槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响

目的研究槐耳清膏对人肺腺癌A549细胞增殖及周期的影响。方法制备浓度为0、3、6、9 mg/ml的槐耳清膏与人肺腺癌A549细胞作用后,采用流式细胞检测观察细胞凋亡率,并分析药物干预36 h对细胞周期和细胞凋亡率的影响。结果流式细胞术检测结果显示,槐耳清膏各浓度组均可发生细胞凋亡,与对照组相比差异显著(P0.05)。各浓度组可使人肺腺癌A549细胞G0/G1、S期细胞比例减少,G2/M期细胞比例增多。结论槐耳清膏能诱导人肺腺癌A549细胞增殖,可能与细胞被阻滞于G2/M期有关。     

槐耳清膏对A549细胞增殖和自噬的影响

目的 观察槐耳清膏对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖和自噬的影响,探讨其作用机制.方法 以A549细胞为研究对象,采用CCK-8法检测槐耳清膏对A549的增殖抑制率,用Western blot 方法检测自噬相关蛋白P62、LC3B表达的变化和mTOR信号通路分子表达的变化.结果 0.5 g/L及以上的槐耳清膏可明显抑制A549细胞的增殖,并且具有时间和浓度依赖性(P＜0.05).用不同浓度(1、2、4、6、8 g/L)的槐耳清膏作用A549细胞48 h可以降低P62表达水平,增加LC3B的表达,降低mTOR信号通路关键分子的表达水平.联合使用自噬抑制剂3-MA可以加强槐耳清膏对A549细胞的增殖抑制率.结论 槐耳清膏通过下调mTOR信号通路抑制A549细胞增殖,并且诱导A549发生自噬.联合使用槐耳和自噬抑制剂可能会更有效发挥槐耳抗肿瘤增殖的作用.     

槐耳清膏诱导人肺腺癌细胞A549凋亡的实验研究

槐耳清膏是药用真菌槐耳菌质的热水提取物 ,临床上证实有一定的抗癌效果。为进一步探讨其抗癌机制 ,我们研究了槐耳清膏在体外诱导人肺腺癌细胞系Ａ5 49凋亡的作用。材料与方法　引进并培养人肺腺癌细胞系Ａ5 49细胞株。制备不同浓度的槐耳清膏ＰＲＭＩ 16 40含药培养液与接种成功、呈对数生长的Ａ5 49细胞共同培养 2 4ｈ后 ,每 6ｈ进行以下观察及测定 (设阳性对照组羟基喜树碱 10 0 μｇ/ｍｌ,共同孵育 10～ 12ｈ后进行测定 ) [1] 。 (1)荧光染色 :收集培养细胞 ,清洗并均匀涂片自然风干 2 4ｈ ,置于 0 0 5ｍｇ/Ｌ的Ｈｏｅｃｈｓｔ332 5 8…     

大蒜素对人肺腺癌细胞生长抑制作用的实验研究

目的研究大蒜素对人肺腺癌A549细胞增殖抑制、细胞凋亡的影响。方法用不同浓度大蒜素作用体外培养的A549细胞,采用CCK8法检测大蒜素对A549细胞增殖抑制能力,荧光显微镜观察A549细胞形态学变化,ELISA法测定A549细胞上清液VEGF水平,比色法检测caspase3、caspase9活性变化。结果大蒜素对A549细胞增殖有明显抑制作用,并呈时间及浓度依赖性;24 h、48 h及72 h大蒜素对A549细胞的IC50分别为114.26μg/ml、85.27μg/ml、76.83μg/ml(P<0.05);60μg/ml以上大蒜素作用A549细胞48h可产生显著凋亡特征;随大蒜素浓度增加,A549细胞上清液VEGF水平呈下降趋势,A549细胞caspase3、caspase9蛋白活性显著增加。结论大蒜素能显著抑制A549细胞增殖、诱导其凋亡,可能与VEGF表达下降及caspase3、caspase9激活相关。     

姜黄素诱导A549细胞凋亡过程中活性氧水平和caspase-3活性的变化

目的 探讨姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的发生机制.方法 采用MTT法检测姜黄素对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察姜黄素对A549细胞凋亡的影响; DCFH-DA为细胞内活性氧(ROS)探针,激光共聚焦扫描显微镜检测姜黄素对A549细胞ROS水平的影响,分光光度法测定姜黄素对A549细胞内caspase-3活性的影响.结果 不同浓度的姜黄素作用12、24、36、48 h后均可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其发生凋亡作用;激光共聚焦扫描显微镜下观察姜黄素作用后细胞ROS明显上升,细胞内caspase-3活性增强.结论 姜黄素对人肺腺癌A549细胞有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,对细胞ROS和caspase-3活性的影响在其诱导A549细胞凋亡中发挥作用.     

