大黄素对实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠T细胞亚群和IFN-γ、IL-4分泌能力的影响

目的：大黄素对实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠的保护和机制研究。方法：通过过量碘剂诱导 NOD 小鼠建立EAT动物模型,造模4周后各实验组摄入不同剂量的大黄素。造模8 周后检测小鼠血浆TgAb 水平及甲状腺炎症程度以观察大黄素的保护作用。流式细胞术检测小鼠外周血、脾脏 T 细胞亚群,分析大黄素对EAT小鼠外周血、脾脏淋巴细胞IFN-γ和IL-4分泌能力的影响。结果:（1）甲状腺病理学观察,大黄素实验组较模型组甲状腺淋巴细胞浸润程度减轻;分级比较有显著性差异（P<0.01）;（2）造模后各组小鼠血浆TgAb水平明显升高（44.16±3.59 vs 11.24±1.52）,大黄素实验组升高幅度低于模型组（26.58±5.24,19.18±5.73,23.24±5.47 vs 44.16±3.59）,各组间有统计学差异(P<0.01);（3）大黄素实验组外周血单核细胞、脾脏淋巴细胞中 CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的频率较对照组明显升高（外周血单核细胞7.72±2.92 vs 4.13±1.45,4.23±1.58 vs 2.76±1.69;脾脏淋巴细胞7.51±1.31 vs 1.82±1.35,5.59±1.98 vs 0.033±0.034）,但低于模型组（外周血单核细胞7.72±2.92 vs 17.46±3.71,4.23±1.58 vs 8.92±2.62;脾脏淋巴细胞7.51±1.31 vs 16.74±4.79,5.59±1.98 vs 11.97±2.21）（P<0.01）;而CD3+CD4+FIN-γ+、CD3+CD4+IL-4+T细胞频率高于对照组但明显低于模型组（P<0.01）。结论：过量碘剂诱导NOD小鼠自身免疫性甲状腺炎造模是可行的;大黄素对造模小鼠甲状腺炎有一定保护作用。大黄素通过抑制CD4+、CD8+T淋巴细胞分化并且抑制IFN-γ和IL-4的分泌,从而抑制造模小鼠的自身免疫反应。     

CpG-ODN增强乙型肝炎病毒转基因小鼠对重组乙肝疫苗的细胞免疫应答

[目的] 探讨CpG-ODN作为佐剂对重组乙肝疫苗诱导乙肝病毒转基因小鼠产生细胞免疫应答的影响. [方法] 用重组干扰素(rIFNα-2b)、重组乙肝疫苗(rHBs vaccine)和重组乙肝疫苗+CpG-ODN分别免疫HBV转基因小鼠后,流式细胞仪检测免疫小鼠的外周血T淋巴细胞亚群,ELISA法检测免疫小鼠的外周血IL-2、IL-12(p70)和IFN-γ的含量,MTT法和乳酸脱氢酶法分别检测免疫小鼠的淋巴细胞增殖和杀伤功能. [结果] 重组乙肝疫苗组CD3+、CD4+、CD8+细胞在T细胞中所占百分比分别为(25.008±2.852)%、(13.640±1.616)%、(9.989±1.123)%均明显高于对照组,(P<0.05);IL-2、IL-12(p70)和IFN-γ的含量分别为(1304.288±572.212)pg/mL、(203.810±91.807)pg/mL、(860.736±336.888)pg/mL均明显高于对照组,(P<0.05);淋巴细胞特异性增殖和杀伤效应与对照组相比均有明显差异,(P<0.05).疫苗+CpG-ODN组与疫苗组比较,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞应答(P<0.05),且以Th1型细胞免疫应答为主.而干扰素组由于给药次数和剂量等原因,与对照组无显著差异.[结论] CpG-ODN作为佐剂可以较好的增强重组乙肝疫苗诱导HBV转基因小鼠产生细胞免疫应答.     

