卡马西平增加癫痫模型大鼠脑内P-糖蛋白的表达

目的探讨癫痫发作与抗癫痫药物卡马西平(CBZ)对多药耐药基因编码的P-糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法给雌性SD大鼠侧脑室注射海人酸(KA)或PBS,成模后再口服CBZ。成模或给药后3、5、7、14、21和28d灌杀大鼠取脑,用免疫组化和双标免疫染色对脑中P-gp进行半定量及定位分析。尼氏染色观察海马神经元的变化。结果模型大鼠脑电图及行为变化与人类癫痫相似,CBZ对癫痫发作没有作用。癫痫发作后第5天脑P-gp表达水平增加,7d时最高,21d后恢复到正常水平。阳性产物主要位于海马的毛细血管内皮细胞,也见于皮层的毛细血管及神经元。CBZ对正常大鼠P-gp的表达没有影响。CBZ KA组动物海马P-gp的表达与KA组动物相似,但7d时其表达明显增强。结论癫痫发作可诱导P-gp的表达;卡马西平在癫痫发作中也参与了P-gp的高表达。     

海人酸致癫痫大鼠海马结构中noggin表达变化

目的:研究海人酸(kainic acid,KA)侧脑室注射并诱发癫痫持续状态(status epilepticus,SE)后大鼠海马结构中noggin基因在大鼠海马的表达变化。方法:大鼠在侧脑室注射KA后1、3、7、14、30和60d等不同时间,采用RT-PCR研究noggin mRNA含量变化,采用免疫组化观察noggin蛋白表达变化。结果:在正常大鼠海马结构中noggin mRNA有少量表达。noggin阳性细胞主要位于齿状回及CA3、CA1区,数量较少。侧脑室注射KA诱发SE后,noggin表达持续升高,3d达到高峰;7d在脑内的表达开始降低;注射后2个月,noggin表达降至术前水平,仅见散在的阳性细胞。结论:侧脑室注射KA并诱发SE后,大鼠海马结构中noggin表达明显增加。     

海人酸诱导大鼠海马nestin的表达

为了探讨海人酸(kainicacid,KA)侧脑室注射后大鼠海马内nestin的表达变化,本文选用成年雄性SD大鼠,并随机分成实验组和对照组。实验组大鼠侧脑室注射1μl(0.5μg/μl)KA,分别于术后1、3、7、14、30、60、90d处死动物,并应用免疫荧光方法观察神经前体细胞标记物nestin、神经元特异烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。实验组大鼠海马的nestin阳性细胞在KA注射后3d开始出现于齿状回、CA3和CA1区,到7d达到高峰,然后逐渐减少。注射侧的nestin阳性细胞数均较非注射侧多(P<0.01);对照组仅有散在阳性细胞。本结果提示,海人酸可诱导和增强大鼠海马nestin的表达,而这些表达nestin的细胞主要为星形胶质细胞。     

海人酸致痫大鼠的海马微血管构筑的改变

目的观察海人酸(KA)癫痫模型中海马微血管构筑的改变。方法采用KA癫痫模型,在造模后第7天应用碱性磷酸酶法显示海马脑片的微血管,光镜观察,定量分析。结果海马内的微血管呈层分布,构筑模式与神经元的构筑模式相一致;KA组的微血管数目明显多于对照组(P=0.001),血管平均直径明显低于对照组(P=0.030),血管总长度明显高于对照组(P=0.000),血管的平均长度略高于对照组(P=0.085)。结论癫痫大鼠海马微血管构筑的改变是癫痫发病的形态学基础之一。     

P-糖蛋白在永久性脑缺血大鼠脑内的表达

目的:研究脑缺血后多药耐药蛋白(P-glycoprotein,P-gp)在脑内血管及细胞中的表达变化,探讨P-gp与脑缺血的关系。方法:应用微创开颅法建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,30只大鼠随机分为缺血后1、2、3 d共3个缺血组,以及正常对照组和假手术组(n=6)。用抗P-gp抗体进行免疫组化染色观测血管壁及脑内细胞是否表达P-gp以及缺血后不同时间点的表达变化。结果:缺血后1、2、3 d组中,在缺血坏死区可见大量表达P-gp的阳性细胞,3 d时达高峰;缺血区仅有少量血管表达P-gp,在缺血区周围皮质及纹状体中血管壁上大量表达P-gp,并随缺血时间的延长而显著增多,在3 d组达高峰。结论:脑缺血后大鼠脑内血管壁及细胞中大量表达P-gp,提示脑内受损后多药耐药蛋白合成增加,在自我保护的同时也影响了临床药物的进入。     