羟基喜树碱对人肝癌细胞增殖影响及凋亡诱导

目的 探讨羟基喜树碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及其诱导凋亡的作用。方法 以不同浓度的羟基喜树碱在体外作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用MTT法检测细胞增殖;化学荧光法检测Bcl-2的细胞表达;电镜观察、流式细胞仪与原位末端标记方法检测细胞凋亡情况。结果 与空白对照组比较,羟基喜树碱浓度在3.125μg/mL～100μg/mL组,对肿瘤细胞的增殖抑制率显著增高(P<0.01);在0.05mg/mL组出现细胞早期凋亡现象,Bcl-2表达明显减少;在0.1mg/mL组形成凋亡小体;细胞凋亡比例随羟基喜树碱浓度增加而增高。结论 羟基喜树碱在体外可抑制人肝癌细胞株SMMC-7721增殖,其作用机制可能系通过抑制Bcl-2表达诱导细胞凋亡。     

不同浓度肿瘤坏死因子-α对肺腺癌A549细胞的影响

目的 观察不同浓度肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对肺腺癌A549细胞产生的保护、促炎、促细胞凋亡效应.方法 分别以0、1、10、25、50 ng/mL的TNF-α诱导肺腺癌A549细胞6h.采用MTT比色法观察细胞存活率;应用活性氧(ROS)荧光探针DCFH-DA检测ROS强度;RT-PCR法检测Nrf-2、NF-κB基因的表达;DAPI细胞核荧光染色法处理细胞,荧光显微镜下观察细胞凋亡.结果 0、1、10、25、50 ng/mL TNF-α对肺腺癌A549细胞存活率无影响(P均＞0.05);100 ng/mL TNF-α诱导后,与对照组比较,细胞存活率降低(P＜0.05).随着TNF-α浓度增加,肺腺癌A549细胞产生ROS的量随之增加(P均＜0.05),Nrf-2 mRNA表达减少(P均＜0.05),NF-κB mRNA表达增加(P均＜0.05),细胞凋亡率有上升趋势.结论 不同浓度TNF-α诱导肺腺癌A549细胞可产生保护、促炎、促细胞凋亡等不同细胞效应,且随TNF-α浓度增加,细胞损伤加重;其机制可能与ROS产生的量有关.     

相关基因在苦参碱诱导人肺腺癌细胞凋亡中的表达

目的 探讨苦参碱对肺腺癌细胞凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法 肺腺癌A549细胞进行传代培养后,分别加入30、60、120、240 mg/L的苦参碱,MTT法检测其对A549细胞生长的抑制作用,流式细胞仪检测细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 不同浓度的苦参碱对肺腺癌细胞生长均有抑制作用,抑制率与浓度呈正相关.苦参碱可诱导A549细胞凋亡,与作用时间呈正相关.苦参碱能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.01),而显著升高Bax蛋白表达水平.结论 Bcl-2基因表达降低、Bax基因表达增高可能在苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡中起重要作用.     

槐耳清膏对结肠癌细胞生长和迁移的影响及其作用机制

目的中药槐耳清膏具有抗肿瘤效应,但其对结肠癌的作用及机制尚不清楚。本研究旨在探讨槐耳清膏对人结肠癌细胞生长和迁移的影响及作用机制。 方法体外培养人结肠癌细胞系HCT116,采用MTT法检测槐耳清膏对肿瘤细胞生长的抑制作用;采用Boyden趋化小室检测槐耳清膏对肿瘤细胞迁移能力的影响;采用荧光定量PCR法检测药物对MMP-9表达的影响;应用流式细胞技术检测药物对细胞凋亡和细胞周期的影响。 结果槐耳清膏对HCT116细胞生长有明显的抑制作用,该抑制作用具有药物剂量和时间依赖性。与细胞共培养96小时后,槐耳淸膏的抑制作用最强;与对照组相比,10 mg/mL、20 mg/mL和30 mg/mL槐耳淸膏对肿瘤细胞的抑制作用分别为25%(P＝0.025),42%(P＝0.032)和67%(P＝0.018)。槐耳清膏能明显抑制肿瘤细胞的迁移,11 mg/mL药物的抑制率为63%(P＝0.01);槐耳清膏(8mg/mL和11mg/mL)处理后的肿瘤细胞中MMP-9的表达量下降(2.73±0.32 vs 4.8±0.36,P＝0.02;1.46±0.25 vs 4.8±0.36,P＝0.004);槐耳清膏可阻滞细胞停留在S期,但对细胞凋亡无明显影响。 结论体外试验证实槐耳清膏对结肠癌细胞的生长及迁移能力具有抑制作用,其作用机制可能是阻滞细胞停留在S期和下调MMP-9的表达。     

