慢病毒介导的moesin基因沉默对U251细胞增殖与侵袭的影响

目的探讨慢病毒介导的moesin基因沉默对U251细胞增殖与侵袭的影响。方法构建moesin基因沉默shRNA慢病毒载体并鉴定,将慢病毒表达载体稳定转染人胶质瘤细胞U251后,real time PCR方法与Western blot方法检测U251细胞moesin mRNA与蛋白的表达, MTT方法检测U251细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力的改变。结果转染moesin基因沉默shRNA慢病毒载体后,人胶质瘤细胞U251 moesin mRNA和蛋白表达水平均明显降低,结果表明成功建立了稳定沉默moesin基因的U251细胞株。与空白对照组比较,在抑制moesin表达后,U251细胞增殖和侵袭能力也明显下降。结论成功建立了稳定沉默moesin基因的U251细胞株,moesin可能参与U251细胞增殖和侵袭的发病过程。     

慢病毒载体介导的E2F-1基因沉默对人胶质瘤U251细胞生物学特征的影响

目的探讨慢病毒载体介导的E2F-1基因沉默对人胶质瘤U251细胞生物学特征的影响。方法构建靶向E2F-1的shRNA重组慢病毒载体,将慢病毒载体转染U251细胞,real-time PCR与Western blot在m RNA与蛋白水平鉴定转染结果,MTT方法检测转染后U251细胞活力的变化,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化,transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 real-time PCR方法与Western blot检测结果均表明成功建立了稳定沉默E2F-1基因的U251细胞株。与空白对照组及阴性对照组比较,转染E2F-1-shRNA的U251细胞活力显著降低,细胞周期被阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高,侵袭能力显著降低(P0.01)。结论转染E2F-1-shRNA能够显著降低U251细胞增殖侵袭能力。     

慢病毒介导的TLR4基因沉默对U251细胞增殖与迁移的影响

目的探讨慢病毒介导的TLR4基因沉默对U251细胞增殖与迁移的影响。方法构建TLR4基因沉默sh RNA慢病毒载体并鉴定,将慢病毒表达载体稳定转染人胶质瘤细胞U251后,real time PCR方法与Western blot方法检测U251细胞TLR4 m RNA与蛋白的表达,MTT方法检测U251细胞增殖情况,transwell实验检测细胞迁移能力的改变。结果 real time PCR方法与Western blot方法检测结果显示,转染TLR4基因沉默sh RNA慢病毒载体后,人胶质瘤细胞U251 TLR4在m RNA和蛋白水平表达均明显降低,结果表明成功建立了稳定沉默TLR4基因的U251细胞株。与空白对照组比较,在抑制TLR4表达后,U251细胞增殖和迁移能力也明显下降。结论成功建立了稳定沉默TLR4基因的U251细胞株,沉默TLR4基因后U251细胞增殖和迁移能力明显下降。     

小干扰RNA沉默垂体瘤转化基因1对人胶质瘤U251细胞增殖侵袭的影响

目的 探讨小干扰RNA沉默垂体瘤转化基因l (PTTG1)对人胶质瘤U251细胞增殖侵袭的影响及可能机制。方法 设计靶向沉默PTTG1的siRNA,将U251细胞随机分为PTTG1基因沉默组、阴性对照组和空白组,PTTG1基因沉默组U251细胞转染PTTG1-siRNA,阴性对照组细胞转染无关序列,空白组细胞不转染任何序列。转染后继续培养48 h,采用real-time PCR与Western blot方法鉴定转染结果,MTT方法和transwell实验分别检测细胞的增殖能力与侵袭能力,Western blot方法检测U251细胞中p-Akt、基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)的表达。结果 PTTG1基因沉默组U251细胞中PTTG1 mRNA和蛋白表达显著低于阴性对照组和空白组（P<0.01）,结果提示转染成功。与空白对照组及阴性对照组比较,PTTG1基因沉默组U251细胞活力显著降低,侵袭能力显著降低,p-Akt、MMP-2/9的表达显著降低（P<0.01）。结论 沉默PTTG1基因可以抑制U251细胞的增殖和侵袭,PTTG1有望成为胶质瘤靶向治疗的新靶点。     

