Aβ25-35对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用

目的 考察Aβ25-35对原代培养大鼠皮质神经元的损伤作用.方法 将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、谷氨酸(glutamate,Glu)组及3个浓度的Aβ25-35组,每组各6孔.观察神经元的形态改变,并测定细胞存活率及培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活力值.结果 与对照组比较,Glu组可造成大鼠皮质神经元明显损伤,形态发生显著改变,细胞存活率为(53.1±5.5)%(P<0.01),并且培养液中LDH漏出显著增多,LDH的活力值为(39.9 4±2.9)U/g Prot (P<0.01);Aβ25-35三个剂量组神经元存活率均显著降低,分别为(69.3±5.9)%(P<0.01)、(52.7±3.0)%(P<0.01)和(33.2±1.8)%(P<0.01),Aβ25-35低、中剂量组培养液中LDH漏出未见明显改变,LDH活力值分别为(23.5±1.4)U/g Prot和(24.7±1.3)U/g Prot(P>0.05),Aβ25-35高剂量组培养液中LDH漏出显著升高,LDH活力值为(38.8±2.0)U/g Prot(P<0.01),与Glu组相当(P>0.05).结论 Aβ25-35能剂量依赖性地损伤皮质神经元,1 μmol/L Aβ25-35剂量组处理24 h后细胞存活率可降低50%左右,可用于Aβ25-35体外诱导阿尔茨海默病细胞模型的建立.     

Aβ25-35寡聚体对原代培养海马神经元突触的损伤作用

阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种以进行性认知功能减退为特征的神经变性疾病。典型的病理学改变为：老年斑、神经原纤维缠结、神经元突触功能异常。AD的病因复杂,AD是多种因素共同参与的结果,其中老年斑的主要成分β-淀粉样蛋白（Amyloid-β,Aβ）被认为是该病发病机制中的起始因素和关键环节,尤其是可溶性Aβ寡聚体的神经毒性作用日益被重视,突触功能障碍及缺失是与认知功能下降关系最为密切的病理变化。     

知母皂苷BⅡ对Aβ_(25-35)诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用

目的研究甾体皂苷类化合物知母皂苷BⅡ对Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤的保护作用。方法体外培养原代大鼠神经细胞,采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法检测细胞增殖活性;采用分光光度法测定细胞培养液中LDH(乳酸脱氢酶)漏出率、SOD(超氧化物歧化酶)活力、MDA(丙二醛)含量以及AChE(乙酰胆碱酯酶)活力。结果知母皂苷BⅡ10-4、10-5mol.L-1能明显增强Aβ25-35(20μmol.L-1)诱导的神经细胞增殖活性,降低LDH漏出率,并能明显提高其SOD活力、降低MDA含量,同时对AChE活力具有一定的降低作用。结论知母皂苷BⅡ能明显改善Aβ25-35诱导的原代大鼠神经细胞损伤,可能与其提高模型细胞的抗氧化能力,改善胆碱能系统相关。     

Aβ25-35对原代培养小鼠皮层神经元突触素和PSD-95表达的影响

目的:观察Aβ25-35对小鼠皮层神经元突触损伤作用,观察PSD-95和突触素的表达,进而探讨阿尔茨海默病的发病机制。方法:将小鼠(出生48h内)断头取脑,急性分离皮层神经元,在24孔培养基上培养7d,经NSE染色鉴定为神经元,将Aβ25-35配制成浓度为5μmol/L,分别在0h、1h、2h、4h、6h致伤皮层神经元(每个时间点分别为4孔,设对照组),经免疫组化观察突触素和PSD-95的表达情况。结果:Aβ25-35作用1h后突触素、PSD-95免疫反映复合物的灰度值明显下降,即二者的表达明显减少,1-6h与同期时间点对照组相比差异有显著性(P<0.01),于6h后突触素、PSD-95几乎未见到表达。     

