VEGF基因沉默脂肪间充质干细胞对人MKN45胃癌细胞生长的影响

目的研究脂肪间充质干细胞(ADSCs)血管内皮生长因子(VEGF)基因沉默后对人MKN45胃癌细胞系体内生长的影响。方法采用siRNA技术沉默脂肪间充质干细胞(ADSCs)内VEGF基因。体外成功构建针对VEGF的siRNA表达载体和1个阴性对照,分为VEGF siRNA组、阴性对照组、空白对照组。Lipofectamine2000介导转染ADSCs,RT-PCR检测显示与阴性对照组、空白对照组相比,VEGF siRNA组ADSCs中VEGF表达显著降低,将上述3组处理后的ADSCs与MKN45胃癌细胞混合后接种裸鼠皮下,观察胃癌生长情况;通过CD34免疫组织化学法染色检测胃癌组织血管生成情况。结果阴性对照组和空白对照组的ADSCs在裸鼠体内可显著促进MKN45胃癌细胞的生长(P0. 05),VEGF siRNA组ADSCs在裸鼠体内对MKN45胃癌细胞的生长无促进作用(P0. 05);胃癌组织平均血管密度(MVD)结果为,阴性对照组和空白对照组分别为(10. 9±0. 64)个/视野及(10. 7±0. 50)个/视野,VEGF siRNA组为(5. 3±0. 36)个/视野,单纯MKN45组为(5. 1±0. 52)个/视野。VEGF siRNA组明显低于阴性对照组和空白对照组(P0. 05),与单纯MKN45组无明显差异(P0. 05)。结论 ADSCs内VEGF基因沉默后VEGF明显降低,与MKN45胃癌细胞混合后接种对胃癌组织血管形成和胃癌生长无影响。     

吉非替尼对神经胶质瘤细胞移植瘤生长的影响和机制研究

目的探究吉非替尼调控丝裂原激活的蛋白激酶(MEK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路对神经胶质瘤细胞移植瘤生长的影响及机制。方法通过皮下注射U87细胞的方法构建胶质瘤裸鼠模型,建模成功后将30只小鼠随机分为对照组、吉非替尼组和联合组(吉非替尼+MEK/ERK通路抑制剂PD98059),每组10只。建模28 d测量肿瘤体积和质量,通过检测Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)分析增殖水平,TUNEL染色检测凋亡。免疫组织化学染色检测CD34和血管内皮生长因子(VEGF)评估微血管密度和血管生成能力。并分析各组MEK和ERK mRNA和蛋白水平。结果吉非替尼组和联合组建模28 d肿瘤体积和质量明显低于对照组,且联合组建模28 d肿瘤体积和质量明显低于吉非替尼组(P0.05)。吉非替尼组和联合组凋亡指数明显高于对照组[(18.54±2.75)%、(28.82±3.91)%vs(4.64±0.75)%,P0.05],且联合组凋亡指数明显高于吉非替尼组(P0.05)。吉非替尼组和联合组Cyclin D1、Ki67、微血管密度、VEGF表达明显低于对照组,且联合组Cyclin D1、Ki67、微血管密度、VEGF表达明显低于吉非替尼组(P0.05)。吉非替尼组和联合组MEK、ERK mRNA和蛋白表达明显低于对照组,且联合组MEK、ERK mRNA和蛋白表达明显低于吉非替尼组(P0.05)。结论吉非替尼可能通过MEK/ERK通路抑制胶质瘤细胞的增殖和血管生成,并诱导凋亡,从而起到抑制胶质瘤的作用。     

