EGCG抑制人胃癌SGC-7901细胞生长

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)抑制人胃癌(SGC-7901)细胞生长及诱导凋亡的生物学效应.方法:应用细胞计数法研究不同浓度EGCG对SGC-7901细胞生长曲线的影响;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染法观察各组细胞凋亡形态,计算凋亡率.结果:EGCG显著抑制人胃癌(SGC-7901)细胞的生长,呈浓度依赖性;SGC-7901细胞经EGCG作用后,其细胞群体倍增时间明显延长,由(34.50±0.14) h延长到(97.74±0.33) h,细胞增殖周期延长,从而细胞增殖速度减慢;EGCG可以诱导SGC-7901细胞凋亡,且随着药物浓度的增加细胞凋亡率逐渐增加.结论:EGCG具有显著抑制人胃癌(SGC-7901)细胞的生长,诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡的作用.     

EGCG抑制口腔鳞癌Tca8113细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：研究绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人口腔鳞癌Tca8113细胞生长抑制及促凋亡的作用。方法：应用MTT法检测不同浓度的EGCG对Tca8113细胞体外增值抑制作用;采用HE染色、Hochest33258染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果：MTT法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性（P〈0.05）;HE、Hochest33258染色显示,EGCG处理Tca8113细胞中出现了典型的凋亡形态学改变如核碎裂、核浓缩。结论：EGCG对Tca8113细胞的生长具有显著的抑制及促凋亡作用,且呈现时间及浓度的依赖性。     

EGCG诱导人胶质瘤细胞U251凋亡及对survivin表达的影响

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)诱导人胶质瘤细胞(U251)凋亡的生物学效应及对survivin蛋白表达的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度EGCG对U251细胞增殖抑制作用;吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染法观察各组细胞凋亡形态,计算凋亡率;Wester Blot法检测不同剂量EGCG处理48h对survivin蛋白表达的影响。结果:EGCG显著抑制U251细胞生长,呈浓度依赖性;EGCG可以诱导U251细胞凋亡,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而逐渐增加。Wester Blot结果显示EGCG抑制Survivin蛋白的表达。结论:EGCG具有诱导U251细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制Sur-vivin蛋白的表达相关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制人胃癌细胞增殖和诱导凋亡作用的研究

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外培养人胃癌细胞系SGC-7901增殖抑制作用,并初步探讨其诱导SGC-7901细胞凋亡的分子机制.方法:采用平皿克隆形成实验法测定不同剂量EGCG对SGC-7901细胞锚定依赖性生长能力的影响;Wester Blot法检测不同剂量EGCG处理人胃癌细胞(SGC-7901)48 h前后NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化情况.结果:平皿克隆形成实验法显示:EGCG可抑制人胃癌细胞SGC-7901生长,且呈剂量依赖性,其对SGC-7901细胞IC50值为63.5 μg/mL;Wester Blot显示随着药物浓度升高,EGCG可以逐渐下调NF-κB和Bcl-2的蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达.结论:EGCG具有诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制核转录因子NF-B活化,导致Bax/Bcl-2比值的上调,促进Caspase-3的活化有关.     

表没食子儿茶素没食子酸酯抑制人卵巢癌CoC1细胞生长

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抑制人卵巢癌(CoC1)细胞系,细胞生长的生物学效应.方法:通过MTT比色法检测EGCG对CoC1细胞生长的影响;应用细胞计数法研究不同浓度EGCG对CoC1细胞生长曲线的影响;采用平皿克隆形成实验法测定不同剂量EGCG对人卵巢癌(CoC1)细胞锚定依赖性生长能力的影响.结果:EGCG显著抑制人卵巢癌CoC1细胞的生长,呈浓度依赖性;CoC1细胞经EGCG作用后,其细胞群体倍增时间明显延长从正常生长的38.02 h,直至97.56 h,细胞增殖周期延长,从而细胞增殖速度减慢;平皿克隆形成实验法显示:EGCG可抑制人卵巢癌细胞CoC1生长,且呈剂量依赖性.结论:EGCG具有抑制人卵巢癌CoC1细胞生长的作用,其机制可能与细胞增殖周期延长相关.     

