Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响

目的:探讨Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L)?Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L)?高糖组(HG组,葡萄糖浓度30mmol/L)和高糖+Resveratrol组(HG+Res组,葡萄糖浓度30 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L),各组细胞分别培养72 h,用比色法测定细胞上清液丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,蛋白含量/细胞数比值评估系膜细胞大小,Western blot法检测细胞内p27蛋白表达的变化?结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均明显上调(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均降低(P < 0.05)?②与NC组相比,HG刺激72 h后,大鼠肾小球系膜细胞肥大?p27蛋白表达明显增加(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞细胞肥大减轻?p27蛋白表达减少(P < 0.05)?Res组和NC组之间p27蛋白表达无统计学意义(P > 0.05)?结论:Resveratrol可能通过缓解高糖诱导系膜细胞的氧化应激?抑制p27蛋白高表达,减轻糖尿病肾脏疾病早期的肾脏肥大?     

高糖刺激对体外培养大鼠肾小球系膜细胞表达TGF-β_1和PDGF-BB的影响

目的探讨高糖刺激对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)表达转化生子因子(TGF-β1)和血小板源性生长因子(PDGF-BB)的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,传代后分为正常组(葡萄糖浓度为5.6mmol/L)、高糖A组(葡萄糖浓度为15mmol/L)、高糖B组(葡萄糖浓度为30mmol/L),分别培养12h、24h、48h后,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定各组细胞TGF-β1和PDGF-BB mRNA的表达水平,应用免疫细胞化学法检测各组细胞中TGF-β1和PDGF-BB蛋白的表达。结果①正常组细胞可表达TGF-β1及PDGF-BB;②与正常组相比,高糖各组细胞TGF-β1和PDGF-BB的mRNA及蛋白表达均升高(P<0.01);③与高糖A组比较,高糖B组系膜细胞中TGF-β1和PDGF-BB的mRNA及蛋白表达均升高(P<0.01)。结论高糖刺激可以上调大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1和PDGF-BB的表达。     

二甲双胍对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖的作用及机制

目的:探讨二甲双胍对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖的作用以及可能的作用机制。方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1),①分为正常对照(NC)组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、NC+二甲双胍组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L+二甲双胍浓度200 mmol/L)、高糖(HG)组(葡萄糖浓度30 mmol/L)、HG+二甲双胍组(葡萄糖浓度30 mmol/L+二甲双胍,浓度分别是50、100、200、400 mmol/L),作用时间分别为6、12、24 h。MTT法检测各组HBZY-1细胞增殖的情况;②分为NC组、NC+二甲双胍组、HG组和HG+二甲双胍组(二甲双胍浓度200 mmol/L),作用时间12 h,用Western blot;法检测各组细胞内转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-AMPK和AMPK蛋白表达的变化。结果:①与NC组相比,高糖刺激12 h后HBZY-1增殖明显,差异有显著性(P<0.01);与HG组相比,HG加二甲双胍干预12 h后,随着二甲双胍的浓度逐渐增加,对HBZY-1增殖的抑制程度逐渐加大,差异均有显著性(P均<0.01);NC+二甲双胍组与NC组相比,两组之间HBZ...     

过表达Sirt1对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达的影响

目的:探讨过表达沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,Sirt1)对高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响?方法:体外培养人肾小球系膜细胞(HMC),利用Sirt1重组慢病毒载体感染细胞获得过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞并分为4组:①NG+LV-CTL组:正常葡萄糖(5.5 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;②HG+ LV-CTL组:高糖(30 mmol/L)+空白对照慢病毒感染;③NG+LV-Sirt1组:正常葡萄糖+Sirt1慢病毒感染;④HG+LV-Sirt1组:高糖+Sirt1慢病毒感染;再设立3组未感染细胞作为对照,分别为:①NG组(正常葡萄糖);②NM组(正常糖+甘露醇组24.5 mmol/L);③ HG组(高糖处理),培养不同时间后以CCK-8法检测细胞增殖情况;实时定PCR 和Western blot 法检测各组细胞TGF-β1 mRNA 和蛋白表达水平?结果:①通过重组慢病毒感染,嘌呤霉素筛选,获取稳定过表达Sirt1蛋白的人肾小球系膜细胞系;②与NG组相比较,各时间点HG?HG+LV-CTL?HG+LV-Sirt1组CCK8的吸光值均明显升高(P均 < 0.01)?处理24?48 h后,HG+ LV-Sirt1组的吸光值明显低于HG?HG+ LV-CTL组?③与NG组相比较,HG?HG+ LV-CTL?HG+ LV-Sirt1组TGF-β1 mRNA以及蛋白水平明显上调,差异均有显著性(P均 < 0.01);HG+LV-Sirt1组的TGF-β1 mRNA以及蛋白水平明显低于HG?HG+ LV-CTL组(P均 < 0.01);而NG?NM?NG+LV-CTL及NG+LV Sirt1组间相比较,无统计学差异(P > 0.05)?结论:过表达Sirt1能够抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞增殖与TGF-β1表达,Sirt1可能成为防治糖尿病肾病的作用靶点?     