尼美舒利和5-氟尿嘧啶联用对胃癌细胞的协同抑制作用及机制

目的 体外研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利和5-氯尿嘧啶（5-FU）对胃癌细胞的抑制作用及机制。方法 以胃癌细胞株MKN45、MKN28为研究对象．观察尼美舒利和5-FU单独或联合应用对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。应用MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡（FITC-Annexin-V/PI双标记）和细胞剧期，RT-PCR观察朋药前后COX-2 mRNA在两株细胞中的表达，Western免疫印迹法观察经两种药物单独和联合作用48h后细胞内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 在MKN45和MKN28细胞中均可观察到不同水平的COX-2 mRNA表达，尼美舒利和5FU联合应用可明显抑制COX-2 mRNA表达。尼美舒利可抑制两株细胞的增殖并诱导凋亡。尼美舒利和5-FU具有协同抑制细胞增殖及诱导凋亡的作用，该作用与两种药物作用顺序无关，但在联用时作用最强。两药协同抑制增殖的作用主要通过协同杀伤和诱导凋亡而实现。5-FU增强了凋亡诱导蛋白Bax的表达，而尼美舒利则减少凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。两药联用可明显抑制胃癌细胞株生长。结论 选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利和5-FU通过抑制COX-2 mRNA的表达硬增强Bax／Bcl-2的表达比率诱导胃癌细胞凋亡．从而对胃癌细胞起到协同抑制增殖的作用。     

白黎芦醇对舒尼替尼诱导肾损伤的作用及机制研究

目的:探究白黎芦醇对舒尼替尼诱导肾损伤的作用及机制.方法:选择WKY大鼠30只随机分为3组:对照组(n=10),舒尼替尼组(n=10),舒尼替尼+白藜芦醇组(n=10).舒尼替尼组给予舒尼替尼[15 mg/(kg·d)]灌胃28 d,建立舒尼替尼肾损伤大鼠模型.舒尼替尼+白藜芦醇组于建模前7 d给予大鼠白藜芦醇[100...     

锌指蛋白Metallopanstimulin-1在肿瘤中的研究进展

Metallopanstimulin-1(MPS-1)是核糖体蛋白S27E家族的一个成员,其在除胎盘和脑以外的全身组织广泛表达,但恶性增殖的组织和细胞中MPS-1的表达水平明显升高.MPS-1作为肿瘤标志物和肿瘤相关抗原在头颈部肿瘤和乳腺癌中被广泛研究.在胃癌中研究结果显示MPS-1在胃癌组织中高表达,其下调能够在体内和体外实验中抑制胃癌细胞的增殖和生长.同时,MPS-1的下调能够通过抑制NF-κB信号通路进而促进胃癌细胞的自发性凋亡.此外,MPS-1在结肠癌中也高表达且与肿瘤的恶性程度和预后密切相关.因此,MPS-1可能成为肿瘤治疗的新靶点.     

达沙替尼联合奥沙利铂协同抑制胃癌细胞增殖和迁移

目的:评价Src酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼联合奥沙利铂抑制胃癌细胞体外增殖、迁移等恶性生物学行为的效应。方法:实时定量-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测Src及其活性形式p-Src在胃癌细胞株中的基础表达;蛋白质印迹技术观察不同剂量奥沙利铂作用于胃癌细胞或作用不同时间后,细胞内Src及p-Src的变化规律;细胞计数试剂盒(CCK-8)方法评价胃癌细胞暴露于不同浓度奥沙利铂和达沙替尼后的生长抑制率,分别计算2种药物的半数抑制浓度(IC50),并使用Calcusyn 2.0软件计算联合作用指数(CI);细胞集落形成实验、流式细胞术和划痕实验观察上述药物对胃癌细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和迁移能力的影响。结果:胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823、MKN-28的p-Src/Src基础表达比值较高;奥沙利铂可明显上调胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-28的p-Src,并呈时间依赖性(r2=0.96、0.85、0.94);达沙替尼和奥沙利铂在胃癌细胞中的CI均     

