丁苯酞通过混合谱系激酶3信号通路对1-甲基-4-苯基-吡啶离子诱导的SH-SY5Y细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨丁苯酞对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞混合谱系激酶3(MLK3)通路的影响,及其对细胞增殖与凋亡的作用机制。方法对数生长期SH-SY5Y细胞分为对照组、MPP+组、丁苯酞组和URMC-099组,对照组正常培养,MPP+组加1 mmol/L MPP+培养24 h,丁苯酞组予10μmol/L丁苯酞预处理3 h后,加入MPP+培养24 h,URMC-099组予200nmol/L MLK3通路特异性抑制剂URMC-099预处理3 h后,加入MPP+培养24 h。倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑蓝比色法检测细胞活性,Annexin-V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342荧光染色法观察凋亡细胞,Western blotting检测MLK3磷酸化蛋白(p-MLK3)、c-Jun氨基末端激酶磷酸化蛋白(p-JNK)和细胞外调节蛋白激酶磷酸化蛋白(p-ERK1/2)的表达。结果 MPP+组细胞存活率低于对照组(P<0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞存活率高于MPP+组(P<0.05);MPP+组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),丁苯酞组和URMC-099组细胞凋亡率低于MPP+组(P<0.05);与对照组相比,MPP+组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量增加(P<0.05),p-ERK1/2蛋白表达量降低(P<0.05);与MPP+组相比,丁苯酞组和URMC-099组p-MLK3、p-JNK蛋白表达量降低(P<0.05),p-ERK1/2蛋白表达量升高(P<0.05)。结论丁苯酞可减少MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,促进细胞增殖,其机制可能是通过抑制MLK3通路,调节下游p-JNK、p-ERK1/2蛋白表达。     

丁苯酞对1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导细胞自噬的影响

目的研究丁苯酞对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的SH-SY5Y细胞自噬相关因子的影响,探讨丁苯酞对帕金森病细胞模型的神经保护作用机制。方法将SH-SY5Y细胞分为空白对照组(A组)、MPP+组(B组)、雷帕霉素预处理+MPP+组(C组)和丁苯酞预处理+MPP+组(D组)。采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞相对存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,Western blotting检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1蛋白表达,RT-PCR检测LC3-Ⅱ/Ⅰ和Beclin 1 m RNA表达。结果 B组SH-SY5Y细胞存活率显著低于A组(t=20.270,P0.001),C组和D组显著高于B组(t8.770,P0.001),且C组和D组间无显著性差异(t=2.270,P=0.064)。与A组相比,B组LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1蛋白和m RNA表达明显增加(t6.647,P0.01);C组和D组明显高于B组(t3.630,P0.01),C组与D组间无显著性差异(t2.238,P≥0.05)。结论丁苯酞可以提高MPP+诱导的SH-SY5Y损伤细胞存活率,其可能通过诱导帕金森病模型细胞自噬,发挥治疗作用。     

MeCP2、TH蛋白在正常SH-SY5Y细胞和帕金森病细胞模型中的表达及其意义研究

目的探讨MeCP2、TH蛋白在正常SH-SY5Y细胞和帕金森病细胞模型中的表达及其意义。方法实验分为3组:空白对照组,未转染;模型对照组;pEGFP-N1-MeCP2组,转染液加入重组pEGFP-N1-MeCP2质粒。除空白对照组外,其余二组均加入6-羟多巴胺(6-OHDA)50.0μmol/L处理24h。用CCK-8法、流式细胞仪检测正常SH-SY5Y细胞、上调MeCP2表达的SH-SY5Y细胞在6-OHDA诱导下细胞活性及细胞凋亡的变化;免疫荧光技术和Western blot法检测各组SH-SY5Y细胞中MeCP2蛋白、TH蛋白表达的变化。结果 CCK-8法检测及流式细胞仪6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞、上调MeCP2的SH-SY5Y细胞中细胞存活和凋亡情况发现,模型对照组与pEGFP-N1-MeCP2组、空白对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05)。双重免疫荧光检测6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞中的MeCP2、TH表达情况发现,模型对照组,6-OHDA(50.0μmol/L)诱导24h,MeCP2和TH的蛋白表达显著下降(P0.05)。Western blot检测上调MeCP2表达后,6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞中的MeCP2、TH表达情况发现,pEGFP-N1-MeCP2组上调组和空白对照组中MeCP2、TH蛋白表达与模型对照组相比,差异具有统计学意义(P0.01)。结论转染pEGFP-N1-MeCP2重组质粒可抑制6-OHDA诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,提高TH的表达,提高细胞存活率。     

