window period,WP)",以进一步降低输血传播相关病     

多重核酸检测技术的临床应用现状及未来

多重核酸检测技术具有可同时检测多个靶标、高通量、低成本等优势,满足大规模筛查、定量等检测需求。多重聚合酶链反应广泛应用于病原体、甲基化DNA和突变基因检测以及单核苷酸多态性分型;重组聚合酶扩增、环介导等温扩增等等温扩增技术在即时检测领域有很好的前景;基于规律间隔成簇短回文重复序列（CRISPR）/CRISPR相关蛋白（...     

多重RT-PCR MassARRAY技术检测27种呼吸道病原体方法的建立和临床应用评价

目的建立一种可同时检测27种呼吸道病原体的多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)MassARRAY技术,并探讨其临床应用价值。方法针对呼吸道病原体设计扩增引物和延伸引物,并构建病原体标准质粒;按梯度稀释标准质粒,用于考察多重RT-PCR MassARRAY方法的灵敏度、特异性和重复性。分别采用建立的多重RT-PCR MassARRAY方法和实时RT-PCR方法检测207份呼吸道感染患者鼻咽拭子样本,比较2种方法的检测性能。结果建立的多重RT-PCR MassARRAY方法对29种病原体的最低检出限为1×101～1×103拷贝/μL,特异性高。207例鼻咽拭子样本中共检出57份阳性,阳性检出率为27.54%。细菌性病原体中检出率较高的是肺炎链球菌、卡他莫拉菌、肺炎支原体和流感嗜血杆菌;病毒性病原体阳性检出率较高的为副流感病毒、人偏肺病毒和甲型流感病毒。2种方法检测结果总符合率为99.03%,具有高度的一致性(kappa=0.98)。结论基于RT-PCR MassARRAY技术的27种呼吸道病原体检测方法具有较高的灵敏度和特异性,且操作简单,通量高,可以为临床呼吸道病原体感染的诊断提供实验室依据。     

基于液相芯片技术的呼吸道病原体多重检测技术的建立

呼吸道感染是临床最常见的疾病之一,可由多种病原体引起,包括细菌、病毒、支原体、衣原体等,其临床表现与治疗因病原体不同而存在较大差异（1-4）。研究表明95%的急性上呼吸道疾病和大部分的下呼吸道疾病均由细菌外的病原感染引起,其中以呼吸道病毒最为常见,包括呼吸道合胞体病毒（respiratory syncytial virus, RSV）、腺病毒（adenovirus, ADV）、流感病毒A型（Influenza virus A, INFA）、流感病毒B型（Influenza virus B, INFB）、副流感病毒（parainfluenza virus, PIV）等（5,6）。大部分呼吸道病毒具有感染力强、传播快、潜伏期短、发病急等特点,并且新致病性病毒还在不断被发现。据统计,呼吸道和胞病毒、甲型流感、乙型流感和副流感病毒是呼吸道病毒感染中最常见的病原体,占病毒感染种类的90%,致死率8%左右,严重危害到公众的健康和安全（7）。因此,建立一种快速准确的诊断方法,不仅有利于病因确诊,也有利于临床采取针对性治疗,同时在病毒的流行病学调查以及阻止病毒的传播与扩散中具有重要的作用。     

不同核酸提取方法SARS-CoV-2核酸检测性能比较

目的 比较磁珠吸附法和样本释放剂法对严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)核酸检测结果的符合率、重复性及检出限,优选出提取效率高、耗时短、成本低的核酸提取方法.方法 采用2种核酸提取方法的3种商品化核酸提取试剂,分别对阴性样本、阳性样本及不同浓度(稀释度20～28)的SARS-CoV-2 RNA标准品进行...     

