低浓度β-淀粉样蛋白诱导小胶质细胞释放一氧化氮的研究

阿尔茨海默病 (AD)重要的病理特征之一是纤维状 β 淀粉样蛋白 (Aβ)在神经细胞外及脑血管壁沉积形成或老年斑(SP)。大量研究表明 ,Aβ沉积激活小胶质细胞所引起的炎症反应是AD的核心致病机制之一 ,但对低浓度Aβ能否激活小胶质细胞存在争议。我们于 2 0 0 2年 6月至 2 0 0 3年 1月用低浓度Aβ干预小胶质细胞 ,观测其形态及一氧化氮(NO)分泌的变化。方法 :无菌条件下将出生 3d内的Wistar大鼠的大脑皮层消化成原代混合胶质细胞 ,培养 7～ 9d ,恒温摇床振摇处理分离出小胶质细胞 ,用孵育成聚集状态的Aβ1 40 及Aβ1 42以不同的浓度分别…     

小胶质细胞在阿尔茨海默病中吞噬作用的研究进展

小胶质细胞(Mic)作为中枢神经系统(CNS)的主要免疫细胞,在CNS受到损伤时,数量增多,形态发生改变,转变成为脑组织中的巨噬细胞。在阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)患者中,小胶质细胞被β淀粉样蛋白(amyloidbetapeptide,Aβ)激活,能够吞噬清除斑块,具有保护CNS的功能。但是,Aβ的持续刺激会加速小胶质细胞衰老,导致小胶质细胞功能不良,吞噬清除Aβ及保护神经元的功能减弱,无法有效抑制AD进展。     

髓样触发受体2及其相关信号通路在阿尔茨海默病中的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种进行性发展的神经退行性疾病,是导致老年人痴呆最主要的原因.AD的病理学主要表现为细胞外β淀粉样蛋白(Aβ)聚集和细胞内神经纤维缠结(NFT)形成.髓样细胞触发受体2(TREM2)主要在小胶质细胞和星形胶质细胞的细胞膜上表达,其突变可提高AD的发病风险,与配体结合可激活下游信号通路,调节小胶质细...     

非酶糖化、晚期糖基化终产物与阿尔茨海默病

许多证据显示非酶糖化及其晚期产物-晚期糖基化终产物(AGEs)在阿尔茨海默病(AD)发病中的重要作用。AGEs促进蛋白交联;糖化β-淀粉样蛋白与AGEs受体相互作用激活小胶质和星形胶质细胞,促进氧化应激、分泌诱导型一氧化氮合酶和前炎症细胞因子,并损伤神经元,促进AD的发生发展。AGEs及其受体在AD中的可能作用机制为开发预防、治疗AD的新药提供理论基础。     

小胶质细胞在阿尔茨海默病中的作用研究进展

目前以阿尔茨海默病(AD)主要病理特点——"β-淀粉样蛋白级联假说、tau蛋白异常聚集"为靶点研发的多种药物, 疗效都不理想。随着对AD病理机制的研究进展, 小胶质细胞及其相关表达基因TREM2、CD33、ABCA7和与其相关的信号传导通路在AD病理机制中的作用越来越被重视, 基于小胶质细胞及其相关表达基因的AD生物学标志物和治疗靶点的研究也明显增多。文中将对小胶质细胞的病理生理、小胶质细胞在AD中的作用机制和小胶质细胞相关的生物学标志物、AD药物治疗进行简要综述。     

miRNA在阿尔茨海默病发病机制中作用的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种发病率较高的神经退行性疾病,可严重影响患者及家属的生活质量。miRNA可通过调控AD中淀粉样蛋白前体(APP)、β-分泌酶1(BACE1)、tau等生物标志物的表达和神经炎症相关的胶质细胞的激活影响AD的发病机制。本文综述近年来miRNA在AD发病机制中作用的研究,为进一步探索miRNA对AD诊断及治疗的策略提供依据和思路。     