乌司他丁预先给药对大鼠海马CA1区缺血-再灌注损伤的干预研究

目的探讨乌司他丁预先给药对大鼠海马CA1区缺血-再灌注损伤的影响及机制。方法采用雄性SD大鼠90只,采用随机数字法分为3组:假手术组(S组)、缺血-再灌注组(I/R组)和乌司他丁预处理组(U组),每组各30只。上述3个实验组按再灌注时间又分为再灌注2 h、6 h、1 d、3 d、7 d五个亚组,每个亚组各6只。采用四动脉结扎法制备全脑缺血-再灌注模型,以原位缺口末端标记(TUNEL)法行海马CA1区的凋亡细胞检测,酶联免疫吸附法测定血清几丁质酶-3样蛋白-1(YKL-40)浓度,免疫组化法分析磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK),并监测细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)在海马CA1区的动态变化。结果三组大鼠间再灌注后各时间点血清YKL-40浓度、海马CA1区的凋亡细胞数目、p-JNK及p-ERK表达的比较,差异均有统计学意义(P均0.05)。进一步两两比较,与S组比较,I/R组各时间点血清YKL-40浓度升高,海马CA1区的凋亡细胞数目、p-JNK及p-ERK的表达均明显增加(P均0.05);与I/R组比较,U组各时间点血清YKL-40浓度及p-ERK的表达显著升高,海马CA1区的凋亡细胞数目、p-JNK的表达均明显减少(P均0.05)。结论乌司他丁预先给药可以减轻大鼠海马缺血-再灌注损伤,其机制可能与增加YKL-40的血清浓度,上调p-ERK和下调p-JNK的表达,减少神经元凋亡有关。     

利拉鲁肽对神经母细胞瘤细胞牵张损伤的神经保护作用

目的探讨胰高血糖素样肽-1类似物利拉鲁肽对神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)牵张损伤的神经保护作用。方法本实验以SH-SY5Y细胞作为研究对象,首先采用MTT实验筛选最适宜的利拉鲁肽处理浓度,然后利用可控性细胞损伤装置(CIC-II)建立细胞牵张损伤模型。将实验分为3组,即对照组、细胞牵张损伤组、利拉鲁肽治疗组(1μM利拉鲁肽处理SH-SY5Y细胞24 h)。乳酸脱氢酶(LDH)法检测各组细胞毒性;蛋白免疫印迹实验检测凋亡相关蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达和Caspase-3的表达水平。结果 MTT实验显示,利拉鲁肽处理SH-SY5Y细胞适宜的保护性浓度为1μM。LDH实验显示,与对照组相比,牵张损伤组LDH漏出量显著增多;与细胞损伤组相比,利拉鲁肽治疗组细胞LDH漏出量明显降低(P0.05);蛋白免疫印迹实验显示:与对照组相比,细胞损伤组Bax表达水平显著增强,Bcl-2表达显著减少,Caspase-3表达明显增高,细胞凋亡百分比显著增高;与细胞损伤组相比,利拉鲁肽治疗组Bax和Caspase-3蛋白表达水平降低(P0.05),Bcl-2表达显著增多(P0.01),细胞凋亡百分比显著降低。结论利拉鲁肽可以减轻细胞损伤引起的LDH释放水平,利拉鲁肽能显著降低损伤细胞的凋亡。利拉鲁肽通过抑制细胞凋亡进而发挥其神经保护作用。     

丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及对MMP-9、TIMP-1及Caspase-3表达的影响

