雷公藤氯内酯醇对急性肺损伤患者T辅助淋巴细胞功能的调节作用体外研究

目的观察急性肺损伤(ALI)患者T辅助淋巴细胞(Th)亚群平衡变化及雷公藤氯内酯醇(T4)的调节作用。方法实验分健康对照组、ALI组、雷公藤T4组、地塞米松(DX)组。采用酶联免疫斑点法(Elispot)测定ALI患者外周血单个核细胞(PBMC)中Th亚群,酶联免疫吸附法(ELISA)测单个核细胞培养上清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-10含量。结果与对照组比较,ALI组、雷公藤T4组、DX组Th2/Th1比值明显升高(P<0.01);与ALI组比较,雷公藤T4组、DX组Th2/Th1比值下降(分别P<0.01,P<0.05)。Th1亚群与TNF-α含量呈正相关(γ=0.78,P<0.01)。Th2亚群与IL-10含量呈显著正相关(γ=0.66,P<0.01)。结论ALI时Th亚群比例失调,提示促炎/抗炎反应失衡。雷公藤T4能够调控Th亚群失衡状态,防止ALI炎症瀑布反应的放大。     

雷公藤多甙对小鼠急性脑损伤的防治作用

目的：观察急性肺损伤小鼠T辅助淋巴细胞（TH,TH1／TH2）的变化及雷公藤多甙对其影响。方法：腹腔注射脂多糖复制小鼠急性肺损伤模型,随机分急性肺损务组、雷公藤多甙组、地塞米松组和正常对照组（n=8）。酶联免疫吸附（ELISA）法测定干扰－γ（IFN－γ）白介素－4（IL－4）浓度,逆录聚合酶链反应（RT－PCR）法测定mRNA表达。伊文思蓝荧光法测定肺血管蛋白渗出量。结果：与正常对照组比较;急性肺损伤组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IFN－γ显著下降,IL－4明显升高（P均＜0．01）。与急性肺损伤组比较：雷公藤多甙组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IFN－γ和I－4均明显降低,,但以IL－4降低更为显著（P均＜0．01）;地塞米松组IFN－γ和IL－4也明显,量以IFN－γ下降更为显著（P＜0．01）;正常对照组、急性肺损伤组、雷公藤多甙组和地塞米松组的IFN－γmRNA表达依次下降,与急性肺损伤组比较;雷公藤多甙组、地塞米松组肺组织中伊文思蓝渗出量、肺湿重／干重比和多形核粒细胞计数均明显降低（P均＜0．05）。结论：急性肺损伤导致TH1向TH2漂移,雷公藤甙和地塞米松通过调节炎症反应,对急性肺损伤具有防治作用。     

急性白血病患者血清IL—2及T淋巴细胞亚群水平测定及临床意义

目的 探讨急性白血病（AL）患血清白细胞介素－2（IL－2）及血液T细胞亚群水平。方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）及荧光免疫法测定30例急性白血病患白细胞介素－2及血液T细胞亚群水平，并与对照组比较。结果 AL患IL－2含量显低于对照组（P＜0．01），T细胞亚群中CD3^ 、CD4^ 均低于对照组水平（P＜0．01），CD8^ 高于对照组水平（P＞0．05），经治疗缓解患IL－2、CD3^ 、CD4^ 、CD8^＋达正常水平。结论 IL－2和T细胞亚群可作为AL辅助诊断指标，为治疗提供实验依据。     

四色法流式细胞术分析正常人T细胞亚群中IFN-γ和IL-4的表达

目的：研究IFN-γ和IL-4在正常人T淋巴细胞亚群中的表达情况。方法：50例正常人的外周血在PMA、ionomycin和BFA存在的奈件下在体外短期培养，进行细胞膜表面抗原和细胞内细胞因子染色，再用流式细胞仪对CD3 、CD3 CD8 、CD3 CD8-细胞内的IFN-γ和IL-4进行测定。并对分析方法中的一些测定条件进行了探讨。结果：正常人9．89％-33．39％的CD3 CD8-细胞为Th1细胞，0．64％-6．87％为Th2细胞，14．00％-63．76％的CD3 CD8 细胞为Tcl细胞，0．92％—5．44％为Tc2细胞；Th1、Tcl细胞百分比明显多于Th2、Tc2细胞，并且Tcl细胞百分比比Th1细胞多，而同时分泌两种细胞因子的Th0、Tc0细胞均较少。结论：T淋巴细胞各个亚群产生IFN-γ和IL-4的能力明显不同且正常人分泌细胞因子的能力有较大的个体差异。     

