补中益气汤对肺腺癌顺铂耐药细胞株与顺铂敏感细胞株荷瘤BALB/c小鼠移植瘤P-gp蛋白表达的影响

目的探讨补中益气汤对肺腺癌顺铂(DDP)耐药与敏感细胞株荷瘤BALB/c小鼠移植瘤P-gp蛋白表达的影响。方法体外培养肺腺癌顺铂耐药株A549/DDP及敏感细胞株A549,接种于BALB/c小鼠腋窝皮下,荷瘤成功后给予顺铂或顺铂联合低、中、高剂量补中益气汤治疗。实验共分为10组:A549/DDP或A549荷瘤对照组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组、A549/DDP或A549荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组。给药结束后,测量移植瘤体积并计算药物抑瘤率及抑瘤作用提高率,蛋白质印迹法检测移植瘤组织P-gp蛋白的表达。结果顺铂对A549/DDP移植瘤体积无显著影响(P0.05),而使A549移植瘤体积显著缩小(P0.05);联合低、中、高剂量补中益气汤的A549/DDP及A549移植瘤体积均缩小(P0.05),抑瘤率均增加(P0.05),随着中药剂量的增加,移植瘤体积随之缩小,抑瘤率随之增加,抑瘤作用提高率也随之增加;单独顺铂可上调A549/DDP移植瘤组织中P-gp蛋白表达(P0.05),下调A549移植瘤组织中P-gp蛋白表达(P0.05);联合低剂量补中益气汤并未显著下调A549/DDP及A549移植瘤组织中P-gp蛋白表达(P0.05);联合中、高剂量补中益气汤的A549/DDP及A549移植瘤组织中P-gp蛋白表达均显著下调(P0.05),两剂量间无差异(P0.05)。结论在顺铂耐药与顺铂敏感的肺腺癌移植瘤组织中,补中益气汤均有缩小移植瘤体积、提高顺铂抑瘤率、下调P-gp蛋白表达的作用,尤以中、高剂量作用最显著。     

人参皂苷CK与顺铂联用对人肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其机制探讨

目的探讨人参皂苷CK与顺铂联用对人肺腺癌A549细胞株的抑制作用及其作用机制。方法不同浓度(50、25、12.5、6.241、3.125、1.562 5μg/m L)人参皂苷CK单独或加不同浓度顺铂(20、10.5、2.5、1.251、0.625μg/m L)作用于A549细胞,MTT法测定人参皂苷CK与顺铂单用或联用对A549细胞的抑制率,流式细胞术检测各细胞周期所占百分比及细胞凋亡率;ELISA法检测A549细胞VEGF水平。结果人参皂苷CK和顺铂联用对A549细胞增殖的抑制效应呈浓度依赖关系;两药大剂量(50μg/m L人参皂苷CK+20μg/m L顺铂)联用时合用指数(CI)≈1,为相加效应,小剂量联用(1.562 5μg/m L人参皂苷CK+0.625μg/m L顺铂)时CI>1,为拮抗效应;两药大剂量联用时A549细胞出现明显的凋亡峰,细胞周期被阻滞在G0/G1期,两药联用凋亡率高于单用人参皂苷CK或顺铂(P均<0.05);两药联用时A549细胞培养上清液中的VEGF水平低于单用人参皂苷CK或顺铂(P均<0.05)。结论人参皂苷CK与顺铂大剂量联用对人肺腺癌A549细胞株的抑制效应为相加效应,小剂量联用时为拮抗效应;大剂量联用可明显诱导A549细胞凋亡,其抗肿瘤机制与减少内源性VEGF分泌有关。     