二甲双胍对HER2阳性胃癌细胞的增殖抑制作用

目的探讨二甲双胍对HER2阳性胃癌细胞的增殖抑制作用。方法体外培养HER2阳性胃癌细胞株,随机分为研究组和对照组,研究组给予曲妥珠单抗联合二甲双胍,对照组给予曲妥珠单抗。四唑盐比色法检测24 h、48 h、72 h HER2阳性胃癌细胞存活和生存状况,Western blotting法检测HER2阳性胃癌细胞株中Cyclin D1、PI3K、m TOR三种蛋白的表达情况。结果在HER2阳性胃癌细胞存活状况方面,研究组24 h、48 h、72 h细胞存活率分别为(12.05±1.32)%、(19.21±2.17)%、(35.06±2.5)%,对照组24 h、48 h、72 h细胞存活率分别为(19.15±2.72)%、(27.68±2.52)%、(52.32±4.62)%,研究组较对照组肿瘤细胞抑制效果好(P均0.05);在肿瘤相关蛋白表达状况方面,研究组Cyclin D1表达量为0.36±0.17,PI3K表达量为0.27±0.10,m TOR表达量为1.35±0.67,对照组Cyclin D1表达量为1.05±0.31,PI3K表达量为0.85±0.29,m TOR表达量为2.10±0.92,研究组肿瘤相关蛋白较对照组明显降低,差异有统计学意义(P均0.05)。结论二甲双胍能有效抑制HER2阳性胃癌细胞的增殖状态,降低细胞的肿瘤相关蛋白表达量,对肿瘤细胞增殖起到明显抑制作用,临床优势明显。     

大蒜油对人胃癌细胞血管内皮生长因子及其受体表达的影响

大蒜油中的生物活性物质大蒜辣素能抑制细胞恶性增殖、诱导凋亡、促进分化,但其具体机制尚不明确.血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体(VEGF receptor,VEGFR)的表达在恶性肿瘤血管和淋巴管新生及转移过程中发挥重要作用.抑制VEGF及其受体表达是目前抑制肿瘤研究的热点.本实验旨在研究大蒜油对胃癌细胞MGC-803增殖、凋亡及其VEGF和VEGFR表达的影响,探讨其抑制胃癌进展和转移的可能机制,为其临床应用进一步提供理论依据.     

PFKFB3基因增强阿帕替尼对胃癌凋亡的影响及机制

[目的]探讨沉默PFKFB3基因对阿帕替尼处理的胃癌细胞凋亡的影响及机制。[方法]通过Western blotting检测人胃黏膜上皮细胞株GES1及SGC-7901、BGC823和MKN45胃癌细胞PFKFB3蛋白表达。将PFKFB3特异性siRNA(si-PFKFB3)转染SGC-7901细胞,Western blotting检测转染效果。MTT法检测转染siPFKFB3或不同浓度(10、20、30、40μmol/L)阿帕替尼处理SGC-7901细胞48h的细胞活力。流式细胞术检测转染si-PFKFB3或/和40μmol/L阿帕替尼处理SGC-7901细胞48h的细胞凋亡率,Western blotting检测Bcl-2、Bax、PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达。[结果]与对照GES1细胞相比,PFKFB3在SGC-7901、BGC823和MKN45胃癌细胞中的表达均明显升高(P0.05)。si-PFKFB3转染SGC-7901细胞后,PFKFB3蛋白表达明显降低(P0.05)。转染si-PFKFB3及不同浓度阿帕替尼均可抑制SGC-7901细胞活力,阿帕替尼对细胞活力抑制呈现浓度依赖性(P0.05)。转染si-PFKFB3及阿帕替尼均可诱导SGC-7901细胞凋亡,下调Bcl-2、PI3K和p-AKT表达,上调Bax表达,二者合用对SGC-7901细胞凋亡诱导更明显(P0.05)。[结论]沉默PFKFB3基因表达可明显增强阿帕替尼对胃癌细胞的凋亡诱导作用,机制可能与下调PI3K/AKT信号通路有关。     

吉非替尼对老年晚期肺腺癌患者血清中血管内皮生长因子、神经元特异性烯醇化酶和细胞角蛋白19片段的调节作用

肺腺癌进展到晚期时,肿瘤细胞产生大量肿瘤相关蛋白,且在血清中表达增高,加速病变的进展,此机制可能与肿瘤中异常表达的基因和蛋白进入血清有关[1].吉非替尼是针对表皮生长因子受体(EGFR)阳性肺腺癌治疗的靶向药物,是选择性EGFR酪氨酸激酶抑制剂,可以对癌细胞增殖和分化有明显抑制[2].本研究在常规化疗基础上加用吉非替尼治疗老年晚期肺腺癌患者,观察其疗效及对血清中血管内皮生长因子受体(VEGF)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)和细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)的作用.     