病原体核酸技术在儿童感染性疾病检测中的发展及应用

分子诊断技术的发展加速推进了儿童感染性疾病病原体核酸检测向高通量、高灵敏度、自动化发展的进程。在临床常用的荧光定量PCR技术之外,多重PCR技术、数字PCR技术、等温扩增技术、微流控芯片的应用使病原体核酸检测在通量和灵敏度上有了显著提升,这些技术配合一体机的使用实现了儿童感染性疾病病原体核酸检测的自动化和高通量化。高通量测序技术可以最大程度获取标本中几乎所有病原体的核酸信息,已逐渐成为临床感染性疾病诊断的重要辅助手段。     

血液感染性病毒核酸检测室内质量控制方法的研究

目的 探讨合适血液感染性病毒核酸检测（nucleic acid testing, NAT）的室内质量控制（internal quality control,IQC）方法。方法 使用北京康彻斯坦质控品（常规质控品）和澳大利亚国立血清学参比实验室（National SerologicalReference Laboratory, NRL）QConnect 质控品（评估质控品）进行血液感染性病毒核酸平行检测。收集2 种质控品的检测结果,在常规质控方法判断为在控的检测批次中,再分别采用Westgard 多规则质控方法和NRL 质控限质控方法进行判断,观察2 种质控方法假失控的次数和比例。结果 在常规质控方法判断在控的实验批次中,再次使用Westgard 多规则质控方法分析,HBV DNA,HCV RNA 和HIV RNA 三项仍各有0 ～ 2.46%（罗氏核酸混样检测）和0.73% ～ 2.55%（盖立复核酸单人份检测）比例的假失控。使用NRL QConnect 质控品在常规质控方法判断在控的盖立复检测批次中,使用NRL 质控限进行室内质控,未发现失控情况。使用NRL QConnect 质控品,在常规质控方法判断在控的罗氏检测批次中,使用NRL 质控限的计算方法,计算该实验室的质控限,发现在HBV DNA 和HIV RNA 检测中各有1 次失控（0.30%）。结论 Westgard 多规则质控方法不适合用于目前血站血液感染性病毒核酸检测的室内质控。该文浓度的NRL QConnect质控品和NRL 质控限适合用于国内盖立复核酸单人份检测方法的室内质控,但该浓度不适合用于国内罗氏核酸混样检测。该实验室在用的室内质控方法与NRL 质控限的室内质控方法,均适用于国内罗氏核酸混样检测和盖立复核酸单人份检测的室内质控。     

新型冠状病毒和其他病原体核酸检测结果分析及其评价

目的:通过核酸检测新型冠状病毒,探讨PCR检测方法在新型冠状病毒和其他病原体感染的临床应用.方法:收集1例确诊患者送检的咽拭子样本,通过柱提法提取病毒RNA,使用商品化的扩增试剂和传统PCR技术进行检测.结果:A、B、C、D、E、F、G新冠检测试剂盒的结果均为阳性,PCR也能扩增出特异性条带,此外还检测出该患者有EB病...     

小儿感染性腹泻1080例病原体检测分析

目的：探讨小儿感染性腹泻的病原侔构成,为临床合理有效地控制该病提供病原学依据。方法：对1080例感染性腹泻患儿进行大便常规检查,WBC（0～＋）者做轮状病毒抗原（RVAg）检测,对WBC（＋＋～＋＋＋＋）者进行细菌培养。结果：815例患儿粪便进行RVAg检测,阳性292例,占35．8％。3岁以下婴幼儿的检出率较高,秋冬季节多发。265例患儿粪便进行细菌培养,大便培养阳性137例,其中36例（13．6％）分离出致病细菌,分离出优势生长的条件致病菌91例（34．3％）,分离出真菌10例（3．8％）。主要致病菌包括痢疾杆菌、致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、变形菌、弗劳地枸橼杆菌和克雷伯菌。结论：小儿感染性腹泻病原类型复杂,多样。对于不同类型的腹泻,除进行大便常规检查外,还要进行必要的病原学检测,争取在最短的时间内查出腹泻病原体,及早采取相应的治疗措施,对患儿进行合理有效的治疗。     

呼吸道病原体核酸检测对小儿呼吸道感染的临床诊治意义

目的 研究分析呼吸道病原体核酸检测对小儿呼吸道感染的临床诊治意义。方法 选取我院诊治100例呼吸道感染患儿,采集其咽拭子样本对呼吸道病原菌类型进行筛查,根据检测结果精准科学用药。结果 所有受检患儿均有相关类型的病原体感染,SP感染率最高,占44%,其次为MP感染;其中单一病原体感染率为59.0%,两种及以上病原体混合感染率为41.0%,小儿呼吸道感染病原体在冬季感染率最高、夏季最低,混合感染率秋季最高、夏季最低,不同季节病原体及感染情况均有明显差异（P<0.05）。结论 通过对呼吸道病原体核酸检测,可准确诊断小儿呼吸道感染,对指导临床用药意义重大。     

不同灭活条件对常见呼吸道病原体核酸检测结果的影响

目的 探讨不同灭活条件对各种常见呼吸道病原体核酸检测结果的影响.方法 收集2020年1月—2021年3月西藏军区总医院腺病毒、支原体、甲型流感病毒或乙型流感病毒核酸检测阳性病例鼻拭子和咽拭子样本12份,设置灭活温度梯度和时间梯度,分别于56、66、76和86℃处理30 min,于56℃分别处理30、60、120、240...     

不同样本保存条件对鼻咽拭子呼吸道病原体核酸检测的影响

目的 探讨西藏边防地区不同鼻咽拭子样本保存条件对呼吸道病原体核酸检测结果的影响。 方法 收集 ２０２０ 年 １ 月 至 ２ 月于西藏军区总医院就诊且鼻咽拭子腺病毒、支原体、甲型流感病毒或乙型流感病毒核酸检测阳性的病例样本 １２ 份,分 别于 ２０ ℃ （室温）、４ ℃ 、－２０ ℃和－８０ ℃条件下保存 ６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ、９６ ｈ 和 １９２ ｈ,比较未经保存和不同保存条件的样本 实时荧光定量 ＰＣＲ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａｌ?ｔｉｍｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ, ｑＰＣＲ）结果。 结果 对于腺病毒和支原体,同未保存样本 核酸检测循环阈值（ｃｙｃｌｉｎｇ ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ, Ｃｔ）相比,２０ ℃保存 ４８ ｈ 以上,会引起样本 Ｃｔ 值明显上升（Ｐ＜０．０５）;４ ℃保存 ９６ ｈ 以上, 才会导致样本 Ｃｔ 变化（Ｐ＜０．０５）;而－２０ ℃和－８０ ℃条件下保存 １９２ ｈ 均不会造成样本 Ｃｔ 值改变（Ｐ＞０．０５）。 对于甲型流感病 毒和乙型流感病毒,２０ ℃保存 ２４ ｈ 以上,样本 Ｃｔ 值明显上升（Ｐ＜０．０５）;４ ℃保存 ４８ ｈ 以上样本 Ｃｔ 升高（Ｐ＜０．０５）;－２０ ℃保存 超过 ９６ ｈ 样本 Ｃｔ 值明显上升（Ｐ＜０．０５）;－８０ ℃条件下保存 １９２ ｈ 样本 Ｃｔ 值差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。 结论 在西藏边防 地区进行样本保存运输时,应尽可能降低保存温度并缩短保存时间,以免对后续实验结果造成影响。     

住院分娩产前检测感染性病原体血清标志物的价值

目的 探讨住院分娩产前检测感染性病原体血清标志物的价值.方法 采用酶联免疫吸附(ELISA)法对住院分娩孕产妇检测人类免疫缺陷病毒1/2抗体(抗-HIV1/2)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎抗体(抗-HCV)和梅毒抗体,抗-HIV1/2阳性用胶体金标记法联合检测.结果 2 276例住院分娩孕产妇中,血清感染性标志物阳性202例,阳性率为8.88%,有1例重叠感染病例(抗-HIV1/2、抗-HCV、梅毒抗体同时阳性);抗-HIV1/2初筛阳性患者3例,阳性率为0.13%;HBsAg阳性患者193例,阳性率为8.48%;抗-HCV阳性患者4例,阳性率为0.18%;梅毒抗体阳性患者2例,阳性率为0.09%.结论 在住院分娩前对孕产妇进行血清标志物的检测,能够及早发现阳性患者,对预防和控制母婴垂直传播,避免医务工作者职业感染等具有重要的价值.