急性肺损伤肺组织和血浆NO、ET-1变化的研究

目的 探讨急性肺损伤（ＡＬＩ）时肺组织和血浆一氧化氮（ＮＯ）、皮内素－１（ＥＴ－１）和白细胞介素８（ＩＬ－８）水平的变化和作用。方法 采用间隔２４ｈ两次注射大肠杆菌内毒素（ＬＰＳ）的方法,复制家兔内毒素急性肺损伤模型。结果 ＡＬＩ组浆、肺组织均浆及支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中ＮＯ、ＥＴ－１和ＩＬ－８水平显著升高（Ｐ〈０．０１）,ＢＡＬＦ内中性料细胞（ＰＭＮ）明显增多,肺系数（ＬＰＬ）、肺水含量     

先兆子痫和正常孕妇外周血辅助性T细胞及其细胞因子的变化

目的 探讨先兆子痫、正常妊娠女性Th细胞亚群功能变化和外周血Th1、Th2细胞百分率与外周血单个核细胞（PBMC）培养上清液中IFN-γ、IL-4浓度的相关性。方法 应用流式细胞仪检测外周血Th1、Th2细胞百分率，ELISA法测定PBMC体外培养上清液中细胞因子IFN-γ和IL-4浓度。结果 与正常对照组相比，先兆子痫患者Th1细胞百分率、Th1/ Th2比值明显升高，差异非常显著；正常妊娠组Th1细胞百分率、Th1/ Th2比值明显下降，差异非常显著。与正常妊娠组相比，先兆子痫患者Th1细胞百分率、Th1/ Th2比值明显升高，差异非常显著。外周血Th1细胞百分率与PBMC培养上清液中IFN-γ浓度、Th2细胞百分率与PBMC培养上清液中IL-4浓度、Th1/Th2与PBMC培养上清液中IFN-γ／IL-4的比值均呈显著性正相关。结论 先兆子痫患者Th1细胞亚群功能增强，Th1/Th2细胞亚群功能失衡，导致病理妊娠。正常妊娠女性Th1细胞亚群功能明显减弱，对妊娠具有保护作用。流式细胞仪检测外周血Th1、Th2细胞百分率和ELISA法测定PBMC体外培养上清液中细胞因子IFN-γ和IL-4浓度具有良好的相关性。     

T淋巴细胞亚群及细胞因子检测在结核病诊治中的应用

<正>结核病(Tuberculosis,TB)已成为威胁全球公共健康的传染病之一。近年来,结核病的发病率呈上升趋势。然而,人类感染结核分枝菌后,仅有少数人发病,其中部分发病者呈隐性感染且能     

人骨髓间充质干细胞及条件培养液对异体T淋巴细胞分泌功能的影响

背景:骨髓间充质干细胞具有支持造血、多向分化及免疫调节作用,后者在异基因造血干细胞移植尤其是HLA半相合造血干细胞移植后移植物抗宿主病中具有潜在的应用价值,但其免疫调节作用的机制不清。目的:体外观察人骨髓间充质干细胞及其条件培养液对异体外周血T淋巴细胞及其分泌功能的影响。方法:从人骨髓中分离培养骨髓间充质干细胞,反复贴壁进行纯化;用尼龙棉柱法纯化异体外周血T淋巴细胞。观察骨髓间充质干细胞及其条件培养液体对植物血凝素刺激下T淋巴细胞增殖的影响,以ELISA方法检测γ-干扰素、白细胞介素4水平变化。结果与结论:骨髓间充质干细胞及其条件培养液体对植物血凝素诱导的T淋巴细胞增殖均有抑制作用,并呈剂量和浓度依赖性。ELISA结果表明,骨髓间充质干细胞及其条件培养液抑制T淋巴细胞γ-干扰素的分泌;骨髓间充质干细胞可促进白细胞介素4的分泌,但其条件培养液对白细胞介素4的分泌无影响。提示骨髓间充质干细胞及其条件培养液对异体外周血T淋巴细胞的增殖有抑制作用,其作用可能与其影响T淋巴细胞分泌γ-干扰素和白细胞介素4有关。     