高糖环境对HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞IL-18、TGF-β1表达的影响

目的:观察高糖环境下肾小球系膜细胞白细胞介素18(IL-18)、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的变化及其相互关系。方法:将HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞分别培养在正常葡萄糖(NG组:葡萄糖浓度为5.5 mmol/L)和高糖浓度(HG组:葡萄糖浓度为25 mmol/L)环境中,荧光定量PCR检测各组IL-18和TGF-β1 mRNA的表达量,而后分组加入不同浓度的IL-18(浓度分别为1、10、50、100 ng/dL)和IL-18抗体(浓度为100μg/dL),荧光定量检测TGF-β1 mRNA的表达量。结果:与NG组比较,HG组细胞IL-18、TGF-β1表达增加,TGF-β1表达水平随IL-18浓度增高而增加,用IL-18抗体阻断IL-18后TGF-β1的表达受到抑制。结论:高糖可导致IL-18、TGF-β1表达升高;TGF-β1表达升高依赖于IL-18,且有剂量依赖性;阻断IL-18可抑制TGF-β1的升高。     

Losartan下调高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β受体的表达

目的 观察血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂losartan对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β受体表达的影响.方法 取4～8代系膜细胞进行实验.系膜细胞转种在50mL塑料培养瓶和置有消毒盖玻片的24孔培养板中培养.系膜细胞长至亚融合状态时,换成无血清RPMI～1640培养基培养24 h,使细胞同步于静止期,然后分为4组:低糖(LG)组:加10%FBS RPMI-1640培养液(葡萄糖浓度为5.6 mmol/L);低糖+D-甘露醇(LG+M)组:加D-甘露醇(D-Mannitol)24.4 mmol/L和10%FBS RPMI-1640培养液(葡萄糖浓度为5.6 mmol/L);高耱(HG)组:加10%FBS RPMI-1640高糖培养液(葡萄糖浓度为30 mmol/L);高糖+losar-tan(HG+L)组:加losartan 10-5mol/L和10%FBS RPMI-1640高糖培养液(葡萄糖浓度为30mmol/L).各组系膜细胞继续培养72 h.每3瓶细胞作为1组,用半定量RT-PCR检测各组系膜细胞转化生长因子β1型受体(TβRI)、转化生长因子βⅡ型受体(TBRⅡ)和纤维连接蛋白(FN)MRNA的表达.24孔培养板中每4孔作为1组,用免疫组织化学检测各组系膜细胞Tβ RⅠ、Tβ RⅡ和FN蛋白表达.结果 HG组TβRⅠ、TβRⅡ和FN mRNA表达以及TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达显著高于LG组和LG+M组(P<0.05).加入losartan后,HG+L组Tβ RⅠ、Tβ RⅡ和FN mRNA表达显著降低,T β RⅠ、Tβ RⅡ蛋白表达也显著降低(P<0.05).与LG组比较,LG+M组Tβ RⅠ、TβRⅡ和FN mRNA表达以及TβRⅠ、TβRⅡ蛋白表达差异均无显著性(P>0.05).结论 高糖上调肾小球系膜细胞TGF-β受体和FN的表达,其作用与渗透压无关.血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂losartan能逆转高糖的上述作用.从而产生肾保护作用.     

