脂联素对结肠癌HT-29细胞的增殖及凋亡研究

目的探讨脂联素对结肠癌HT-29细胞的增殖、凋亡的影响。方法以不同浓度脂联素干预细胞,MTT法检测细胞增殖能力;AnnexinV／PI双染后流式细胞仪检测细胞凋亡。结果随着脂联素浓度的不断升高和培养时间的延长,HT-29细胞的生长逐渐受到抑制,脂联素可以诱导细胞凋亡。结论脂联素可抑制HT-29细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

Genistein对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察金雀异黄素(Genistein)对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法将HT-29细胞分别加入6.25、12.5、25、50、100μg/mL的Genistein进行培养,观察其生长、增殖、凋亡情况并检测其中的Bcl-2、Bax蛋白。结果 25、50μg/mL的Genistein作用48 h后,HT-29细胞的生长受抑制,凋亡率上升(P均<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P均<0.01),Bax蛋白表达上升(P均<0.01),呈剂量依赖性(P<0.05)。各浓度的Genistein作用48 h后对HT-29细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性(P均<0.05)。结论 Genistein既可以抑制HT-29细胞的生长及增殖,又可以诱导其凋亡,其作用机制可能与其上调HT-29细胞Bax蛋白以及下调Bcl-2蛋白的表达有关。     

丙咪嗪对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的:探讨丙咪嗪对结肠癌HT-29细胞的增殖、细胞周期和凋亡的影响及其作用机制.方法:按ACTT方法常规培养HT-29细胞,并以不同浓度(0、1、5、10、25、50和100μmol/L)丙咪嗪干预,MTT法检测各浓度干预24、48和72h后的细胞增殖能力:丙咪嗪以各浓度(0、1、10、50和100μmol/L)干预HT-29细胞24h,PI染色后流式细胞仪检测细胞周期分布,Annexin V/PI双染后流式细胞仪和DNA片段梯试验检测细胞凋亡,Western blot检测Eagl蛋白的变化,逆转录PCR检测p21、p27、CyclinE1和cDK2mRNA表达水平的变化.结果:各浓度丙咪嗪干预HT-29细胞24、48和72h后,IC50分别为43、32、22μmol/L;丙咪嗪以剂量依赖方式诱导HT-29细胞在细胞周期Gn/G1期停滞,随丙咪嗪干预的浓度增加,HT-29细胞的凋亡指数逐渐升高(P<0.01),HT-29细胞中Eag1蛋白的表达水平逐渐下降(P<0.05),p27和p21mRNA表达水平逐渐增强(P<0.05),cyclinE1和CDK2mRNA的表达水平逐渐减弱(P＜0.05).结论:丙咪嗪可抑制HT-29细胞增殖,阻滞HT-29细胞周期进展,诱导细胞凋亡.其作用机制可能与抑制Eag1钾通道的活性,上调p27和p21表达、下调CyclinE1和CDK2表达有关.     

槲皮素对结肠癌HT-29细胞增殖及周期的影响

目的:探讨槲皮素(Qu)对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡影响的分子机制．方法:以40×10-6,80×10-6,160×10-6mol／L的槲皮素作用结肠癌HT-29细胞,以溶剂为对照组,采用MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察槲皮素对结肠癌细胞增殖,细胞周期,细胞凋亡,及Caspase-3 蛋白表达、Caspase-3、bcl-2、bax mRNA表达的影响．结果:40×10-6mol／L Qu明显促进HT-29细胞增殖(P<0．05),80×10-6,160×10-6mol／L Qu 明显抑制细胞增殖(P<0．05或P<0．01),呈时间 (?)效应．40×10-6,80×10-6,160×10-6mol/L槲皮素作用HT-29细胞72 h,其增殖率分别为 (111．8±9．6)％,(64．6±8.3)％和(26．1±5．7)％, G0／G1期细胞分别为(32．7±5．4)％、(58．1± 18．3)％和(71．6±20．8)％,S期细胞分别为(48．6 ±17．5)％、(27．4±13．4)％和(15．4±10．1)％,细胞凋亡率分别为(7．0±1．3)％、(15．6±3．6)％和(26．4±6．2)％,80×10-6,160×10-6mol／L能明显提高G0／G1期细胞(P<0．01),明显降低S期细胞(P<0．01),细胞凋亡明显增加(P<0．01)．80 ×10-6,160×10-6mol／L的Qu增加细胞中bax mRNA,Caspase-3 mRNA及其蛋白的表达,降低 bcl-2 mRNA的表达．40×10-6mol／L的Qu增加 Caspasc-3 mRNA表达,但其蛋白表达未见明显增加,细胞增殖明显增加．结论:槲皮素能促进结肠癌HT-29细胞增殖, 也能诱导细胞凋亡,其机制可能是通过上调 Caspase-3和bax表达,降低bcl-2表达来实现的．     