干扰素γ及白细胞介素6对透析患者淋巴细胞凋亡的影响

目前认为 ,活化诱导的淋巴细胞凋亡 (ＡＩＣＤ) ,在免疫应答的负调节中发挥重要作用 ,而细胞因子能影响ＡＩＣＤ[1] 。然而 ,ＡＩＣＤ增强是否与干扰素γ及白介素 6 (ＩＬ 6 )调节有关 ,尚不清楚。为此 ,我们应用流式细胞仪 ,观察它们对维持性血液透析 (ＨＤ)患者ＡＩＣＤ的影响 ,旨在探讨ＨＤ患者免疫功能低下以及免疫细胞耗竭的发病机制。一、材料和方法1 试验分组 :(1)正常组 30名 ,男 19名、女 11名 ,年龄(4 1± 5 )岁 ,均为健康献血员。 (2 )ＨＤ组 37例 ,男 2 1例、女16例 ,年龄 (4 3± 5 )岁 ,透析时间 1～ 5年 ,每周透析 2～ 3次 ,…     

T淋巴细胞亚群在急性脑梗死预后判断中的意义

目的：探讨T淋巴细胞亚群在急性脑梗死中的预后意义。方法：用流式细胞仪检测(直接荧光染色法)急性脑梗死总者发病后第三天的周围血CD3^ 、CD4^ 和CD8^ T淋巴细胞百分数．用中国卒中量表(CSS)对每1例急性脑梗死患者发病后第20天的神经功能缺失进行计分。结果：CD4^ 、CD4^ ／CD8^ 比值跟CSS计分至显著负相关(P＜0．05)．相关系数分别为-0．552和-0．651．而CD3^ 淋巴细胞和CD8^ 淋巴细胞跟CSS计分无显著相关(P＞0．05)。结论：本研究结果提示急性脑梗死患者第三天的周围血CD4^ T淋巴细胞和CD4^ ／CD8^ 比值越低，其近期预后越差。     

CD4＋CD25＋调节性T细胞／辅助性T细胞17失衡在急性肺损伤小鼠中的作用

急性肺损伤（acute lung injury,ALI）是感染、创伤等导致的急性难治性呼吸衰竭,尽管呼吸支持治疗已取得显著进步,但其病死率依然高达40％［1］。ALI 的发生和发展涉及到多种病理生理过程,目前认为失控的炎症反应是其发生的根本机制［2］。辅助性 T 细胞17（Th17）和 CD4＋CD25＋调节 T 细胞（Treg 细胞）细胞是近几年才发现的CD4＋T 淋巴细胞亚群,其数量及功能的异常与感染性疾病的发生与发展密切相关［3］。Th17细胞和 Treg 细胞失衡是否与 ALI 的发生与发展相关,目前尚无系统研究报告。本研究以急性肺损伤小鼠模型为基础,观察不同时间段 ALI 小鼠 Th17细胞和 Treg 细胞的变化以及其相关细胞因子在外周血和肺组织局部的表达情况,希望为探讨 ALI 炎症失控的机制提供帮助。     