儿茶素单体EGCG与ECG体外抗人肝癌细胞BEL-7402的作用

目的研究儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和表儿茶素没食子酸酯(ECG)抗人肝癌细胞BEL-7402的作用。方法形态学观察EGCG、ECG作用后BEL-7402细胞的生长;MTT法检测EGCG、ECG对BEL-7402细胞生长的抑制;流式细胞术(FCM)检测EGCG、ECG诱导BEL-7402细胞凋亡水平;RT-PCR检测增殖相关信号分子Gli2和凋亡受体Fas的表达水平。结果 EGCG、ECG均能以时间依赖和浓度依赖的方式抑制BEL-7402细胞生长,并诱导细胞凋亡。EGCG对BEL-7402细胞的生长抑制和诱导凋亡作用均较ECG强。EGCG和ECG均能下调Gli2的表达,但对Fas表达无影响。结论EGCG抗人肝癌BEL-7402细胞作用较ECG强。     

EGCG对阿米卡星诱导大鼠螺旋神经元凋亡的保护作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG).对阿米卡星诱导的大鼠耳蜗螺旋神经元凋亡是否具有保护作用.方法 设生理盐水对照组、阿米卡星(450 mg·kg-1·d-1共14 d)损伤组和阿米卡星加EGCG(50 mg/kg·kg-1·d-1共14 d)保护组.各组动物均深度麻醉后半身灌注固定处死,取右侧耳蜗标本固定、脱钙、石蜡轴位包埋、轴位切片,近中轴位切片行末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记(TUNEL)免疫组化染色,光学显微镜下检测耳蜗螺旋神经节细胞表达情况、并通过切片图像分析进行半定量处理比较.结果 正常组螺旋神经元胞浆及细胞核基本上均不着色,损伤组部分螺旋神经元胞核着色,保护组亦少部分螺旋神经元胞核着色,图像分析结果显示损伤组与对照组、损伤组与保护组之间的染色阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 EGCG可以减轻阿米卡星诱导大鼠耳蜗螺旋神经元凋亡.     

EGCG通过抑制COX-2表达及PGE2合成诱导胃癌细胞系HGC27凋亡

目的:探讨EGCG对胃癌细胞系HGC27细胞凋亡的影响及其机制。方法:体外培养的HGC27细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度EGCG处理24、48、72 h,对照组加入同等体积的培养基,MTT法测定其对HGC2细胞增殖的影响;EGCG(浓度分别为0、10、20、40μg/m L)处理HGC27细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡,分光光度计检测Casepase-3、Casepase-9相对活性,Rh123探针染色流式细胞仪检测线粒体膜电位变化,western blot法检测环氧合酶2(COX-2)基因表达,ELISA法检测PGE2含量。结果:EGCG(浓度10~80μg/m L)能显著抑制HGC27细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;EGCG(浓度分别为10、40、80μg/m L)作用HGC27细胞48 h后,细胞凋亡率分别为14.8%、25.8%、37.7%,对照组凋亡率为0.6%;Casepase-3、Casepase-9相对活性显著增加,线粒体膜电位降低,COX-2的表达降低,PGE2合成减少。结论:EGCG可通过抑制HGC27细胞COX-2表达及PGE2合成,激活线粒体凋亡途径,抑制细胞增殖并促进其凋亡。EGCG可能是一种前景广阔的抗肿瘤药物。     

表没食子儿茶素没食子酸酯乙基化衍生物Y6对耐阿霉素人肝癌细胞丝裂原活化蛋白激酶通路的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)乙基化衍生物Y₆在逆转耐阿霉素(DOX)人肝癌细胞耐药过程中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)途径的影响。方法 将对数生长期的耐DOX人肝癌细胞BEL-7404/DOX随机分为空白对照组、DOX组、DOX+维拉帕米(VER)组、DOX+EGCG组、DOX+低剂量Y₆组和DOX+高剂量Y₆组,空白对照组不加任何药物,DOX组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX,DOX+VER组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX和10μmol·L^-1的VER,DOX+EGCG组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX和10μmol·L^-1的EGCG,DOX+低剂量Y₆组加入终浓度为10μmol·L^-1的DOX和10μm...     