十全大补汤含药血清对A549和A549/DDP细胞株顺铂耐药性及凋亡的影响

目的研究十全大补汤含药血清对人肺腺癌顺铂(DDP)敏感细胞株A549和耐药细胞株A549/DDP耐药性及凋亡的影响。方法将24只SD大鼠随机分为十全大补汤含药血清低剂量组(1.625 g/ml)、中剂量组(3.25 g/ml)、高剂量组(6.5 g/ml)、空白血清组(等体积生理盐水),每天灌胃给药1次,连续7 d后提取血清;MTT法检测各组细胞对DDP的半数抑制浓度(IC50)值,并计算耐药指数;AnnexinⅤ/PI法检测各组细胞的早期凋亡率。结果 A549细胞中,中、高剂量组IC50值均较空白血清组下降(均P0.01),而中剂量组的IC50值与高剂量组无差别,但较低剂量组显著降低(P0.05);A549/DDP细胞中,低、中、高剂量组的IC50值均较空白血清组下降(均P0.01),而中剂量组IC50值与高剂量组无差别,但较低剂量组显著降低(P0.01);DDP处理A549细胞后,中、高剂量组分别增加细胞的早期凋亡率(P0.05,P0.01),中、高剂量组之间无差别(P0.05),但中剂量组较低剂量组增加细胞的早期凋亡率(P0.05);DDP处理A549/DDP细胞后,低、中、高剂量组均增加细胞的早期凋亡率(P0.05,P0.01),但中、高剂量组之间无差别,而中剂量组较低剂量组增加细胞的早期凋亡率(P0.05)。结论十全大补汤含药血清对A549及A549/DDP细胞均有降低DDP耐药性的协同增效作用,可能与其促进肿瘤细胞凋亡有关;在A549/DDP细胞中十全大补汤含药血清的协同增效作用更强,且中剂量含药血清效率最高、效果最佳。     

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。     

蛋白激酶C抑制剂联合顺铂治疗非小细胞肺癌的实验研究

目的 初步探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂白屈菜红碱(CH)与化疗药物顺铂联合应用在非小细胞肺癌(NSCLC)治疗中的作用及其可能的机制.方法 应用四甲基偶氮唑蓝试验及流式细胞术分别检测CH、顺铂以及CH与顺铂联用对人NSCLC细胞株A549增殖和凋亡的影响.用裸鼠移植瘤实验检测CH、顺铂以及CH与顺铂联用对A549细胞成瘤性的影响.应用人肺腺癌细胞株A549细胞构建裸鼠皮下移植瘤模型,用随机数字表法将24只倚瘤裸鼠分为CH组、顺铂组、CH+顺铂组及生理盐水对照组,每组5只,裸鼠分别腹腔注射CH、顺铂、CH+顺铂和生理盐水(共3周,顺铂及生理盐水每周注射1次,CH每周注射2次),观察移植瘤的生长情况.结果 CH可抑制NSCLC细胞株A549增殖,浓度增加其细胞毒作用亦增强,CH与顺铂联用呈协同或相加作用;CH组、顺铂组及CH+顺铂组A549细胞的凋亡率分别为(5.36±0.70)%、(5.23±0.55)%及(17.28±2.17)%,均高于对照组的(2.75±0.35)%(t=7.88,P＜0.05),CH+顺铂组A549细胞的凋亡率分别高于CH组及顺铂组(t=5.62,P＜0.05);裸鼠移植瘤体内实验结果表明,CH及顺铂均町抑制移植瘤的生长,CH+顺铂组的抑瘤率(80.5%)高于CH组(72.4%)及顺铂(64.3%)组(t=11.34,P＜0.01).结论 CH与顺铂联用对A549细胞及裸鼠移植瘤有显著的协同抗肿瘤作用,其作用机制可能是通过增强对A549细胞增殖的抑制以及诱导其凋亡而实现.     