目的探讨丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响以及对基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平的影响。方法将54只KM小鼠随机均分为假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组(20 mg/kg)、丁苯酞中剂量组(40 mg/kg)、丁苯酞高剂量组(80 mg/kg)。模型组和丁苯酞组采用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型假手术组同样手术操作但不进行线栓。观察各组小鼠神经功能损伤、脑梗死、脑水肿、氧化应激、炎性反应、脑组织凋亡情况以及MMP-9、TIMP-1表达水平。结果与假手术组比较,模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞中剂量组、丁苯酞高剂量组小鼠神经功能评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量、细胞凋亡率、伊文思蓝(EB)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Caspase-3、Bax蛋白水平、MMP-9、TIMP-1相对表达量明显升高(P <0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活性、Bcl-2蛋白水平明显降低(P<0.05);与模型比较,丁苯酞低剂量组、丁苯酞中剂量组、丁苯酞高剂量组小鼠神经功能评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量、细胞凋亡率、EB、MDA、NO、TNF-α、Caspase-3、Bax蛋白水平、MMP-9相对表达量明显降低(P<0.05),SOD活性、Bcl-2蛋白水平、TIMP-1相对表达量明显升高(P <0.05),呈剂量依赖性。结论丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注脑损伤有保护作用,可能与调节小鼠脑组织氧化应激、细胞凋亡以及血脑屏障有关。     

右美托米啶对β-淀粉样肽引起的SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的:探讨右美托米啶(dexmedetomidine,Dex)对β-淀粉样肽(amyloid-βpeptide,Aβ)引起的SH-SY5Y细胞(神经母细胞瘤细胞)凋亡的影响作用。方法:体外培养SH-SY5Y细胞,随机分为4组:阴性对照组,不同浓度Aβ25-35组(2.5、5.0、10.0μmol/L组),观察不同浓度的Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的作用。同时进一步观察Dex与Aβ联合应用对SH-SY5Y细胞的作用,实验随机分为5组:阴性对照组,Aβ组(10.0μmol/L Aβ25-35),Aβ+Dex 0.1组(10.0μmol/L Aβ25-35+0.1μmol/L Dex),Aβ+Dex 1.0组(10.0μmol/L Aβ25-35+1.0μmol/LDex)和Aβ+Dex 10.0组(10.0μmol/L Aβ25-35+10.0μmol/L Dex),分别处理24 h后,采用DAPI荧光染色法计数凋亡细胞数,计算凋亡率。结果:Aβ25-35可以促进SH-SY5Y细胞的凋亡,且呈时间和浓度依赖性;而在Aβ25-35中同时加入Dex作用后,细胞凋亡明显受到抑制,细胞凋亡率明显下降(P<0.05),但仍明显高于阴性对照组。结论:Dex可以有效的抑制Aβ25-35引起的SH-SY5Y细胞的凋亡。     