间质胶原酶在高氧所致急性肺损伤中的表达

目的 研究间质胶原酶(interstitial collagenase)在高氧所致急性肺损伤发病过程中的作用,探讨急性肺损伤的发病机理.方法 将72只C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、高氧24 h组、高氧48 h组、高氧72 h组,每组18只;正常对照小鼠呼吸室内空气,高氧小鼠置于密闭的氧气室(氧浓度＞95%).评价肺损伤程度;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组织化学法测定肺组织间质胶原酶的表达及组织分布.统计分析采用单因素方差分析和q检验.结果 高氧能引起急性肺损伤;RT-PCR结果显示肺组织间质胶原酶mRNA表达量在暴露于高氧24 h后达(0.59±0.13)较对照组(0.07±0.01)明显增加(q≥3.15,P＜0.01),72 h达最高(0.68±0.12,q=3.78,P＜0.01);免疫组织化学研究显示间质胶原酶蛋白主要表达于气道上皮细胞、Ⅱ型肺泡上皮细胞和血管平滑肌细胞的胞浆中;间质胶原酶蛋白在气道上皮细胞的表达在高氧环境下24 h达(28.54±9.60)较对照组(13.48±4.32)明显升高(q≥2.62,P＜0.05),于48、72 h表达逐渐降低,分别为(20.32±5.68)和(15.24±4.65).结论 高氧能引起急性肺损伤伴间质胶原酶的表达增高,它们通过降解细胞外基质在高氧所致的急性肺损伤过程中发挥重要作用.     

ACC1-expressing pathogenic T helper 2 cell populations facilitate lung and skin inflammation in mice

T cells possess distinguishing effector functions and drive inflammatory disorders. We have previously identified IL-5–producing Th2 cells as the pathogenic population predominantly involved in the pathology of allergic inflammation. However, the cell-intrinsic signaling pathways that control the pathogenic Th2 cell function are still unclear. We herein report the high expression of acetyl-CoA carboxylase 1 (ACC1) in the pathogenic CD4⁺ T cell population in the lung and skin. The genetic deletion of CD4⁺ T cell–intrinsic ACC1 dampened eosinophilic and basophilic inflammation in the lung and skin by constraining IL-5 or IL-3 production. Mechanistically, ACC1-dependent fatty acid biosynthesis induces the pathogenic cytokine production of CD4⁺ T cells via metabolic reprogramming and the availability of acetyl-CoA for epigenetic regulation. We thus identified a distinct phenotype of the pathogenic T cell population in the lung and skin, and ACC1 was shown to be an essential regulator controlling the pathogenic function of these populations to promote type 2 inflammation.     

滤泡辅助性T细胞在急性肝衰竭小鼠模型中的变化及意义

目的:探讨滤泡辅助性T(T follicular helper,Tfh)细胞及相关细胞因子白细胞介素(interleukin,IL)-21在急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)小鼠模型中的变化及意义。方法:将20只雌性C57BL/6小鼠随机分成2组,分别予脂多糖/D-氨基半乳糖或磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)腹腔注射,6 h后采集血液、肝脏和脾脏组织标本。采用苏木精-伊红染色法分析肝脏病变情况;流式细胞术分析小鼠脾脏单个核细胞中Tfh细胞的频数;酶联免疫吸附试验分析血清中IL-21和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的水平。结果:ALF小鼠肝脏肿大而呈暗红色,肝细胞大量坏死和炎性细胞浸润,其血清中TNF-α及IL-21的水平均较正常对照组显著增高(P<0.01,P<0.05);而单个核细胞中CD4+CXCR5+、CD4+PD-1+、CD4+CXCR5+PD-1+T细胞频数亦较正常对照组显著升高(P<0.01)。结论:ALF小鼠脾脏单个核细胞中Tfh细胞频数显著增加,血清IL-21水平显著升高,推测Tfh细胞在ALF的发病过程中起重要作用,本研究结果可能为ALF的治疗提供新思路。     