EZH2抑制剂联合顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨EZH2抑制剂UNC1999联合顺铂对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响。方法传代培养人肺癌A549细胞系,取生长良好的传代细胞分为对照组、联合用药组、顺铂组和UNC1999组。所有组均给予RPMI 1640培养液及10%的胎牛血清培养,对照组不加药液,联合用药组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L UNC1999药液及2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;顺铂组分别加入2.5、5、10、20、40μg/ml顺铂药液;UNC1999组分别加入10、20、40、80、160 nmol/L的UNC1999药液;采用MTT比色法检测各组细胞增殖抑制率中IC50及联合指数(CI)。Western印迹法检测各组相关凋亡蛋白及细胞外调节蛋白激酶(ERK)及p-ERK的表达水平。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果与对照组相比,UNC1999组、顺铂组、联合用药组细胞增殖均受到不同程度抑制(P0.05)。各组细胞增殖抑制作用存在剂量-时间依赖关系,且UNC1999与顺铂存在协同作用。UNC1999组、顺铂组、联合用药组与对照组比较细胞凋亡差异显著(P0.05)。UNC1999组、顺铂组、联合用药组中凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达明显升高,p-ERK蛋白表达明显降低,联合用药组Bcl-2表达低于对照组(P0.05)。结论 EZH2特异性抑制剂UNC199可能通过抑制MAPK-ERK细胞通路起到抑制肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,与顺铂单药或联合均具有协同效应。     

姜黄素抗人肺腺癌A549/DDP细胞增殖及诱导凋亡的作用

目的 研究姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定细胞对顺铂的敏感性和姜黄素对细胞增殖的抑制作用;倒置相差显微镜和荧光显微镜下观察细胞形态学的变化;应用原位末端标记(TUNEL)染色及流式细胞仪检测细胞凋亡情况;以Western blot分析凋亡相关蛋白表达变化.结果 实验中所用的A549/DDP细胞对顺铂耐药,耐药指数为10.82.姜黄素对A549及A549/DDP细胞增殖均有抑制作用,并且呈时间、浓度依赖性(P＜0.05),对两细胞株的半数抑制浓度分别为16.28/μmol/L和18.06μmol/L,差异无统计学意义(P＞0.05).姜黄素处理A549/DDP细胞后,细胞变形、缩小、脱落.Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小、变形,致密浓染,荧光成团块分布.TUNEL法以及流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).Western blot结果显示,随姜黄素浓度的增加,天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶8(cysteinyl aspartate-specific protease-8,caspase-8)p10蛋白水平增加.结论 A549/DDP细胞对姜黄素无抗药性,姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并能诱导细胞凋亡.caspase-8的活化是其中的机制之一.     

辛伐他汀对耐紫杉醇人肺腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨辛伐他汀联合紫杉醇对人肺腺癌耐紫杉醇细胞株增殖的影响。方法用0、10、20、40、80μmol/L的辛伐他汀处理耐紫杉醇A549细胞(A549/Taxol)24、36、48 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测算各组细胞增殖率。用含有20μmol/L的辛伐他汀(辛伐他汀组)、10-7mol/L紫杉醇(紫杉醇组)及20μmol/L的辛伐他汀+10-7mol/L紫杉醇(联合组)培养A549/Taxol细胞,24、48 h后用MTT法测算各组细胞增殖率,24、36、48 h后用流式细胞术检测各组细胞周期。结果辛伐他汀能浓度依赖性(10~40μmol/L)地抑制耐紫杉醇A549/Taxol细胞增殖,而且抑制作用呈时间依赖性(P均<0.05)。相同时点比较联合组细胞增殖抑制率和G1期细胞比例高于辛伐他汀组、紫杉醇组和空白对照组。结论辛伐他汀可抑制A549/Taxol增殖,辛伐他汀联合紫杉醇对A549/Taxol增殖有协同抑制作用。     

VEGFR-1抗体对肺癌A549细胞顺铂药物敏感性的影响

目的观察血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)抗体影响人肺腺癌A549细胞对顺铂(CDDP)的药物敏感性。方法将VEGFR-1抗体与顺铂单独及联合作用于A549细胞,72 h后用MTT法,克隆形成法检验化疗药物的敏感性。结果VEGFR-1抗体(30μmol/L)和顺铂(10μg/mL)联用组抑制A549细胞生长均显著强于VEGFR-1抗体与顺铂单独用药组。结论VEGFR-1抗体能显著增强顺铂抑制人肺癌细胞A549细胞生长的作用,可能是很有潜力化疗增敏剂。     