苦参提取物对耐多药结核分枝杆菌感染小鼠模型免疫功能的调节作用

目的分析苦参提取物对耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)感染小鼠模型免疫功能的调节作用。方法选取30只健康雄性昆明种小鼠,采用随机数字表法分为正常组、对照组及苦参提取物组,每组10只。对照组及苦参提取物组小鼠通过尾静脉注入MDR-TB 3 m L,正常组尾静脉内注入等量0.9%Na Cl注射液。苦参提取物给予200 mg/kg苦参提取物灌胃,正常组和对照组给予等体积极0.9%Na Cl注射液灌胃。采用流式细胞仪测定血清CD+3、CD+4、CD+4/CD+8水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清γ干扰素(IFN)、白细胞介素(IL)4、IL-10、IL-12等细胞因子水平及补体C3、补体C4、免疫球蛋白(Ig)G、Ig M、Ig A水平变化。结果苦参提取物组血清CD+3、CD+4、CD+4/CD+8水平高于对照组[(0.62±0.08)%比(0.53±0.06)%,(0.50±0.06)%比(0.40±0.05)%,(1.68±0.20)比(1.42±0.12),P<0.05],CD+8水平低于对照组[(0.20±0.04)%比(0.29±0.05)%,P<0.05];与正常组[(0.64±0.07)%、(0.56±0.08)%、(0.15±0.03)%、(1.73±0.18)%]比较差异无统计学意义(P>0.05)。苦参提取物组血清IFN-γ、IL-12高于对照组[(1.37±0.08)ng/L比(1.18±0.05)ng/L,(2.35±0.12)ng/L比(2.08±0.11)ng/L],血清IL-10、IL-4低于对照组[(12.01±0.25)ng/L比(12.47±0.26)ng/L,(6.02±0.23)ng/L比(6.31±0.27)ng/L,P<0.05];与正常组[(1.55±0.14)ng/L、(11.23±0.26)ng/L、(5.56±0.27)ng/L、(24.7±0.07)ng/L]比较差异无统计学意义(P>0.05)。苦参提取物组血清C3、C4、Ig G、Ig M、Ig A高于对照组[(1.01±0.15)g/L比(0.67±0.09)g/L,(0.26±0.06)g/L比(0.19±0.03)g/L,(13.22±1.91)g/L比(7.92±0.94)g/L,(2.57±0.63)g/L比(1.84±0.37)g/L,(1.28±0.33)g/L比(0.52±0.11)g/L,P<0.05];与正常组[(1.27±0.20)g/L、(0.31±0.08)g/L、(15.82±1.75)ng/L、(2.91±0.65)g/L、(1.35±0.37)g/L]比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论苦参提取物可以同时提升MDR-TB小鼠的细胞免疫及体液免疫水平,具有明显的抗MDR-TB作用,可以作为苦参提取物应用于临床MDR-TB感染患者治疗的依据。     

慢性乙型肝炎患者外周血IL-7与细胞免疫的关系

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血IL-7含量与T淋巴细胞亚群、调节性T细胞百分比的关系,探究IL-7对慢性乙型肝炎细胞免疫作用的影响。方法慢性乙型肝炎患者组、慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带组、健康对照组,采用ELISA法检测受试者外周血IL-7含量,流式细胞仪技术检测外周血T淋巴细胞亚群和CD4+CD25+调节性T细胞百分比。结果 CHB组、HBV携带组、健康对照组外周血IL-7含量分别为(1.68±0.58)ng/mL、(3.83±0.62)ng/mL和(6.25±0.32)ng/mL,3组间存在显著性差异(P0.05);CHB组、HBV携带组、健康对照组外周血T细胞亚群CD4+T淋巴细胞分别为(31.3±3.3)%、(38.1±6.8)%、(43.2±9.4)%,CD8+T淋巴细胞分别为(24.8±5.2)%、(28.1±3.4)%、(30.5±8.6)%;CD4+CD25+调节性T细胞分别为(10.9±1.3)%、(7.4±1.0)%、(4.2±1.1)%。CHB组外周血IL-7明显低于HBV携带组及健康对照组,且与CD4+T细胞百分比呈负相关(r1=-0.58,P0.05),与CD8+T细胞百分比呈正相关(r2=0.63,P0.05),与CD4+CD25+调节性T细胞百分比呈负相关(r3=-0.43,P0.05)。结论 CHB患者外周血IL-7负调控调节性T细胞,对CD8+T细胞的细胞免疫有促进作用。     