耐抗癫痫药大鼠模型脑内P-糖蛋白的表达

目的：通过耐丙戊酸钠（VPA）、耐卡马西平（CBZ）大鼠惊厥模型探讨癫痫耐药机制。方法：采用大鼠腹腔注射戊四氮（PTz）21d的点燃方法,建立大鼠惊厥模型。在此基础上分别以CBZ及VPA灌胃14d,建立耐CBZ及耐VPA大鼠惊厥模型。实验分4组：正常对照组、惊厥对照组、耐CBZ组及耐VPA组,每组8只鼠。以惊厥潜伏期和Racine行为学分级作为评定药效指标。采用免疫组化法检测大鼠脑内P-糖蛋白（Pgp）的表达变化;统计分析各组大鼠脑内Pgp表达量,探索癫痫大鼠的耐药机制。结果：①24只大鼠在连续腹腔注射PTZ21d达点燃标准,成功建立惊厥模型;②取16只惊厥大鼠分两组各灌胃CBZ及VPA14d后,两组大鼠惊厥潜伏期（5．84士2．94和6．23土2．57min）较惊厥对照组的惊厥潜伏期（3．32±1．83min）显著延长（P〈0．01）,提示耐CBZ及耐VPA模型制备成功;③惊厥对照组PgP的表达（12．40±10．35）比正常对照组（1．62±0．85）增高,差异有统计学意义（P〈0．01）;耐CBZ组（38．67±17．28）及耐VPA组大鼠的PgP的表达（42．33±15．54）较惊厥对照组（12．40±10．35）增高,差异有显著意义（P〈0．01）;而耐CBZ组与耐VPA组之间PgP的差别则无统计学意义（P〉O．05）。结论：①大鼠腹腔注射PTz21d,建立惊厥模型,再进一步分别灌胃CBZ及VPA14d,成功建立耐CBZ及耐VPA模型;②CBZ和VPA可显著诱导Pgp的表达,而长期惊厥发作对其表达也可能有一定的诱导Pgp表达的作用。     

CCK与海人酸诱发癫痫敏感性形成的关系

用海人酸 (Kainic acid,KA) 10 mg/ kg给 Sprague- Dawley (SD)大鼠颈部皮下注射 ,诱发急性癫痫发作 ,在急性癫痫发作后一周 ,用阈下剂量 (5 mg/ kg)的 KA检测癫痫敏感性。同时分别用原位杂交和免疫组化技术检测并发现癫痫敏感性形成大鼠额叶皮层胆囊收缩素原 (PCCK) m RNA明显增加 ;海马结构中 ,靠近海马齿状回颗粒细胞 (DGCs)基底部锥体样胆囊收缩素 (Cholecystokinin,CCK)免疫反应阳性神经元染色明显增强 ,但海马门尖部 CCK免疫反应阳性神经元明显减少。而癫痫敏感性未形成大鼠未见上述变化 ,提示上述变化与癫痫敏感性形成有关     

P-糖蛋白抑制剂的研究进展

肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药（MDR，即肿瘤细胞对某种化疗药物产生耐药，同时对其他化学结构，机理不同的化疗药物亦产生交叉耐药）是肿瘤患者化疗的主要原因，许多因素参与MDR的发生过程，而MDR基因编码的P-糖蛋白（P—gp）过度表达是主要因素，因此通过抑制其过度表达，从而使肿瘤细胞的MDR产生逆转，对于提高疗效、降低毒副反应具有重要意义。近几年来P—gp抑制剂的研发较快，已发展至第3代。随着研究的不断深入，将有更多疗效突出、副作用小的P—gp抑制剂问世。     