可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：研究可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺( OGD)损伤的保护作用。方法取培养8 d的皮质神经元,分为正常对照组、模型对照组、可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)预处理组。神经元氧糖剥脱损伤模型通过化学性缺氧、孵育液缺糖的方法建立。神经元损伤程度采用噻唑蓝( MTT)染色法和检测乳酸脱氢酶( LDH)的释放量来进行评价,观察预给予可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)对神经元损伤的保护作用。结果显微镜下,正常对照组细胞密集,胞体饱满,边缘光滑,有较强折光性;神经元存活率(100.00±32.12)％,LDH释放比率(100.00±37.51)％。模型对照组细胞核固缩,细胞膜不完整,折光性差,MTT染色吸光度值明显降低,神经元存活率(53.61±7.62)％,LDH释放量显著增加,释放率为(166.07±9.65)％。可乐定(1.0,3.0,10μmol·L-1)预处理可明显逆转ODG损伤所致细胞形态的改变,剂量依耐性升高MTT染色吸光度值,神经元存活率分别为(67.53±10.54)％,(71.50±9.79)％和(87.48±5.29)％,同时可明显降低LDH的释放量,释放率分别为(136.45±25.72)％,(130.92±24.94)％和(121.63±32.68)％。结论可乐定对原代培养大鼠皮质神经元ODG损伤具有良好的保护作用。     

皮质神经元B27原代培养及MAP2鉴定

目的对原代新生鼠皮质神经元原代培养方法进行改进,以获得纯度更高、体外更易存活的神经元进行相关实验研究。方法采用胰酶消化和机械分离相结合的方法制备皮质神经元悬液,进行培养,用倒置相差显微镜观察细胞形态,利用神经元特异性标志物微管相关蛋白2(MAP2)鉴定培养神经元的纯度。结果神经元细胞存活率高,在体外培养条件下细胞状态良好,生长旺盛。培养第4天,可见多数细胞长出1、2个突起并交织成网。培养第8天细胞胞体较大,能形成典型的神经细胞网络。培养第10天,鉴定神经元纯度质量分数达90%以上。结论该方法简便可行,是体外培养神经元较理想的方法。     

艾司西酞普兰对Aβ25-35诱导的大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的研究艾司西酞普兰(escitalopram,ESC)对β-淀粉样肽片段(β-amyloid peptide,Aβ25-35)诱导的阿尔茨海默病海马神经元细胞损伤的保护作用,并探讨其可能机制。方法以Aβ25-35诱导大鼠海马神经元细胞建立阿尔茨海默病(alzheimer disease,AD)模型,随机分为空白对照组、Aβ组、不同ESC组(0.5、1.0、1.5μmol·L-1)、Aβ+不同ESC(0.5、1.0、1.5μmol·L-1)组。通过荧光显微镜观察腺病毒(adenoviruses-enhanced green fluorescent protein,Ad-EGFP)转染的神经元细胞形态,MTS法检测细胞活性,Western blot检测脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达。结果与空白组比较,Aβ组及Aβ+不同浓度艾司西酞普兰组神经元细胞分支及长度均减少,细胞活力降低,差异有统计学意义(P<0.05),BDNF释放减少;与Aβ组比较,Aβ+不同ESC组神经元细胞分支数目及长度均增加,细胞活力上升,差异有统计学意义(P<0.05),BDNF释放增多。结论艾司西酞普兰能显著改善阿尔茨海默病模型神经元的存活率,发挥细胞保护作用,其机制可能是通过上调BDNF、减缓神经元退行性变以促进神经元的修复。     

蒲公英总黄酮抑制Aβ25-35诱导的海马神经元细胞凋亡的研究

目的：研究蒲公英总黄酮用于防治阿尔兹海默症（AD）的机制,探讨蒲公英总黄酮对Aβ25-35诱导海马神经元细胞凋亡的影响,并进一步探究其潜在机制。方法：对海马神经元胞进行原代培养,经20 μmol·L-1 Aβ25-35诱导,细胞逐渐出现凋亡,用MTT法结合流式细胞仪,观察不同浓度的蒲公英总黄酮的细胞活力和细胞凋亡情况。用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法来检测各组细胞中丙二醛（MDA）含量以及超氧化物歧化酶（SOD）活性。Western blot检测各组细胞凋亡相关的基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。结果：20 μmol·L-1 Aβ25-35组细胞比对照组活力下降,凋亡增加,MDA 含量上升,SOD 活性降低。与20 μmol·L-1 Aβ25-35组相比,各浓度下的蒲公英总黄酮均能够提高细胞活力,升高细胞内SOD活性,抑制细胞凋亡,降低MDA含量,同时上调Bcl-2表达,降低Bax和活化状态下的Caspase-3蛋白的表达,并呈浓度依赖性相关。结论：蒲公英总黄酮能够减少Aβ25-35诱导神经元细胞的细胞凋亡,这可能与拮抗其氧化损伤有关。     

