鲑鱼降钙素对体外培养鼠成骨细胞增殖及IGF-I表达的影响

目的观察鲑鱼降钙素（calcitonin,CT）对离体培养数成骨细胞（osteoblast,OB）的作用,初步探讨CT对OB增殖以及胰岛素样生长因子I（Insulin-like Growth Factor-I,IGF-I）表达的影响,为促进骨修复和再生的临床治疗提供一定的理论依据。方法取新生24hSD乳鼠颅盖骨,采用酶消化法培养OB,经酶解消化后得到原代OB,进行体外培养并鉴定。将体外培养的OB用不同浓度（1×10-12～1×10-8mol/L）的CT处理,采用MTT法（噻唑蓝染色法）观察OB的增殖;Gomori钙-钻法检测碱性磷酸酶（ALP）的表达;RT-PCR方法观察胰岛素样生长因子-I（IGF-I）mRNA的表达。结果经细胞鉴定后证实其系OB;MTT法检测表明,CT浓度为1×10-12mol/L时就可以刺激OB增殖,且随CT浓度升高其增殖能力增加,呈剂量依赖关系;Gomori钙-钻法检测结果表明随着CT浓度的升高OB分化能力增强;经RT-PCR法检测表明,IGF-I mRNA可在乳鼠OB内稳定表达,半定量分析表明,随着CT浓度的升高,IGF-ImRNA的表达量逐渐增加。结论适当浓度的CT可以促进体外培养OB的增殖;部分机制可能与CT促进IGF-ImRNA表达的增加有关。     

鲑鱼降钙素对体外培养鼠成骨细胞增殖及IGF-Ⅰ表达的影响

目的 观察鲑鱼降钙素(calcitonin,CT)对离体培养数成骨细胞(osteoblast,OB)的作用,初步探讨CT对OB增殖以及胰岛素样生长因子Ⅰ(Insulin-like Growth Factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)表达的影响,为促进骨修复和再生的临床治疗提供一定的理论依据.方法 取新生24hSD乳鼠颅盖骨.采用酶消化法培养OB,经酶解消化后得到原代OB,进行体外培养并鉴定.将体外培养的OB用不同浓度(1×10<'-12>～1×10<'-8>Smol/L)的CT处理,采用MTT法(噻唑蓝染色法)观察OB的增殖;Gomori钙-钻法检测碱性磷酸酶(ALP)的表达;RT-PCR方法 观察胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA的表达.结果 经细胞鉴定后证实其系OB;MTT法检测表明.CT浓度为1×10<'-12>mol/L时就可以刺激OB增殖,且随CT浓度升高其增殖能力增加,呈剂量依赖关系;Gomori钙一钻法检测结果 表明随着CT浓度的升高OB分化能力增强;经RT-PCR法检测表明,IGF-Ⅰ mRNA可在乳鼠OB内稳定表达,半定量分析表明.随着CT浓度的升高,IGF-ImRNA的表迭量逐渐增加.结论适当浓度的CT可以促进体外培养OB的增殖;部分机制可能与CT促进IGF-ImRNA表达的增加有关.     

电针后血清对大鼠成骨细胞增殖活性的影响

目的观察电针后血清对大鼠成骨细胞增殖活性的影响。方法取30只SD雌性大鼠按抽签法随机分为空白组、雌二醇组、电针组,每组各10只。空白组不做任何处理;雌二醇组以戊酸雌二醇后肢肌肉注射,每周1次,连续90 d;电针组取穴大杼（BL11）、命门（DU4）、足三里（ST36）,电针干预15 min,每日1次,10次为1个疗程,疗程间休息5 d,共干预6个疗程,持续90 d。90 d后,每组腹主动脉采血制备血清。另外,将新生24 h SD乳鼠麻醉断头处死,取下颅盖骨,建立成骨细胞体外培养体系,培养至第3代时同步化后进行干预,采用MTT法分别确定电针后血清的有效干预时间及干预浓度。空白组、雌二醇组、电针组分别在有效浓度作用下干预成骨细胞,在有效干预时间点采用MTT法观察成骨细胞的增殖。结果与24、48、96 h比较,干预72 h成骨细胞OD值高于其它3个时间点,差异有统计学意义（P<0.05）;10%电针后血清浓度组明显高于5%、20%血清浓度组,差异有统计学意义（P<0.01）。在10%血清浓度的作用下干预72 h,电针组第3代成骨细胞OD值高于雌二醇组（P<0.05）。结论电针后血清能加速成骨细胞增殖,维持成骨细胞活性。     