LncRNA JHDM1D-AS1 对MPP+ 诱导的帕金森细胞模型线粒体功能的机制研究

目的 探讨长链非编码RNA (long non-coding RNA, LncRNA) JHDM1D 反义RNA 1( JHDM1D antisense RNA1，JHDM1D-AS1) 对帕金森细胞模型线粒体功能的影响及分子机制。方法 采用1- 甲基-4- 苯基吡啶离子（MPP+）处理 SH-SY5Y 细胞构建帕金森细胞模型，记为MPP+ 组，正常细胞作为对照组（control 组）。将JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA 分别转染至MPP+ 诱导的SH-SY5Y 细胞中，利用RT-PCR 检测JHDM1D-AS1 表达。流式细胞技术分析JHDM1D-AS1 表达对SH-SY5Y 细胞凋亡、线粒体膜电位及活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量的影响。Western blot 实验分析JHDM1D-AS1 表达对沉默调节蛋白1（SIRT1）表达的影响，并利用双荧光素酶报告验证两者的靶向关系。使用SIRT1 激活剂 Resveratrol 对转染JHDM1D-AS1 mimic 的细胞进一步处理，证实JHDM1D-AS1 调控SIRT1 对帕金森细胞线粒体的影响。结果 control 组JHDM1D-AS1 相对表达为0.85±0.21，MPP+ 模型组JHDM1DAS1相对表达为1.25±0.33，较control 组增加，差异有统计学意义（t=62.017，P ＜ 0.05）。转染JHDM1D-AS1 mimic和JHDM1D-AS1 siRNA 序列后，JHDM1D-AS1 相对表达分别为1.63±0.38 和0.72±0.17，与MPP+ 组比较差异有统计学意义（F=112.035，P ＜ 0.05）。MPP+ 组细胞凋亡率为17.64%，JHDM1D-AS1 mimic 和JHDM1D-AS1 siRNA 组细胞凋亡率分别为25.92% 和10.74%，差异有统计学意义（F=49.052，P ＜ 0.05）。MPP+ 组绿色荧光强度为22.20%，JHDM1D-AS1-mimic 和JHDM1D-AS1siRNA 组绿色荧光强度分别为43.97% 和10.65%，差异有统计学意义（F=57.390，P ＜ 0.05）。流式结果显示，MPP+ 组相对荧光强度为27.58%±4.25%，JHDM1D-AS1 mimic 和JHDM1D-AS1 siRNA组相对荧光强度分别为45.10%±6.05% 和14.82%±3.70%，差异有统计学意义（F=25.794，P ＜ 0.05）。Control 组SIRTI 蛋白表达为1.00±0.23，MPP+ 模型组SIRT1 表达下调为0.70±0.27，差异有统计学意义（t=35.740，P ＜ 0.05）。转染JHDM1D-AS1 mimic 和JHDM1D-AS1 siRNA 后，SIRT1 表达分别为0.44±0.16 和1.34±0.22，与MPP+ 组比较差异有统计学意义（F=29.508，P ＜ 0.05）。Target Scan 软件预测，JHDM1D-AS1 与SIRT1 序列存在结合位点，双荧光素酶实验显示，JHDM1D-AS1 过表达可降低WT- SIRT1 荧光素酶活性。JHDM1D-AS1 过表达时线粒体膜电位降低，SIRT1 激活过表达时线粒体膜电位升高，转染 JHDM1D-AS1 mimic 并激活 SIRT1 后线粒体膜电位水平回升。结论 沉默JHDM1D-AS1 表达可抑制MPP+ 诱导的SH-SY5Y 细胞凋亡，其作用机制可能与JHDM1D-AS1 靶向调控SIRT1，进而影响帕金森细胞模型线粒体功能有关。     

miR-188-5p通过靶向调控丝裂原活化蛋白激酶信号通路对大鼠移植肾慢性排斥反应的作用

目的探讨miR-188-5p通过靶向调控丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)信号通路对大鼠移植肾慢性排斥反应的作用。方法 SPF级F344大鼠20只和Lewis大鼠40只,其中以Lewis大鼠供体10只、受体10只进行肾移植为对照组;以F344大鼠20只为供体,Lewis大鼠20只为受体行肾移植建立大鼠慢性排斥反应模型,并分为模型组和过表达组。3组均于术后连续注射环孢素A 1.5 mg/kg 10 d。过表达组术后当天同时注射miR-188-5p高表达慢病毒颗粒0.1 mL,对照组与模型组分别注射等量生理盐水。术后12周观察3组大鼠存活情况,比较3组大鼠肾功能指标;观察3组大鼠移植肾组织病理变化情况,采用慢性移植肾损伤指数评分系统评价移植肾损伤情况;采用反转录PCR法检测移植肾组织miR-188-5p、p38MAPK、细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinase 1/2, ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测p38MAPK、ERK1/2、JNK蛋白及其磷酸化蛋白相对表达量,并比较p-p38MAPK/p38MAPK、(p-ERK1/2)/(ERK1/2)、p-JNK/JNK。结果术后12周3组大鼠均存活。模型组和过表达组血清肌酐水平、24 h尿蛋白定量、慢性移植肾损伤指数评分高于对照组(P0.05),模型组高于过表达组(P0.05)。移植肾组织病理学观察,对照组存在交界性改变,仅少量炎症细胞浸润;模型组慢性排斥反应病理改变明显,过表达组较轻。过表达组移植肾组织miR-188-5p相对表达量(1.90±0.22)高于模型组(0.62±0.18)和对照组(1.02±0.25)(P0.05),对照组高于模型组(P0.05);模型组p38MAPK、ERK1/2、JNK mRNA相对表达量,p-p38MAPK、p38MAPK、p-ERK1/2、ERK1/2、p-JNK蛋白相对表达量及p-p38MAPK/p38MAPK、(p-ERK1/2)/(ERK1/2)、p-JNK/JNK高于过表达组和对照组(P0.05),过表达组高于对照组(P0.05)。结论 miR-188-5p可有效抑制大鼠移植肾慢性排斥反应,其机制可能与靶向调控MAPK信号通路中相关基因的表达及蛋白磷酸化过程有关。     