蒿甲醚粉针剂对裸鼠体内移植人肺腺癌A549的抑制作用

目的探讨蒿甲醚粉针剂对裸鼠体内移植人肺腺癌A549的抑制作用。方法选取雌性裸鼠32只,将其随机分为对照组,低、中、高剂量组,各8只。裸鼠接种人肺腺癌A549细胞24 h后,高剂量组给予蒿甲醚粉针剂120 mg/kg、中剂量组为80 mg/kg、低剂量组为54 mg/kg,对照组给予0.9%氯化钠溶液10 mg/kg,连续给药12 d后处死裸鼠,剖取肿块称质量,计算抑瘤率。结果 4组抑瘤率比较,差异有统计学意义(P0.05),其中高剂量组抑瘤率高于低、中剂量组(P0.05),低、中剂量组抑瘤率比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论裸鼠腹腔连续注射蒿甲醚粉针剂对人肺腺癌A549有抑制作用,随着剂量的增加抑制作用越强。     

红景天联合顺铂协同诱导人肺腺癌耐药细胞的凋亡

目的观察红景天联合顺铂对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的生长抑制和凋亡诱导作用。方法应用MTT法检测红景天、顺铂对A549/DDP细胞的生长抑制并计算IC50,采用Annexin V-FITC试剂盒、流式细胞仪定量检测凋亡率;采用Western印迹法检测各组细胞Caspase-3、聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)表达水平。结果 A549/DDP对顺铂具有一定耐药性;在红景天、顺铂分别作用24 h后,A549/DDP细胞凋亡率为(11.49+1.73)%、(19.87+3.65)%;显著低于联合用药组(34.88+5.62)%(P<0.05)。联合用药组Caspase-3、PARP活化程度高于红景天组、顺铂组。结论联合红景天与顺铂具有协同作用,抑制肺腺癌耐药细胞生长,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,提示红景天在化疗耐药的肺癌治疗中有一定的应用前景。     

厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响

目的探讨厄洛替尼联合Survivin siRNA对人肺腺癌细胞A549增殖的影响。方法选用Survivin siRNA转染和厄洛替尼单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549,作用48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝比色法检测其对细胞增殖的抑制作用,免疫组化法观察Survivin蛋白表达的变化。结果 Survivin siRNA转染和厄洛替尼两者单独或联合应用于人肺腺癌细胞A549作用48 h后,两种因素单独或联合应用都对细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制率分别为（47.68±4.09）%、（60.28±3.23）%、（78.14±4.34）%,较对照组差别有统计学意义（P〈0.01）,并能明显降低细胞内Survivin蛋白的表达水平,联合应用较两者单独应用对细胞增殖的抑制作用更显著（P〈0.01）,对Survivin蛋白表达的抑制作用更强。结论应用siRNA沉默Survivin表达可以提高肺腺癌细胞对厄洛替尼的敏感性。     

非诺贝特联用顺铂对人肺癌A549细胞抑制和凋亡的实验研究

目的探讨过氧化物酶体增殖因子激活受体仪激动剂非诺贝特联用顺铂对体外培养的人肺癌A549细胞增殖和凋广的影响及可能机制。方法采用MTF法分别检测单用非诺贝特、顺铂和非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制情况。采用Hoechest染色观察非诺贝特联用顺铂对肺癌A549细胞的生长抑制作用。流式细胞术检测联合用药对A549细胞的凋亡诱导作用。RT—PCR法检测联合用药对A549细胞中caspase－3、survivinmRNA的表达变化情况。结果非诺贝特对肺癌A549细胞有抑制作用,呈现时间剂量关系。联合用药组作用肺癌A549细胞48h后比单用药组的细胞抑制作用强（P〈0．05）。形态学观察及流式细胞术结果显示联合用药组A549凋亡细胞数目多于单药组,RT—PCR结果提示联合用药组较单用药组上调caspase－3mRNA的表达,下调stirvivin mRNA的表达。结论非诺贝特与顺铂联用可以增强顺铂杀伤肺癌A549细胞作用,其机制可能与上调caspase－3的表达和下调survivin的表达有关。     