淫羊藿甙对大鼠成骨细胞功能及Osterix表达的影响

目的观察淫羊藿甙对体外培养成骨细胞功能及Osterix（Osx）表达的影响,探讨淫羊藿抗骨质疏松的作用机制。方法分别用酶消化法获得新生SD大鼠成骨细胞,在培养液中分别加入不同浓度的淫羊藿甙,观察成骨细胞的增殖功能和分化功能。用RT—PCR法测定成骨细胞OsxmRNA表达。结果增殖率测定淫羊藿甙从1ng／ml起光密度值均较对照组增加,且呈剂量依赖关系。但仅有浓度为100ng／ml时差异才有显著意义（P〈0．01）;碱性磷酸酶活性从1ng／ml起均较对照组增加,也呈剂量依赖关系,且浓度≥10ng／ml差异有显著意义;1ng／ml,10ng／ml,100ng／ml淫羊藿甙均可促进OsxmRNA表达（P〈0,05）,以10ng／ml组作用最显著。结论淫羊藿甙能通过影响成骨细胞增殖、分化、提高成骨细胞Osx基因表达水平,从而促进骨形成,发挥抗骨质疏松的作用。     

依普拉芬对大鼠成骨细胞一氧化氮生成及内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的研究依普拉芬对大鼠成骨细胞一氧化氮生成以及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA表达的影响，探讨其治疗骨质疏松的细胞作用机制。方法体外分离培养新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞，取第2代细胞，培养液中分别加入不同浓度的依普拉芬，72h后，测定各组细胞培养液中的NO浓度，RT—PCR方法检测各组细胞中eNOSmRNA的表达。结果与阴性对照组相比，各浓度组的依普拉芬均可增加成骨细胞培养液中的NO浓度并促进eNOSmRNA的表达（均P〈0．01）。其中10^-8～10^-5mol／L浓度之间作用最为显著。结论一定浓度的依普拉芬可以增加成骨细胞NO合成，但进eNOSmRNA的表达，从而发挥其促进成骨作用。     

丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察丁酸钠对宫颈癌HeLa细胞的数量及血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达水平的影响,探讨丁酸钠对HeLa细胞增殖的作用及相关机制。方法体外分组培养的HeLa细胞分别加入不同浓度的丁酸钠作用72h后,用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞生长情况,逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测各组细胞VEGFmRNA表达情况。结果经不同浓度的丁酸钠作用后,宫颈癌HeLa细胞增殖水平及VEGFmRNA表达水平较对照组均有明显降低,在一定范围内呈现浓度依赖性。结论丁酸钠不但能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,还可抑制宫颈癌HeLa细胞VEGF基因的表达水平。丁酸钠抑制VEGF基因表达水平的作用可能是其抑癌机制之一。     

镉对体外培养成骨细胞增殖、凋亡、分化及矿化的影响

目的探讨镉对体外培养成骨细胞（osteoblast,OB）增殖、凋亡、分化及矿化的影响。方法用混合酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养;成骨细胞与不同浓度的Cd2＋作用后,MTT法测定细胞增殖;AO/EB双染法进行凋亡形态学观察;PNPP法检测碱性磷酸酶活性;矿化结节计数和面积测量分析镉对成骨细胞矿化能力的影响。结果各剂量组氯化镉均可抑制成骨细胞增殖,其中2.0μmol/L以上剂量组与对照组相比差异有统计学显著意义（P〈0.01）;16.0μmol/L、32.0μmol/L剂量组OB可见较多凋亡细胞;各时点、各剂量组氯化镉均能抑制ALP活性,尤其是48h以上影响作用更明显（P〈0.01）;0.5μmol/L、1.0μmol/L浓度的氯化镉可明显抑制成骨细胞矿化能力。结论镉离子可以抑制成骨细胞增殖、分化及矿化能力,促进成骨细胞凋亡,对成骨细胞的骨形成能力有明显抑制作用。     