2类多巴胺受体激活对细胞凋亡的影响及与 MAPK 通路的关系

目的观察2类多巴胺受体（ DR2）激活对乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其与MAPK通路的关系。方法通过原代培养乳鼠心肌细胞缺氧-复氧模拟缺血-再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤模型。心肌细胞随机分为4组：正常对照组（Control,C group）,缺血-再灌注组（I/R group）,10μmol/L Bromocriptine （DR2激动剂）组（Bro group）,10μmol/L Haloperidol（DR2抑制剂）组（Hal group）。 Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况;免疫荧光检测心肌细胞促凋亡因子（ caspase-3、caspase-9）和抑凋亡因子（ Bcl-2）蛋白的表达;Western blot方法检测MAPK通路相关因子p-ERK、p-p38及p-JNK活性变化。结果与Control组相比,I/R组凋亡细胞增加,p-p38、p-JNK、促凋亡因子及抑凋亡因子表达均增加,唯有p-ERK蛋白表达减少;与I/R组比较,Bro可减轻心肌细胞凋亡,下调促凋亡因子的蛋白表达和p-p38、p-JNK的活性,上调抑凋亡因子的蛋白表达和p-ERK活性;Hal则对上述指标影响不明显。结论 DR2的激活可抑制乳鼠心肌细胞凋亡,其机制与MAPK通路相关。     

丁苯酞修饰新型自组装短肽对氧化低密度脂蛋白损伤血管内皮细胞的影响

目的 研究丁苯酞修饰新型自组装短肽（NBP-SAP）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）损伤血管内皮细胞的影响及与信号通路关系。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）并分为NBP-SAP+LY组、NBP-SAP组、oxLDL组和对照组,分别给予NBP-SAP+LY450139+ox-LDL、NBP-SAP+ox-LDL、ox-LDL及对照处理。Realtime-qPCR法检测不同措施处理后HUVECs中血管内皮生长因子（VEGF）/血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)-Notch1/DLL4通路相关基因表达,Western blot法检测VEGF/VEGFR2-Notch1、DLL4通路相关蛋白表达量,CCK-8法、Annexin-V/PI双染法、Transwell法分别检测各组细胞活力、细胞凋亡率及细胞侵袭力等。结果 NBP-SAP组较ox-LDL组48 h细胞活力及细胞侵袭力增强,细胞凋亡率下降（t分别=3.59、2.91、2.44,P均<0.05）,VEGFR-2、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量上调（t分别=12.57、14.49,P均<0.05...     

大鼠癫痫持续状态对海马神经元的损害及腺苷A2A受体阻断剂的保护作用研究

目的研究大鼠癫痫持续状态对海马神经元损伤及腺苷A2A受体阻断剂的保护作用。方法取36只雄性Wistar大鼠,随机分为对照组(正常大鼠)、癫痫组(通过氯化锂-毛果芸香碱构建大鼠癫痫持续状态模型)、干预组(造模前15 min给予0. 05 mg/kg SCH58261,腹腔给药),三组各12只。造模24 h后,观察三组大鼠脑组织海马CA3区神经元病理形态学改变,比较大鼠磷酸化C-Jun N-末端激酶(p-JNK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及p-p38蛋白的表达水平。结果癫痫组造模成功率为91. 67%(11/12),干预组造模成功率为83. 33%(10/12)。对照组脑组织海马CA3区可见大量锥体细胞,且结构致密、排列整齐、结构完整,细胞核内染色质分布均匀,细胞膜边缘清晰可见;癫痫组大鼠脑组织海马CA3区大量神经元明显变性和坏死,大量细胞体积增大、肿胀明显、边缘模糊,细胞核溶解、碎裂、固缩,细胞明显脱失;干预组大鼠脑组织海马CA3区神经元脱失明显少于癫痫组,神经元变性不明显,少数胞质Nissl小体减少。p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白均表达于三组大鼠脑组织海马区,其中癫痫组和干预组p-ERK、p-p38、p-JNK蛋白的表达水平较对照组均显著升高(P 0. 01),干预组p-p38和p-JNK蛋白的表达水平较癫痫组均显著下降(P 0. 01),干预组p-ERK蛋白的表达水平与癫痫组比较,并无显著差异(P0. 05)。结论大鼠癫痫持续状态可导致脑组织海马神经元损伤,给予腺苷A2A受体阻断剂SCH58261腹腔给药可通过阻滞MAPK通路,从而具有保护海马神经元的作用。     