白细胞介素21对SHIV感染的恒河猴外周血CD8+ T细胞分泌γ干扰素的影响

目的 研究白细胞介素21(interleukin 21,IL-21)对SHIV感染CD8+T细胞分泌干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)的影响.方法 从SHIV/恒河猴模型外周血中分选出CD8+T细胞,加入IL-21诱导培养,应用ELISA方法检测细胞培养上清液中IFN-γ浓度,RT-PCR方法检测细胞中IFN-γ mRNA的表达水平,流式细胞术检测分泌IFN-γ的CD8+T细胞所占的百分比.结果 10 ng/mL,IL-21明显促进CD8+T细胞分泌IFN-γ(P＜0.05),IFN-γ mRNA的表达明显升高,4h为刺激CD8+T细胞胞内IFN-γ合成的最佳时间.结论IL-21对CD8+T细胞分泌IFN-γ有促进作用.     

日本血吸虫感染的小鼠肺脏组织CD69~+TRM细胞免疫学特性的变化

目的探究日本血吸虫感染的小鼠肺脏CD69~+组织定居记忆T细胞(TRM)的表型和功能的变化。方法使用血吸虫感染C57BL/6小鼠,6周后分离感染组及正常对照组小鼠的肺脏组织,制备石蜡切片,使用HE染色,观察肺部病变情况;制备单细胞悬液,用流式细胞术检测CD4~+和CD8~+的CD69~+TRM的含量;使用细胞表面染色方法,观察CD69~+TRM细胞表面CD103、CD62L和CD107a分子的表达情况;使用细胞内细胞因子染色法,检测CD69~+TRM细胞白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)、IL-9和IL-10的分泌情况。结果日本血吸虫感染小鼠肺脏组织出现明显肉芽肿病变;流式细胞术检测结果显示,在CD4~+T和CD8~+T细胞中,感染组CD69的表达比例均高于正常组[(19.02±2.87)%vs.(4.29±0.21)%,(7.61±1.99)%vs.(2.46±0.49)%],差异有统计学意义(P0.05)。在CD4~+T细胞中,CD62L和CD107a分子在感染组小鼠CD69~+细胞的表达比例低于正常组[(6.41±0.47)%vs.(23.95±1.63)%,(30.19±2.70)%vs.(48.15±2.75)%],差异均有统计学意义(P0.05)。在CD8~+T细胞中,感染组小鼠CD69~+细胞表面CD103和CD62L分子的表达比例远低于正常组小鼠[(19.12±0.41)%vs.(44.79±3.64)%,(38.89±4.59)%vs.(58.69±2.12)%],差异均有统计学意义(P0.05)。在CD4~+T细胞中,感染组CD69~+T细胞相比正常组表达较高水平的IL-4[(27.25±0.88)%vs.(14.57±1.36)%],差异有统计学意义(P0.05)。在CD8~+T细胞中,感染组CD69~+T细胞相比正常组表达较高水平的IFN-γ[(45.08±4.25)%vs.(2.75±0.07)%],差异有统计学意义(P0.05)。结论小鼠肺脏组织中存在着一群表达CD69的TRM细胞,在日本血吸虫感染诱导的肺部肉芽肿病变过程中发挥了重要的作用。     