LDL对小鼠成骨细胞的影响

目的 研究不同浓度及同一浓度不同作用时间的LDL对小鼠成骨细胞增殖分化及LRP5、DKK1表达的影响,探讨Wnt信号通路是否参与了LDL对成骨细胞增殖分化调节。方法在小鼠成骨细胞株MC3T3-E1培养液中加入0.05、0.1、0.2 mg/ml的LDL,分别培养24、48、72 h后应用CCK8检测其对成骨细胞增殖的影响,采用ELISA法检测成骨细胞骨钙素水平,分析LDL对成骨细胞分化的影响;采用荧光定量PCR方法检测LDL对成骨细胞LRP5、DKK1基因表达水平的影响。结果在LDL浓度为0.05 mg/ml 24 h时,明显抑制成骨细胞的增殖,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。LDL对成骨细胞增殖的作用呈剂量及时间依赖性。ELISA实验结果显示LDL明显抑制成骨细胞中的骨钙素表达,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。LDL对成骨细胞骨钙素表达的作用在一定程度上具有剂量及作用时间依赖性。荧光定量PCR实验结果显示LDL在48 h浓度为0.05 mg/ml时明显下调成骨细胞中的LRP5 mRNA表达水平,显著上调DKK1 mRNA表达水平,与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LDL能够显著抑制成骨细胞的增殖和分化,这可能与wnt信号通路中LRP5及其抑制剂DKK1基因表达有关。     

骨肽对成骨细胞Bel-2及Bax表达影响的实验研究

目的：探讨骨肽对成骨细胞凋产柑关基因Bcl—2及Bax表达的影响。方法：体外分离培养成骨细胞,0．02mg／ml、0．08mg／ml、0．32mg／ml三个剂量浓度骨肽分别作用12h、24h、36h,收集细胞上清利用酶联免疫法（ELISA法）检测Bcl-2及Bax表达含量。结果：骨肽各浓度组在12h、24h均可引起Bcl-2表达升高、降低Bax的表达水平,其中0．08rag／ml剂量组作用24h效果最为显著。结论：骨肽可促进凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达、抑制凋亡蛋白Bax的表达,从而发挥促进成骨细胞增殖的作用。     

不同浓度淫羊藿苷对大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的：观察不同浓度淫羊藿苷对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化及功能的影响。方法：利用酶消化法从新生小鼠颅盖骨中分离和培养成骨细胞;用组织化学染色和矿化结节法进行细胞鉴定;用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测不同淫羊藿苷浓度对大鼠成骨细胞的增殖、分化作用;同时通过检测成骨细胞碱性磷酸酶的活性,以观察淫羊藿苷对成骨细胞功能的影响。结果：与各浓度组比较,10μg/L淫羊藿苷对成骨细胞的生长增殖、分化均有促进作用,且作用最强,最为持久。结论：浓度为10μg/L的淫羊藿苷能显著促进成骨细胞增殖,并增强其成骨活性。     

熟地、鳖甲对大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶蛋白和核心结合因子α1 mRNA表达的影响

目的观察熟地、鳖甲含药血清对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响。方法雄性SD大鼠随机分为3组后,分别灌服高浓度熟地、鳖甲煎剂(3.25 g/kg)、低浓度熟地、鳖甲煎剂(1.625 g/kg)及等量容积的蒸馏水,连续灌胃3 d,制得大鼠高、低剂量熟地、鳖甲含药血清及空白对照血清。原代培养并传至第3代经碱性磷酸酶鉴定取得的大鼠成骨细胞,消化计数铺板并分为3组,以上述血清处理72 h,MTT法检测成骨细胞的增殖率,ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)分泌量并以相应OD值进行纠正,并且运用实时荧光定量PCR检测各组成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达情况。结果低剂量含药血清组成骨细胞增殖率、ALP浓度及Cbfα1 mRNA表达量明显高于其他2组。结论熟地、鳖甲可能是通过提高成骨细胞的增殖潜能而起骨保护作用的。     