PTEN基因对MKN45胃癌细胞系p-AKT和p-ERK表达的影响

目的探讨PTEN基因对MKN45胃癌细胞增殖及磷酸化的丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)和磷酸化的细胞外信号调节激酶(p-ERK)表达的影响,分析可能的作用机制。方法体外培养胃癌细胞株MKN45,通过质粒转染技术建立过表达PTEN的稳定细胞株MKN45/PTEN,空载体细胞株作为阴性对照组,未转染细胞为正常对照组。应用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测PTEN的转染效果,MTT法检测细胞的增殖率,蛋白质印迹法(Western blot)检测p-AKT和p-ERK蛋白水平的表达变化。结果 PTEN在MKN45/PTEN细胞中表达量明显高于阴性对照组和正常对照组(P0.05)。PTEN在72 h和96 h明显抑制MKN45细胞的增殖,细胞增长缓慢,与阴性对照组和正常对照组的差异有统计学意义(P0.05)。MKN45/PTEN组p-AKT和p-ERK的相对表达量显著低于阴性对照组及正常对照组(P0.05)。结论 PTEN对胃癌细胞的体外增殖有抑制作用,可能通过p-AKT和p-ERK发挥作用。     

舒尼替尼治疗转移性胃癌的临床疗效及其对PDGFR和Notch信号通路基因表达的影响

目的研究舒尼替尼治疗转移性胃癌的临床疗效及其对血小板衍生生长因子受体(PDGFR)和Notch信号通路的影响。方法纳入70例转移性胃癌患者作为研究对象,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组35例。两组均接受替吉奥同步放疗序贯化疗,观察组在此基础上加用舒尼替尼。比较两组治疗效果和不良反应发生情况,记录两组患者治疗前后PDGFR和Notch信号通路基因表达水平,随访记录两组患者2年总生存率。结果观察组显效率为22. 86%,对照组为5. 71%,两组间差异有统计学意义(P 0. 05)。治疗后观察组PDGFR和Notch信号通路基因阳性率分别为42. 86%和54. 29%,对照组分别为68. 57%和77. 14%,两组间差异均有统计学意义(P 0. 05)。两组治疗期间贫血、白细胞减少、胃肠道反应、口腔黏膜炎及皮肤毛发改变严重程度比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。两组2年生存率比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论舒尼替尼用于转移性胃癌患者能显著提高肿瘤控制效果,安全性较高,可能与其抑制PDGFR和Notch信号通路有关。     

Akt抑制剂SH-5对胃癌细胞系BGC-823增殖的影响

目的探讨Akt在胃癌细胞系BGC-823中的表达及其与胃癌细胞增殖的关系。方法应用实时PCR检测BGC-823中Akt各亚型的mRNA水平;应用Akt特异性的抑制剂SH-5培养BGC-823,检测其对胃癌细胞增殖的影响;应用ELISA方法检测细胞上清中VEGF的表达。结果SH-5显著抑制了胃癌细胞的增殖,抑制VEGF的表达(P<0.05),而且呈一定程度的剂量依赖性。结论 Akt与胃癌细胞的增殖密切相关,其机制可能与其对VEGF的调控有关。     

