miR-638对胃癌细胞侵袭和迁移的影响及其分子机制

目的探讨miR-638是否可通过直接调控靶向性别决定区Y框蛋白(SOX)2抑制上皮-间质转化(EMT)相关通路从而抑制胃癌细胞的侵袭迁移。方法 qRT-PCR检测miR-638在100对胃癌组织及癌旁组织中的表达、检测miR-638在7株胃癌细胞系及1株正常胃黏膜细胞中的表达。Transwell和Wound Healing实验验证分别转染miR-638模拟物(miR-638 mimics)及其无关对照寡核苷酸序列(scramble)到胃癌细胞AGS中时对细胞的侵袭和迁移能力的影响。Target Scan软件预测miR-638的靶基因、将野生型或突变型SOX2的3'-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(SOX2-wt或SOX2-mut)并分别与miR-638 mimics或scramble共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因为SOX2,qRT-PCR和Western印迹分别检测转染miR-638 mimics和scramble后SOX2的mRNA和蛋白表达的及EMT相关蛋白表达。结果 miR-638在胃癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,同时miR-638在胃癌细胞系中的表达水平也显著低于正常胃黏膜细胞系。转染miR-638后,胃癌细胞AGS的侵袭和迁移能力显著低于scramble组(P<0.05)。在共转染miR-638或scramble和SOX2-wt的两组中,共转染miR-638和SOX2-wt组的荧光素酶活性强度降低了约43.1%(P<0.05)。转染miR-638后,SOX2的mRNA和蛋白表达水平均显著下调;EMT相关的上皮标志物钙黏附蛋白E(E-cadherin)的表达显著增加,而EMT相关的间质标志物神经钙联素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达则显著降低(P<0.05)。结论 miR-638可通过靶向调控SOX2而影响EMT,抑制胃癌细胞AGS的侵袭和迁移。     

miR-183靶向DDR1调控乳腺癌细胞迁移侵袭的分子机制

目的研究miR-183对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、正常细胞MCF-10A中miR-183、盘状结构域受体(DDR)1的表达;将miR-183组(转染miR-183 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con),miR-183+pcDNA组(共转染miR-183 mimics和pcDNA)、miR-183+pcDNA-DDR1组(共转染miR-183 mimics和pcDNA-DDR1)均用脂质体法转染至MDA-MB-231细胞;MTT和Transwell法检测各组细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-183表达显著降低,DDR1表达显著升高(P0.05);过表达miR-183、敲减DDR1均可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-183可靶向负调控DDR1表达;过表达DDR1可逆转miR-183对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-183可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向DDR1有关,可为乳腺癌的治疗提供新靶点。     

miR-509-3p靶向BCL2基因调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-509-3p(miR-509-3p)调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制。方法 qRT-PCR检测miR-509-3p、B淋巴细胞瘤(BCL)2在乳腺癌组织及不同乳腺癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-509-3p与BCL2之间的相互作用;噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测miR-509-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡能力的变化情况;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-509-3p对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭行为的变化情况;Western印迹检测miR-509-3p对BCL2、细胞周期蛋白(CyclinD)1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的调控情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-509-3p的表达水平显著下调(P<0.05),与其他乳腺癌细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231细胞中miR-509-3p表达最低,而BCL2的表达水平相反;上调miR-509-3p表达MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),而细胞凋亡水平明显升高(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平明显降低(P<0.05),而p21表达水平明显升高(P<0.05);miR-509-3p可靶向调控BCL2表达;上调BCL2表达可逆转上调miR-509-3p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。结论 miR-509-3p能够靶向抑制BCL2而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。     