神经酰胺对结肠癌HT-29细胞凋亡和增殖细胞核抗原表达的影响

目的 探索神经酰胺(C_2-cer)影响人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡和增殖细胞核抗原(PCNA)表达.方法 12.5、25 μmol/L的C_2-cer处理HT-29细胞,用MTT法、流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、Western印迹等方法检测HT-29细胞增殖、凋亡和PCNA表达.结果 以12.5、25 μmol/L的C_2-cer处理HT-29细胞,细胞增殖受到抑制,细胞凋亡明显增加,PCNA表达明显降低,并呈剂量-效应关系.结论 C_2-cer可诱导细胞凋亡,该效应可能与下调PCNA表达有关.     

抑制JNK信号通路对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究抑制JNK 信号通路对结肠癌HT-29 细胞增殖和细胞凋亡的影响.方法:将人结肠癌细胞株HT-29分为正常对照组和JNK 抑制剂组(用SP600125 预处理细胞24 h),用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT 法)检测细胞增殖水平,用脱氧核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL 法)观察细胞凋亡情况.结果:...     

雷替曲塞对人结肠癌细胞SW480增殖、凋亡的影响及其机制

目的观察雷替曲塞对人结肠癌细胞(SW480)细胞增殖及细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法将SW480随机分为A组、B组、C组与对照组,A组加入雷替曲塞0. 1μg/mL,B组加入雷替曲塞0. 5μg/mL,C组加入雷替曲塞2. 5μg/mL,对照组加入等量培养液。培养24、48、72 h后采用CCK-8试剂盒检测各组SW480增殖活性;培养10 d后,计算各组SW480克隆形成率;培养72 h后,采用实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA,采用Western Blotting法检测Bax、Bcl-2及Caspase-3蛋白。结果随着雷替曲塞浓度的增加以及干预时间的延长,SW480的增殖速度减慢(P均<0. 05),且在浓度达到一定程度后,该现象不再明显;孵育10 d后,各组SW480克隆形成率组间两两比较,P均<0. 05;随着雷替曲塞浓度的增加,SW480 Bax及Caspase-3蛋白及mRNA表达升高,Bcl-2蛋白及RNA表达降低(P均<0. 05)。结论雷替曲塞可通过调节SW480 Bax、Caspase-3和Bcl-2蛋白及...     

LncRNA CCAT1对H2O2诱导的PC12细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响及机制

目的 探讨结肠癌相关转录因子(CCAT)1对过氧化氢(H2O2)诱导的PC12细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响及其作用机制.方法 用浓度分别为0、100、200、400μmol/L的H2 O2处理PC12细胞24 h作为不同浓度处理组,以未经任何处理的细胞作为对照(control)组;将pcDNA-control、pcD...     

EGCG对结肠癌HT-29细胞生长的影响及机制

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人结肠癌细胞株HT-29生长的影响及可能作用机制.方法 采用不同浓度的EGCG处理HT-29细胞,四唑盐比色试验(MTT)法观察处理后细胞的生长情况;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况;Western Blot洁检测表皮生长因子受体(EGFR)、细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化水平的表达.结果 EGCG处理后HT-29细胞生长明显抑制,呈现时间、剂量依赖性;HT-29细胞凋亡率升高;EGFR和ERK的磷酸化水平表达下调.结论 EGCG可明显抑制结肠癌HT-29细胞的生长;其可能机制为下调EGFR和ERK的磷酸化水平,从而干预EGFR-ERK信号转导通路.     

H_2S对外源性LY294002预处理人结肠癌细胞凋亡的影响

目的研究H_2S对体外培养人结肠癌细胞凋亡的影响及其机制。方法体外培养人结肠癌细胞,随机分为正常对照组、NaHS(100μmol/L)组、LY294002(2μg/ml)组、NaHS(100μmol/L)+LY294002(2μg/ml)组,采用流式细胞术检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞凋亡的影响,Western印迹检测各组干预48 h后对人结肠癌细胞中磷酸化Akt、非磷酸化GSK-3β蛋白表达的影响。结果与正常对照组比较,NaHS组人结肠癌细胞凋亡显著降低,p-Akt蛋白表达显著增加,而GSK-3β蛋白表达显著降低(均P<0.01)。LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达均显著增加(均P<0.01)。而与NaHS组比较,NaHS+LY294002组人结肠癌细胞凋亡显著增加,p-Akt蛋白表达显著降低,而GSK-3β蛋白表达显著增加(均P<0.01)。结论 PI3K/Akt/GSK-3β信号通路可能介导参与了H_2S对人结肠癌细胞凋亡的抑制作用。     

氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的机制

目的探讨氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用及机制。方法以不同剂量的氧化苦参碱作用于人结肠癌细胞株SW480,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞的增殖能力,Hoechst 33258染色法观测细胞凋亡。免疫印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,荧光法测定半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的活性。结果氧化苦参碱可剂量依赖性地抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡。Western印迹方法显示氧化苦参碱可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,提高促凋亡蛋白Bax的表达,同时激活凋亡效应分子caspase-3。结论氧化苦参碱能够抑制结肠癌SW480细胞的增殖,通过提高Bax的表达、抑制Bcl-2的表达、激活caspase-3发挥其诱导细胞凋亡的作用。     

姜黄素对人结肠癌细胞HT-29中β-catenin、血管内皮生长因子的影响

目的研究姜黄素对体外培养人结肠癌HT-29细胞增殖及对细胞株中β-catenin、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法采用不同浓度的姜黄素作用于HT-29细胞,MTT法检测细胞增殖情况;Western印迹检测药物处理后β-catenin及VEGF蛋白的表达。结果姜黄素对HT-29细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量-时间依赖性(P<0.05),测得IC50为19.27μmol/L;在蛋白水平,姜黄素处理后,β-catenin、VEGF的蛋白表达水平降低。结论姜黄素能够抑制HT-29细胞的增殖,并下调结肠癌细胞HT-29中β-catenin、VEGF的表达。     

石斛多糖对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖、凋亡的影响及机制

目的观察石斛多糖对人Burkitt淋巴瘤Raji细胞增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法用水提醇沉淀法从铁皮石斛中提取石斛多糖。取体外培养对数生长期Raji细胞,加入终浓度为0、100、200、400、800mg/L的石斛多糖溶液,用MTT法检测石斛多糖对Raji细胞增殖的抑制率、流式细胞术检测Raji细胞凋亡率、RT-PCR检测Raji细胞中Caspase-3 mRNA。结果随着石斛多糖浓度的提高和作用时间延长,各组Raji细胞增殖抑制率、凋亡率、Caspase-3 mRNA表达量升高,P均〈0.05。结论石斛多糖可以抑制Raji细胞增殖并诱导其凋亡,效果随着作用剂量和时间的增加而增强,其抑瘤机制可能与促进Raji细胞Caspase-3蛋白的表达上调有关。     

刚地弓形虫细胞培养上清对人结肠癌细胞sw480增殖与凋亡的影响

目的观察刚地弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞系共培养上清对人结肠癌sw480细胞增殖的影响和诱导其凋亡与坏死的情况。方法取对数生长期的人结肠癌sw480细胞(1×106),建立弓形虫RH株速殖子数目分别为2×106、4×106、8×106、16×106的共培养模型,观察弓形虫速殖子在sw480细胞中的寄生,提取共同孵育72h后的培养上清,以新鲜培养基稀释为半量,体外作用人结肠癌sw480细胞12h、24h、48h、72h,CKK-8法检测吸光度(A450值)并计算抑制率;Annexin-v-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测细胞凋亡与坏死率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡DNA条带;透射电镜和荧光显微镜观察细胞形态学改变。结果弓形虫RH株速殖子可在人结肠癌sw480细胞内寄生和增殖。CKK-8法检测结果显示上述共培养上清对sw480细胞增殖抑制率随上清作用时间延长均明显增大,48h最大抑制率达44.55%。流式细胞仪检测显示实验组sw480细胞早期凋亡率和晚期凋亡与坏死率随上清作用时间延长均明显增加,48h早期凋亡率达最高值(11.54%),48h以后早期凋亡率下降,晚期凋亡和坏死率显著上升,72h总死亡率可达46.11%,细胞杀伤效果明显;琼脂糖凝胶电泳显示典型的DNA云梯状条带;荧光显微镜和透射电镜观察到细胞凋亡和坏死典型形态。结论弓形虫RH株速殖子与人结肠癌sw480细胞共培养上清对体外培养的sw480细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导sw480细胞凋亡与坏死。     