氨基胍对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤及血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究氨基胍(AG)对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致人腹膜间皮细胞(HMrSV5)损伤及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用人腹膜间皮细胞株HMrSV5为体外实验模型,分为无血清DMEM培养液对照组、L-PDS组(2.5%L-PDS)、L-PDS+AG组(2.5%L-PDS+10 mmol/L AG)、单纯AG组(终浓度10 mmol/L).各组以上不同干预因素与HMrSV5细胞共孵育.MTT法检测各组细胞增殖、评估细胞活力,Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF蛋白及mRNA的表达.结果 MTT试验表明,L-PDS组OD值为(0.120±0.019),明显低于对照组的(0.298±0.031),差异有统计学意义(P<0.05);L-PDS+AG组OD值为(0.289±0.022),明显高于L-PDS组,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot和RT-PCR结果均表明,与对照组比较,L-PDS组细胞中VEGF蛋白和mRNA表达明显增加,与L-PDS组比较,PDS+AG组VEGF蛋白和mRNA的表达明显减低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 AG可拮抗乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤并下调VEGF的表达.     

瘦素对胃癌细胞系SGC7901增殖和凋亡的影响

目的观察人胃癌细胞系SGC7901瘦素及瘦素受体的表达及瘦素对SGC7901增殖及凋亡的影响。方法免疫组化和RT-PCR检测SGC7901瘦素和瘦素受体的表达,噻唑蓝比色实验观察瘦素对SGC7901的增殖作用,流式细胞仪检测瘦素对细胞周期及凋亡的影响,RT-PCR方法半定量检测瘦素对促凋亡基因bax mRNA表达的影响。结果SGC7901既表达瘦素又表达瘦素受体,重组瘦素呈剂量依赖性地促进细胞的增殖,并明显抑制细胞的凋亡,瘦素可抑制促凋亡基因bax mRNA的表达。结论瘦素可能以自分泌方式调节人胃癌细胞系SGC7901的增殖及凋亡。     

腺病毒介导血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染表达抑制血管平滑肌细胞增殖

目的：探讨血管平滑肌细胞（VSMC）转染表达血管紧张素II（AngII)2型受体（AT2R）对其增殖的影响。方法：构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体（AdCMV-AT2R)体外转染大鼠主动脉VSMC,用RT－PCR方法检测AT2R mRNA表达,流式细胞仪检测AT2R表达率,用细胞周期,分裂指数,MTT比色法和5－溴尿苷（BrdU)掺入法检测VSMC增殖。结果 构建的AdCMV-AT2R体外转染培养VSMC表达率为89．51％,AT2R峰值表达时,其S期和G2－M期细胞比率从31．7％降低到13．9％（P＜0．05）,分裂指数从37．4％降低互9．6％（P＜0．01）,MTTK有光度和BrdU掺入量分别降低61．4％和51．6％（P＜0．01）,结论：AT2RL志染表达可显著抑制体外培养VSMC的增殖,这一作用对再狭窄防治是有益的。     

RNA干扰抑制视网膜母细胞瘤细胞血管内皮生长因子的表达

目的利用RNA干扰（RNAi）技术,研究血管内皮生长因子（VEGF）编码基因的siRNA对人视网膜母细胞瘤（RB）细胞的影响,从而探讨通过抑制血管内皮生长因子在视网膜母细胞瘤组织中的表达来治疗视网膜母细胞瘤的机理。方法将VEGF编码基因特异的siRNA转染入视网膜母细胞瘤细胞,采用RT PCR和Western blot技术检测siRNA处理前后RB细胞VEGF基因表达变化。MTT法检测siRNA处理前后RB细胞生长的抑制情况。结果RT PCR和Western blot均显示VEGF特异性siRNA对视网膜母细胞瘤细胞血管内皮生长因子基因的表达有抑制作用,MTT法检测RB细胞生长的抑制情况显示,抑制率可达40%。结论VEGF特异性siRNA的特异性基因沉默作用对RB细胞VEGF基因的表达有抑制作用。     

接骨中药含药血清对成骨细胞生物功能的影响

目的 比较伤科常用单味接骨中药含药血清对成骨细胞生物学功能的影响。方法 应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、茜素红染色方法和RT-PCR法，比较伤科常用单味中药当归、自然铜、骨碎补和续断对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶分泌、矿化结节形成和mRNA表达的影响。结果 单味中药当归对早期增殖期的成骨细胞有明显的促增殖和分化的作用；当归和自然铜能增加成骨细胞矿化期矿化结节的形成；当归和续断能上调BMP-2和IGF-ImRNA的表达。结论 单味接骨中药当归具有刺激体外培养成骨细胞增殖和分化的功能。     