慢病毒携带的短发夹RNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶基因表达的沉默作用

目的通过构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,探讨慢病毒携带的shRNA对乳腺癌细胞乙酰肝素酶(HPA)基因表达的沉默作用。方法采用RNA干扰(RNAi)序列设计原则,以乳腺癌HPA基因为靶基因,将构建5对shRNA重组慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过Western印迹检测HPA-shRNA对MDA-MB-231细胞HPA蛋白表达水平的影响;用CCK-8的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞的生长抑制作用及5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌细胞的杀伤作用,运用transwell实验检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞侵袭能力的影响。进一步,运用流式分析的方法检测HPA-shRNA对乳腺癌细胞周期的影响。建立小鼠转移瘤模型,检测HPA-shRNA在体内对乳腺癌细胞的生长抑制作用。结果成功构建HPA-shRNA重组慢病毒载体。在体外,实验组HPA-shRNA1组、HPA-shRNA3组、HPA-shRNA4组有效沉默了人乳腺癌MDA-MB-231细胞HPA的表达,HPA蛋白表达明显降低(P<0.05)。HPA-shRNA1对乳腺癌细胞的生长具有良好的抑制作用,HPA-shRNA1能够增加乳腺癌细胞对5-Fu的敏感性。此外,HPA-shRNA1能够诱导乳腺癌细胞在S期发生细胞周期阻滞。在体内,HPA-shRNA1组HPA基因mRNA相对表达量明显低于阴性对照组(P<0.05),HPA-shRNA1能够沉默乳腺癌移植瘤HPA mRNA表达。在体内HPA-shRNA1同样能够抑制乳腺癌细胞生长。结论 HPA-shRNA重组慢病毒载体可有效抑制乳腺癌HPA基因的表达,进而发挥良好的抗肿瘤作用。     

lncRNA LINC00958靶向调控miR-597-5p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)LINC00958影响乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用与机制。方法 定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC00958和miR-597-5p在乳腺癌组织中的表达。MDA-MB-231细胞转染si-LINC00958或miR-597-5p或共转染si-LINC00958和anti-miR-597-5p。qRT-PCR检测LINC00958和miR-597-5p表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测MDA-MB-231细胞增殖,Transwell检测细胞迁移、侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测Ki-67、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达。双荧光素酶报告实验分析LINC00958与miR-597-5p的靶向关系。结果 与癌旁组织比较,41例乳腺癌组织中LINC00958表达显著上调,miR-597-5p表达显著下调(P<0.05)。抑制LINC00958表达显著降低MDA-MB-231细胞增殖、Ki-67表达水平、迁移、侵...     

siRNA干扰LOX基因对乳腺癌细胞株侵袭性影响的研究

目的检测赖氨酰氧化酶（LOX）基因在低侵袭性乳腺癌细胞MCF-7和高侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达差异,并探讨LOX基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法 RT-PCR扩增MCF-7和MDA-MB-231LOX基因,采用SYBR G reen I实时荧光定量RT-RCR技术相对定量两种细胞的LOX基因表达。瞬转MDA-MB-231,并于转染后24、48、72 h行体外运动试验侵袭实验,观察干扰LOX基因表达后对MDA-MB-231侵袭的影响。结果 MDA-MB-231较MCF-7高表达LOX基因（P〈0.05）。MDA-MB-231细胞中LOX mRNA在转染48 h表达下降明显。干扰LOX表达后,体外运动实验结果显示RNA i组中MDA-MB-231细胞穿过微孔滤膜到达下室面的细胞数少于未转染组和阴性对照组（P均〈0.05）。结论 MDA-MB-231细胞高表达LOX基因,干扰其LOX基因表达后细胞的侵袭运动能力明显减弱。     

全硫代反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响

目的 本研究探讨全硫代反义寡核苷酸( PS-ASODN)对乳腺癌MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞生长、迁移、侵袭的影响.方法 本实验将PS-ASODN经脂质体转染作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞,将实验分为空白对照组、对照正义全硫代寡核苷酸(PS-SODN)组和不同剂量的PS-ASODN组;脂质体介导的PS-ASODN和PS-SODN作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附法(EUSA)、流式细胞术、Transwell小室迁移、侵袭实验检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡、细胞迁移、侵袭能力的影响.结果 终浓度为1、3及5 μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与空白对照组比较差异显著(P＜0.01),并呈一定剂量依赖性;ELISA法检测结果,1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞作用72 h后端粒酶皆为阴性,表明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性,对照组端粒酶皆为阳性.1、3及5μmol/L的PS-ASODN作用24h可以明显抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力(P＜0.01).结论 PS-ASODN能有效抑制人乳腺癌MDA-MB -231细胞的生长、促进凋亡、抑制其侵袭和迁移能力,其机制可能是通过PS-ASODN降低端粒酶活性而实现.     