紫草萘醌组分抑制移植性肝癌新生血管的形成

目的研究紫草萘醌组分体内抗肝癌作用机制。方法建立可移植性小鼠Hep-A-22肝癌皮下接种动物模型,5-氟尿嘧啶(5-FU)腹腔注射,20 mg/kg;三组紫草萘醌组分制剂灌胃(2.5、5.0、10.0 mg/kg);阴性对照组予以相同容积的溶剂灌胃。以肿瘤称重为观察指标;采用免疫组织化学染色方法测定肿瘤微血管密度(MVD)和癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果三组紫草萘醌类化合物均明显抑制可移植性肝癌原位生长;抑制Hep-A-22肿瘤细胞的VEGF表达并降低肿瘤组织的MVD。结论紫草萘醌萘醌组分对小鼠肝癌移植瘤具有增殖抑制作用,对肿瘤VEGF生成的抑制可能为其机制之一。     

依维莫司对大鼠颈总动脉球囊损伤后内膜增生的影响

目的:探讨依维莫司对大鼠颈总动脉球囊损伤模型增生内膜的影响及其可能作用机制.方法:健康雄性SD大鼠36只,随机分为假损伤组(对照组)、颈总动脉球囊损伤组(损伤组)和颈总动脉球囊损伤+口服依维莫司组(依维莫司组),每组12只.依维莫司组于颈总动脉球囊损伤前1天,用依维莫司负荷剂量1.5 mg/kg灌胃,随后给予其剂量0.75 mg·kg-1·d-1灌胃直至第28天,对照组与损伤组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃.各组均于术后第28天取颈总动脉损伤段,观测颈动脉形态学变化,以免疫组化法测定损伤血管内膜真核翻译起始因子4E(eIF-4E)及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果:对照组血管内膜无增生,eIF-4E、PCNA表达极少;与对照组比较,损伤组新生内膜形成并增生明显,eIF-4E、PCNA表达显著增强;依维莫司组较损伤组新生内膜增生减轻,eIF-4E及PCNA表达明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:依维莫司可抑制大鼠颈总动脉球囊损伤模型新生内膜增殖.其作用机制可能与抑制eIF-4E及PCNA表达有关.     

KDR单克隆抗体对荷人胃癌裸小鼠肿瘤生长的抑制作用

目的:研究血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)受体Ⅱ单克隆抗体(KDR-mAb)抑制荷人胃癌裸小鼠肿瘤生长的作用.方法:将人胃癌细胞(SGC-7901)通过背部皮下接种裸小鼠制备荷人胃癌小鼠肿瘤模型.待肿瘤生长至直径100-300mm3时将荷瘤小鼠随机分为3组,分别腹腔注射KDR-mAb、5-FU和生理盐水进行治疗.10d后剥离瘤组织,比较3组肿瘤组织的体积和质量、计算抑瘤率;通过Real-timePCR法和免疫组织化学法分别定量检测VEGF在各治疗组肿瘤组织中的表达.结果:KDR-mAb在体内能显著抑制实体瘤的生长,抑瘤率为36.3%,肿瘤大小和肿瘤质量与对照组比较差异显著(1889.94mm3±396.64mm3vs9398.34mm3±7413.96mm3,1.07g±0.58gvs1.68g±0.18g,均P<0.05);KDR-mAb能显著抑制肿瘤组织中VEGFmRNA和VEGF蛋白的表达(P<0.05).结论:作为VEGF受体抑制剂,KDR-mAb在荷人胃癌细胞小鼠肿瘤模型中具有明显的体内抗肿瘤活性,对于人胃癌的临床治疗具有一定的应用前景...     

阿司匹林对人胃癌细胞株的作用及机制探讨

目的 观察阿司匹林对人胃癌细胞株SGC7901生长及人胃癌裸鼠移植瘤生长的作用,并初步探讨其作用机制。方法 采用MTT法及流式细胞术检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响;Westem blot法检测阿司匹林对胃癌细胞COX-2、VEGF表达的影响;建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,给予阿司匹林20天,观察肿瘤大小,免疫组化检测阿司匹林对肿瘤组织中COX-2、VEGF表达及MVD的影响。结果 阿司匹林对胃癌细胞的增殖具有抑制作用,且呈一定的时间、剂量依赖性;细胞周期分析表明阿司匹枳主要使细胞阻滞在G0/G1期;western blot检测表明阿司匹林能降低胃癌细胞COX-2、VEGF蛋白的表达;阿司匹林对裸鼠移植瘤的生长有抑制作用,免疫组化显示阿司匹林能降低移植瘤组织中(COX-2、VEGF的表达及MVD。结论 阿司匹林对胃癌细胞及裸鼠移植瘤均具有一定的抑制作用,其机制可能是通过对COX-2和VEGF等血管生成相关因子的抑制起作用。     