丹皮酚对人大肠癌HT-29细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

目的:探讨丹皮酚(paeonol, Pae)对人大肠癌HT-29细胞的增殖抑制、凋亡诱导作用及可能的作用机制. 方法:应用MTT法、荧光显微镜及透射电镜技术、TUNEL法和流式细胞仪技术观察不同浓度的Pae对HT-29细胞增殖的抑制及凋亡的诱导作用; 应用免疫细胞化学技术检测用药前后凋亡相关基因Bcl-2, Bax及P53表达的变化. 结果: HT-29细胞经Pae(浓度范围7.81-250 mg/L)作用后细胞生长明显受到抑制, 呈明显的剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系; 荧光显微镜及透射电镜观察到Pae作用后HT-29细胞出现典型的细胞凋亡形态; Pae在15.63, 62.5, 250 mg/L 3种浓度下作用48 h均可诱导HT-29细胞凋亡, TUNEL法显示凋亡指数与Pae浓度呈正相依赖关系; 流式细胞仪技术检测其凋亡率分别为7.6%, 16.2%和34.5%, 也有明显的剂量效应关系, 同时Pae使细胞周期分布发生明显变化, 表现为S期细胞比例上升, G0/G1期和G2/M期细胞比例下降; 免疫细胞化学结果显示Pae作用后HT-29细胞Bcl-2及P53蛋白表达显著降低, Bax蛋白表达无显著改变. 结论:Pae能抑制HT-29细胞增殖并诱导其凋亡, 呈现明显的剂量依赖效应关系和时间依赖效应关系. 其作用可能与影响癌细胞的细胞周期、下调Bcl-2/Bax的比例及P53蛋白的表达有关.     

吲哚美辛诱导结肠癌细胞凋亡的分子机制

许多凋亡相关基因在细胞凋亡的调节中起重要作用[1] ,如ｂｃｌ 2基因家族是重要的凋亡调控基因。结肠癌的发生发展常伴有凋亡机制障碍 ,许多化疗药物正是通过诱导细胞凋亡起作用的。研究表明 :包括吲哚美辛 (ｉｎｄｏｍｅｔｈａｃｉｎ ,ＩＮ)在内的非甾体抗炎药 (ｎｏｎ ｓｔｅｒｏｉｄａｌａｎｔｉ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｄｒｕｇｓ,ＮＳＡＩＤ)能显著改变肿瘤细胞周期 ,抑制细胞增殖 ,诱导肿瘤细胞凋亡[2 ,3] ,但该类药物诱导细胞凋亡的机制尚未阐明。本研究 ,利用反转录ＰＣＲ检测吲哚美辛诱导ＨＣＴ116细胞凋亡过程中ｂｃｌ 2ｂａｘ…     

c-myc反义寡核苷酸对结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

目的:研究体外c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法:利用脂质体LipofectamineTM2000介导将c-myc ASODN转染入大肠癌HT-29细胞中, 逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Westernblot方法检测c-myc基因mRNA及蛋白的表达,MTT、流式细胞仪(FCM)检测c-myc ASODN对人结肠癌HT-29细胞增殖抑制及其对奥沙利铂敏感性影响.结果:转染c-myc ASODN后, HT-29细胞内c-myc mRNA水平显著降低(0.464±0.029 vs0.974±0.027, 0.945±0.012, 均P<0.01). 在HT-29细胞中存在分子质量62 kDa的特异性条带, 与c-myc分子质量相符, ASODN组在PVDF膜上的特异性条带明显弱于对照组; MTT结果显示转染c-myc ASODN 48 h后的HT-29细胞的增殖速度较对照组细胞明显减慢. FCM显示c-myc ASODN转染后72 h后, 奥沙利铂+ c-myc ASODN组细胞凋亡率显著高于对照组( P<0.05).结论:体外c-myc ASODN可抑制c-myc mRNA及蛋白的表达, 阻断c-myc可抑制HT-29细胞增殖并增强其对奥沙利铂的敏感性, 可能为大肠癌的基因治疗提供新的靶点.     

弓形虫ROP16Ⅰ/Ⅱ蛋白对RAW 264.7细胞增殖与凋亡的影响及相关机制

目的 探讨弓形虫Ⅰ、Ⅱ型ROP16蛋白对小鼠腹腔巨噬细胞RAW 264.7细胞增殖和凋亡的影响及相关机制。方法 用构建的Ⅰ、Ⅱ型ROP16重组慢病毒表达载体转染RAW 264.7细胞,经嘌呤霉素筛选稳定后获得单克隆过表达细胞株。qRT-PCR和Western blot法鉴定过表达效果,免疫光法检测其定位,cck-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡变化水平。Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Caspase 3、Caspase 9、Bax、Bcl-2和信号通路相关蛋白pTyr705-STAT3、total-STAT3、p-NF-κB p65和NF-κB p65的相对表达水平,qRT-PCR法检测细胞凋亡相关基因Caspase 3、Caspase 9、Bax、Bcl-2的相对转录水平。结果 重组慢病毒表达载体转染RAW 264.7细胞后可观察到强绿色荧光,并检测到rop16基因转录与蛋白表达,且该蛋白主要定位于RAW 264.7细胞核及其周围。cck-8检测显示,Ⅰ、Ⅱ型ROP16蛋白均可促进RAW 264.7细胞增殖。流式细胞术检测显示,过表达overExp-ROP1...