有丝分裂原活化蛋白激酶信号通路介导大鼠星形胶质细胞氧糖剥夺后水通道蛋白4的表达

目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是否介导缺血后大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)的表达。方法分离培养新生Sprague-Dawley大鼠脑星形胶质细胞。第2代细胞分成对照组、氧糖剥夺(OGD)组和阻断组。后两组复制OGD 5 h后复氧模型,12 h后阻断组分别换入含U0126(1μmol/L和10μmol/L,U1组和U10组)、SP600125(1μmol/L和10μmol/L,SP1组和SP10组)和SB203580(1μmol/L和10μmol/L,SB1组和SB10组)的培养液。复氧后0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、8 h和12 h检测OGD组细胞体积,复氧后0.5 h、1 h、1.5 h、8 h和12 h Western blotting法检测OGD组AQP4表达;复氧后24 h,检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blotting法检测各组AQP4,磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和p38MAPK(p-p38 MAPK)表达。结果复氧后1.5 h、2 h、3 h和4 h时,OGD组细胞体积较对照组显著增大(P0.001),OGD组AQP4水平较对照组显著升高(P0.001),并在复氧后1.5 h达到峰值。OGD组p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK、AQP4水平较对照组显著增加(P0.001),阻断组p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK较OGD组显著下降(P0.001),SB10组AQP4较OGD组显著下降(P0.001)。除SP1组、SB1组外,各干预组LDH活性较OGD组显著下降(P0.01),SB10组最低(P0.001)。结论 MAPK信号通路,特别是p38MAPK可介导大鼠星形胶质细胞AQP4蛋白表达,加重细胞坏死。     

丁苯酞注射液对局灶性脑缺血再灌注大鼠的脑保护作用及机制

目的探讨丁苯酞对局灶性脑缺血再灌注大鼠的脑保护机制。方法 160只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组,n=10)、缺血再灌注组(IR组,n=50)、丁苯酞高剂量后处理组(高剂量组,n=50)、丁苯酞中剂量后处理组(中剂量组,n=25)和丁苯酞低剂量后处理组(低剂量组,n=25)。后4组线栓法制作缺血2 h再灌注模型。Sham组术后24 h处死,其他各组分别于再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h处死,5只用于应用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡,免疫组织化学染色法观察沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)及过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的表达。Sham组、IR组及高剂量组另5只用实时荧光定量PCR检测SIRT1及PGC-1α的表达。结果与IR组比较,丁苯酞各剂量组各时间点凋亡细胞数均显著减少(F160.60,P0.001),SIRT1、PGC-1α阳性细胞数显著增多(F87.20,P0.001)。与低、中剂量组比较,高剂量组各时间点凋亡细胞数更少(P0.05),SIRT1、PGC-1α阳性细胞数更多(P0.05),低、中剂量组之间除再灌注6 h外,也有显著性差异(P0.05)。与IR组比较,高剂量组各时间点SIRT1及PGC-1αm RNA表达均明显增多(t4.13,P0.01)。结论丁苯酞能抑制大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡,可能与上调SIRT1及PGC-1α的表达有关。     

重复磁刺激对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞生长和分化的影响

目的 探讨不同参数的重复磁刺激（rMS）对人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞生长和分化的影响。 方法 将不同频率、不同强度和不同脉冲数的rMS作用于体外培养的SH-SY5Y细胞,按照刺激强度设置最大输出强度的15%组、30%组、60%组,按照刺激频率设置0.5 Hz组、1 Hz组、5 Hz组、10 Hz组、20 Hz组,按照脉冲数设置每日800个脉冲组、1600个脉冲组,所有组均rMS干预4 d。应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活力。采用神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP+）诱导SH-SY5Y细胞凋亡,采用全反式维甲酸诱导SH-SY5Y细胞分化,用免疫组化方法观察神经元特异核蛋白表达及表征细胞分化程度。 结果 在rMS对SH-SY5Y细胞增殖的影响方面,0.5 Hz的rMS抑制SH-SY5Y细胞增殖,10 Hz的rMS促进SH-SY5Y细胞增殖。rMS频率为5 Hz时,最大输出强度15%组和30%组的细胞增殖表现为明显加快（P<0.05）。1600个脉冲组的刺激效果优于800个脉冲组的刺激效果,其中10 Hz的rMS对细胞增殖有明显促进作用（P<0.05）。在rMS对SH-SY5Y细胞凋亡的影响方面,在30%最大输出强度下,0.5 Hz组和10 Hz组细胞凋亡被抑制（P<0.05）。在rMS对SH-SY5Y细胞分化的影响方面,0.5 Hz和10 Hz的rMS均能促进SH-SY5Y细胞向神经元分化。 结论 rMS能影响SH-SY5Y细胞增殖,表现为低频抑制、高频促进,且影响程度会随着刺激脉冲数的增多而提高。rMS对MPP+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有保护作用,并能促进全反式维甲酸诱导的SH-SY5Y细胞向神经元分化。     