β-淀粉样蛋白对星形胶质细胞分泌组织蛋白酶B作用的研究

目的研究β-淀粉样蛋白(Aβ)对星形胶质细胞活性、形态学以及分泌组织蛋白酶B(CB)的影响。方法体外培养星形胶质细胞,采用免疫细胞化学方法对星形胶质细胞进行鉴定;观察加入不同浓度溶解状态的Aβ1-40后细胞形态学改变,采用四唑盐法检测细胞活性,Western blot法测定细胞上清CB表达水平。结果将不同浓度新鲜Aβ1-40加于星形胶质细胞分别培养24 h,各浓度Aβ1-40对星形胶质细胞活性均无明显影响(P0.05);随时间延长,经40～60μmol/LAβ1-40处理的星形胶质细胞逐渐出现肿胀、坏死;经15、20、25μmol/L Aβ1-40诱导的星形胶质细胞上清中检测到CB表达,随Aβ1-40浓度增高可见蛋白质显影增强且带形清晰。结论 Aβ1-40可激活星形胶质细胞并诱导其释放CB,提示Aβ激活的星形胶质细胞及其释放的CB可能在AD发病中起着一定作用。     

京尼平对脂多糖诱导小胶质细胞炎症及凋亡的作用及机制研究

目的探讨京尼平(genipin)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞(BV-2)炎症及凋亡反应的作用及机制。方法采用LPS诱导BV-2小胶质细胞建立中枢神经系统炎症和凋亡反应模型。实验细胞分为4组:空白对照组、京尼平组、LPS组、LPS+京尼平组。通过ELISA、RT-PCR、Western Blot、细胞流式检测细胞的炎症及凋亡反应。结果与空白对照组比较,LPS可以诱导BV-2细胞上清培养基中IL-6、IL-1β和TNF-α释放和细胞内IL-6、IL-1β和TNF-α转录的增加;同时,LPS还可以激活凋亡蛋白Bax并抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,导致细胞凋亡率的明显升高。京尼平预处理可以有效抑制小胶质细胞介导的炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)激活,并减少LPS诱导的小胶质细胞凋亡。结论 genipin干预可对LPS诱导的小胶质细胞炎症及凋亡反应起到保护作用。     

髓样细胞触发受体2调控小胶质细胞功能及参与阿尔茨海默病发病机制的研究进展

阿尔茨海默病(AD)是一种以细胞外β淀粉样蛋白(Aβ)沉积形成的淀粉样斑块、细胞内过度磷酸化tau蛋白形成的纤维缠结及神经炎症为特征性病理表现的神经退行性病变。近年来研究发现,髓样细胞触发受体2(TREM2)基因突变显著增加阿尔茨海默病的发病风险。TREM2在中枢神经系统(CNS)中仅表达于小胶质细胞,小胶质细胞作为CNS中最主要的一道免疫防线,吞噬中枢神经系统特异性碎片及Aβ和tau等异常聚集蛋白,还可调节可溶性炎症介质的释放,以应对中枢神经系统损伤。本文对小胶质细胞TREM2在AD中的作用进行综述。     

海风藤对β淀粉样蛋白寡聚体激活小胶质细胞的影响

目的 研究海风藤提取物对β淀粉样蛋白(Aβ)寡聚体诱导小胶质细胞激活的影响.方法 模拟体内生理条件诱导Aβ单体形成Aβ寡聚体,原代培养新生大鼠小胶质细胞,分别用Aβ25-35寡聚体、Aβ25-35寡聚体+海风藤提取物、Aβ25-35寡聚体+DMSO干预小胶质细胞,并设空白对照组,48 h后测上清液中白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)水平,并比较各组间炎性因子差异.结果 Aβ寡聚体组上清液中IL-1β、IL-6水平明显高于空白对照组[IL-1β:(67.06±1.79)pg/mL vs.(36.30±1.40)pg/mL;IL-6:(181.14±4.46) pg/mLvs.(110.90±4.62)pg/mL,均P＜0.05];Aβ寡聚体组上清液中IL-1β、IL-6水平明显高于Aβ寡聚体+海风藤提取物组[IL-1β:(63.24±2.00) pg/mL,IL-6:(170.34±3.47) pg/mL,P＜0.05];Aβ寡聚体组上清液中IL-1β、IL-6水平和Aβ寡聚体+DMSO组[IL-1β:(68.26±1.38) pg/mL,IL-6:(184,7±6.06) pg/mL]比较无统计学差异.结论 Aβ寡聚体能激活小胶质细胞;海风藤提取物能明显抑制Aβ寡聚体诱导小胶质细胞的激活.     