神经生长因子对培养大鼠皮质神经元缺氧损伤的拮抗作用

AIM: To observe the effects of nerve growth factor (NGF) on neuronal hypoxic injury induced by sodium dithionite in primary cultures from gestation of 17-d rat fetal cerebral cortex. METHODS: Neuronal death and lactate dehydrogenase (LDH) efflux in the bathing medium were measured. The homogenate of cortical cells was used to determine malonyldialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) activities. RESULTS: When cultures were incubated for 24 h with sodium dithionite, efflux of LDH and MDA content increased while the number of surviving neurons decreased. NGF 100 micrograms.L-1 increased the number of surviving neurons to 85% +/- 9% of normoxia level under hypoxia. NGF 1-100 micrograms.L-1 concentration-dependently attenuated hypoxia-induced increase of efflux of LDH and MDA content, with IC50 of 27 and 49 (95% confidence limits: 18-49 and 29-110) micrograms.L-1. NGF 30 micrograms.L-1 induced a 3-fold increase in SOD and GSH-Px activities. The levels of SOD and GSH-Px activities in hypoxia group were increased 2.7-fold by NGF 100 micrograms.L-1. CONCLUSION: NGF prevented hypoxic insults in cultured cerebral cortical neurons by suppressing the generation of lipid peroxides and increasing the activities of antioxidant enzymes.     

蒲公英总黄酮改善Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病大鼠记忆功能障碍的观察

目的：探索蒲公英总黄酮对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠记忆功能的影响以及潜在机制。方法：将50只健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组和蒲公英总黄酮低、中、高剂量组（100、200、400 mg·kg-1）。采用大鼠右侧海马CA1 区注射1 μL Aβ25-35建立AD大鼠模型,术后各组进行灌胃治疗21d。治疗结束采用Morris水迷宫法观察大鼠的记忆能力;分离海马组织并制备组织匀浆,采取二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)荧光法检测活性氧 (ROS) 水平;利用硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性;将海马组织制备切片,应用TUNEL染色观察海马神经元凋亡;Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表达。结果：与正常对照组相比,模型组大鼠逃逸潜伏期明显延长,空间探索时间明显缩短,海马组织ROS水平增加,MDA含量明显增高,SOD活性明显下降,海马神经元细胞凋亡增加,Bax和Caspase-3表达上调同时Bcl-2表达降低。与模型组相比,不同浓度的蒲公英总黄酮均能缩短逃逸潜伏期,延长空间探索时间,降低ROS水平和MDA含量,升高SOD活性,减少神经元细胞凋亡,同时上调Bcl-2表达,降低Bax和Caspase-3表达,并且呈现浓度依赖性关系。结论：蒲公英总黄酮能够保护Aβ25-35诱导的大鼠记忆能力损伤,这可能与拮抗氧化应激介导的神经元细胞凋亡有关。     

阿魏酸钠对抗Aβ25-35诱导的鼠神经元凋亡作用研究

目的 探讨阿魏酸钠对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)通过谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡的影响.方法 培养的皮层神经元分别与谷氨酸(20μmol/L)、Aβ25-35(5μmol/L)、Aβ25-35(5μmol/L)+谷氨酸(20μmol/L)孵育,采用Hoechst 33258荧光染色法分析神经细胞凋亡;然后用谷氨酸( 50μmol/L)诱导神经元凋亡,采用荧光染色法和Westem blot观察阿魏酸钠的保护作用.结果 单独应用Aβ25-35(5μmol/L)和单独加入谷氮酸(20μmol/L)引起的皮层神经元凋亡率与对照组无明显差异;Aβ25-35与皮层神经元共同孵育5天,接着用谷氨酸处理24h,细胞凋亡率从正常的9.2%+1.5%增加到43%±8%:阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞凋亡百分比至21%±5%,并对抗谷氨酸引起的Bcl-2蛋白表达的降低.结论 阿魏酸钠能够减弱Aβ25-35提高谷氨酸毒性诱导的鼠皮层神经元凋亡.     