重组人红细胞生成素对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖和TGF-βmRNA的影响

目的探讨重组人红细胞生成素(rHuEPO)对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖和表达TGF-βmRNA的影响。方法以大鼠M Cs为研究对象,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度为5 mmol/L),高糖组(HG组,葡萄糖浓度为10、20、30、40、50 mmol/L),其中30 mmol/L的高糖组分别以不同浓度rHuEPO(1、10、50、100、1 000 U/mL)分别干预24、48、72 h,Cell Counting Kit-8(CCK-8)比色法检测细胞增殖情况。用RealtimePCR法测定干预24、48、72 h时细胞TGF-βmRNA表达水平。结果在30 mmol/L以下时,葡萄糖能明显刺激M Cs的增殖,以30 mmol/L培养72 h反应最佳,rHuEPO在低于100 U/mL时能促进高糖诱导的M Cs增殖。rHuEPO在1 000 U/mL时,细胞毒性明显,大部分细胞死亡。结论高糖在一定时间和浓度内有刺激大鼠M Cs增殖的效应,rHuEPO在一定浓度和时间内能刺激高糖培养的MCs增殖,抑制高糖培养的MCs表达TGF-βmRNA。     

脂联素干预对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞表达色素上皮衍生因子的影响

目的:探讨脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响.方法:体外常规培养大鼠系膜细胞,传代后分组:对照组(培养液葡萄糖浓度5.6 mmol/L) 、高糖A 、B组(培养液葡萄糖浓度分别为15,30 mmol/L)、脂联素A、B、C、D组 (30 mmol/L葡萄糖培养液+脂联素,使培养液脂联素浓度分别为2.5,5,10,20 mg/L),分别作用24 h后,RT-PCR法测定各组细胞PEDF mRNA的表达水平;ELISA法测定各组上清液中PEDF蛋白的含量.结果:(1)与对照组相比,高糖各组大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达显著降低(P<0.05);(2)脂联素干预各组高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞PEDF mRNA及PEDF蛋白表达恢复(P<0.01).结论:高糖可抑制大鼠肾系膜细胞PEDF的表达,脂联素干预可逆转这一改变.     

辛伐他汀与阿托伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞p27蛋白表达的影响

目的探讨辛伐他汀和阿托伐他汀对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞p27表达的影响。方法将体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组(葡萄糖浓度5.6mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度30mmol/L)、高糖辛伐他汀组(葡萄糖浓度30mmol/L,辛伐他汀浓度10μmol/L)、高糖阿托伐他汀组(葡萄糖浓度30mmol/L,阿托伐他汀浓度10μmol/L)。每组设置6个复孔,于24、48、72、120h收集细胞,Western blotting法测定大鼠肾小球系膜细胞p27蛋白的表达,逆转录PCR测定p27mRNA的表达。结果高糖组p27蛋白浓度及mRNA水平均较正常对照组升高(P<0.05);高糖辛伐他汀组及高糖阿托伐他汀组p27蛋白浓度及mRNA水平均较高糖组降低(P<0.05)。结论他汀类药物通过调节肾小球系膜细胞p27的表达,可发挥非依赖降脂的肾脏保护作用。     

健脾益肾、活血化瘀中药复方对高糖刺激下肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 探讨健脾益肾、活血化瘀中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)增殖的影响及对转化生长因子-β1(TGF-β1)和骨形态发生蛋白-7(BMP-7)表达的影响.方法 将常规培养的RMCs分为对照组(5.6 mmol/L葡萄糖组)、甘露醇组(5.6 mmol/L葡萄糖+24.4 mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖组)、高糖+中药复方组(30 mmol/L葡萄糖+0.65 mg/mL中药复方).培养48 h,采用4-甲偶氮唑蓝(MTr)法检测细胞增殖情况,分析健脾益肾、活血化瘀中药复方对高糖刺激下RMCs增殖的影响.酶联免疫法检测TGF-β1的表达,实时定量PCR法检测BMP-7 mRNA的表达.结果 高糖组RMCs增生及TGF-β1的表达较对照组增加明显,BMP-7 mRNA的表达更明显下降,高糖+中药复方组较高糖组RMCs增生及TGF-β1的表达明显下降,BMP-7mRNA的表达明显升高.结论 健脾益肾、活血化瘀中药复方能够抑制高糖刺激下的RMCs增殖及TGF-β1的表达,并上调BMP-7 mRNA的表达.     

脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的 观察脂联素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响,探讨脂联素在糖尿病肾病中可能的保护作用.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为7组:对照组、高糖A组、高糖B组(培养液葡萄糖浓度分别为5.6 mmol/L、15 mmol/L、30 mmol/L);脂联素A、B、C、D组(各组培养液葡萄糖浓度均为30 mmol/L+脂联素,脂联素浓度依次为2.5 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml),作用24 h,RT-PCR法测定各组细胞VEGF mRNA表达水平;ELISA法测定各组上清液中VEGF蛋白的含量.结果 与对照组相比,高糖A组、高糖B组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达升高(P＜0.05);脂联素各组大鼠肾小球系膜细胞VEGF mRNA及VEGF蛋白表达低于高糖B组(P＜0.05).结论 高糖可刺激大鼠肾系膜细胞VEGF表达增高,脂联素可抑制高糖环境下系膜细胞对VEGF的表达.     

L158,809和西拉普利对体外培养系膜细胞TGF-β1表达和细胞外基质蛋白分泌的影响

目的：观察血管紧张素受体拮抗剂(ARBs)L158，809和血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂西拉普利对体外培养人肾小球系膜细胞转化生成因子(TGF—β1)表达和纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响。方法：分别在不同葡萄糖浓度(5.6mmol／L和30mmol／L)和药物浓度(1、10、100和500μmol／L)下体外培养人肾小球系膜细胞，分别于24、48和72h后测定细胞增殖。然后将系膜细胞分为低糖(5．6mmol／L)对照组(LG)、高糖(30mmol／L)对照组(HG)、L158，809(10μmol／L)组和西拉普利(10μmmol／L)组，48h后，分别用RT-PCR法测定TGF-β1表达，ELISA和放射免疫法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ胶原浓度。结果：与低糖对照组相比，高糖对照组系膜细胞过度增殖，细胞上清液中TGF-βl、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ胶原浓度明显升高，TGF-βlmRNA表达也显升高；而L158，809组和西拉普利组TGF-β1和细胞外基质(ECM)蛋白水平明显低于高糖对照组，且TGF-β1mRNA水平亦表达明显降低。结论：高糖可刺激体外培养系膜细胞过度增殖，TGF-β1表达增高，ECM蛋白分泌明显增加，而L158，809和西拉普利均可抑制高糖环境下上述现象。     

白果内酯调控细胞因子信号转导抑制因子2抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞中炎症与纤维化成分的表达

目的:研究白果内酯是否通过调控细胞因子信号转导抑制因子2(SOCS2)影响高糖诱导的肾小球系膜细胞中炎症与纤维化成分的表达。方法:人肾小球系膜细胞(HMC)进行如下分组：NG组(正常培养)、HG组(30mmoL/L葡萄糖)、HG+低、中、高白果内酯组(6μmoL/L、12μmoL/L、24μmoL/L白果内酯和30mmoL/L葡萄糖)、HG+高白果内酯+NC组(转染小干扰RNA阴性对照、24μmoL/L白果内酯和30mmoL/L葡萄糖)和HG+高白果内酯+干扰SOCS2组(转染针对SOCS2的小干扰RNA、24μmoL/L白果内酯和30mmoL/L葡萄糖)。利用Western blotting检测SOCS2和纤维化成分转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、纤连蛋白(FN)的蛋白表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-6(IL-6)表达。结果:与NG组相比,HG组肾小球系膜HMC细胞中TGF-β1[(0.82±0.04) vs (0.23±0.02)]、CTGF[(0.69±0.05) vs (0.12±0...     

高糖对大鼠肾系膜细胞IкB-α表达影响的泛素化研究

目的 探讨高糖对大鼠肾小球系膜细胞IkB-α表达的影响及其可能的作用途径.方法 将大鼠HBZY-1肾小球系膜细胞进行体外培养,设立正常对照组(5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组(包括10、20和30mmol/L葡萄糖)、甘露醇组、30 mmol/L高糖加特异性泛素蛋白酶体阻断剂MG132组及5.6 mmol/L葡萄糖加MG132组,作用48h,用Western Blotting法检测各组IkB-α蛋白的表达,实时定量PCR法检测各高糖组IkB-α及泛素mRNA的表达.结果 各高糖组IkB-α蛋白的表达下降(P＜0.05),具有浓度依赖效应;各高糖组IkB-α mKNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05);各高糖组泛素mRNA的表达增加(P＜0.05);30mmol/L高糖加MG132组较30mmol/L高糖组IkB-α蛋白的表达下降被明显逆转(P＜0.0).结论 高糖可增加大鼠肾系膜细胞泛素表达,上调泛素蛋白酶体系统活性,增加IkB-α蛋白泛素化降解.     