阿尔茨海默病患者表现帕金森病样临床特征的机制

目的 探讨阿尔茨海默病(AD)患者表现帕金森病(PD)样临床特征的机制.方法 用0.5、1.0和2.0μmol/L β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42处理Fischer 344大鼠、小胶质细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(亦称吞噬细胞氧化酶,PHOX)野生型(PHOX / )及其基因敲除(PHOX-/-)小鼠的中脑神经元-胶质细胞、神经元-星形胶质细胞和小胶质细胞培养体系:(1)检测多巴胺(DA)能神经元摄取能力;(2)计数酪氮酸羟化酶阳性(TH )DA能神经元数并观察细胞形态;(3)对小胶质细胞进行补体受体-3抗体(OX-42)染色并观察细胞形态;(4)检测小胶质细胞中超氧化物(O2)和细胞内活性氧类物质(iROS)水平.结果 (1)在大鼠神经元-胶质细胞中,0.5、1.0和2.0μmol/L Aβ组DA能神经元摄取能力分别为对照组的72%、61%和54%,TH 神经元数分别为对照组的77%、64%和52%,与对照组比较差异均具统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);DA能神经元胞体皱缩,胞浆淡染,神经突起数目减少、变短、变细,严重时中断甚至消失.(2)在大鼠神经元-星形胶质细胞中,0.5、1.0和2.0 Fmol/L Aβ组DA能神经元摄取能力分别为对照组的94%、96%和92%,与神经元一胶质细胞的结果比较差异均具统计学意义(均P＜0.01);小胶质细胞体积明显增大,胞浆深染,形状不规则;小胶质细胞产生的O2分别为对照组的194%、250%和300%,iROS分别为44、65和84荧光单位,与对照组比较差异均具统计学意义(均P＜0.01);(3)在PHOX / 和PHOX-/-小鼠,0.5、1.0和2.0 μmol/L Aβ组DA能神经元摄取能力分别为对照组的69%、64%、51%和91%、86%、80%,前组明显低于后组(P＜0.05,P＜0.01);产生的O2 分别为对照组的167%、250%、317%和88%、49%、61%,产生的iROS分别为14、38、164和0、12、80荧光单位,前组均明显高于后组(P＜0.05,P＜0.01);PHOX / 小鼠DA能神经元胞体及突起的损伤明显重于PHOX-/-小鼠.结论 Aβ通过PHOX从功能及形态上激活小胶质细胞,损伤DA能神经元,可能是AD患者出现PD样临床特征的机制,这为抑制小胶质细胞的PHOX成为治疗神经变性疾病的新靶点提供了一定依据.     

小胶质细胞异常激活在帕金森病发病中的作用及潜在临床应用

帕金森病为老年人群中常见的神经系统变性疾病,发病机制至今不明。近年研究表明,异常激活的小胶质细胞在神经炎症机制介导的帕金森病发病过程中起重要作用,小胶质细胞可在α突触共核蛋白、环境毒素、老龄化等因素的刺激下,以及内源性CD200-CD200R抑制信号减弱或缺失的情况下发生异常激活,通过分泌大量炎性因子(如肿瘤坏死因子α、IL1β等)活化诱导型一氧化氮合酶、环氧合酶2、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2等介导神经元损伤。抑制小胶质细胞异常激活从而有效抑制免疫炎性损伤,可能是帕金森病治疗的有效新途径。     