T-bet重组腺病毒调节哮喘小鼠辅助性T细胞1型/2型免疫平衡

目的研究静脉注射T-bet重组腺病毒(AdT-bet)对小鼠哮喘模型过敏性气道炎症及辅助性T细胞1型/2型(Th1/Th2)免疫失衡的影响。方法随机将36只C57BL/6小鼠分为AdT-bet治疗(A)组、模型对照(B)组、正常对照(C)组。以卵蛋白、氢氧化铝免疫建立哮喘模型,A组激发前尾静脉注射1×10~8 pfu/100μL的AdT-bet,各组激发后进行肺泡灌洗分析细胞组分,分离肺T淋巴细胞测定细胞因子分泌水平,以流式细胞仪检测CD3~ 、CD4~ T细胞比例及表达γ-干扰素(IFN-γ)和白细胞介素(IL)-4、IL-5的比例,比较各组肺组织学改变。结果A组与B组相比:①明显抑制抗原激发后气道内嗜酸性粒细胞的浸润(0.004±0.003比0.221±0.067,P<0.01);②明显抑制肺T淋巴细胞产生IL-4[(22±12)pg/mL比(170±28)pg/mL]、IL-5[(16±13)pg/mL比(330±30)pg/mL],增加了IFN-γ[(2100±360)pg/mL比(60±50)pg/mL]的产生,差异均有统计学意义(P值均<0.01);③肺T淋巴细胞CD4~ IFN-γ%及IFN-γ~ /IL-4~ 明显升高(P值均<0.01),而CD4~ IL-4~ %明显下降(P<0.01);④明显抑制哮喘鼠气道内及肺泡内的过敏性炎症反应。结论激发前静脉应用AdT-bet对哮喘小鼠过敏性气道炎症有明显的防治作用,其机制可能与表达的T-bet上调Th1/Th2比值,从而调整了免疫平衡有关。     

湿疹溻渍方对模型小鼠炎性细胞因子及淋巴细胞亚群的影响

目的观察自拟中药汤剂"湿疹溻渍方"外用对湿疹模型小鼠皮损中γ-干扰素受体(IFN-γRa)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)以及外周血中T淋巴细胞亚群CD4~+T、CD8~+T的影响。方法将7%的二硝基氯苯(DNCB)-丙酮溶液均匀涂抹于小鼠腹部脱毛的皮肤上,制作小鼠接触性湿疹模型,以中药汤剂湿疹溻渍方进行溻渍洗浴治疗,通过免疫组织化学法检测各个小组中小鼠腹部皮损组织中IFN-γRa、IL-2及IL-4的含量,采用流式细胞技术检测各组小鼠血浆中CD4~+T和CD8~+T的水平。结果 "湿疹溻渍方"对DNCB致小鼠腹部湿疹有明显的改善效果,能够让湿疹小鼠皮损组织中的IFN-γRa和IL-2量增加,而IL-4的表达降低,且能够减小湿疹小鼠外周血中CD8~+T、升高CD4~+T淋巴细胞的百分比。结论 "湿疹溻渍方"外用可以明显地改善小鼠湿疹模型,具体的作用原理与其参与免疫调节有关。     

抗白细胞介素6单克隆抗体治疗延长小鼠同种心脏移植物存活时间的实验研究

目的 观察应用抗白细胞介素6(IL-6)单克隆抗体(anti-IL-6 monoclonal antibody,anti-IL-6 mAb)对同种异体小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 建立小鼠颈部异位心脏移植模型.实验动物随机分为同系移植组、移植治疗组(每日注射3 g/L anti-IL-6 mAb 0.1 mL)和移植模型组(注射等量生理盐水).ELISA法检测受鼠移植术后第3、6 天外周血IL-6的表达水平,观察各组移植心脏存活时间,病理分析检测排斥反应程度,流式细胞术(FCM)检测各组受鼠脾脏及移植心脏中CD4+ CD25+调节性T细胞比例变化,RT-PCR检测移植心脏IL-6、IFN-γ、IL-17、RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平.结果 ①治疗组外周血IL-6表达水平较模型组明显降低(P<0.01);②治疗组移植心脏存活时间较模型组明显延长[(22.0±2.3)d vs(7.7±0.8)d,P<0.01],排斥反应病理分级明显下降(Stanford 2级);③治疗组移植心脏中IFN-γ、IL-6、IL-17和RORγt mRNA表达水平较模型组显著下降(均P<0.05),脾脏及移植心脏中浸润的CD4+ CD25+调节性T细胞比例及Foxp3 mRNA表达水平均明显升高,与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05).结论 anti-IL-6 mAb治疗可抑制Th1、Th17型细胞因子的分泌,促进CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞产生,抑制单个核细胞浸润并有效延长小鼠同种移植心脏的存活时间.     