补中益气汤与siRNA对肺腺癌A549/DDP细胞耐药逆转作用的比较

目的比较补中益气汤含药血清与siRNA技术(RNA)对人肺腺癌耐顺铂细胞A549/DDP的耐药效果及对多药耐药蛋白P-gp表达的影响。方法制备补中益气汤含药血清,设计并合成针对P-gp基因对应序列的siRNA,转染A549/DDP细胞;实验分组为空白对照组、补中益气汤含药血清处理组、siRNA处理组,利用RT-PCR检测P-gp mRNA,Western印迹及免疫细胞化学法检测P-gp蛋白质的表达;MTT法检测A549/DDP细胞耐药逆转效果。结果补中益气汤含药血清和siRNA均能降低P-gp mRNA和蛋白质表达,恢复顺铂敏感性,耐药倍数分别降至2.01、2.73,具有统计学意义(P<0.05)。结论补中益气汤含药血清和siRNA均能有效逆转人肺腺癌耐药细胞A549/DDP的多药耐药。     

HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡诱导作用的机制研究

目的 评价HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡蛋白Caspase 3、8、9以及Bax、Bcl-2mRNA表达的影响,探究HPS-1抗肺肿瘤可能机制.方法 人肺腺癌A549细胞经低、中、高剂量HPS-1处理不同时间后,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术(FCM)法检测各组细胞凋亡率及细胞周期比例,比色法检测各组细胞凋亡蛋白Caspase-3、8、9的表达,RT-PCR法检测各组细胞Bax、Bcl-2 mRNA的表达.结果 MTT结果显示,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的增殖具有明显抑制作用,且具有时间、剂量依赖性;FCM法检测发现,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的凋亡具有促进作用,且与剂量呈正相关;比色法检测各组细胞发现,HPS-1促进凋亡蛋白Caspase-3、8、9的上调,且HPS-1高剂量组凋亡蛋白上调更明显.结论 HPS-1具有抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导其凋亡作用,且该作用可能与HPS-1阻滞细胞周期G1期,上调凋亡蛋白Caspase-3、8、9及Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达有关.     

靶向HER2基因的siRNA联合卡铂对肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的 探讨靶向HER2基因的siRNA联合卡铂对肺腺癌A549细胞的抑制作用.方法 设计并合成3对靶向HER2基因的siRNA(2621组、1724组、1491组),分别转染肺腺癌A549细胞,同时设阴性对照组及空白组.应用实时荧光定量PCR法和免疫组化法检测细胞内HER2 mRNA及其蛋白的表达.应用流式细胞术检测卡铂与HER2 siRNA联合应用时肺癌A549细胞的凋亡率.结果 2621组和1724组HER2 mRNA及蛋白表达均低于1491组和阴性对照组.流式细胞术检查显示,各组间细胞凋亡率比较P＜0.01,HER2 siRNA+卡铂组细胞的凋亡率均高于对应浓度的卡铂组.结论 siRNA能抑制HER2基因在肺癌A549细胞中的表达,并与卡铂协同诱导癌细胞凋亡.     

索拉非尼对人肺腺癌细胞株A549抑制作用的研究

目的探讨索拉非尼（Sorafenib）在体外对人肺腺痛细胞株A549增殖、凋亡的影响。方法采用MTT法检测Sor-afenib对A549细胞增殖抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Sorafenib在1．5～12．20μmol／L浓度范围内能明显抑制A549细胞的增殖,此抑制作用呈时间-剂量依赖效应（P〈0．05）,而不同药物浓度的Sorafenib作用于A549细胞72h,显著增加其凋亡率,呈剂量依赖性,差异有显著性（P〈0．05）。结论Sorafenib能抑制人肺腺癌细胞株A549细胞增殖,呈时间-剂量依赖效应,还能促进A549细胞凋亡,亦呈剂量依赖性。     