急性肺损伤的炎症反应机制与药物治疗探讨

目的：探讨急性肺损伤的炎症反应机制以及雷公藤单体Ｔ４（Ｔ４）对炎症反应的影响。方法：小鼠腹腔注射内毒素（ＬＰＳ）复制急性肺损伤模型。动物分为生理盐水对照组、ＬＰＳ组、Ｔ４组（腹腔注射Ｔ４ ８５ μｇ／ｋｇ）和地塞米松组（地塞米松７０ ｍ ｇ／ｋｇ）。酶联免疫吸附法测定肿瘤坏死因子 α（ＴＮＦ α）、白细胞介素 １β（ＩＬ １β）、ＩＬ ６ 和ＩＬ １０ 浓度。一氧化氮（ＮＯ）的产物ＮＯ－２ 浓度以Ｇｒｉｅｓｓ法测定。以肺湿重与干重比值反映肺含水量。结果：Ｔ４组小鼠肺湿重与干重比值（３．９０±０．６２）与ＬＰＳ组（５．９５±０．９９）比较显著降低（Ｐ＜ ０．０５）。ＬＰＳ组血浆ＴＮＦ α、ＩＬ １β和ＩＬ ６浓度分别为（１３２．５±５．０）ｎｇ／Ｌ、（１８３．７±５８．６）ｎｇ／Ｌ和（３ ２９０．１±９２４．２）ｎｇ／Ｌ,Ｔ４组血浆ＴＮＦ α（０ ｎｇ／Ｌ）与ＬＰＳ组比较显著降低,Ｔ４ 组血浆ＩＬ １β和ＩＬ ６〔（３９．１±３１．８）ｎｇ／Ｌ和（８５９．６±８２９．９）ｎｇ／Ｌ〕与ＬＰＳ组比较亦显著降低。与ＬＰＳ组比较,Ｔ４ 组小鼠肺泡灌洗液中ＴＮＦ α浓度从（２２９．３±２０．３）ｎｇ／Ｌ显著降低到（２８．５±３３．４）ｎｇ／Ｌ。     

高氧所致小鼠急性肺损伤时一氧化氮合成酶的表达

目的探讨一氧化氮合成酶(INOS,eNOS)在高氧所致急性肺损伤发病过程中的作用.方法将54只小鼠置于密闭的氧气室暴露于＞95%的高氧,另18只小鼠呼吸正常空气作为对照组;分别于24、48 h和72 h取出小鼠,评价肺损伤程度同时进行支气管肺泡灌洗液细胞分类和计数;免疫组织化学测定肺组织iNOS和eNOS的表达及组织分布.结果高氧能引起急性肺损伤伴支气管肺汽灌洗液细胞总数、巨噬细胞、中性粒细胞数均明显增加;免疫组织化学研究显示iNOS和eNOS蛋白主要表达于气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和巨噬细胞的胞浆中,它们在气道上皮细胞的表达在高氧环境下明显升高.结论在高氧环境下一氧化氮合成酶通过促进肺组织中一氧化氮合成从而在高氧所致的急性肺损伤过程中发挥重要作用.     

多种基质金属蛋白酶在高氧所致急性肺损伤中的表达

目的 探讨基质金属蛋白酶（MMPs）和细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）在高氧所致急性肺损伤（ALl）发病中的作用。方法 72只小鼠按随机数字表法分为正常对照组和高氧24、48、72h组，每组18只。高氧组小鼠置于密闭的氧气室，暴露于体积分数〉98％的高氧；正常对照组小鼠呼吸室内空气作为对照组。分别于24、48和72h活杀高氧组小鼠，取肺评价肺损伤程度；逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及免疫组化法测定肺组织MMP-2、MMP-9及EMMPRIN的mRNA和蛋白表达及组织分布。结果 高氧能引起ALI。RT—PCR结果显示，高氧组动物肺组织MMP-2、MMP-9及EMMPRIN的mRNA表达均增高；免疫组化研究显示，MMP-2和MMP-9蛋白主要表达于气道上皮细胞、血管平滑肌细胞和炎性细胞的胞浆中，EMMPRIN蛋白则主要表达于上述细胞胞浆和细胞膜上；它们在气道上皮细胞中的表达在高氧环境下明显升高。结论 高氧能引起ALI，伴MMP-2、MMP-9和EMMPRIN的表达增高，MMPs通过降解细胞外基质从而在高氧所致ALI过程中发挥重要作用。     