慢病毒介导的RWDD3沉默对人胶质瘤U251细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨沉默RWDD3表达对人胶质瘤U251细胞生物学特征的影响。方法:构建靶向RWDD3的shRNA重组慢病毒并转染U251细胞,通过real-time PCR和Western blot在mRNA及蛋白水平鉴定转染结果。MTT法检测转染后细胞的细胞活力;平板克隆实验检测克隆形成能力;Brd U实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力的变化;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的改变。结果:real-time PCR和Western blot结果均表明成功建立稳定沉默RWDD3的U251细胞株。与空白对照组及阴性对照组比较,转染RWDD3-shRNA组的细胞活力和克隆形成能力降低;侵袭及迁移能力均下降,穿膜细胞数明显减少;细胞周期进展被抑制,阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率增高(P0.05)。结论:RWDD3在胶质瘤细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,提示RWDD3有望成为人脑胶质瘤基因治疗的候选靶点。     

shRNA沉默TXNDC12抑制脑胶质瘤细胞的增殖和迁移

目的 探讨TXNDC12(thioredoxin domain-containing 12)在脑胶质瘤发生中的作用机制。方法 采用生物信息学分析TXNDC12基因在脑胶质瘤中mRNA的表达及其与预后的相关性，并通过Western blot检测TXNDC12在脑胶质瘤组织和正常脑组织中蛋白表达；构建沉默TXNDC12基因的shRNA慢病毒表达质粒，建立沉默TXNDC12的U251稳转细胞株。采用qRT-PCR和Western blot实验分别检测稳转细胞株中TXNDC12的mRNA及蛋白表达；用CCK-8实验、Transwell和划痕实验检测沉默TXNDC12对U251细胞增殖和迁移能力的影响。结果 生物学信息分析显示TXNDC12在脑胶质瘤组织(1.885±0.902)中的蛋白表达比正常脑组织(1.0±0.545,P<0.05)高，且与不良预后相关(高表达组51.5%vs低表达组70.7%,P<0.000 1);沉默TXNDC12后U251细胞增殖能力和迁移能力明显下降(P<0.05)。结论 TXNDC12在脑胶质瘤中可能发挥促癌基因的作用，其高表达可能促进脑胶质瘤细...     

miR-200b通过靶向CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖

目的研究hsa-miR-200b对人U251胶质瘤细胞增殖的影响及相关作用机制。方法将miR-200b过表达和表达沉默质粒分别稳定转染至胶质瘤U251细胞,qRT-PCR验证转染效率,CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化,qRTPCR以及Western blot方法检测的CRKL的m RNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点。将CRKL过表达和表达沉默质粒载体分别稳定转染至U251胶质瘤细胞,使用CCK-8法检测U251细胞增殖水平变化。分别建立miR-200b和CRKL的稳定双转染U251细胞系,使用CCK-8法检测对各组细胞增殖水平的变化。结果与对照组相比,miR-200b过表达显著抑制胶质瘤U251细胞的增殖并且抑制CRKL在U251胶质瘤细胞的m RNA和蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证了miR-200b与CRKL基因3’UTR的结合位点;CRKL过表达显著增强胶质瘤U251细胞增殖能力;CRKL过表达有效阻断了miR-200b抑制胶质瘤U251细胞增殖的作用。结论 miR-200b能够通过靶向下调CRKL抑制胶质瘤U251细胞增殖。     

ATP1A1基因沉默抑制人胶质瘤细胞U251侵袭

目的探讨沉默Na+/K+ATP酶A1亚基(ATP1A1)对人U251胶质瘤细胞系侵袭能力的影响及其机制。方法用shRNA-ATP1A1慢病毒感染人U251胶质瘤细胞,RT-q PCR及Western blot分别检测ATP1A1 mRNA和蛋白的表达;MTT法检测细胞体外的增殖;细胞划痕实验及Transwell小室检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶2/9(MMP-2/9)的表达。结果沉默ATP1A1细胞的ATP1A1 mRNA和蛋白表达均受到了明显抑制;细胞的增殖和迁移、侵袭能力也显著受抑(P0.05);MMP-2和MMP-9的表达也明显降低(P0.05)。结论靶向ATP1A1干扰能够明显抑制胶质瘤U251细胞的体外增殖、迁移及侵袭,其机制可能与MMP-2、MMP-9的下调相关,ATP1A1可能作为胶质瘤治疗的一个潜在靶点。     