β-淀粉样蛋白对AD大鼠脑内胶质细胞的影响作用研究

目的　探讨Meynert核注射 β 淀粉样蛋白 (Aβ)后对大鼠脑神经胶质细胞超微结构的影响及其可能机制。方法　将 1μLAB1-40 (10 μg/ μL)在立体定向仪下注入大鼠右侧Meynert核 ,分别于 1周、4周时用透射电镜观察脑组织中神经胶质细胞超微结构变化。结果　实验组Meynert核、海马区和皮层区均可见神经胶质细胞增生 ,其中以小胶质细胞为主 ,星形胶质细胞次之 ;小胶质细胞聚集并吞噬变性神经细胞以及血管周围可见增生活跃的小胶质细胞聚集 ;神经元胞体皱缩 ,胞浆浓缩 ,核染色质固缩成团块状并见边聚现象 ,核膜尚完整 ,有发生凋亡的趋势 ;正常对照组和假手术组无上述变化。结论　Aβ能引发CNS神经胶质细胞增生并活化 ,免疫炎性反应在AD记忆障碍和痴呆形成过程中可能具有重要作用。     

尼古丁上调星形胶质细胞内源性Cryab抑制Aβ聚集的研究

目的研究尼古丁激活星形胶质细胞α7胆碱能受体(α7 nicotinic receptors,7 n AChRs)上调内源性B-晶状体蛋白(αB-crystallin,Cryab)并抑制β淀粉样蛋白(Amyloid,Aβ)集聚的现象及其机制。方法分离24 h内新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并鉴定;体外制备Aβ_(1-42)寡聚体;将细胞分为对照组、尼古丁组、α7n AChRs阻断剂(methyllycaconitine,MLA)组、Aβ_(1-42)组、尼古丁+Aβ_(1-42)组、PI3K信号通路阻断剂LY294002+尼古丁+Aβ_(1-42)组。用蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞内Cryab、P-Akt(ser473)、Aβ寡聚体的表达水平。结果尼古丁可以显著上调星形胶质细胞内源性Cryab蛋白(P0.05);尼古丁能够显著上调磷酸化Akt蛋白水平(P0.05);在细胞裂解液及培养基中,尼古丁显著增强星形胶质细胞对Aβ聚集的抑制作用(P0.01)。结论尼古丁通过激活星形胶质细胞α7 nAChRs上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚;PI3K/Akt信号通路可能参与尼古丁激活星形胶质细胞α7 n AChRs上调内源性Cryab蛋白抑制Aβ集聚的过程。为进一步研究尼古丁抑制Aβ集聚的可能机制提供了实验基础。     

血管内注射可溶性β-淀粉样蛋白1-40对毛细血管内皮细胞和胶质细胞毒性的研究

目的研究血液内较高浓度的可溶性β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)对毛细血管内皮细胞和胶质细胞的毒性,以探讨其在阿尔茨海默病发病中的作用.方法成年雄性SD大鼠90只,随机分为注射Aβ1-40组、注射生理盐水组以及正常大鼠(非手术)组,每组30只.采用右侧颈外静脉血管插管并留置的方法,通过导管向血管内中每日2次注射10μg的可溶性的Aβ1-40,连续14天后,采用免疫组化和免疫印迹(Western blot)方法观察星形胶质细胞、小胶质细胞的激活状态以及转糖蛋白-1、转糖蛋白-3表达的改变.结果注射Aβ1-40以后,毛细血管周围星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白表达明显增多;小胶质细胞呈明显的激活状态;Western blot法检测到脑实质内转糖蛋白-1以及转糖蛋白-3表达明显减少.结论血管内连续注射Aβ1-40以后,对血-脑屏障的内皮细胞有明显的损害,对胶质细胞有明显的激活作用,可能与AD发病有关.     

小胶质细胞在脓毒症相关性脑病中的作用研究进展

脓毒症相关性脑病(SAE)是由脓毒症引起的弥漫性脑功能障碍, 临床表现以意识改变及认知障碍为特征。小胶质细胞作为脑内主要的免疫细胞, 是影响SAE病程进展的重要因素, 例如小胶质细胞表面受体可通过影响小胶质细胞激活而在SAE发病中起重要作用, 小胶质细胞激活可通过加重神经炎症、损伤血脑屏障及突触功能参与SAE的发生发展等。本文主要围绕小胶质细胞表面受体及小胶质细胞激活在SAE发生发展中的作用机制进行综述, 以期为SAE的防治提供新思路。     