晚期炎症介质在双重打击致急性肺损伤小鼠中作用的实验研究

目的 观察双重打击导致急性肺损伤(ALI)时肺组织中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)随病程的浓度变化及其敛炎作用.方法 建立出血性休克后感染致ALI小鼠模型,观察病变过程中检测时间点肺组织HMGB1浓度、髓过氧化物酶(MPO)含量和肺泡膜通透性的变化,比较抗-HMGB1抗体干预治疗前后小鼠肺内MPO含量、肺泡膜通透性和肺组织病理学的改变.结果 出血性休克后感染致ALI小鼠肺组织HMGB1浓度于模型建立后4 h升高,16 h达高峰,48 h仍显著高于对照组.MPO水平于模型建立后4 h达峰值[(95.0 ±5.6)U/g肺组织].模型建市后4 h肺内伊文兰显著升高,于16 h达高峰[(33.3±2.3)g·mL-1·g-1肺组织].应用抗-HMGB1抗体可以显著降低肺内MPO浓度[抗体应用前(95.0±5.6)U/g肺组织、抗体应用后(50.0±6.4)pg·mL-1·mg-1肺组织]、减轻肺内伊文兰含量和肺组织病理损伤.结论 HMGB1是介导双重打击导致的ALI的重要迟发性炎症介质.     

急性肺损伤肺组织PECAM-1 mRNA的表达

目的探讨急性肺损伤（ＡＬＩ）肺组织血小板内皮细胞粘附分子－１（ＰＥＣＡＭ－１）ｍＲＮＡ表达的变化和可能作用。方法在脂多糖（ＬＰＳ）诱发的大鼠ＡＬＩ模型,使用斑点杂交观察肺组织ＰＥＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达的变化。结果正常肺组织表达较高水平的ＰＥＣＡＭ－１ｍＲＮＡ;在ＡＬＩ大鼠肺组织,ＰＥＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达早期下调,但致伤６ｈ时,又基本恢复至正常水平。结论正常肺组织表达较高水平的ＰＥＣＡＭ－１ｍＲＮＡ,ＰＥＣＡＭ－１可能参与ＡＬＩ的发病。     

鼠尾草酚对脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤的作用及机制分析

目的 探讨鼠尾草酚在脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)中的作用及其分子机制.方法 将40只周龄10～ 12周的雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、鼠尾草酚组、ALI组和治疗组(ALI+鼠尾草酚),每组10只.鼠尾草酚组和治疗组于LPS注射前1周给予鼠尾草酚20 mg/(kg·d)灌胃,持续7d.ALI组和治疗组通过单次腹腔注射LPS (10 mg/kg)的方式构建小鼠ALI模型,对照组和鼠尾草酚组则注射等剂量生理盐水.注射LPS 12 h后,取小鼠主动脉血和肺组织,检测各组小鼠的动脉血氧分压[pa(O2)]、动脉血二氧化碳分压[pa(CO2)]、血清乳酸脱氢酶(LDH),记录肺湿干质量比值,HE染色观察各组小鼠肺组织损伤状况.采用免疫印迹法检测各组小鼠肺组织中铁死亡标志蛋白前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)蛋白和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)蛋白的表达水平.检测小鼠肺组织中核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路相关蛋白的表达.结果 与对照组相比,ALI组小鼠肺组织出现明显肺水肿、炎症细胞和红细胞浸润等损伤特征,肺湿干质量比值、气道压、pa(CO2)升高,pa(O2)降低,肺组织中PTSG2蛋白表达升高、GPX4蛋白降低,Nrf2、HO-1蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P＜0.05);与ALI组相比,治疗组小鼠肺组织损伤减轻,肺湿干质量比值降低,pa(O2)升高,pa(CO2)降低,肺组织中PTSG2蛋白表达降低、GPX4蛋白升高,Nrf2、HO-1蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 鼠尾草酚具有减轻小鼠ALI的作用,其可能通过调控Nrf2/HO-1抑制铁死亡而发挥肺保护作用.