高糖对肾小球系膜细胞Smurf2表达的影响

目的观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾小球系膜细胞胞内Smad泛素调节因子2(Smurf2)的表达,探讨泛素化降解在糖尿病肾病中的作用。方法将体外培养的大鼠肾系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、20 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖组、甘露醇组。分别用real ti me quantitative PCR法和细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞Smurf2的mRNA和蛋白的表达。结果(1)正常对照组系膜细胞Smurf2的mRNA和蛋白表达较弱。(2)高糖组Smurf2的mRNA和蛋白表达较正常对照组增强(P<0.05),呈浓度依赖性。结论高糖可诱导肾系膜细胞Smurf2表达增强。提示泛素-蛋白酶体途径可能参与了糖尿病肾病的病理进程。     

螺内酯对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞PAI-1表达的抑制作用

目的 观察醛固酮拮抗剂--螺内酯对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)表达的影响.方法 采用正常糖(NG)、高糖(HG)及HG+不同浓度螺内酯体外培养大鼠系膜细胞.以RT-PCR检测PAI-1、醛固酮受体(MR)和保护其配体特异性的11β-羟类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)的mRNA表达,采用ELISA检测培养细胞上清中PAI-1蛋白的浓度.结果肾小球系膜细胞表达MR和11β-HSD2 mRNA;高糖刺激系膜细胞后PAI-1 mRNA表达明显升高,培养上清液蛋白浓度增加,加入螺内酯干预后系膜细胞PAI-1 mRNA和蛋白表达明显下降,且随螺内酯浓度增大,作用更明显.结论 螺内酯可能通过降低高糖对系膜细胞PAI-1表达的刺激作用而发挥其肾脏保护作用.     

MG132对高糖刺激的肾系膜细胞中Smad7表达的作用

目的 观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾系膜细胞胞内Smad7 的表达,并以蛋白酶体特异性抑制剂MG132作为阻断剂,探讨泛素化降解在Smad信号中的作用.方法 将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、20 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖+MG132组、甘露醇组、正常对照组+MG132、30 mmol/L高糖+溶剂组等.分别用Real time Quantitative PCR法和细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞Smad7的mRNA和蛋白的表达.结果 (1)与正常对照组比较,高糖作用后,各组Smad7 mRNA的表达差异无统计学意义;(2)而正常对照组细胞Smad7蛋白表达较强;高糖组较正常对照组表达减弱(P<0.05),呈浓度依赖性,30 mmol/L高糖组加入MG132后,Smad7蛋白表达增强.结论 (1)高糖可诱导肾系膜细胞Smad7蛋白降解增加;(2)MG132可阻止高糖所导致的上述变化.提示泛素-蛋白酶体途径参与了糖尿病肾病Smad通路的信号调节.     

高糖诱导的肾小球系膜细胞Smad4蛋白的SUMO修饰作用

目的 观察高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞小泛素相关修饰物 （SUMO）2/3和Smad4蛋白的表达及二者之间的相互作用,探讨SUMO化修饰在糖尿病肾病转化生长因子-β （TGF-β）信号通路中的作用与机制。 方法 将体外培养的大鼠肾小球系膜细胞分别设正常对照组 (5.6 mmol/L葡萄糖),高糖组 （10、20、30 mmol/L葡萄糖）,渗透压对照组 (5.6 mmol/L葡萄糖+24.4 mmol/L甘露醇）。用Western blot检测各组细胞SUMO2/3和Smad4蛋白表达;RT-PCR检测SUMO2/3和纤维连接蛋白 （fibronectin,FN） mRNA表达;免疫共沉淀方法检测SUMO2/3与Smad4蛋白间的相互作用;免疫荧光双染技术检测SUMO2/3与Smad4在细胞中的共定位关系。 结果 与正常对照组比较,各高糖组SUMO2/3、Smad4蛋白及SUMO2/3、FN mRNA表达均增加 （P<0.05）;免疫共沉淀结果显示SUMO2/3与Smad4在各组均存在相互作用,并在高糖刺激下显著增强 （P<0.05）;免疫荧光双染结果表明SUMO2/3与Smad4在肾小球系膜细胞内存在共定位现象,且在高糖组更明显。 结论 SUMO2/3可能通过共价修饰Smad4参与糖尿病肾病时TGF-β信号通路的调控。     