辅助性T细胞17和调节性T细胞在哮喘小鼠中的失衡表达及其意义

目的探讨辅助性T细胞17(Th17)和CD4+ CD25+ Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达失衡在哮喘小鼠发病机制中的作用。方法将24只BALB/c小鼠随机分为哮喘组和正常对照组,每组12只。哮喘组采用卵白蛋白致敏和激发的方法制作小鼠哮喘模型,对照组用等量的生理盐水代替。采用体积描记法测定气道反应性;对BALF中炎性细胞进行计数;流式细胞术检测脾脏单个核细胞中Th17及Treg细胞占CD4+ T细胞比例;ELISA法检测BALF及肺匀浆中Th17及Treg相关细胞因子IL-17和IL-10水平。结果与对照组比较,哮喘组平均气道阻力显著升高(P0.01),Th17细胞比例显著升高[(5.68±1.99)%比(2.80±0.82)%,P0.01],而Treg细胞比例显著降低[(2.88±0.46)%比(6.10±2.44)%,P0.01],Th17/Treg比值显著升高(1.93±0.41比0.50±0.15,P0.01),BALF及肺匀浆中IL-17水平均显著升高[(22.37±3.00)pg/mL比(11.42±2.15)pg/mL,(52.93±5.39)pg/mL比(19.38±2.65)pg/mL,P均0.01],而IL-10水平均显著降低[(6.05±1.25)pg/mL比(14.23±2.94)pg/mL,(9.33±1.79)pg/mL比(21.40±2.44)pg/mL,P均0.01]。结论哮喘小鼠Th17细胞数量增多及IL-17水平增高,而Treg细胞数量减少及IL-10水平降低,Th17/Treg细胞比例失衡可能在哮喘的发病机制中具有重要作用。     

肺结核患者T淋巴细胞凋亡的研究

[摘要] 目的 探讨肺结核患者外周血CD4+ T淋巴细胞凋亡及相关细胞因子水平的变化。方法 分离肺结核患者和正常人外周血单核细胞标记后用流式细胞仪测定CD4+ T淋巴细胞凋亡率,用ELISA法检测白细胞介素-10(IL-10)与干扰素-γ(IFN-γ)的浓度。结果 肺结核患者外周血CD4+ T淋巴细胞凋亡率明显高于正常对照组,淋巴细胞培养上清液IL-10水平显著高于对照组,而IFN-γ水平显著低于对照组。涂阳组外周血CD4+ T细胞凋亡率高于涂阴组与健康对照组,复治组外周血CD4+ T细胞凋亡率显著高于初治组与健康对照组。外周血CD4+ T细胞凋亡率与IL-10, IFN-γ水平相关。结论 外周血CD4+ T淋巴细胞凋亡增加可能是肺结核的免疫发病机制之一,对诱导或抗凋亡的某些因素进行干预有望为结核病的治疗带来新的希望和突破。     

参麦注射液治疗支气管哮喘急性发作临床研究

目的探讨参麦注射液配合常规疗法治疗支气管哮喘急性发作的临床疗效及其对T淋巴细胞免疫功能的影响.方法将118例支气管哮喘急性发作期患者随机分为研究组和对照组,每组59例.对照组给予常规西医治疗,研究组在此基础上加用参麦注射液60mL,1次/天,连用14d,观察两组临床疗效及治疗前、后外周血中T淋巴细胞(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD69CD3+T淋巴细胞、CD69CD4+T淋巴细胞)水平的变化.结果研究组有效率为91.53%,对照组有效率为71.19%,差异有统计学意义(P相似文献   