人BRCA1真核表达载体的构建及鉴定

目的 构建人BRCA1基因真核表达载体,为BRCA1基因高表达乳腺癌细胞株的研究奠定基础.方法 从胎盘中提取总RNA,设计引物,RT-PCR方法克隆BRCA1基因,以羧基端插入 pcDNA3.1(+)真核表达载体中.通过DNA序列测定,菌液提取质粒,酶切鉴定插入基因片段的正确性.提取无内毒素质粒pcDNA3.1-BRCA1并转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,获得稳定高表达BRCA1细胞株.提取细胞总蛋白,Western blot方法鉴定BRCA1的表达.结果 从人胎盘组织中成功克隆出BRCA1基因N端933个碱基.测序及提取质粒酶切鉴定证实pcDNA3.1-BRCA1中含有插入方向、片段大小和DNA序列均正确BRCA1基因N端933个碱基序列.转染后细胞株中BRCA1表达水平明显高于转染前,P＜0.01.结论 成功构建了人BRCA1基因的真核表达载体.获得稳定高表达BRCA1的MDA-MB-231细胞株.     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。     

miR-141-3p靶向CBX1抑制乳腺癌细胞增殖和细胞迁移侵袭

目的探讨miR-141-3p对乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的作用机制。方法实验设置miR-con组、miR-141-3p组、si-con组、si-染色体同源物(CBX)1组、anti-miR-con组、anti-miR-141-3p组、miR-141-3p+pcDNA组、miR-141-3p+pcDNA-CBX1组;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-141-3p和CBX1 mRNA的表达水平;Western印迹检测蛋白表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果与正常乳腺细胞HBL-100相比,乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和BT474中miR-141-3p的表达水平显著降低,CBX1的表达水平显著升高(P0.05);过表达miR-141-3p、沉默CBX1均可抑制SGC-7901细胞增殖、迁移和侵袭,抑制CBX1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的表达(P0.05)。miR-141-3p靶向调控CBX1的表达,过表达CBX1能逆转miR-141-3p对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移、侵袭的抑制作用。结论 miR-141-3p可能通过下调CBX1表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

人乳腺癌上皮细胞miR-217对EZH2表达的调控作用

目的 验证乳腺癌上皮细胞中miR-217是否通过直接作用于homolog2 zeste基因增强子（EZH2）3＇UTR调控EZH2表达.方法 利用RT-PCR技术检测人正常乳腺上皮细胞系HBL-100及乳腺癌上皮细胞系MCF-7、MDA-MB-231细胞株中的miR-217,在低表达miR-217细胞株中转染miR-217模拟物（miR-217 minics）,在高表达miR-217细胞株中转染miR-217抑制剂（miR-217 inhibitor）;Western blot法检测各实验细胞中的EZH2蛋白.用含有miR-217野生型及突变型识别位点的EZH2 3＇UTR载体（UTREZH2-UTR-WT和EZH2-UTR-MUT）质粒分别转染人胚肾细胞293T,检测其相对荧光素酶活性.结果 miR-217在MDA-MB-231细胞中低表达,转染miR-217 minics后,其EZH2蛋白表达下降;miR-217在HBL-100中高表达,转染miR-217 inhibitor后,其EZH2蛋白表达增高.人胚肾细胞293T中EZH2-UTR-WT的相对荧光素酶活性低于EZH2-UTR-MUT,两者相比,P＜0.05.结论 在乳腺癌上皮细胞中,miR-217对EZH2的表达具有调控作用,且miR-217通过直接靶向EZH2 3＇UTR调控EZH2表达.     