雌激素对培养大鼠皮质神经元细胞β淀粉样蛋白(25-35)损伤的保护作用

目的:研究雌激素对β淀粉样蛋白(βamyloidprotein,Aβ)诱导的大鼠神经细胞损伤的影响。方法:通过相差倒置显微镜、Giemsa染色及乳酸脱氢酶(lactatedehydrohenase,LDH)释放率的测定。观察17β雌二醇(17βestradiol,17βE2)对Aβ(2535)诱导的大鼠皮质神经元细胞损伤的影响。结果:Aβ(2535)可以诱导大鼠皮质神经元细胞损伤,17βE2预处理48h显著抑制Aβ(2535)诱导的大鼠皮质神经元细胞损伤。结论:Aβ对大鼠皮质神经元细胞有毒性作用,雌激素可以抑制Aβ诱导的大鼠皮质神经元细胞损伤,雌激素具有神经保护作用。     

人参皂甙Rb1抑制Aβ25-35诱导皮层神经元tau蛋白的过度磷酸化

目的：探讨人参皂甙Rb1对凝聚态Aβ25-35诱导的胎鼠皮层神经元tau蛋白过度磷酸化的影响及其可能的作用机制。方法通过蛋白免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测胎鼠皮层神经元tau蛋白在Ser396、Ser199／202和Thr231位点的磷酸化水平、总tau蛋白水平和糖原合成酶3B(GSK-3β)的蛋白表达水平。结果20μmol／L     

芥子碱对Aβ_(25-35)诱导的认知功能障碍小鼠海马神经元再生的影响

目的探讨芥子碱对Aβ25-35诱导的认知功能障碍小鼠海马神经元再生的影响。方法采用侧脑室内注射Aβ25-35诱导认知功能障碍小鼠模型,并分为4组:假手术组、Aβ25-35组、假手术+芥子碱组和Aβ25-35+芥子碱组。采用Y型电迷宫法检测学习和记忆行为;TUNEL法检测海马CA1区的神经元凋亡情况;ELISA法检测海马的丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot法检测海马生长相关蛋白43(GAP-43)和突触素(P38)的蛋白水平。结果相比于假手术组,Aβ25-35组的学习次数、海马MDA和TNF-α的水平增加,记忆次数减少、海马CA1区神经元凋亡率升高、GAP-43和P38的蛋白水平降低(P<0.05);而芥子碱处理可改善以上症状,但仍与假手术组有差异。结论芥子碱可改善Aβ25-35诱导的认知功能障碍小鼠的学习和记忆功能障碍,降低海马神经元凋亡,并缓解海马区与神经再生相关蛋白及分子的水平。     

APP17肽对Aβ25-35诱导神经细胞凋亡保护作用

目的通过形态学和生化学指标观察APP17肽对Aβ25-35诱发SH-SY5Y细胞凋亡是否有保护作用,并对其保护作用机制作进一步的探讨.方法选用细胞形态观察、半定量LM-PCR DNA ladder Assay和流式细胞仪定量测定细胞凋亡率的方法观察APP17肽是否对Aβ25-35诱发SH-SY5Y细胞凋亡有保护作用;通过测定细胞MTT代谢率,共聚焦显微镜观察Aβ25-35和APP17肽对细胞内过氧化物含量、线粒体膜电位的影响以及Western Blotting 观察细胞内凋亡诱导因子AIF及核转录因子NF-κB的表达情况,探讨了APP17肽的保护作用机制. 结果 APP17肽可以明显改善Aβ25-35造成的细胞形态损伤,显著降低细胞凋亡比率;与Aβ25-35损伤组相比,APP17肽预孵育能明显提高细胞MTT代谢率,稳定线粒体膜电位,减少AIF的表达;有效降低Aβ25-35引起的细胞内过氧化物含量增高;并且使具有神经保护作用的核转录因子NF-κB表达增加. 结论 APP17肽可以稳定线粒体功能、降低细胞内过氧化物含量,激活NF-κB并使其持续表达,对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有比较明显的保护作用.     