VEGF165基因转染真皮多能干细胞的实验研究

目的 为获得高表达生物活性血管内皮细胞生长因子VEGF165的皮肤种子细胞,拟将转基因治疗与真皮多能干细胞相结合,为难愈性创面的促愈治疗奠定基础.方法 构建真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF165,经脂质体法介导转染真皮多能干细胞;半定量RT-PCR检测VEGF165 mRNA的表达,Western blot和酶联免疫ELISA法检测VEGF蛋白的表达;并检测了表达产物的生物活性及转染VEGF(dermal multipotential stem cells,DMSCs)增殖活性的变化.结果 转染后VEGF165 mRNA和VEGF蛋白的表达均显著增强(P＜0.01),约为对照组的1.6倍,且转染VEGF后DMSCs的培养上清显著提高hECV304细胞增殖活性(P＜0.01).MTT结果显示转染VEGF后DMSCs增殖活性显著增高,约为转染空载体组DMSCs的2倍(P＜0.01).结论 成功获得了高水平表达并分泌具有生物活性的VEGF的基因治疗种子细胞DMSCs,为下一步动物在体进行基因治疗打下了基础.     

瘦素及瘦素受体在胃癌组织和胃癌细胞株中的表达

[目的]探讨胃癌细胞株和胃癌组织是否有瘦素和瘦素受体表达,以及瘦素对胃癌细胞株的增殖作用.[方法]免疫组化和RT-PCR检测胃癌细胞株及胃癌组织中瘦素和瘦素受体表达,MTT法测定瘦素对胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖作用.[结果]胃癌细胞株SGC7901、MGC803及MKN45均有瘦素及瘦素受体表达;47例胃癌组织石蜡切片标本检测有瘦素表达20例,有瘦素受体表达23例,两者共同表达17例;19例新鲜胃癌组织标本,有瘦素mRNA表达13例,瘦素受体mRNA表达12例,两者共同表达10例;与对照组相比,100ng/mL的瘦素可使胃癌细胞株SGC7901、MGC803、MKN45的增殖率分别为1.45、1.56及1.54.[结论]胃癌细胞株及胃癌组织普遍存在瘦素和瘦素受体表达,瘦素可促进胃癌细胞株增殖.     

降钙素对小鼠成骨细胞增殖及OPG/RANKL表达的影响

目的探讨降钙素对小鼠成骨细胞增殖及骨保护素（OPG）／细胞核因子KB受体活化因子配体（RANKL）表达的影响。方法取出生24h内的小鼠30只,无菌的条件下取出颅骨,应用酶消化法进行成骨细胞的培养,在培养成骨细胞的培养液中加入不同浓度的降钙素,首先应用MTT法检测这种药物对成骨细胞增殖的影响,然后应用RT-PCR法检测其对OPG／RANKL mRNA的表达及ELISA法检测OPG蛋白分泌的影响。结果降钙素能促进成骨细胞的增殖。降钙素能增强成骨细胞中OPG mRNA的表达同时抑制成骨细胞中RANKL mRNA的表达,并能促进OPG蛋白的分泌。结论降钙素能促进成骨细胞的增殖及成骨细胞中OPG mRNA的表达,同时抑制RANKL的mRNA的表达。     

瘦素与前列腺癌激素依赖性关系的研究

目的观察瘦素对前列腺癌细胞增殖的促进作用,探讨其与前列腺癌激素依赖性的关系。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测瘦素作用不同时间后雄激素依赖性前列腺癌细胞株22RV1和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3的增殖率;用MTT法检测不同浓度瘦素及双氢睾酮(DTH)作用后前列腺癌细胞株22RV1和PC-3的增殖率。结果瘦素作用于PC-3细胞不同时间后吸光度(OD值)均明显增高(P<0.05),在48 h达到顶点;且随瘦素浓度逐渐增高,其促进PC-3细胞增殖率亦逐渐增高;而瘦素对22RV1细胞作用不同时间后OD值增高不明显(P>0.05)。DTH对22RV1细胞增殖作用最明显,增殖率随其浓度增高而逐渐升高,但其促进PC-3细胞增殖率明显较低(P<0.01)。结论瘦素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞增殖具有明显的选择性促进作用,其可能与前列腺癌雄激素非依赖性的发生发展有密切关系。