miR-517a-3p对人肺鳞癌细胞生长和转移的影响及分子机制

目的探讨miR-517a-3p对人肺鳞癌细胞生长和转移的影响及分子机制。方法肺鳞癌细胞株H460培养24 h后用Lipofectamine2000转染试剂转染,分为miR-517a-3p过表达组、miR-517a-3p表达抑制组,并设空白对照组。CCK8检测3组细胞的增殖情况;Transwell检测细胞的侵袭能力;Western印迹检测细胞中侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9表达水平。构建e2f6-3'Utr区的双荧光素酶报告载体,检测miR-517a-3p对下游靶基因e2f6的调控作用。结果 CCK8检测显示,miR-517a-3p过表达组细胞增殖速度较空白对照组明显降低,miR-517a-3p表达抑制组增殖率明显提升(P<0.05)。miR-517a-3p过表达组H460穿膜数明显低于空白对照组;miR-517a-3p表达抑制组穿膜数明显高于空白对照组(P<0.05)。miR-517a-3p过表达组MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量均明显低于空白对照组,miR-517a-3p表达抑制组明显高于空白对照组(P<0.05)。过表达miR-517a-3p可明显下调e2f6-3'Utr的报告载体荧光素酶活性,抑制miR-517a-3p表达后可上调荧光素酶活性,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。过表达miR-517a-3p后e2f6的表达量明显低于空白对照组;抑制miR-517a-3p表达后,e2f6的表达量明显高于空白对照组(P<0.05)。结论 miR-517a-3p可通过调控下游靶基因e2f6而抑制肺鳞癌细胞株H460的生长和侵袭力。     

circSLCO1B3在三阴乳腺癌脑转移中的作用及其调控机制

目的 探讨circSLCO1B3在三阴乳腺癌（TNBC）脑转移中的作用及其可能的调控机制。方法 采用qRT-PCR实验检测circSLCO1B3在乳腺癌细胞系中的表达。采用过表达质粒上调TNBC子代脑转移细胞231Br中circSLCO1B3的表达,设为circSLCOB3-OE组（转染对照质粒的为circCTR-OE组）,采用Transwell侵袭实验检测circSLCO1B3对231Br细胞侵袭能力的影响。经小鼠左心室注射231Br细胞,构建体内脑转移模型,检测circSLCO1B3对TNBC脑转移能力的影响。通过CircInteractome及TargetScan在线软件分别预测与circSLCO1B3结合的miRNA及miRNA下游靶基因,并使用双荧光素酶报告基因和qRT-PCR、Western blotting实验验证其调控关系。结果 相对正常乳腺上皮细胞,circSLCO1B3在TNBC细胞系中均显著下调,且在TNBC子代脑转移细胞231Br中下调最为显著（P<0.05）。与circCTR-OE组比较,circSLCOB3-OE组231Br细胞的侵袭能力、脑转移结节数...     

反义寡核苷酸vMO调控Bcl-x剪接对人乳腺癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨靶向纠正Bcl-x基因异常剪接对人乳腺癌细胞侵袭转移等生物学行为的影响。方法人乳腺癌MDA-MB-231细胞和正常NIH3T3细胞均设转染组和空白对照组。实验组采用靶向Bcl-x基因的特异性Vivo-Morpholino Antisense Oligomer(vMO)进行转染,空白对照组常规培养。采用qRT-PCR和Western Blot分别检测各组Bcl-x剪接体Bcl-xL和Bcl-xS mRNA和蛋白表达水平,通过流式细胞仪(FCM)、平板克隆形成试验、Transwell侵袭试验及划痕试验检测vMO对MDA-MB-231和NIH3T3细胞增殖、凋亡、侵袭及转移的影响。结果VMO能稳定高效转染细胞,荧光阳性率达99.17%,并能持续稳定存在7天以上;VMO能在胞内有效调节Bcl-x的剪接模式,MDA-MB-231细胞中Bcl-xL mRNA和蛋白较对照组显著降低,而Bcl-xS mRNA和蛋白较对照组显著升高(P0.05);平板克隆形成试验和FCM结果显示,vMO转染前后,NIH3T3细胞克隆形成率分别为43%和35%,凋亡率分别为0.27%和0.53%,差异均无统计学意义;vMO转染MDA-MB-231细胞前后,穿膜细胞数分别为(67±1)和(47±1)个,发生迁移的细胞数分别为(106±2)和(78±1)个,差异具有统计学意义(P0.05);划痕试验显示,转染组MDA-MB-231细胞划痕愈合能力较对照组减弱(P0.05),平均迁移距离分别为(218±21)mm和(389±12)mm。结论 vMO靶向结合Bcl-x pre-mRNA促使Bcl-xL向Bcl-xS转化,在抑制乳腺癌细胞侵袭及转移方面具有重要作用。     