血小板对人肺癌细胞株A549凋亡的影响及机制初探

目的探讨血小板(PLT)对肺癌细胞株A549的影响及其可能的机制。方法通过流式细胞术检测PLT对A549细胞的凋亡作用;Westernblot检测PLT和A549细胞共培养后A549细胞中ERK1/2、JNK、p-ERK、p-JNK、MMP–2、M M P–9、 B c l–2、 B a x蛋白的表达情况。结果应用流式细胞术的检测结果发现,血小板抑制A 549细胞的凋亡并能阻止化疗药物吉西他滨诱导的A549细胞凋亡。Westernblot结果显示PLT和A549细胞共培养48h后,A549细胞中ERK1/2、JNK、p-E R K、 p-J N K、 M M P-2、 M M P-9、 B c l-2蛋白表达明显增加, B a x蛋白表达明显降低。结论血小板可增加A 549细胞中ERK1/2、JNK、p-ERK、p-JNK磷酸化,增加MMP-2、MMP-9和Bcl-2蛋白的表达;降低Bax蛋白表达,并抑制肺癌细胞株A549的凋亡。血小板可抑制A549细胞的凋亡,且与血小板的浓度呈正相关。     

绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯对酒精诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用研究

目的:体外观察绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对酒精诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用,初步探讨EGCG治疗酒精性痴呆(alcohol-associated dementia,AAD)的可行性。方法:以SH-SY5Y神经元细胞为实验对象,酒精组给予100 mol/L酒精37℃培养24 h,EG CG+酒精组在其培养液中同时加入不同浓度的EG CG(1~100μmol/L)及100 mol/L酒精,37℃培养24 h;另设相同浓度的EGCG对照组(EGCG组)及空白对照组(对照组)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,以Annex in-V APC/7-A AD双染法检测细胞凋亡及光镜下观察细胞形态。结果:MTT结果证实EGCG(25~100μmol/L)作用24 h后可明显促进SH-SY5Y细胞存活,并呈浓度依赖关系(P0.001)。流式检测及细胞形态观察结果证实酒精组细胞凋亡率(21.82%±1.27%),明显高于对照组(4.90%±0.80%)(P0.001)及EGCG组(7.82%±0.68%)(P0.001);EGCG(100μmol/L)+酒精组细胞凋亡率(10.81%±0.31%),明显低于酒精组(P0.001)。结论:EGCG可抑制酒精诱导SHSY5Y细胞凋亡发生并促进细胞存活,提示EGCG对于A AD治疗具有潜在价值。     