阿尔茨海默病与神经胶质细胞研究进展

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病,主要临床表现为记忆减退、失语、失认、视空间能力减退等认知功能障碍,其主要病理特征为脑组织神经元细胞外形成神经炎性淀粉样斑块和脑组织神经元细胞内高度磷酸化的tau蛋白聚集形成神经原纤维缠结。目前,AD的发病机制还不明确,近年来越来越多研究开始关注神经胶质细胞对AD的作用。神经胶质细胞是神经组织中除神经元以外的另一大类细胞,主要包括星形胶质细胞、少突胶质细胞和小胶质细胞等。研究神经胶质细胞对AD发病的作用,可能为AD的预防和治疗提供新的理论依据。     

脑缺血对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能的影响及其机制探讨

目的 探讨脑缺血对阿尔茨海默病(AD)病程进展的影响及其机制.方法 采用大鼠海马注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40建立AD模型,再于海马内注射ET-1建立脑缺血条件,观察脑缺血后AD样大鼠认知功能以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和异常磷酸化tau表达的变化;采用免疫组化、原位杂交和RT-PCR法检测海马内星形胶质细胞数量和IL-1、TNF-α表达的变化.结果 脑缺血后AD样大鼠的认知功能明显下降,海马内Aβ沉积增加,神经元丢失增加,异常磷酸化tau表达增加.星形胶质细胞的数量以及IL-1和TNF-α的表达显著增加(均P＜0.01).结论 脑缺血加重了AD样大鼠的认知功能障碍和海马病理损伤,显著增加的星形胶质细胞及IL-1和TNF-α的表达参与了这一过程.防治脑缺血和抗炎治疗可能成为减缓AD进展的新途径.     

线粒体钙单向转运体在β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞凋亡中的作用机制

目的探讨线粒体钙离子单向转运体在β淀粉样蛋白诱导小胶质细胞凋亡中的作用机制。方法将体外原代培养小胶质细胞随机分为对照组、Aβ_(25-35)组、Ru360组、Spermine组,并进一步采用线粒体特异性抗氧化剂MitoQ进行干预;采用流式细胞术、荧光探针及Western blotting等技术检测细胞凋亡、线粒体钙离子浓度、ROS生成及相关蛋白表达。结果 (1)与对照组相比,Aβ_(25-35)显著增加小胶质细胞凋亡,Ru360显著减少Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞凋亡,而Spermine发挥相反作用;(2)与对照组相比,Aβ_(25-35)显著增加低线粒体钙离子浓度及线粒体ROS生成水平,Ru360显著降低Aβ_(25-35)诱导的线粒体钙离子浓度及线粒体ROS生成水平的升高,而Spermine发挥相反作用;(3)与对照组相比,Aβ_(25-35)组GRP78、CHOP和caspase-12的表达显著增加,Ru360显著减少Aβ_(25-35)诱导的GRP78、CHOP和caspase-12表达的增加,而Spermine发挥相反作用;(4)与Aβ_(25-35)组相比,MitoQ组显著减少线粒体ROS产物水平,并减少GRP78、CHOP和caspase-12表达。结论 (1) MCU在Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞凋亡发挥重要作用,抑制MCU可减少细胞凋亡,而激活MCU增强细胞凋亡;(2)氧化应激介导的内质网应激反应可能在MCU参与Aβ_(25-35)诱导的小胶质细胞凋亡中发挥重要作用。     

补体及调节剂与阿尔茨海默病

炎性机制在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)发病过程中起重要作用,补体也被认为参与了颅内慢性炎性反应。颅内补体主要由脑内神经元、胶质细胞等产生。在AD发病过程中,补体可能被以β淀粉样蛋白为主的抗原物质通过经典途径、旁路途径、甘露聚糖结合凝集素(MBL)途径等激活。激活的补体发挥了神经毒性作用。但也有一些研究结果表明某些补体成分可保护神经元免受损伤。AD发病过程中补体存在过度活化。补体调节剂是一类能够调节补体活性的物质,已应用于治疗一些疾病。AD的补体调节治疗现处于动物实验阶段。