肥厚心肌缺血后适应时细胞外信号调节激酶的保护作用

目的 研究缺血后适应(IPost)在离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注(L/R)损伤中的保护作用,探讨细胞外信号调节激酶(ERK1/2)在此保护中的作用机制.方法 12周龄C57/BL小鼠通过主动脉弓缩窄4周建立心肌肥厚模型,利用Langendorff灌流装置建立小鼠肥厚心肌I/R模型,30 min全心缺血随后再灌注120 min.分为4组,I/R组、Ipost组(采取缺血10 s及再灌注10 s的3次IPost周期)、I/R+PD98059组(ERK1/2抑制剂)、Ipost+PD98059组,进行心脏血流动力学、心肌梗死范围检测,Western印迹方法检测细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt.c)蛋白表达水平,脱氧核苷酸转移酶介导的生物素原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞的凋亡.结果 与I/R组比较,IPost组小鼠心脏血流动力学指标左心室收缩压、左心室压力变化最大速率显著改善[(85±4)mm Hg比(68±5)mm Hg,(3811±230)mm Hg比(2830±230)mm Hg,均P<0.05],IPost组心肌的ERK1/2磷酸化水平、Bcl-2、线粒体Cyt.C表达显著增加,Bax、胞质Cyt.C蛋白表达显著降低,凋亡指数显著降低,心肌梗死范围减小(均P<0.05).与I/R组比较,I/R+PD98059组上述指标差异均无统计学意义(均P>0.05).IPost+PD98059组显示在再灌注的最初15 min使用PD98059能消除IPost对肥厚心肌的上述保护作用并显著增加心肌梗死面积,与I/R组水平相同.结论 IPost能有效地减轻离体小鼠肥厚心肌缺血再灌注损伤,ERK1/2细胞信号途径参与IPost对缺血再灌注肥厚心肌保护作用并可能通过其抗凋亡的机制实现.     

Salvianolate Reduces Murine Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury via ERK1/2 Signaling Pathways in vivo

Objective

To analyze the effects of salvianolate on myocardial infarction in a murine in vivo model of ischemia and reperfusion (I/R) injury.

Methods

Myocardial I/R injury model was constructed in mice by 30 min of coronary occlusion followed by 24 h of reperfusion and pretreated with salvianolate 30 min before I/R (SAL group). The SAL group was compared with SHAM (no I/R and no salvianolate), I/R (no salvianolate), and ischemia preconditioning (IPC) groups. Furthermore, an ERK1/2 inhibitor PD98059 (1 mg/kg), and a phosphatidylinositol-3-kinase (PI3-K) inhibitor, LY294002 (7.5 mg/kg), were administered intraperitoneal injection (i.p) for 30 min prior to salvianolate, followed by I/R surgery in LY and PD groups. By using a double staining method, the ratio of the infarct size (IS) to left ventricle (LV) and of risk region (RR) to LV were compared among the groups. Correlations between IS and RR were analyzed. Western-blot was used to detect the extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) and protein kinase B (AKT) phosphorylation changes.

Results

There were no significant differences between RR to LV ratio among the SHAM, I/R, IPC and SAL groups (P>0.05). The SAL and IPC groups had IS of 26.1%±1.4% and 22.3%±2.9% of RR, respectively, both of which were significantly smaller than the I/R group (38.5%±2.9% of RR, P<0.05, P<0.01, respectively). Moreover, the phosphorylation of ERK1/2 was increased in SAL group (P<0.05), while AKT had no significant change. LY294002 further reduced IS, whereas the protective role of salvianolate could be attenuated by PD98059, which increased the IS. Additionally, the IS was not linearly related to the RR (r=0.23, 0.45, 0.62, 0.17, and 0.52 in the SHAM, I/R, SAL, LY and PD groups, respectively).

Conclusion

Salvianolate could reduce myocardial I/R injury in mice in vivo, which involves an ERK1/2 pathway, but not a PI3-K signaling pathway.