松果菊苷对高糖诱导的人肾小管上皮细胞上皮间质转化及纤维化的影响

目的:研究松果菊苷(ECH)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化及纤维化的影响,探讨松果菊苷改善肾纤维化的机制。方法:取对数期生长的HK-2细胞分组:正常对照组(NC,5. 5 mmol/L的D-葡萄糖)、渗透浓度对照组(OSM,5. 5 mmol/L的D-葡萄糖+24. 5 mmol/L甘露醇)、高糖组(HG,30 mmol/L的D-葡萄糖)、低松果菊苷组(E-L,30 mmol/L的D-葡萄糖+125μmol/L松果菊苷)、高松果菊苷组(E-H,30 mmol/L的D-葡萄糖+250μmol/L松果菊苷)。RT-PCR和Western Blot检测各组HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ),纤维连接蛋白(Fn),转化生长因子β1(TGF-β1),Smad3及Smad2的mRNA和蛋白质表达水平;细胞免疫组化法检测Fn和α-SMA的阳性表达。结果:ECH对HK-2细胞增殖的影响:不同浓度的ECH(125,250μmol/L)分别处理HK-2细胞48 h后,相较于空白对照组,差异均无统计学意义(P>0. 05),提示ECH对HK-2细胞增殖活性无影响。高糖处理48 h时:①HG组HK-2细胞中α-SMA、CollagenⅢ、Fn、TGF-β1、Smad3及Smad2的mRNA和蛋白表达水平均显著高于NC组(P<0. 05);②相较于NC组,OSM组细胞相关上述指标的变化均无统计学意义(P>0. 05),即高浓度渗透压对HK-2细胞无显著作用;③相较HG组,ECH处理后的各浓度组HK-2细胞α-SMA、CollagenⅢ、Fn、TGF-β1、Smad3及Smad2的mRNA和蛋白表达量均显著降低(P<0. 05);各浓度组间比较,相较于E-L组,E-H组HK-2细胞α-SMA、CollagenⅢ、Fn、TGF-β1、Smad3及Smad2的mRNA和蛋白表达水平显著下降(P<0. 05)。结论:松果菊苷可减少α-SMA、CollagenⅢ及Fn的产生,抑制高糖诱导的HK-2细胞上皮间质转化及纤维化;松果菊苷可通过下调TGF-β1、Smad3及Smad2的表达,抑制TGF-β1/Smads信号通路,从而逆转肾纤维化,延缓糖尿病肾病的发展。     

MG132对高糖刺激的肾系膜细胞中Smurf2表达的作用

目的 观察不同浓度高糖刺激后大鼠肾小球系膜细胞胞内Smad泛素化调节因子-smurf2的表达,并以蛋白酶体抑制剂MG132作为阻断剂,探讨泛素化降解在糖尿病肾病中的作用.方法 将体外培养的大鼠肾系膜细胞分别设正常对照组(葡萄糖浓度5.6 mmol/L)、20 mmol/L高糖组、30 mmol/L高糖组、30mmol/L高糖加MG132组等.分别用Real time Quantitative PCR 法和细胞免疫荧光染色法及激光共聚焦显微镜检测各组细胞泛素连接酶Smurf2的mRNA和蛋白表达.结果 ①正常组细胞Smurf2的mRNA和蛋白表达较弱,高糖组Smurf2表达较正常组增强(P<0.05),呈浓度依赖性;②30mmol/L高糖组加入MG132后,Smurf2的mRNA和蛋白表达减弱.结论 高糖可诱导肾系膜细胞Smud2表达增强,MG132可阻止高糖所导致的上述变化.提示泛素-蛋白酶体途径参与了糖尿病肾病的发病.