小RNA干扰骨桥蛋白抑制人U251细胞的体外生长与侵袭

目的:研究慢病毒载体介导的骨桥蛋白(OPN) RNA干扰对人U251神经胶质瘤细胞体外生长和侵袭的影响,并探讨其对神经胶质瘤生长、侵袭的可能机制.方法:应用本实验室已构建并鉴定的OPN特异性短发卡RNA慢病毒表达载体(LV-OPN shRNA)感染U251神经胶质瘤细胞.RT-PCR检测干扰前、后U251细胞OPN mRNA的表达;免疫印迹法检测干扰前、后U251细胞OPN、MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力的变化;Transwell体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化;细胞划痕实验观察细胞迁移能力的变化.结果:与未感染组、空载体感染组相比,LV-OPN shRNA感染组OPN mRNA、OPN蛋白及MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达均明显下降;LV-OPN shRNA感染组细胞增殖、侵袭能力及迁移能力也明显下降.结论:慢病毒载体介导的骨桥蛋白RNA干扰在体外能抑制U251细胞OPN mRNA和蛋白表达, 进而抑制U251细胞在体外的生长及侵袭,因此可以推测OPN是促进胶质瘤增殖和侵袭的基因之一,为胶质瘤的治疗提供新的靶点.     

针对CD44的siRNA对脑胶质瘤细胞U87增殖与侵袭的抑制作用

目的:通过RNA干涉下调CD44在脑胶质瘤细胞U87中的表达,观察CD44的表达抑制对胶质瘤增殖、迁移和侵袭的影响。方法:根据CD44基因序列设计并合成的siRNA片段(CD44-siRNA)转染U87细胞,利用荧光实时定量qRT-PCR检测细胞中CD44基因mRNA水平的变化;Western blot检测CD44蛋白水平的变化;MTT法检测U87细胞增殖;单细胞划痕愈合实验、Transwell小室侵袭实验检测U87细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44-siRNA下调了U87细胞中CD44mRNA水平与蛋白水平的表达,转染细胞的增殖和迁移侵袭能力下降。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制U87脑胶质瘤细胞的增殖及其迁移侵袭力,为以CD44为靶点的脑胶质瘤基因治疗奠定基础。     

FOS蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响

目的 探讨FOS蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响.方法 用免疫组化染色法检测FOS蛋白在各级别胶质瘤组织中的表达水平.应用RNA干扰技术降低FOS表达后,应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和流式细胞技术检测胶质瘤细胞的增殖和周期的改变;应用Transwell实验检测胶质瘤细胞侵袭能力的改变;采用Western印迹法检测FOS下游功能蛋白的变化.结果 胶质瘤组织中FOS的表达随着级别的增高而增高;抑制FOS的表达后,U87和U251细胞生长受抑制,细胞生长阻滞在G1期且细胞侵袭能力下降,下游的功能蛋白CyclinD1和MMP9表达水平降低.结论 FOS在胶质瘤中高表达;抑制其表达可以下调功能蛋白CyclinD1和MMP9的表达,进而调控细胞的生长和侵袭能力.     

RAS蛋白在胶质瘤中的表达及其对胶质瘤细胞生长的影响

目的 探讨RAS蛋白在胶质瘤中的表达及其对人脑胶质瘤细胞生长的影响.方法 用免疫组化染色法检测RAS蛋白在正常脑组织及各级别胶质瘤组织中的表达水平,并采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法和流式细胞技术检测降低RAS活性后U251细胞的增殖和凋亡情况;用Western印迹法检测ERK和AKT信号通路.结果 胶质瘤组织中RAS的表达随胶质瘤恶性程度增高而增强.抑制RAS 蛋白活性后,RAS信号通路的下游分子ERK和AKT蛋白磷酸化水平降低;U251胶质瘤细胞生长受抑制,细胞生长阻滞在G1期且凋亡增加.结论 RAS蛋白在胶质瘤中高表达,抑制其活性可下调ERK和AKT 信号通路,进而调控细胞的生长.     