健脾解毒方对人结肠癌HCT116/L-OHP裸鼠皮下移植瘤的作用及Caspase3表达的影响

目的:观察中药健脾解毒方对人结肠癌HCT116/奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)裸鼠皮下移植瘤化疗的增效作用,初步探讨其增效的作用机制.方法:建立人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L-OHP裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为空白组、奥沙利铂组、健脾解毒方组、健脾解毒方低剂量联合奥沙利铂组、健脾解毒方高剂量联合奥沙利铂组.治疗中测量肿瘤的长径和短径,根据公式计算瘤体体积,描绘瘤体生长曲线,治疗结束后称取瘤质量,公式计算瘤体抑制率和瘤质量抑制率;免疫组织化学,Western blot技术检测皮下移植瘤Caspase3的表达.结果:健脾解毒方高剂量联合奥沙利铂组的瘤体体积和瘤质量(995.54 mm3±87.26 mm3;0.85g±0.06 g)及健脾解毒方低剂量联合奥沙利铂组的瘤体体积和瘤质量(1318.32 mm3±100.68mm3;1.06 g±0.07 g)明显低于单用健脾解毒方组(1967.83 mm3±178.83 mm3;1.71 g±0.11 g)或奥沙利铂组(1698.46 mm3±147.61 mm3;1.56g±0.12 g),有统计学意义(P<0.05或P<0.01);同时健脾解毒方高剂量联合奥沙利铂组的瘤体抑制率和瘤质量抑制率(55.63%;56.85%)及健脾解毒方低剂量联合奥沙利铂组的瘤体抑制率和瘤质量抑制率(41.25%;46.19%)明显高于单用健脾解毒方组(12.30%;13.20%)或奥沙利铂组(24.31%;20.81%),有统计学意义(P<0.05或P<0.01);健脾解毒方联合奥沙利铂组均可上调裸鼠皮下移植瘤组织Caspase3蛋白的表达有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论:健脾解毒方联合奥沙利铂能抑制裸鼠结肠癌皮下移植瘤的生长,增加奥沙利铂的疗效,其增效的机制是通过上调Caspase3的表达而促进细胞凋亡有关.     

YAP调控肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的机制分析

目的探讨Yse相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其机制。 方法采用MTS检测顺铂对肺腺癌A549细胞以及肺腺癌耐顺铂A549/DDP细胞的50%抑制浓度(IC₅₀)。使用qPCR以及Western blot检测A549和A549/DDP细胞中YAP mRNA以及蛋白的表达。Western blot检测维替泊芬(Verteporfin, VP)处理A549/DDP后YAP蛋白表达变化。将A549/DDP细胞设置为DMSO对照组、顺铂组(DDP组)、维替泊芬组(VP组)、顺铂联合维替泊芬组(DDP+VP组),采用MTS检测0、24和48 h各处理组细胞活力的变化。采用qPCR检测VP处理A549/DDP后干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA表达变化。 结果顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50分别为(4.07±0.03)μg/ml、(23.44±0.98)μg/ml,耐药指数为5.76。A549/DDP细胞中YAP显著高于A549细胞(P<0.05)。VP处理A549/DDP细胞后YAP蛋白表达水平较DMSO组明显降低。DDP+VP组较单独DDP组,其细胞活力在24 h和48 h均明显降低(P<0.05)。qPCR检测发现A549/DDP细胞经VP处理后,干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA均较DMSO组明显降低(P<0.05)。 结论YAP可能参与了肺癌细胞的顺铂耐药。抑制YAP可通过抑制肿瘤干细胞特性,进而发挥逆转耐药的作用。     

RNAi技术对A549细胞survivin基因表达及顺铂敏感性的影响

目的 利用RNA干扰(RNAi)技术沉默抗凋亡基因survivin,观察其对人肺腺癌细胞A549增殖以及顺铂药物敏感性的影响.方法 将靶向survivin的基因片段插入到载体后构建重组质粒,将其导入A549细胞,RT-PCR及免疫荧光法分析转染前后A549细胞survivin mRNA及蛋白的表达情况,MTT法检测转染后A549细胞对顺铂的敏感性变化.结果 成功构建pGenesil1.1-survivin重组质粒.转染重组质粒后,A549细胞survivin mRNA和蛋白的表达明显降低;转染前顺铂对A549细胞的IC50明显高于转染后(P＜0.05).结论 靶向survivin的RNAi表达载体能下调survivin基因表达,增强顺铂对A549细胞的药物敏感性.