miR-124通过靶基因IQGAP1调控甲状腺癌细胞分化、增殖的机制

目的探讨miR-124对甲状腺癌细胞的作用机制。方法通过RT-PCR检测人甲状腺癌细胞K1、BCPAP、TPC-1和人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-124的表达水平。MTT法检测甲状腺癌细胞K1转染miR-124 mimics、mimics control后的细胞存活率。根据靶基因预测软件The miRBase、Target Scan、Pic Tar预测miR-124的靶基因IQGAP1,构建wt-IQGAP1和mut-IQGAP1,采用双荧光素酶活性检测鉴定靶基因的正确性。Western印迹检测转染miR-124 mimics、mimics control后甲状腺癌细胞K1中IQGAP1的表达情况。甲状腺癌细胞K1中转染si IQGAP1和si IQGAP1 control,用MTT检测细胞增殖能力,Western印迹检测细胞中IQGAP1蛋白表达含量。结果甲状腺癌细胞K1、BCPAP、TPC-1中的miR-124的相对表达量与甲状腺细胞相比差异显著(P<0.05),三种甲状腺癌细胞中K1细胞的表达量最低。转染后12 h内,空白组、miR-124 mimics组和mimics control组的甲状腺癌K1细胞的存活数量差异不显著(P>0.05),从转染后12 h开始,miR-124 mimics组与对照组、mimics control组相比,甲状腺癌细胞生长抑制明显。预测miR-124的靶基因可能为IQGAP1,转染miR-124 mimics野生型IQGAP1中荧光素酶活性比突变型IQGAP1中荧光素酶活性显著降低,差异显著(P<0.05)。mimics control和wt-IQGAP1和mut-IQGAP1共转染组比较无明显差异(P>0.05)。转染miR-124 mimics组甲状腺癌K1细胞IQGAP1蛋白明显下降,miR-124负调控IQGAP1的表达。抑制甲状腺癌K1细胞中IQGAP1基因,细胞增殖能力减弱,细胞中IQGAP1蛋白表达减弱。结论 miR-124在甲状腺癌细胞中表达下调,miR-124可以抑制甲状腺癌细胞的增殖分化,其通过负调控靶基因IQGAP1抑制癌细胞增殖分化。     

白藜芦醇通过c-FLIP蛋白影响乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长和侵袭

目的观察白藜芦醇(RES)抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和侵袭的作用是否是通过抑制c-FLIP的表达来实现的。方法重组腺病毒载体Ad-c-FLIP的构建及鉴定、转染乳腺癌细胞,通过qRT-PCR、RT-PCR和Western印迹观察c-FLIP的表达情况;MTT比色法检测空白对照组;RES100μg/ml组;100μmol/L RES+Ad-GFP-c-FLIP组;Ad-GFP-c-FLIP组在24 h,48 h和72 h内对乳腺癌细胞增殖的影响;流式细胞仪和Transwell实验分别检测各组在作用48 h后乳腺癌细胞的凋亡和侵袭情况;Western印迹检测各组在作用48 h后caspase-3、-8、MMP-2、-9的表达情况。结果qRT-PCR、RT-PCR和Western印迹检测结果显示Ad-GFP-c-FLIP明显增强c-FLIP的表达,而与Ad-GFP-c-FLIP组比较RES+Ad-GFP-c-FLIP组明显抑制c-FLIP的表达;与Ad-GFP-c-FLIP组相比RES+Ad-GFP-c-FLIP组乳腺癌细胞的生长明显被抑制(P0.05),并且随时间的延长抑制作用明显加大;与Ad-GFP-c-FLIP组相比RES+Ad-GFP-c-FLIP组乳腺癌细胞的侵袭能力明显被抑制,而乳腺癌细胞的凋亡明显增加(P0.05);Western印迹检测结果显示,作用48 h后与Ad-GFP-c-FLIP组比较白藜芦醇+Ad-GFP-c-FLIP组MMP-2,-9表达被抑制,而caspase-3,-8表达被增强。结论 RES可以通过降低c-FLIP的表达来抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长和侵袭。     