梓醇保护L-谷氨酸和Aβ25-35损伤PC12细胞作用比较作用比较

目的观察梓醇对L-Glu和Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用的异同。方法常规培养神经元样PCI2细胞，预先加入梓醇及对照生理盐水24h后分别加L—Glu 5mmol／L和Aβ25-35 20μmol／L损伤24h，K252a干预组细胞在梓醇前1h加入200nmol／LK252a。MTT法测定细胞存活率，放射配基结合分析测定M2受体密度。结果梓醇100μmol／L明显提高细胞存活率（P〈0．01），10μmol／L、100μmol／L升高M2受体密度（P〈0．05，P〈0．01），K252a部分阻断梓醇对Aβ25-35损伤细胞的保护作用，对梓醇保护L—Glu损伤的阻断作用更强。结论梓醇对L—Glu和Aβ25-35损伤PC12细胞保护作用有差异。     

梓醇保护L-谷氨酸和Aβ25-35损伤PC12细胞作用比较作用比较

目的观察梓醇对L-Glu和Aβ25-35损伤PC12细胞的保护作用的异同。方法常规培养神经元样PCI2细胞，预先加入梓醇及对照生理盐水24h后分别加L—Glu 5mmol／L和Aβ25-35 20μmol／L损伤24h，K252a干预组细胞在梓醇前1h加入200nmol／LK252a。MTT法测定细胞存活率，放射配基结合分析测定M2受体密度。结果梓醇100μmol／L明显提高细胞存活率（P〈0．01），10μmol／L、100μmol／L升高M2受体密度（P〈0．05，P〈0．01），K252a部分阻断梓醇对Aβ25-35损伤细胞的保护作用，对梓醇保护L—Glu损伤的阻断作用更强。结论梓醇对L—Glu和Aβ25-35损伤PC12细胞保护作用有差异。     

孕酮及别孕烯醇酮对Aβ_(25-35)诱导的神经元损伤作用的影响

目的:研究孕酮及别孕烯醇酮对Aβ25-35诱导的神经元损伤作用的影响。方法:采用Aβ25-35(1μmol.L-1)处理原代培养的大鼠大脑皮质神经元建立损伤模型,另分别加入不同浓度孕酮及别孕烯醇酮与Aβ25-35共孵育24h,观察神经元的形态学变化并测定存活率(MTT法)。结果:与模型组比较,孕酮共孵育组神经元生存状况明显改善,神经元存活率浓度依赖性地升高(r=0.757,P<0.01),高剂量组的存活率为(100.7±7.9)%,与对照组比较无统计学差异(P>0.05);别孕烯醇酮共孵育组神经元生存状况与模型组比较无明显改善,神经元存活率呈浓度依赖性降低(r=-0.841,P<0.01)。结论:神经甾体孕酮能浓度依赖性地抑制Aβ25-35诱导的神经毒性作用,提高细胞存活率;孕酮的代谢物别孕烯醇酮不能对抗Aβ25-35引起的神经元损伤,并浓度依赖性地加重上述损伤任用。     

新生大鼠大脑皮层神经元的原代培养

目的成功建立简便易行的原代神经元培养模型的方法。方法无菌操作条件下,培养皿或培养板经L-多聚赖氨酸包被过夜,用15%完全培养液混悬神经元,以细胞密度为5×104细胞/mL的浓度种植,24h后倒置相差显微镜观察神经元贴壁后即用阿糖胞苷(10μmol/L)以抑制神经胶质细胞及非神经细胞的增殖,每48h进行每皿或每孔半量换液。结果神经元贴壁生长较多,神经胶质或成纤维细胞被抑制,在半量换液中可清除,获得相对单纯的神经元。结论简便易行的原代皮层神经元培养方法,可以得到相对单纯体外培养的神经元模型。