NAC对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞Tau蛋白过度磷酸化影响的研究

目的探讨N-乙酰基半胱氨酸(NAC)对β淀粉样蛋白片段25-35(Aβ25-35)诱导SH-SY5Y细胞Tau蛋白过度磷酸化的影响。方法用凝聚态Aβ25-35刺激SH-SY5Y细胞,建立Tau蛋白过度磷酸化的细胞模型。分为空白组、对照组和试验组。空白组为未刺激的细胞,对照组给予20μmol·L~(-1)的Aβ25-35作用6 h,试验组先给予10 mmol·L~(-1)的NAC作用24 h,然后给予20μmol·L~(-1)的Aβ25-35共同作用6 h。通过蛋白免疫印迹法检测CDK 5的两个亚基CDK5和P35/P25的蛋白水平,以及Tau蛋白在Thr 212和Ser396位点的磷酸化水平;采用荧光酶标法检测氧自由基(ROS)。对三组细胞的CDK5和P35/P25的蛋白水平、Thr 212和Ser396位点的磷酸化水平和ROS进行比较。结果三组细胞ROS荧光值比较结果显示,空白组ROS荧光值为231±19,对照组为359±23,试验组为264±32。空白组最低,对照组最高,试验组ROS荧光值明显高于空白组(P0.05),但低于对照组(P0.05)。空白组Tau蛋白在T212和S396磷酸化水平分别为1.03±0.09、1.04±0.05,对照组分别为1.63±0.54、1.72±0.34,试验组分别为1.31±0.09、1.21±0.05,空白组最低,对照组最高,试验组细胞明显高于空白组(P0.05),但低于对照组(P0.05)。空白组CDK5、P35分别为1.00±0.06、1.00±0.18,对照组分别为0.75±0.14、1.12±0.13,试验组分别为0.19±0.21、0.99±0.09。空白组、对照组与试验组CDK5、P35相比较无显著差异(P0.05)。空白组P25水平为1.10±0.16、对照组为1.69±0.20,试验组为1.19±0.03,空白组最低,对照组最高,试验组P25值低于对照组,P25值高于空白组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 NAC可以降低Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞Tau蛋白磷酸化水平。     

丁苯酞注射液对血管性痴呆大鼠海马区生长相关蛋白-43及突触素P38表达的影响

目的:观察丁苯酞注射液对血管性痴呆(VD)模型大鼠海马区生长相关蛋白-43(GAP-43)和突触素P38在mRNA及蛋白表达水平的影响。方法:采用永久性结扎双侧颈总动脉的方法制备模型。80只大鼠随机分为假手术组、VD组、丁苯酞组。Y-型迷宫观测学习记忆能力,RT-PCR和Western Blot检测GAP-43及突触素P38的mRNA和蛋白表达。结果:VD组和丁苯酞组GAP-43 mRNA较假手术组升高(均P<0.05),丁苯酞组较VD组升高更明显(P<0.05);丁苯酞组GAP-43蛋白较假手术组和VD组均升高(均P<0.05),VD组和假手术组相比差异无显著性(P>0.05)。丁苯酞组突触素P38 mRNA较假手术组和VD组上调(均P<0.05),假手术组和VD组相比差异无显著性(P>0.05);VD组和丁苯酞组突触素P38蛋白较假手术组明显下调(均P<0.05),VD组下调更明显(P<0.05)。结论:丁苯酞注射液能提高VD大鼠海马区突触素P38及GAP-43基因及其蛋白的表达,从而改善其认知功能。     

木犀草素对博来霉素诱导的肺上皮细胞增殖、凋亡及Hippo/Yes相关蛋白通路的影响

目的 探究木犀草素(Lut)对博来霉素(BLM)诱导的人肺正常上皮细胞(BEAS-2B细胞)增殖、凋亡及Hippo/Yes相关蛋白(YAP)通路的影响.方法 体外培养BEAS-2B细胞,使用4、8、12、24 μg/mL BLM诱导12、24、48 h,筛选BLM诱导浓度和时间.将BEAS-2B细胞分为对照组、BLM组以及Lut低、中、高浓度组.各组细胞培养24 h后,倒置显微镜观察细胞形态学变化;采用CCK-8法检测细胞增殖能力;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Hippo/YAP通路相关蛋白-哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)、大肿瘤抑制因子1(LAST1)和YAP磷酸化水平.结果 BLM诱导24 h后BEAS-2B细胞的半数抑制浓度(IC50)约为8μg/mL,所以本研究选取8μg/mL BLM诱导细胞24 h.与对照组相比,BLM组细胞较小,边缘不规则,细胞间隙增加,细胞增殖能力、MST1、LAST1和YAP蛋白磷酸化水平显著降低(P＜0.05),凋亡率显著升高(P＜0.05);与BLM组相比,Lut低、中、高浓度组细胞形态趋于正常,细胞增殖能力、MST1、LAST1和YAP磷酸化水平依次升高(P＜0.05),凋亡率依次降低(P＜0.05).结论 Lut可能通过激活BEAS-2B细胞中Hippo/YAP信号通路,提高BLM诱导后细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡.