姜黄素的抗肺纤维化作用

目的筛选抗肺纤维化的中药,为临床应用奠定理论基础。方法SD大鼠45只,分为正常对照组,模型组、姜黄素组,正常对照组给予0.2ml生理盐水气管内注入,其他二组给予博莱霉素生理盐水溶液0.2ml(5mg/kg)。灌注当日开始用药,正常对照组、模型组1ml·kg-1.d-1生理盐水,姜黄素组50mg·kg-1.d-1腹腔注射直至处死动物的前1d。于术后7、21、28d每组各处死5只,取肺作HE和Masson染色,观察肺泡炎和肺纤维化程度,测血清中透明质酸(HA)和前胶原Ⅲ(precollgenⅢ,PCⅢ)浓度及肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量。结果姜黄素组肺泡炎和肺纤维化的程度较模型组减轻(P<0.05)。血清中HA和PCⅢ低于模型组(P<0.05),肺组织中HYP含量也明显低于模型组(P<0.05)。结论姜黄素对大鼠肺纤维化有抑制作用。     

三氧化二砷对大鼠肺纤维化模型的干预作用及其机制的探讨

目的观察三氧化二砷(arsenictrioxide,AS2O3)对博莱霉素-A5(bleomycin-A5,BLM-A5)所致大鼠肺纤维化有无治疗作用并探讨其作用机制。方法50只SD大鼠分为空白对照组、肺纤维化模型组和三氧化二砷治疗组。其中对照组10只,气管内给予生理盐水后,连续7天腹腔内注入生理盐水;模型组20只,气管内给予BLM-A5后,连续7天腹腔内注入生理盐水;治疗组20只,气管内给予BLM-A5后连续7天腹腔内注入AS2O3。每组再随机均分成2个亚组,分别于实验第7天、第28天处死。检测以下项目:①支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid,BALF)经流式细胞仪行细胞分类和炎性细胞凋亡率检测;②ELISA法检测BALF中细胞因子γ-干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)的含量。③光镜下观察肺组织肺泡炎和肺纤维化程度;④实验第28天肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量的测定。结果与模型组相比,治疗组:①BALF中中性粒细胞和淋巴细胞百分比总和降低(P<0.05);炎性细胞凋亡率增加(P<0.05);实验第7天组IFN-γ含量降低(P<0.05)。②肺组织炎症和纤维化程度减轻;HYP含量降低(P<0.05)。结论AS2O3能减轻BLM-A5诱导的肺纤维化大鼠肺组织炎症和纤维化程度,作用机制可能与其诱导肺内炎性细胞凋亡有关。     

黄芪糖蛋白对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的干预作用及机制

目的观察黄芪糖蛋白(HQGP)干预肺纤维化小鼠的病理学改变及并分析机制。方法将60只健康ICR小鼠随机分为对照组、模型组及治疗组,每组20只。采用鼻腔滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型,造模次日起治疗组每天腹腔注射HQGP,模型组及对照组腹腔注射等体积的生理盐水,连续14 d;造模后第7、14、28天取材,取肺组织进行HE、Masson染色,观察肺泡炎及纤维化程度;免疫组化法检测肺组织转化生长因子(TGF)-β1表达。结果与模型组比较,第7、14、28天治疗组肺泡炎、肺纤维化程度明显减轻;肺组织TGF-β1蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 HQGP抑制小鼠肺纤维化的发展,其作用机制可能与降低肺组织中TGF-β1表达有关。     

激动素对实验性肺纤维化的治疗作用研究

目的研究激动素(Kinetin)对博来霉素A5(BLMA5)诱导的大鼠肺纤维化的治疗作用。方法雌性Wister大鼠60只随机分为3组:A组为生理盐水对照组;B组为BLMA5造模组;C组为Kinetin治疗组。分别于第3、7、14、28天处死大鼠,取肺组织行HE及Masson染色以观察肺泡炎和肺纤维化情况,检测肺组织匀浆HYP、SOD、MDA、TNF-α、TGF-β1的含量。结果与模型组比较,Kinetin治疗组的肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻;肺组织SOD水平上升,MDA、TNF-α、TGF-β1水平下降。结论 Kinetin通过抗氧化、抑制TNF-α、TGF-β1减轻博来霉素A5所致大鼠肺纤维化。     

不同剂量白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预比较

目的 比较不同剂量的白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用.方法 90只SD大鼠随机分成正常对照组、模型组、Res低剂量干预组、Res中剂量干预组、Res高剂量干预组、DXM干预组.博莱霉素(5 mg/kg)气管内灌注建立大鼠肺纤维化模型.各组均采用HE染色、Masson染色、HYP含量测定.观察不同剂量的白藜芦醇对大鼠肺纤维化的干预作用.结果 Res中、高剂量干预组及DXM干预组大鼠一般情况均较模型组好.HE染色、Masson染色显示Res低剂量干预组大鼠肺组织肺泡炎和肺纤维化程度较模型组没有显著差异(P均＞0.05).Res中、高剂量干预组及DXM干预组病理组织染色可见肺泡炎和肺纤维化程度在各时间点均明显轻于模型组(P＜0.05).HYP含量测定中Res低剂量干预组与模型组无显著性差异(P＞0.05),而Res中、高剂量干预组及DXM干预组各时间点HYP含量均低于模型组(P＜0.05).结论 不同剂量的白藜芦醇对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用不尽相同.中、高剂量白藜芦醇的干预作用基本同地塞米松的干预作用.     

Trichostatin A对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的抑制作用

目的 观察非选择性组蛋白去乙酰化酶抑制剂Trichostatin A(TSA)对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化的影响以及肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原含量及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的变化.方法 将46只SPF级雄性160～180 g SD大鼠随机分为正常对照组、模型组Ⅰ、模型组Ⅱ、治疗组,其中正常对照组10只,模型组Ⅰ 14只,模型组Ⅱ12只,治疗组10只.模型组Ⅰ、模型组Ⅱ及治疗组经气管内注入盐酸博莱霉素(5mg/kg),制备肺纤维化大鼠模型.正常对照组气管内注入相同体积生理盐水.治疗组在造模次日起腹腔内注射TSA 2 mg/kg溶于二甲基亚砜(DMSO) 60μl,并稀释于生理盐水1.2 ml中,每天1次,连续3d;模型组Ⅱ在造模次日起腹腔内注射DMSO 60 μl稀释于生理盐水1.2 ml中,每天1次,连续3 d；模型组Ⅰ及正常对照组在造模次日起腹腔内注射生理盐水1.2 ml,每天1次,连续3d.其中模型组Ⅰ大鼠死亡5只,模型组Ⅱ大鼠死亡4只,治疗组大鼠死亡2只.于造模第21天处死全部存活大鼠.取肺组织进行HE染色及Masson三色染色,评估肺纤维化程度.碱水解法测定肺组织羟脯氨酸(HYP)含量.酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织匀浆中α-SMA及Ⅰ型胶原的含量.real-time PCR检测肺组织TGF-β1mRNA表达的变化.结果 ①HE染色分析:模型组Ⅰ及模型组Ⅱ肺泡炎程度较正常对照组增高(P＜0.05),模型组Ⅰ及模型组Ⅱ之间肺泡炎程度差异无统计学意义(P＞0.05),治疗组肺泡炎程度均较模型组Ⅰ及模型组Ⅱ减轻(P＜0.05),与正常对照组比较肺泡炎程度差异无统计学意义(P＞0.05).②Masson染色分析:模型组Ⅰ及模型组Ⅱ肺组织纤维化程度较正常对照组增高(P＜0.05),模型组Ⅰ及模型组Ⅱ之间肺纤维化程度差异无统计学意义(P＞0.05),治疗组肺纤维化程度较模型组Ⅰ及模型组Ⅱ减轻(P＜0.05),与正常对照组比较肺纤维化程度差异无统计学意义(P＞0.05).③肺组织HYP含量:模型组Ⅰ及模型组Ⅱ的HYP含量较正常对照组高(P＜0.05),模型组Ⅰ及模型组Ⅱ的HYP含量无明显变化(P＞0.05).治疗组的HYP含量较模型组Ⅰ及模型组Ⅱ降低(P＜0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).④肺组织匀浆中α-SMA蛋白浓度:模型组Ⅰ及模型组Ⅱ的α-SMA含量较正常对照组高(P＜0.05),模型组Ⅰ及模型组Ⅱ的α-SMA含量差异无统计学意义(P＞0.05),治疗组的α-SMA含量较模型组Ⅰ及模型组Ⅱ降低(P＜0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).⑤肺组织匀浆中Ⅰ型胶原蛋白浓度:模型组Ⅰ及模型组Ⅱ的Ⅰ型胶原含量较正常对照组高(P＜0.05),模型组Ⅰ及模型组Ⅱ的Ⅰ型胶原含量差异无统计学意义(P＞0.05),治疗组的Ⅰ型胶原含量较模型组Ⅰ及模型组Ⅱ降低(P＜0.05),与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).⑥肺组织TGF-β1 mRNA:模型组Ⅰ及模型组Ⅱ的TGF-β1 mRNA表达较正常对照组升高(P＜0.05),模型组Ⅰ及模型组Ⅱ的TGF-β1 mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05),治疗组的TGF-β1mRNA表达较模型组Ⅰ及模型组Ⅱ降低(P＜0.05),但高于正常对照组(P＜0.05).结论 气管内注入博莱霉素成功构建肺纤维化大鼠模型.非选择性组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA能减轻博莱霉素诱导大鼠肺纤维化,降低肺组织中纤维化相关蛋白α-SMA、Ⅰ型胶原含量以及TGF-β1 mRNA表达.     

大鼠肺纤维化模型中NLRP3、IL-18表达及意义的探讨

目的观察博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中NLRP3、IL-18的表达水平,探讨其在肺纤维化发生、发展中的意义。方法将45只清洁级Wistar大鼠按随机数字表法分为健康对照组(N组)、博来霉素组(B组)、地塞米松治疗组(D组),每组大鼠各15只,B组及D组大鼠给予气管内注射博来霉素4mg/kg制作肺纤维化模型,N组给予相同体积生理盐水作为对照,D组大鼠于肺纤维化造模基础上第2天每日腹腔注射地塞米松3mg/kg,N、B组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照。各组大鼠分别于造模后7、14、28天处死,HE染色评价肺组织病理形态学变化,碱水解法及酶联免疫吸附法分别测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)、NLRP3含量,RT-PCR法测定肺组织中IL-18mRNA表达量。结果 (1)HE染色示B、D组大鼠第7天肺间质和肺泡腔内可见大量炎细胞浸润,此后炎症随时间推移逐渐减轻,逐渐发展为晚期纤维化性变;B、D组HYP含量随时间推移逐渐升高,以28天为著,P0.05;(2)B、D组NLRP3、IL-18mRNA表达于第7天升高至最高点,后逐渐降低,至28天均高于N组,差异有统计学意义(P0.05);(3)D组NLRP3、IL-18mRNA表达在同一时间均低于B组,P0.05。结论 NLRP3、IL-18在大鼠肺纤维化发病早期起重要作用,可能参与了肺纤维化发生与发展。     

苦参碱对肺间质纤维化大鼠外周血单个核细胞DNA损伤的保护研究

目的 观察肺间质纤维化大鼠氧化/抗氧化状态、外周血单个核细胞(PBMCs)DNA 损伤情况及苦参碱的保护作用机制.方法 采用气管内灌注博来霉素(BLM)的方法建立大鼠肺纤维化模型,设正常对照组、模型组、小剂量苦参碱组、大剂量苦参碱组和氢化可的松组,每组18只,再各分为第7天、第14天和第28天组.观察各组不同时期病理切片和肺组织羟脯氨酸(HYP)浓度;测定肺组织丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;用荧光显微镜检测PBMCs DNA 损伤情况.结果 苦参碱组和氢化可的松组的肺泡炎和肺纤维化程度及HYP含量显著地低于模型组(P＜0.05);苦参碱和氢化可的松能明显减少肺间质纤维化大鼠肺组织MDA水平,提高GSH-Px含量,降低PBMCs彗星率(P＜0.01).结论 苦参碱能减轻BLM诱导的大鼠肺纤维化,这种作用有可能通过改善BLM大鼠体内氧化应激状态,减轻肺间质纤维化大鼠PBMCs DNA损伤实现的.     

IL-37、Smad3在博来霉素致大鼠肺纤维化模型中的表达及意义

目的研究博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中IL-37、Smad3的表达水平,探讨其在PF发生、发展中的作用及意义。方法将45只清洁级Wistar大鼠按随机数字表法分为健康对照组(N组)、博来霉素组(B组)、地塞米松治疗组(D组),每组大鼠15只,B组及D组大鼠气管内给予博来霉素4mg/kg制作肺纤维化模型,N组给予相同体积生理盐水作为对照组,D组大鼠于肺纤维化造模基础上第2天每日腹腔注射地塞米松3mg/kg,N、B组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照。各组大鼠分别于造模后7、14、28天处死,HE染色评价肺组织病理形态学变化,碱水解法及酶联免疫吸附法分别测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)、IL-37含量,RT-PCR法测定肺组织中Smad3mRNA表达量。结果 (1)HE染色示B、D组大鼠肺组织由肺泡炎逐渐发展为纤维化性变,B、D组HYP含量在各时间点均较N组升高,以28天为著,P0.05;(2)B、D组IL-37含量于第7天升高明显,后逐渐降低,但均高于N组,P0.05;(3)随着时间延长B、D组肺组织Smad3mRNA表达量逐渐升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 IL-37、Smad3在大鼠肺纤维化发病过程中起重要作用,可能参与了肺纤维化发生与发展。     

激动素对实验性肺纤维化的治疗作用研究简

目的 研究激动素（Kinetin）对博来霉素 A5 （ BLMA5） 诱导的大鼠肺纤维化的治疗作用.方法 雌性Wister大鼠60只随机分为3组：A组为生理盐水对照组;B 组为BLMA5造模组;C 组为Kinetin治疗组.分别于第3、7、14、28天处死大鼠,取肺组织行HE及Masson染色以观察肺泡炎和肺纤维化情况,检测肺组织匀浆HYP、SOD、MDA、TNF-α、TGF-β1的含量.结果与模型组比较,Kinetin治疗组的肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻;肺组织SOD水平上升,MDA、TNF-α、TGF-β1水平下降.结论 Kinetin通过抗氧化、抑制TNF-α、TGF-β1减轻博来霉素A5所致大鼠肺纤维化.     

外源性H_2S对肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子-β1及结缔组织生长因子的干预作用

目的动态观察硫化氢(H2S)对博莱霉素(BLM)致肺纤维化大鼠肺组织转化生长因子(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响。方法采用气管内一次注射BLM 5 mg/kg致大鼠肺纤维化的造模方法,将健康雄性Wistar大鼠54只随机分为对照组、肺纤维化组和NaHS(H2S供体)+肺纤维化组,造模后第2天开始:NaHS+肺纤维化组每天腹腔注射0.5 ml NaHS(28μmol/kg),对照组及肺纤维化组每天腹腔内注射等量生理盐水。各组在给药后7、14、28 d分别随机处死6只取材,碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)水平的变化,免疫组化法检测TGF-β1及CTGF蛋白在肺组织的表达。结果与对照组相比,肺纤维化组各期大鼠肺组织HYP含量、TGF-β1及CTGF蛋白表达均显著升高(P<0.01);与肺纤维化相比,NaHS+肺纤维化各组大鼠HYP含量、TGF-β1及CTGF蛋白表达在各期均显著降低(P<0.01、0.05)。各组各期肺组织TGF-β1与CTGF呈显著正相关(r=0.891⁰.968,P均<0.01)。结论外源性H2S可以通过抑制TGF-β1信号通路,下调CTGF蛋白表达发挥抗纤维化作用。     

芪丹颗粒对博莱霉素致肺损伤大鼠肺组织FasL、caspase-3表达的影响

目的 探讨芪丹颗粒对博莱霉素所致肺损伤大鼠肺泡上皮细胞增殖的影响.方法 将105只SD大鼠随机分成4组.模型组、芪丹颗粒组(芪丹组)、氢化可的松琥珀酸钠组(氢可组)各30只,气管内灌注博莱霉素A5诱导肺纤维化,次日芪丹组每日给予芪丹颗粒3 125 mg/kg灌胃,氢可组腹腔注射氢化可的松25 mg/kg,对照组气管内灌注和灌胃均用生理盐水,分别于造模第7、14、28天处死大鼠(对照组5只,余组各10只)取肺组织,HE染色观察肺泡炎及纤维化程度,免疫组化法检测石蜡切片中FasL及caspase-3的表达.结果 芪丹组较氢可组及模型组肺纤维化及肺泡炎程度轻.FasL、caspase-3表达芪丹组较对照组、模型组、氢可组均有不同程度降低.FasL与caspase-3表达呈正相关(r=0.817,P<0.01).结论 芪丹颗粒可减轻博莱霉素A5诱导的肺纤维化大鼠的肺纤维化及肺泡炎,减少FasL与caspase-3的表达.其机制可能与减少肺泡上皮细胞凋亡有关.     

骨髓间充质干细胞对大鼠肺纤维化的抑制作用

目的分析大鼠气管内注入博来霉素(BLMS)后,观察不同时间点移入骨髓间充质干细胞(MSC)的分化行为,分析细胞因子表达规律及其与病理变化的相关性,确定MSC移植治疗实验性肺纤维化大鼠的最佳时间窗及标准,旨在为临床上干细胞移植治疗肺纤维化的时机提供可靠参考依据。方法体外分离和培养雄性Wistar大鼠的MSC。将60只雌性Wistar大鼠随机分为4组:A组为生理盐水对照组,气管内注入PBS50μL;B组为博来霉素模型组,向气管内注入BLMS 5mg/kg;C组气管内注入BLMS后立即尾静脉注射移植MSC 1×10~7/mL,200μL;D组气管内注入BLMS 14d后移植MSC 1×107/mL,200μL。于实验7d、14d、28d(D组于28d)分别处死大鼠5只,取肺组织病理切片行HE及Masson染色,观察肺部炎症和纤维化情况及羟脯氨酸(HYP)含量测定;提取肺组织通过聚合酶链反应(PCR)检测雄性鼠的性别决定基因(SRY);提取肺组织免疫组织化学法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达。结果病理切片观察:B组第7天肺泡炎最明显,28d时肺纤维化最严重,与其他3组比较有统计学意义(P0.05或P0.01);C组、D组肺泡炎及肺纤维化程度均较B组显著减轻(P0.05),但仍较A组严重(P0.05或P0.01),其中D组较C组严重(P0.05)。Y染色体性别决定区SRY基因的检测:A组及B组检测不到SRY基因,但C组和D组各时间点均能检测到SRY基因。HYP含量:B组第7天HYP含量开始升高,28d达到最高峰,高于其他3组(P0.05或P0.01),与A组相比各时间点HYP含量的差异均具有统计学意义(P0.01);C组与D组大鼠HYP含量均呈低水平升高趋势,造模后7d、14d、28dHYP含量均显著低于B组(P0.05)。TGF-β1:B组TGF-β1在14d时表达最高,28d时逐渐下降,各组之间比较均有统计学意义(P0.05)。结论气管内注入博来霉素可成功复制大鼠肺纤维化模型;MSC可减轻肺泡炎、肺纤维化的程度;MSC到达损伤肺后可能抑制TGF-β1的表达,从而抑制博来霉素诱导肺纤维化的形成。     

腹腔注射左旋精氨酸诱导急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的实验研究

目的探讨大剂量左旋精氨酸腹腔注射诱导大鼠急性坏死性胰腺炎相关性肺损伤模型。方法将48只SD大鼠随机分成对照组(C组,n=24)、急性胰腺炎组(A组,n=24)。A组用6%的左旋精氨酸(L-Arginine,L-Arg)腹腔内注射,每次1.5 mg/g体重,共3次,注射间隔1h,诱导ANP和APALI模型;C组同法注射等量生理盐水。在注射完L-Arg后的第6、12和24小时三个时点分批处死大鼠,分别测定两组各时点血清淀粉酶水平,并观察各组对应各时点胰腺和肺组织病理学改变的变化。结果 A组大鼠胰腺和肺组织病理损伤在各时点比C组明显加重(P0.01);在肺损伤评分均呈正相关(r_s=0.374,P=0.046;r_s=0.452,P=0.027)。结论大剂量L-精氨酸分次腹腔内注射可成功诱导急性坏死性胰腺炎相关性肺损伤大鼠模型,ANP肺组织损伤程度与胰腺组织损伤程度密切相关。     

组蛋白脱乙酰基转移酶抑制剂丙戊酸钠在肺纤维化中的抗炎作用

目的 探讨组蛋白脱乙酰基转移酶抑制剂丙戊酸钠在博莱霉素诱导肺纤维化大鼠的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)表达的调节.方法 36只雄性SD大鼠随机分为控制对照组、肺纤维化组、肺纤维化+丙戊酸钠干预组.肺纤维化模型组、丙戊酸钠干预组给予博莱霉素溶液按5mg/kg气管内注入建立大鼠肺纤维化模型,对照组给予等体积生理盐水注射.各组随机于造模后第7天处死,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数及LDH的变化,肺组织大体及HE变化和Masson染色,Szapiel评分,大鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)检测及TNF-α免疫组织化学检测.结果 与对照组相比,模型组BALF中LDH、BALF白细胞数的变化(P＜0.01),肺组织TNF-α及HYP含量显著增高(P＜0.05),丙戊酸钠干预后增高的Szapiel评分,TNF-α及HYP受到明显抑制.结论 给予VPA干预后能显著降低TNF-α水平,减小早期肺部炎症,从而达到抑制肺纤维化的发生.     

Th17细胞、RORγt在肺纤维化大鼠模型中的表达及意义

目的初步探讨Thl7细胞及其维甲酸受体相关孤儿受体(retinoid-ralated orphan receptorγt,RORγt)在肺纤维化中的作用。方法 64只雄SD大鼠随机分为对照组(N)、肺纤维化模型组(B组)、地塞米松治疗组(D)。采用气管内注入博来霉素致大鼠肺纤维化模型.苏木精-依红(HE)观察肺组织病理形态学变化并测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量;PCR检测肺部RORγtmRNA的表达;流式细胞术计数肺组织CD4+IL-17+Th17细胞;ELISA测血清IL-17水平.结果 (1)B、D组肺组织病理呈现逐渐由肺泡炎至纤维化动态改变过程,B、D组肺组织内HYP含量在不同时间点均高于N组(P<0.05),28 d时数值最高;(2)与N组比较,B、D组在不同时间点肺组织中TH17细胞和RORγtmRNA、血清中IL-17表达均明显增高(P<0.05),以造模7d最为显著。结论 TH17细胞、RORγtmRNA和血清IL-17表达增高在肺纤维化形成过程中起重要作用。     

醛固酮拮抗剂减轻大鼠肺纤维化的机制探讨

目的探讨醛固酮拮抗剂减轻大鼠肺纤维化的作用机制。方法36只雄性SD大鼠气管内滴入博莱霉素A_5复制肺纤维化模型后,分为螺内酯干预组(螺内酯100mg·kg~(-1)·d~(-1))和模型组,另取6只雄性SD大鼠为正常对照组。各组动物于造模后第7、14、28天分别处死6只。通过HE染色、Masson染色观察肺组织形态的变化、测定肺组织及血浆醛固酮(ALD)含量及肺组织中羟脯氨酸(HYP)浓度来评价治疗效果。测定血浆及肺组织匀浆中转化生长因子β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)含量。结果①模型组和干预组血浆、肺组织ALD水平较正常对照组均升高(P＜0．05,P＜0．01);②干预组肺组织HYP含量较模型组明显下降(P＜0．01);③HE染色、Masson染色可见干预组肺纤维化程度明显低于模型组;④各时间点模型组血浆TGF-β_1含量均较正常对照组及干预组明显增高(P＜0．01);各时间点干预组血浆TGF-β_1含量高于正常对照组,但两组比较差异无显著性(P＞0．05);肺组织匀浆与血浆各时间点TGF-β_1含量变化一致。⑤相关分析表明模型组各时间点血浆ALD水平与TGF-β_1含量呈正相关：7天(r =0．901,P＜0．05);14天(r=0．942,P＜0．01);28天(r=0．826,P＜0．05)。结论螺内酯可能是通过抑制TGF-β_1产生来减轻大鼠肺纤维化程度。     