     

依达拉奉对大鼠弥漫性脑创伤后认知功能及ERK1/2活化、Cytc释放的影响

目的探讨依达拉奉(Edaravone)对弥漫性脑创伤后认知功能障碍的治疗作用及其机制。方法随机将SD大鼠分为对照组(40只)、创伤组(68只)、Edaravone干预组(68只)。Marmarou′s法建立SD大鼠弥漫性脑创伤模型。在电镜下观察伤后1、6、24、48、72?h线粒体形态结构变化;采用免疫组化和Western blot法检测上述时间点磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（p ERK1/2）和Cytc的表达;伤后第3天水迷宫法测试动物学习记忆功能,连测7?d。结果伤后海马区部分神经细胞线粒体肿胀、内脊断裂、消失;免疫组化显示 p ERK1/2和细胞色素C（Cytc）阳性产物主要定位于细胞浆,Western blot定量显示,伤后p ERK1/2和Cytc表达水平增高,分别于24、48?h达高峰;水迷宫实验显示,创伤组大鼠搜索安全岛潜伏期（230.9±20.9）s明显高于对照组（50.7±4.9）s;Edaravone治疗组线粒体受损程度、p ERK1/2和Cytc表达水平以及搜索安全岛潜伏期（70.6±8.7）s均低于创伤组。结论Edaravone对弥漫性脑创伤有治疗作用,其机制与抑制伤后ERK12活化、减轻线粒体形态结构损伤、减少Cytc释放有关。     

Role of p38 Mitogen-activated Protein Kinase in Mediating Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Human Umbilical Vein Endothelial Cells

p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK)is a member of the mitogen-activated protein kinase (MAPK) family. p38MAPK pathway is one of the most widely studied signaling pathways involved in the transduction of intracellular signals including survival, growth,differentiation and death.     

ERK1/2 及p38通路调节P2Y受体介导的前列腺癌细胞体外侵袭

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK1／2)及p38激酶在P2Y嘌呤受体活化介导的前列腺癌细胞体外侵袭中的作用。方法 以脂质体法将负显性MAPK激酶1(KA-MEKl)及野生型p38磷酸酶(MKP-5)转染人前列腺癌细胞PC-3亚系1E8(高转移)和284(不转移)细胞,以Western印迹法检测细胞经P2Y嘌呤受体激动剂ATP刺激后ERK1／2及p38活化情况,并用体外侵袭实验检测在P2Y受体介导的前列腺癌细胞体外侵袭效应中ERK1／2及p38通路所起的作用。结果ATP可以激活ERK1／2及p38通路并促进前列腺癌细胞体外侵袭,这种侵袭促进效应可以分别被MEK1抑制剂PD98059及p38抑制剂SB203580所抑制。转染KA-MEK1及MKP-5使侵袭细胞数分别降低约40％及60％。如果加入抑制剂同时抑制ERKl／2及p38通路,细胞的侵袭能力被抑制约76％。结论 ERK1／2及p38通路在P2Y嘌呤受体活化所介导的前列腺癌细胞侵袭中起重要作用。     

姜黄素通过抑制ERK1/2磷酸化减弱ET-1诱导的大鼠VSMCs增殖

目的观察姜黄素（curcumin）对内皮素-1（ET-1）诱导培养的离体大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖及p44/42丝裂原活化蛋白激酶（p44/42 MAPK,ERK1/2）表达的影响。方法组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs。分别以ET-110-8 mol/L,ET-110-8 mol/L联合浓度为10-6 mol/L、10-5 mol/L、10-4 mol/L的姜黄素作用于体外培养的VSMCs 24 h,采用细胞计数检测VSMCs的增殖,3H-胸腺密啶掺入（3H-TdR）法测定VSMCs的DNA合成,western bolt法检测VSMCs磷酸化ERK1/2的表达。结果与对照组比较,ET-1能显著刺激VSMCs增殖,姜黄素能显著抑制ET-1诱导的VSMCs增殖,且呈剂量依赖关系;ET-1能显著刺激VSMCs磷酸化ERK1/2的表达,该作用可被姜黄素所抑制。结论姜黄素能抑制ET-1刺激的VSMCs的增殖,其作用可能与抑制磷酸化ERK1/2的表达相关。     

Induction of Apoptosis in Hormone-resistant Human Prostate Cancer PC3 Cells by Inactivated Sendai Virus