CBX3在脑胶质瘤中的表达分析及其对胶质瘤细胞凋亡的抑制作用

目的 通过对胶质瘤公共数据库中CBX3表达量的分析,明确其与胶质瘤预后的相关性。流式细胞术以及对凋亡指标的检测分析其对胶质瘤细胞系凋亡水平的影响。 方法 通过对TCGA以及CGGA中胶质瘤患者基因芯片的数据进行分析,比较CBX3在不同级别胶质瘤中的表达量以及分析CBX3表达量与胶质瘤患者预后之间的关系。GO和Pathway分析对CBX3基因进行功能注释。最后在细胞系中探索CBX3基因对胶质瘤细胞系凋亡水平的影响。 结果 高级别胶质瘤中CBX3表达量明显高于低级别的胶质瘤中CBX3的表达量(P<0.01) 。高表达CBX3的患者预后比低表达CBX3的患者更差( P<0.05)。同时流式细胞术实验发现过表达CBX3可以显著降低胶质母细胞瘤细胞系U87MG和T98G的凋亡水平。 结论 CBX3的表达水平与胶质瘤的生存期呈负相关关系,高表达 CBX3可以降低胶质母细胞瘤细胞系的凋亡水平,故而CBX3或许可作为判断胶质母细胞瘤预后的有效指标。     

胶质瘤血管新生及其调控机制

体内外研究表明实体性肿瘤的生长是依赖血管的,其直径一旦超过2 mm,若没有新生的血管供血则肿瘤的生长就会停止。胶质瘤是人体内血管化程度最高恶性的肿瘤之一。胶质瘤的血管发生与其他实体性肿瘤血管发生一样,由血管形成及血管新生两种方式构成：前者由内皮祖细胞或者血管母细胞形成新的血管;而后者是由组织中既存的成熟血管的内皮细胞发生增殖和游走形成小血管。血管新生是肿瘤血管生成的主要形式,胶质瘤血管新生的机制研究以及抑制其血管生成是胶质瘤治疗的一个新途径,成为近年来的研究热点,本文就胶质瘤血管新生及其调控机制作一综述。     

Proteases and glioma angiogenesis

Angiogenesis, the process by which new branches sprout from existing vessels, requires the degradation of the vascular basement membrane and remodeling of the ECM in order to allow endothelial cells to migrate and invade into the surrounding tissues. Serine, metallo, and cysteine proteinases are 3 types of a family of enzymes that proteolytically degrade various components of extracellular matrix. These proteases release various growth factors and also increase adhesive molecules and signaling pathway molecules upon their activation, which plays a significant role in angiogenesis. Downregulation of these molecules by antisense/siRNA or synthetic inhibitors decreases the levels of these molecules, inhibits the release of growth factors, and decreases the levels of various signaling pathway molecules, thereby leading to the inhibition of angiogenesis. Furthermore, MMPs degrade specific substrates and release angiogenic inhibitors which inhibit angiogenesis. Downregulation of 2 molecules, such as uPA and uPAR, uPAR and MMP-9, or Cathepsin B and MMP-9, are more effective to inhibit angiogenesis rather than downregulation of single molecules. However, careful testing of these combinations are most important because multiple effects of these combinations play a significant role in angiogenesis.     

Glycinamide ribonucleotide formyl transferase is frequently overexpressed in glioma and critically regulates the proliferation of glioma cells

Aims

Current treatments for the most common form of brain tumor, glioma, are disappointing in their effectiveness. Low expression levels of GART, an enzyme in the core nucleotide metabolism, significantly correlate with chemosensitivity, conferring a survival advantage to tumor cells. Our study aimed to explore the expression and function of GART in glioma.

Methods

Immunohistochemical and Western blot analysis were performed in 70 cases of human gliomas and normal brain tissues. We mainly used cell growth assay and multicellular tumor spheroid formation assay to evaluate the proliferation and chemosensitivity of glioma cells.

Results

High GART expression (most cancer cells cytoplasm stained) was observed in 70 specimens and was related to the grade of malignancy. We also reviewed each grade of tumors separately and investigated whether GART expression predicted patient survival within each subgroup. In brief, GART overexpression was significantly associated with overall survival (P = 0.03). Interestingly, transfecting cells with GART-siRNA suppressed proliferation and enhanced temozolomide (TMZ)-induced apoptosis in glioma cells.

Conclusion

The current results showed that GART expression was associated with glioma grade and that high GART protein expression might be related to poor outcome.     

Lysyl oxidase genetic variants and the prognosis of glioma

Lysyl oxidase (LOX) is a copper‐dependent amine oxidase that plays important roles in the development and homeostasis of primary brain tumors such as glioma. The aim of this study was to investigate whether polymorphisms in the LOX gene were associated with susceptibility to glioma. We tested two functional polymorphisms of LOX, ?22G/C and 473G/A, and compared them between 466 glioma cases and 502 healthy controls in the Chinese population. Results showed that the prevalence of 473AA genotype was significantly increased in cases than in controls (p = 0.001). Individuals who carried 473A allele had a 1.44‐fold of increased risk for glioma than those with 473G allele (p = 0.002). In addition, when analyzing the survival time of glioma patients with LOX 473G/A polymorphism, cases with AA genotype had significantly shorter survival time compared to the patients carrying G allele (25.0 months vs 43.0 months, p = 0.0009). These results suggested that polymorphism in LOX gene was associated with increased susceptibility to glioma and could be used as prognostic factor for this malignancy.     

MicroRNA与胶质瘤关系的研究进展

胶质瘤是一种最常见的颅内肿瘤,约占所有颅内肿瘤的50％.MicroRNA是一种长为18～25 nt,进化上高度保守的内源性非编码小分子RNA.实验证据表明microRNA可通过调控其靶标基因参与的信号通路,影响肿瘤的发生和发展,发挥类似于癌基因或抑癌基因的功能.与正常脑组织相比,多种microRNA在许多胶质瘤组织中异常表达,为胶质瘤的诊断和治疗提供了新的策略.     

Cytogenetics of neuroblastoma and glioma]

Without having the common high specific marker, the tumours of the nervous system are, however, characterized by regular quantitative and structural changes of chromosomes. In this review molecular and genetic aspects of chromosome translocations typical for the main types of the nervous system, their role in activation of protooncogenes and their conversion to oncogenes, which is able to cause tumor transformation, are considered. Additionally, the role of chromosome translocation in the inactivation of suppressor genes is discussed.     

血管中心性胶质瘤临床病理学特征及相关文献复习

目的探讨血管中心性胶质瘤(angiocentric glioma,AG)的临床病理学特征、诊断及鉴别诊断。方法收集首都医科大学宣武医院病理科诊断的12例AG,回顾性分析患者的临床资料、病理学特征及预后,并复习相关文献。结果12例患者均有难治性癫痫病史,平均发病年龄9岁(2.8~24岁)。头颅核磁共振(MRI)表现为T1WI低信号,T2WI/FLAIR高信号,未见明显强化。组织学特点为均一的双极细胞,沿血管轴排列形成血管周围假菊形团。AG中GFAP、vimentin均阳性,肿瘤细胞中EMA、D2-40呈胞质弥漫阳性或核旁点灶阳性,EMA和D2-40的阳性率分别为91.7%(11/12)和100%(12/12);NeuN、IDH1 R132H、L1CAM、BRAF V600E和H3K27M均阴性。Ki-67的增殖指数为1%~5%。术后影像学检查示患者肿瘤均完整切除。随访14~110个月,患者均无癫痫发作及肿瘤复发。结论AG是以癫痫发病、生长缓慢的肿瘤,手术切除效果良好。