小干扰RNA抑制胃癌细胞环氧合酶-2的表达

目的 观察瞬时转染环氧合酶-2特异性小干扰RNA(COX-2 siRNA)对胃癌细胞增殖与凋亡的影响,探讨COX-2在胃癌发生中的作用和RNA干扰方法 对肿瘤的治疗作用.方法 以胃癌细胞系SGC7901为研究对象,瞬时转染COX-2 siRNA,转染后72 h用RT-PCR方法 分别检测COX-2siRNA组、无意义siRNA组及空白对照组的COX-2 mRNA表达;免疫组化法与Western blot检测3组细胞的COX-2蛋白质的表达;流式细胞仪检测3组的细胞周期和凋亡情况.转染后1周内每天同一时间用噻唑蓝比色分析法(MTr)检测3组癌细胞的活力并计算癌细胞的相对生存率.结果 COX-2siRNA对胃癌细胞中COX-2 mRNA及蛋白表达均有明显抑制作用,胃癌细胞增殖受到抑制,凋亡增加,但细胞周期分布无明显变化.结论 在胃癌细胞中,COX-2表达的抑制可降低胃癌细胞的增殖速度,促进肿瘤细胞凋亡,COX-2在胃癌的发生中可能具有重要作用.     

培美曲塞与厄洛替尼联合或序贯治疗对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨培美曲塞与厄洛替尼联合或序贯对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法以人肺腺癌A549细胞为研究对象,分别应用培美曲塞与厄洛替尼单药、联合及不同序贯方法干预72 h后,MTT法检测细胞增殖及抑制情况,并计算联合指数(CI),流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡情况,蛋白质印迹法(Western印迹法)检测磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)及磷酸化-ATK(p-AKT)的表达情况。结果培美曲塞序贯厄洛替尼组(P-E)对A549细胞增殖的抑制率及凋亡率较高,明显高于培美曲塞(P)和厄洛替尼(E)单药组以及厄洛替尼联合(E+P)或序贯培美曲塞组(E-P)(P均0.05)。E组和E+P/E-P组的G1期细胞所占比例较对照组明显增多(P0.05),P组和P-E组的S期细胞所占比例较对照组明显增多(P均0.05)。各药物干预组细胞凋亡率均较对照组明显增高,且P-E组细胞凋亡率明显高于其他组(P均0.05)。P-E组A549细胞p-AKT及p-EGFR的表达水平均明显低于对照组(P均0.05)。结论培美曲塞可有效抑制肺腺癌A549细胞的增殖作用,且与厄洛替尼序贯应用的协同效果更为明显,其作用机制可能与p-EGFR及p-AKT信号通路相关。     

胃癌的抗血管生成治疗研究进展

肿瘤血管生成在癌细胞增殖和转移中起重要作用,在众多相关的临床试验中,雷莫芦单抗(Ramucirumab)不仅可以单独使用,还可以联合紫杉醇作为二线化疗药物来延长总体生存期。此外,阿帕替尼(Apatinib)作为三线或后续的治疗方案可延长晚期胃癌患者的生存期。诸多研究将阿帕替尼与细胞毒剂联合用于全身系统性化学治疗或维持治疗,为胃癌的早期治疗提供更多选择。抗血管生成疗法不仅要结合化学疗法,还要结合免疫检查点抑制剂进行进一步研究,为改善胃癌患者的生存率提供希望。本文旨在总结抗血管生成治疗胃癌的最新进展,并讨论经临床试验检测的抗血管生成药物在治疗该疾病中的实用性。