当归红芪超滤膜提取物对12C6+重离子束辐射致H22荷瘤小鼠免疫功能损伤的影响

目的观察当归红芪超滤膜提取物抗~(12)C~(6+)重离子束辐射致H22荷瘤小鼠免疫功能损伤的作用。方法 H22细胞皮下注射法构建H22荷瘤小鼠模型,以检测血液白细胞数目为评价标准确定~(12)C~(6+)重离子束辐射致H22荷瘤小鼠免疫损伤最佳辐射剂量及当归红芪超滤膜提取物药物干预最佳剂量。实验分正常对照组、肿瘤模型组、单纯药物组(给予当归红芪超滤膜提取物6.72 g/kg)、单纯放射组(照射剂量为4Gy)、药物(给予当归红芪超滤膜提取物6.72 g/kg)+放射(照射剂量为4Gy)组。测定各组脾脏指数、胸腺指数;流式细胞仪技术分析各组小鼠血液T淋巴细胞亚群变化;ELISA法检测各组小鼠血清补体C3、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)含量;光镜下观察脾脏病理形态学改变。结果与肿瘤模型组比较,单纯放射组血液白细胞数目、脾脏指数、胸腺指数、血液CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量、血清补体C3、IFN-γ、IL-4含量明显下降(P0.05),CD4+/CD8+比值、IFN-γ/IL-4比值明显下降(P0.05)。病理形态学显示:肿瘤模型组小鼠脾脏形态结构如常,多数脾窦扩张淤血,脾小体清晰,可见动脉周围淋巴鞘,巨核细胞多见,与正常对照组小鼠脾脏形态无明显差异;单纯放射组脾脏脾小体及红髓脾索萎缩,淋巴细胞明显减少,巨核细胞数量减少,纤维组织增生。与单纯放射组比较,药物+放射组血液白细胞数目、脾脏指数、胸腺指数、血液CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量、血清补体C3、IFN-γ含量明显上升(P0.05),CD4+/CD8+比值、IFN-γ/IL-4比值有明显上升(P0.05),病理形态学损伤改变明显减轻。结论当归红芪超滤膜提取物有减轻~(12)C~(6+)重离子束辐射引起H22的荷瘤小鼠免疫功能损伤的作用。     

35例多发性硬化患者Th17细胞及相关细胞因子的检测

目的 探讨多发性硬化(MS)患者外周血Th17细胞水平及相关细胞因子的意义.方法 采用流式细胞分析法检测35例MS患者(MS组)和20例健康者(对照组)外周血Th17细胞占CD4+T细胞比例,ELISA法检测外周血IL-17、IL-23水平.结果 MS组患者外周血Th17/CD4+T细胞比例[(1.94±0.32)%]显著高于对照组[(0.60±0.25)%],差异有统计学意义(P<0.01);MS组患者外周血IL-17、IL-23水平亦明显高于对照组[IL-17:MS组(69.01±19.29)ng/L、对照组(25.94±15.61)ng/L;IL-23:MS组(550.80±112.06)ng/L、对照组(158.78±33.19)ng/L,(P<0.01)].患者外周血IL-17水平与IL-23水平呈正相关(r=0.731,P<0.01).结论 MS患者外周血Th17/CD4+T细胞比例增加,相关细胞因子IL-17、IL-23水平升高,Th17细胞可能参与了MS的发生与发展.     

环孢素A抑制正常人外周血记忆CD4~+T细胞产生IL-22的实验研究

目的探讨环孢素A(CsA)是否能够抑制正常人CD4+T细胞产生白细胞介素22(IL-22)。方法使用密度梯度离心法制备正常人外周血单个核淋巴细胞(PBMCs),加入PMA+Inomycin刺激细胞后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测正常人外周血PBMCs中产生IL-22的T细胞亚群,以及IL-17-IFN-γ-IL-22+CD4+T细胞亚群(Th22);PMA+Inomycin刺激正常人PBMCs,同时加或不加环孢素A(CsA)后,做细胞内细胞因子染色,流式细胞仪检测IL-22+CD4+T细胞和IFN-γ+CD4+T细胞的比例,以及IL-22+CD4+T细胞表达记忆表型分子CD45RO情况。结果正常人外周血中产生IL-22的T细胞以CD4+T细胞为主,且存在仅分泌IL-22,不分泌IL-17和IFN-γ的Th22亚群;CsA以剂量依赖方式抑制CD4+T细胞产生IL-22和IFN-γ;CsA抑制外周血PBMCs中记忆CD4+T细胞产生IL-22。结论 CsA能抑制正常人外周血中记忆CD4+T细胞产生IL-22。     