化瘀理肺方对大鼠肺纤维化形成的干预作用及对Smad7表达的影响

目的 研究化瘀理肺方对大鼠肺纤维化形成的干预作用及可能作用机制.方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,用1%戊巴比妥钠(35 mg/kg)腹腔内注射麻醉后,经气管内插管注入博莱霉素(5 mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组注入生理盐水0.25 ml,从造模后的第2天起分别给予化瘀理肺方药物灌胃(中药组,13 410 mg/kg)、生理盐水灌胃(对照组、模型组)、氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射(激素组,25 mg/kg)进行干预,后于给药后的第14、28天分别处死,取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化情况,免疫组化法测定肺组织中Smad7蛋白的表达情况.结果 中药组肺泡炎和纤维化程度明显低于模型组和激素组,中药组Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组(P＜0.01).结论 化瘀理肺方对博莱霉素所致肺纤维化大鼠有一定预防性治疗作用,可能通过促进Smad7蛋白表达发挥作用.     

TGF-β/Smad 信号通路在小鼠肺纤维化发病机制中的作用及对纤维连接蛋白、骨桥蛋白表达的影响

目的：观察转化生长因子β/Smad 信号通路在小鼠肺纤维化中的作用及对纤维连接蛋白(FN)、骨桥蛋白(OPN)表达的影响,进一步探讨肺纤维化可能的发病机制。方法雄性 C57BL/6小鼠72只,随机分为3组：对照组(NS 组)、模型组(M 组)、SB431542阻断组(SB 组),每组24只。采用气管内滴入博莱霉素造模法造模,NS 组气管内滴入生理盐水,SB 组采用 SB431542溶于10%的乙醇溶液,分别于造模后第3、4、5天腹腔注射4.2 mg/kg,每组分别于第7、14、28天经腹主动脉放血法处死24只小鼠,肺组织病理切片行 HE 染色和 Masson 染色,观察肺泡炎和纤维化改变;碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量,观察肺纤维化的程度;免疫组化法观察 FN、OPN、p-Smad3蛋白在肺组织中的表达,各组进行对比。结果与 NS 组比较,M 组小鼠肺泡炎症于第7天时明显,以后逐渐减轻,于第28天时出现明显的肺纤维化改变;M 组小鼠肺组织 HYP 含量随着时间推移逐渐升高,OPN、p-Smad3蛋白的表达均较 NS 组明显增加,差异具有统计学意义(P <0.05),均于第28天时达高峰;而 FN 于第14天达高峰,较同期 NS 组也明显增高,差异具有统计学意义(P <0.05)。与 M 组比较,SB 组小鼠肺泡炎及纤维化程度均明显减轻,肺组织 p-Smad3、FN、OPN 的表达有所减少,差异具有统计意义(P <0.05)。结论FN 参与了肺纤维化小鼠早期的肺泡炎性损伤的发生与发展,OPN 参与了肺纤维化的全过程,两者在肺纤维化的形成过程中起重要作用。其中转化生长因子β/Smad 是小鼠肺纤维化发生的重要信号通路,通过阻断此信号通路可能抑制 FN、OPN 的表达,进而可能抑制肺纤维化发生、发展。     

TGF-β/Smads信号传导通路在实验性大鼠肺间质纤维化中的作用

目的 研究化瘀理肺方对肺间质纤维化大鼠肺组织中转化生长因子β(TGF-β)、Smad3、Smad7蛋白表达的影响.方法 对照组在气管插管内注入生理盐水,其余大鼠注入博莱霉素建立肺纤维化模型.分别给予大鼠化瘀理肺方药物(中药组)、生理盐水灌胃(模型组、对照组)、氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射(激素组)进行干预,并于给药后14、28 d处死,取肺组织行HE染色观察病理变化,免疫组化法测定肺组织TGF-β、Smad3、Smad7蛋白表达情况.结果 与模型组和激素组比较,中药组肺泡炎和肺纤维化程度及TGF-β、Smad3蛋白表达均明显降低,Smad7蛋白表达升高.结论 TGF-β、Smad3、Smad7在实验性大鼠肺纤维化的形成中起重要作用,化瘀理肺方可通过调节这些蛋白的表达,从而起到防治肺纤维化的作用.