心房颤动相关微小RNA4279靶向调控钙通道蛋白

目的采用双荧光素酶报告基因等手段,探讨心房颤动(房颤)相关微小RNA4279(miR-4279)与房颤相关离子通道蛋白的靶向调控关系。方法利用在线数据库Targetscan,miRanda,miRDB预测可能的靶基因后,分别将靶基因的重组荧光素酶报告质粒与miR-4279及阴性对照质粒共转染于人胚胎肾HEK293细胞,实验分为转染组,阴性组和空白组检测各组相对荧光素酶的活性。并将miR-4279模拟体导入大鼠胚胎心肌H9c2细胞,观察其对靶基因的表达调控。结果 CACNA1C基因转染中,与阴性组比较,转染组相对荧光素酶活性降低18%(0.300±0.012 vs 0.366±0.011,P<0.01),转染组CACNA1C基因mRNA表达水平下调31%(0.820±0.058 vs 1.193±0.060,P<0.01),miR-4279模拟体转入H9c2细胞可抑制CACNA1C基因的表达。结论电压门控L型钙通道α亚基CACNA1C基因可能是miR-4279的直接靶基因,miR-4279可能通过抑制CACNA1C表达参与房颤电重构,有可能成为未来房颤干预治疗的靶点。     

过表达miR-769-5p对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响和机制

目的 探讨乳腺癌细胞中miR-769-5p的表达变化及其过表达对乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力、迁移能力的影响及机制.方法 通过qRT-PCR法检测乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、SK-BR-3、HCC1806和正常乳腺上皮细胞HBL-100中miR-769-5p的表达.通过脂质体转染技术对HCC1806转...     

MiR-21对肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨miR-21对肺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法培养人肺癌细胞HBE、H460、A549和H446,将实验分为miR-21 inhibitor组、miRNA scramble组、空白对照组。荧光定量检测肺癌细胞H460、A549和H446 miR-21的表达;荧光定量PCR检测将miR-21 inhibitor和miRNA scramble转染到培养至对数生长期的人肺癌细胞H460后,对照组不转染的各组细胞的表达量;MTT实验检测转染miR-21 inhibitor后对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染miR-21 inhibitor后对细胞凋亡的影响;Western印迹检测与凋亡相关蛋白的活性。结果肺癌细胞H460、A549和H446miR-21的表达显著高于正常肺癌细胞HBE(P<0.01),由于肺癌细胞株H460的miR-21表达在3个细胞株中高表达,因此选择肺癌细胞株H460做后续研究;将miR-21 inhibitor组和miRNA scramble组转染到肺癌细胞株H460后,荧光定量PCR显示,miR-21 inhibitor组的miR-21的相对表达量为显著低于空白对照组(P<0.01),miRNA scramble组的相对表达量与空白对照组无差异(P>0.05);MTT结果显示,转染4 d后,miRNA scramble组与空白对照组细胞增殖率无差异(P>0.05),而miR-21 inhibitor组显著低于空白对照组(P<0.05),且随时间延长,细胞增殖率逐渐下降;流式结果显示,与空白对照组和miRNA scramble组比较,miR-21 inhibitor组细胞的凋亡率显著升高(P<0.01);Western印迹显示,miR-21 inhibitor组Cleaved-caspase-3和Bax蛋白的表达显著高于miRNA scramble组和空白对照组,而miR-21 inhibitor组Bcl-2蛋白的表达显著低于miRNA Scramble组和空白对照组(P<0.05)。结论下调miR-21的表达,可抑制肺癌细胞H460的生长,增加细胞的凋亡,其作用机制可能与Bcl-2家族的调节有关。