Objective Inactivated Sendai virus particle[hemagglutinating virus of Japan envelope(HVJ-E)]has a potential oncolytic effect due to its ability to induce apoptosis in tumor cells.However,the molecular mechanism of apoptosis induction in cancer cells mediated by HVJ-E has not been fully elucidated.This paper aims to investigate the underlying mechanism of apoptosis induction by HVJ-E in prostate cancer cells(PC3).Methods PC3 cells were treated with HVJ-E at various MOI,and then interferon-6(IFN-S) production,and the cell viability and apoptosis were detected by ELISA,MTT-based assay and flow cytometry,respectively.Next,the roles of Jak-Stat,MAPK and Akt pathways played in HVJ-E-induced apoptosis in PC3 cells were analyzed by immunoblot assay.To further evaluate the cytotoxic effect of HVJ-E on PC3 cells,HVJ-E was intratumorally injected into prostate cancers on BALB/c-nude mice,and the tumor volume was monitored for 36 days.Results HVJ-E induced IFN-β production and activated Jak-Stat signaling pathway,which resulted in the activation of caspase-8,caspase-3,and PARP in PC3 prostate cancer cells post HVJ-E treatment.Furthermore,we observed for the first time that p38 and Jnk MAPKs in PC3 cells contributed to HVJ-E-induced apoptosis.In addition,intratumoral HVJ-E treatment displayed a direct inhibitory effect in an in vivo BALB/c nude mouse prostate cancer model.Conclusion Our findings have provided novel insights into the underlying mechanisms by which HVJ-E induces apoptosis in tumor cells.     

黄芩素对人乳腺癌MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶的抑制作用

目的观察黄芩素对MCF-7细胞内酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响。方法采用台盼蓝拒染法,在不同条件下测定细胞增殖的抑制率。TPK活性通过测定转移到TPK底物上[-32P]ATP的32P放射性活度来检测。结果黄芩素能够显著地抑制MCF-7细胞内TPK的活性并呈剂量依赖性关系,其IC50为2·5μmol/L。结论黄芩素作为一种细胞内的TPK抑制剂具有潜在的抗乳腺癌应用价值。     

ERK1/2与实验性慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道平滑肌增殖的分子机制研究

目的:探讨ERK1/2信号在烟熏实验性慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道重塑平滑肌增殖的分子机制。方法:取大鼠模型肺组织分别提取RNA、蛋白以及行组织病理学检查。RT-PCR检测TGF-β1、ET-1条带;Masson染色检测各组支气管管腔的内周长(Pi)、平滑肌层面积(WAm)、支气管壁面积(WAt);Western Blot检测各组标本TGF-β1、ET-1、ERK1/2和p-ERK1/2。结果:烟熏2周后气道平滑肌层和支气管壁厚度较健康对照组和U0126对照组明显增厚(P<0.05),TGF-β1、ET-1以及ERK1/2蛋白磷酸化表达均增加,予U0126干预后,气道平滑肌增殖和支气管壁厚度逐渐减轻,ERK1/2蛋白磷酸化受到抑制,呈剂量依赖性。结论:烟熏可以刺激大鼠气道平滑肌慢性炎症和平滑肌增殖,ERK1/2是COPD气道平滑肌增殖信号传导的主要途径。TGF-β1参与了ERK1/2信号系统对气道重塑平滑肌增殖的调控。MEK1的特异性阻断剂U0126能有效干预COPD气道平滑肌细胞增殖的分子信号调节。     

白藜芦醇通过下调p-ERK1/2抑制脂多糖诱导的H9c2细胞损伤

目的 探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)是否通过下调p-ERK1/2 发挥对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的H9c细胞氧化损伤的保护作用及机制。 方法 将H9c2细胞分为实验(Con)组,脂多糖(LPS)组,脂多糖+白藜芦醇5μmol/L(L+R5)组,脂多糖+白藜芦醇10μmol/L(L+R10)组,脂多糖+白藜芦醇20μmol/L(L+R20)组,脂多糖+白藜芦醇50μmol/L(L+R50)组。其中对照组不做任何处理,L+R5组、L+R10组、L+R20组、L+R50组分别用5、10、20、50μmol/L的白藜芦醇预先处理24h,然后将LPS组、 L+R5组、L+R10组、L+R20组、L+R50组和10μg/ml的脂多糖共同孵育20min和12h。MTT比色法检测H9c2细胞活力,Western blot法检测 p-ERK1/2,ERK1/2蛋白表达。 结果 LPS降低H9c2细胞活力,诱导细胞凋亡。RSV 上调p-ERK1/2蛋白表达,成剂量依赖性。RSV 预处理能明显降低LPS对H9c2细胞的损伤。 结论 白藜芦醇可能通过下调p-ERK1/2 来减轻LPS引起的H9c2 细胞损伤,发挥其保护作用。