前列腺癌冷冻消融对小鼠机体抗肿瘤免疫反应的影响

目的 探讨前列腺癌冷冻消融后对机体抗肿瘤免疫反应的影响.方法 复制前列腺癌皮下移植瘤.将动物模型随机分为:对照组(A组)、手术切除组(B组)、冷冻消融组(C组).分别于治疗前、治疗后7、14、21 d取外周血、引流淋巴结、脾脏.ELISA法检测外周血干扰素(IFN)γ、白细胞介素(IL)4浓度,以IFN-γ/IL-4计算Th1/Th2比值;分离引流淋巴结、脾脏淋巴细胞,ELISPOT试验检测CD4+Th肿瘤特异性IFN-γ的分泌情况,LDH释放试验检测CD8+CTL肿瘤杀伤活性.观察各组动物肿瘤转移情况.结果 治疗后7 d,A、B、C组外周血Th1/Th2比值分别为:4.97±0.31,10.07±0.62,13.71±0.57(P<0.05).引流淋巴结每10～6个CD4+Th肿瘤特异性IFN-γ~+细胞数分别为22.3±1.0、24.0±1.2、243.4±46.2(P<0.05),引流淋巴结CD8+CTL特异杀伤活性分别为:(14.6±1.1)%、(15.2±0.8)%、(62.6±2.3)%(P<0.05).但各观察时间点A、B、C组脾脏Th细胞IFN-γ分泌及CTL细胞杀伤活性均无明显变化.术后28 d A、B、C淋巴结转移率分别为100%、80%、40%,肺转移率均为100%.结论 冷冻消融治疗前列腺癌可诱导机体Th1抗肿瘤免疫优势,并诱导引流淋巴结T细胞肿瘤特异性免疫反应,但存在一定局限性,尚需更深入研究.     

益元生血方对免疫性血小板减少症患者外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的:观察益元生血方提取物对免疫性血小板减少症(immune thrombocytopenia,ITP)患者T淋巴细胞亚群的影响。方法:(1)纳入ITP患者10例和健康志愿者10例,抽取受试者外周血制备淋巴细胞悬液,以10%、5%、2.5%、1.25%、0.625%浓度的益元生血方水提物干预ITP患者淋巴细胞悬液,培养时间分别为24 h、36 h、48 h、72 h,检测不同浓度、不同时间益元生血方水提物培养的ITP患者T淋巴细胞增殖的活性,以确定益元生血方水提物作用的最佳药物浓度和最佳培养时间。(2)根据试验需求,结合上述试验结果,设正常对照组、ITP未干预组和ITP干预组,正常对照组为健康志愿者淋巴细胞混悬液+完全RPMI-1640培养液,ITP未干预组为ITP患者淋巴细胞混悬液+完全RPMI-1640培养液,ITP干预组为ITP患者淋巴细胞混悬液+"最佳药物浓度"益元生血方灭菌提取物,培养时间为"最佳培养时间"。采用流式细胞术检测各组CD4~+、CD8~+、IFN-γ、IL-4、IL-17、CD4~+CD25~+T淋巴细胞亚群表达。结果:(1)当培养时间为36 h,益元生血方水提物药物浓度为5%时,T淋巴细胞增殖活性最佳。(2)与正常对照组比较,ITP未干预组CD4~+、CD4~+CD25~+、IL-4 T淋巴细胞表达及CD4~+/CD8~+比值均降低(P0.05),CD8~+、IFN-γ、IL-17 T淋巴细胞表达及IL-17/CD4~+CD25~+、IFN-γ/IL-4比值均显著升高(P0.05);与ITP未干预组比较,ITP干预组CD4~+、CD4~+CD25~+、IL-4 T淋巴细胞表达及CD4~+/CD8~+比值均升高(P0.05),CD8~+、IFN-γ、IL-17 T淋巴细胞表达及IL-17/CD4~+CD25~+、IFN-γ/IL-4比值均显著降低(P0.05)。结论:益元生血方可通过调节ITP患者T淋巴细胞亚群分化调节免疫,从而发挥治疗作用。     