海人酸颞叶癫犬模型的脑磁图研究

目的:应用海人酸(KA)海马注射建立颞叶癫(TLE)犬模型,探讨对其进行脑磁图(MEG)研究的可行性。方法:应用KA给予犬脑单侧海马微量注射建立TLE模型,观察癫发生发展过程中的发作表现、脑电图、磁共振及病理改变,着重分析这种模型的MEG结果。结果:应用KA给予犬脑局部微量注射可成功制作TLE模型,模型表现稳定,脑电图、磁共振图、病理改变规律和MEG表现与电生理学及形态学表现相符。结论:应用KA局部微量注射制备的TLE犬模型是癫研究的有效实验工具,该模型在MEG基础研究中具有应用价值。     

构建海人酸诱导的内侧颞叶癫痫小鼠模型

目的 建立C57BL/6颞叶癫痫小鼠模型,观察其在行为学和病理学上的变化.方法 将C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、0.9%氯化钠注射组(35μL/g)和海人酸注射组(12 mg/kg),进行单侧海马注射.注射5 d或5周后,取小鼠脑进行HE染色,观察海马病理结构改变;检测海马组织中mTOR通路标志物P-S6蛋白质...     

红藻氨酸对大鼠海马锥体细胞钙电流的影响

目的：应用膜片钳技术,观察红藻氨酸（KA）对大鼠海马锥体细胞ca2＋电流的影响,以研究癫痫的发病机制。方法：采用酶加机械分离法制备出生10～12d的大鼠海马锥体神经元标本,用全细胞膜片钳技术测定其生理学特性及观察KA对ca2＋电流的影响。结果：分离出的海马锥体细胞形态正常,有较长突起;用膜片钳技术证实,其保存了主要的离子通道活性。KA20μmol／L和100μmol／L的浓度均可使海马锥体细胞ca2＋电流峰值增大（n=8,P〈0．01）。结论：①大鼠海马锥体神经细胞具有明显的突起,细胞膜表面光洁、晕光好,适用于膜片钳实验研究;②KA使ca2＋内流增加,引起“Ca”超载”导致细胞毒性等一系列反应;③KA通过激活α-氨基羟甲基恶唑丙酸（AMPA）受体,诱发快速的兴奋性突触后电位（EPSP）,参与兴奋性突触传递。AMPA受体的激活可能是癫痫的发病机制之一。     

Statin inhibits kainic acid-induced seizure and associated inflammation and hippocampal cell death

Statins are inhibitors of HMG-CoA reductase that have been recently recognized as anti-inflammatory and neuroprotective drugs. Herein, we investigated anti-excitotoxic and anti-seizure effects of statins by using kainic acid (KA)-rat seizure model, an animal model for temporal lobe epilepsy and excitotoxic neurodegeneration. We observed that pre-treatment with Lipitor (atorvastatin) efficiently reduced KA-induced seizure activities, hippocampal neuron death, monocyte infiltration and proinflammatory gene expression. In addition, we also observed that lovastatin treatment attenuated KA- or glutamate-induced excitotoxicity of cultured hippocampal neurons. These observations suggest a potential for use of statin treatment in modulation of seizures and other neurological diseases associated with excitotoxicity.     

克罗米酚的抗癫癎作用

目的:了解雌激素受体调节剂克罗米酚(clomiphene citrate,CC)对海人藻酸(kainic acid, KA)致癎大鼠癫癎发作行为的影响。方法:健康雌性SD大鼠40只,均行双侧卵巢切除术,术后第八天将动物随机分4组:茶油对照组(OIL组)、KA组、雌二醇(E2) KA组、E2 CC KA组,每组10只。 OIL组、KA组连续5天腹腔注射茶油;E2 KA组连续5天腹腔注射E2(20mg／kg,10mg／ml);E2 CC KA组连续5天腹腔注射E2和CC(2mg／kg,2mg／ml),最后一次打药结束1 h后,致癎各组大鼠(KA 组、E2 KA组、E2 CC KA组)经腹腔注射KA(10mg／kg,2mg／ml),OIL组腹腔注射生理盐水后,连续观察大鼠2 h的行为改变。记录癎样发作的潜伏期、出现重型发作的时间以及发作程度。结果:E2 CC KA组的癫癎发作潜伏期为61．75±19．04 min,较E2 KA组的潜伏期23．8±6．03 min延长,且出现重型癫癎发作的时间晚,为50．20±20．37 min,而E2 KA组出现重型癫癎发作时间平均为30．70 ±13．58 min,两组比较差异有显著意义(P<0．05)。致癎2 h后,致癎各组大鼠的癫癎发作Racine分级比较差异显著意义(P>0．05)。结论:CC有拮抗雌激素的致癎作用,延缓癫癎的发作。     

Curcumin attenuates the kainic acid-induced hippocampal cell death in the mice

Kainic acid (KA) induced oxidative stress is associated with hippocampal cell death. Recent studies suggest that curcumin, a potent antioxidant, may provide protection for KA-induced oxidative stress. We investigated the effects of curcumin treatment on hippocampal reactive astrocytes in mice with KA-induced seizures. Eighteen hours after curcumin treatment, mice were treated with KA (30 mg/kg, i.p.), and then sacrificed after a further 48 h. Using cresyl violet staining and TUNEL analysis, histological evaluation revealed cell death in the KA-treated hippocampus. However, marked cell death was not observed in mice treated with curcumin. In addition, curcumin treatment reduced the KA-induced immunoreactivity of caspase-3. Similarly, immunoreactivity analyses indicated that KA causes upregulation of hippocampal GFAP, eNOS, and HO-1 levels, all of which were reduced in animals those received the curcumin treatment. Our findings indicate that curcumin is a potent inhibitor of reactive astrocyte expression and thus, prevents hippocampal cell death. These results also support its potential for use in the treatment of neurodegenerative diseases.     

低频重复经颅磁刺激对难治性癫痫大鼠模型脑内P—gP表达的影响

目的：观察低频重复经颅磁刺激（rTMS）对难治性癫痫大鼠模型脑内P-糖蛋白（P—gp）表达的影响。方法：24只大鼠海仁酸注射以建立难治性癫痫模型,随机分为4个造模组：单纯rTMS组、假性rTMS组、丙戊酸钠组和丙戊酸钠＋rTMS联合治疗组,每组6只;另有6只不造模作对照组,只注射等容量生理盐水以作对照。用免疫组织化学方法观察和比较各组动物脑内P—gP的表达。结果：单纯rTMS组大鼠脑内梨状皮层和丘脑区P—gP的表达与假性rTMS组相比明显下降,差异有统计学意义（P=0.003,P=0.005）;丙戊酸钠组大鼠脑内P—gP表达在海马CA3区、梨状皮层和丘脑区明显升高,与联合治疗组比较差异有统计学意义（P=0．008,P=0．003,P=0．001）。结论：低频rTMS可以降低难治性癫痫大鼠脑内P—gP的高表达。     

红藻氨酸致(癎)大鼠神经元凋亡的动态研究

目的：探讨红藻氨酸（kainic acid，KA）诱导的癫痫大鼠脑内神经元凋亡在不同部位和致痫后不同时间的变化情况。方法：将50只SD大鼠随机分为对照组和KA组，KA组再按癫痫发作后1天、1周、2周、3周和4周不同时点分为5个亚组。KA注射后，观察大鼠癫痫发作后的行为学变化，采用原位细胞凋亡检测法观察不同部位、不同时点神经元凋亡情况。结果：KA注射后，大鼠出现严重的惊厥，在癫痫发作后1天、1周和4周凋亡细胞明显增多，以齿状回、丘脑和CA3区明显（P〈0．05）。结论：细胞凋亡贯穿KA致痫大鼠癫痫发作后神经元迟发性死亡的全过程。     

地塞米松对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织AQP-4表达的研究

目的探讨DEX（地塞米松）对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑组织AQP-4表达的影响,为临床治疗新生儿缺氧缺血脑病提供实验和理论依据,揭示其发病机制,以期指导该病的早期治疗。方法将健康7日龄SD新生大鼠96只,清洁级,雌雄不限,平均体重12-18g,随机分为假手术组,HIBD组,DEX组,各组32只,分离左侧颈总动脉并结扎,吸入92%N2＋8%O2氮氧混合气体行缺氧处理3h,制成HIBD模型。假手术组只作分离左侧颈总动脉而不结扎,不作缺氧处理,不给与药物处理。DEX治疗组于建模成功后立即腹腔注射10mg/kg,假手术组及HIBD组大鼠腹腔注射等量生理盐水,上述各组均于术后6h、24h、48h、72h随机抽取8只,于麻醉下处死取脑组织,通过Western blot方法检测新生大鼠脑组织AQP-4蛋白表达及实时定量PCR检测AQP-4 mRNA的表达。结果 SD鼠在缺氧处理后出现异常行为学改变。AQP-4 mRNA及蛋白的表达在缺氧诱导后显著升高,DEX的治疗则使SD鼠异常行为的表现程度减轻,后趋于正常,且能够降低HIBD导致的AQP-4的升高。结论 DEX对HIBD的治疗具有一定的疗效。     

Intracellular electrophysiology of CA1 pyramidal neurones in slices of the kainic acid lesioned hippocampus of the rat

Summary Intracellular recordings were made from hippocampal CA1 pyramidal cells in slices where the CA3/CA4 region had been lesioned using intracerebroventricular kainic acid. In 55% of the cells studied orthodromic excitation evoked bursts of action potentials. This bursting activity was associated with a decrease in or loss of the early phase to the hyperpolarisation which normally follows orthodromically evoked action potentials. The recurrent inhibitory post-synaptic potential produced by antidromic activation of pyramidal cells was also reduced or absent. A late phase to the orthodromic hyperpolarisation was reduced in cells from lesioned slices. However, in normal slices treated with bicuculline this potential showed an apparent increase. The afterhyperpolarisation which follows a short current evoked burst of action potentials was reduced in bursting cells from lesioned slices. In addition, a silent period in the firing pattern produced by long depolarising current pulses was reduced or absent in these cells. These results together with observations made with bicuculline suggest that the bursting activity in lesioned slices is largely due to a loss of inhibition mediated by -aminobutyric acid. It is proposed that the kainic acid-lesioned in vitro hippocampus may be a suitable preparation for studying the electrophysiology of temporal lobe epilepsy.     

Some behavioral effects of selective neuronal depletion by kainic acid in the dorsal hippocampus of rats

Iontophoretic injections of the neurotoxin kainic acid (KA) into the dorsal hippocampus resulted in an essentially complete attrition of neurons throughout the dorsal hippocampus but spared the fimbria/fornix system. The ventral hippocampus, subiculum, and associated aspects of the entorhinal area appeared completely intact. There was also no detectable damage to neocortex or thalamus adjacent to the dorsal hippocampus or to such KA-sensitive distant regions of the brain as the piriform cortex or striatum. Bilateral depletion of neurons from the dorsal hippocampus retarded the acquisition of a brightness discrimination (because the animals developed position habits during the early phases of acquisition) but had no deleterious effects on brightness discrimination reversal. The KA injections also sharply reduced spontaneous alternation in a T maze and increased locomotor activity in an open field. Food and water intake as well as saline and sucrose preferences were normal after the initial post-operative period but the animals continued to spill more of their food than controls.     

白藜芦醇对戊四氮慢性点燃大鼠行为及脑电图的影响

目的：探讨白藜芦醇（resveratrol,RV）对戊四氮（pentylenetetrazole,PTZ）慢性点燃大鼠行为及脑电图（EEG）的影响。方法：将60只Wistar大鼠随机分为空白对照组（A组）、PTZ致癎组（B组）、RV干预组（C组）,每组20只。B组和C组通过腹腔注射PTZ建立慢性癫癎动物模型,观察大鼠行为、脑电图及海马组织学变化情况。结果：腹腔注射RV可明显抑制大鼠的癎样放电,延长发作潜伏期、缩短发作时间,与PTZ致痂组相比重型发作率降低（P〈0．05）;同时在病理学上还能减轻海马神经元的损伤程度。结论：RV可明显抑制PTZ诱导的大鼠癫癎发作,对致癎海马神经元有一定的保护作用。