枸杞多糖对细粒棘球蚴小鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的研究枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharides,LBPs)对细粒棘球蚴小鼠脾脏T细胞亚群的影响,初步探讨LBP对细粒棘球蚴感染后机体免疫功能变化的影响。方法枸杞多糖溶液皮下给药3次,每次间隔2周,于第3次给药后2周,用细粒棘球蚴原头蚴攻击感染BALB/c小鼠,使用流式细胞仪动态检测给药前后、感染前后不同时间点小鼠脾脏IFN-γ+CD3+T细胞、IL-4+CD3+T细胞占总T细胞的比例以及CD4+/CD8+T细胞的比值变化。结果与给药前比较,枸杞多糖给药后7周,小鼠脾脏分泌IFN-γ的T细胞比例增加,分泌IL-4的T细胞比例减少,CD4+/CD8+的比例明显增加;与感染对照组相比,枸杞多糖能使细粒棘球蚴感染小鼠脾脏分泌IFN-γ的T细胞比例增加(感染后2、15周);分泌IL-4的T细胞比例减少(感染后2、10周),CD4+/CD8+的比例先升高(2、10周),后降低(15、20周)。结论枸杞多糖有正向免疫调节作用,通过促进细粒棘球蚴感染小鼠脾脏T淋巴细胞向Th1的分化,抑制Th2的分化,发挥抗细粒棘球蚴的作用。     

肺癌患者外周血CD4~+T淋巴细胞Th1/Th2分化情况检测与分析

目的观察肺癌患者外周血CD4+T淋巴细胞中Th1/Th2分化情况与反应状态,为肺癌的诊断和免疫治疗研究提供依据。方法以干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)代表Th1和Th2细胞功能,应用细胞因子诱生技术和流式细胞仪,检测25例肺癌患者及25例健康志愿者外周血CD4+T淋巴细胞诱生的IFN-γ和IL-4水平。结果肺癌患者外周血CD4+T淋巴细胞诱生的IFN-γ水平与健康对照组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),IL-4水平在2组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌患者外周血CD4+T淋巴细胞向Th1细胞的分化明显减少,向Th2细胞的分化无明显变化,Th1向Th2方向的漂移可能是肺癌细胞生长和免疫逃避的机制之一。     

氨茶碱、地塞米松对哮喘患者CD4+CD25+T调节细胞抑制功能的影响

目的探讨哮喘患者CD4+ CD25+ T调节细胞的作用是否存在缺陷及药物(地塞米松、小剂量氨茶碱)对其作用的影响,为有效控制哮喘提供依据。方法分离哮喘患者及健康对照者外周血CD4+ CD25+ T调节细胞及CD4+CD25-T淋巴细胞并培养,设CD4+ CD25+ T调节细胞组、CD4+CD25-T淋巴细胞组及CD4+ CD25+ T调节细胞联合CD4+CD25-T淋巴细胞组,第3组又分为氨茶碱干预组、地塞米松干预组及空白对照组,72h后取培养上清液用ELISA法检测IFN-γ、IL-5、IL-13水平。结果健康对照者CD4+ CD25+ T调节细胞可抑制IFN-γ、IL-5及IL-13的生成(P<0.01),哮喘患者仅抑制IFN-γ、IL-5的生成(P<0.01);地塞米松预处理CD4+ CD25+ T调节细胞后,健康对照者CD4+ CD25+ T调节细胞抑制IFN-γ(P<0.05)、IL-5(P<0.01)、IL-13(P<0.01)生成能力增强,哮喘患者抑制IL-5、IL-13生成能力增强(P<0.01);采用氨茶碱预处理后,健康对照者CD4+ CD25+ T调节细胞抑制IL-5(P<0.01)、IL...