红景天联合顺铂协同诱导人肺腺癌耐药细胞的凋亡

目的观察红景天联合顺铂对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的生长抑制和凋亡诱导作用。方法应用MTT法检测红景天、顺铂对A549/DDP细胞的生长抑制并计算IC50,采用Annexin V-FITC试剂盒、流式细胞仪定量检测凋亡率;采用Western印迹法检测各组细胞Caspase-3、聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶(PARP)表达水平。结果 A549/DDP对顺铂具有一定耐药性;在红景天、顺铂分别作用24 h后,A549/DDP细胞凋亡率为(11.49+1.73)%、(19.87+3.65)%;显著低于联合用药组(34.88+5.62)%(P<0.05)。联合用药组Caspase-3、PARP活化程度高于红景天组、顺铂组。结论联合红景天与顺铂具有协同作用,抑制肺腺癌耐药细胞生长,促进肺腺癌耐药细胞凋亡,提示红景天在化疗耐药的肺癌治疗中有一定的应用前景。     

白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制

目的探讨白藜芦醇(Res)诱导肺腺癌A549细胞凋亡的机制。方法用不同浓度Res处理A549细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态学变化,4,6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)细胞核染色后荧光显微镜观察细胞凋亡特征,噻唑蓝(MTT)检测对于A549细胞的抑制生长作用,Western印迹法检测Res作用A549细胞后P53、Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase3蛋白的表达变化。结果 Res处理A549细胞后,细胞间隙变大,细胞核分裂,随着药物浓度的增加上述形态变化明显。25²00μmol/L浓度的Res可明显抑制A549细胞的增殖,具有剂量依赖性,24 h的IC50为100μmol/L,而且细胞内的P53、Bax、Cleaved-Caspase3蛋白表达量升高,Bcl-2蛋白被抑制,Bcl-2/Bax比值下降。结论 Res抑制A549细胞增殖,并通过P53途径诱导A549细胞凋亡,Bax、Bcl-2和Cleaved-Caspase3参与了凋亡过程。     

重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用

目的探讨重楼皂苷Ⅶ对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞增殖的抑制作用。方法 MTT法测定重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响。结果重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P<0.05)。同时发现,重楼皂苷Ⅶ对A549/DDP细胞作用48 h及72 h组与24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P<0.05),但72 h组与48 h组比较,无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪分析显示,浓度为50μmol/L及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用A549/DDP细胞24 h后,与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高;且对细胞周期时相分布影响明显,细胞阻滞G2期。结论重楼皂苷Ⅶ对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖具有明显抑制作用,并呈明显的浓度依赖性,与时间有一定相关性。重楼皂苷Ⅶ可引起早期凋亡细胞比例明显增加,并明显影响A549/DDP细胞周期时相分布。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂促进肺腺癌A549细胞株凋亡机理的研究

收集2×106个A 549肺腺癌细胞,以含10%胎牛血清培养后,随机分为观察组及对照组各1×106个细胞,观察组分别加入0.1、0.2、0.5μm o l/L浓度的曲古抑菌素A(TSA),对照组不予处理。观察两组A 549细胞凋亡、细胞周期及caspase-8、caspase-9表达情况。结果观察组A 549细胞凋亡率明显高于对照组,呈现时间、浓度依赖性效应关系,药物作用后72 h,0.5μm o l/L TSA处理的A 549细胞凋亡率最高,达50%;而对照组A 549细胞凋亡率在各时间点均无明显变化。观察组细胞主要积聚在G2/M期,呈浓度依赖性,0.1、0.2、0.5μm o l/L的TSA处理后,细胞积聚在G2/M期的比例分别为23.4、35.8、39.7,与对照组比较P均<0.05。W estern b lot检测证实,TSA诱导了A 549肺腺癌细胞caspase-8、caspase-9裂解活化,随着TSA作用时间延长,其蛋白着色深度逐步升高。证实TSA可诱导A 549细胞株凋亡,其机制可能为触发一种存在于正常细胞的G2检测点功能,引发cas-pase蛋白酶的级联反应。     

铁对人肺腺癌A549细胞凋亡的体外影响

目的了解加铁、去铁对体外培养人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡的影响,探讨铁代谢与肺癌发生发展的关系。方法体外培养人肺腺癌细胞株A549细胞,采用不同浓度的去铁胺(DFO)及三氯化铁(FeCl3)以及生理盐水作用A549细胞,通过观察细胞形态学变化、流式细胞术(FCM)检测、TUNEL三种方法检测细胞凋亡的变化。结果①不同浓度的FeCl3作用于A549细胞后,在同一时间点随浓度升高细胞凋亡率(APO%)呈下降趋势;②不同浓度FeC l3作用于A549细胞后,仅150μmol/L组48 h出现凋亡梯带,其余浓度均无凋亡梯带出现。③流式细胞仪(FCM)检测各组APO%分别为:10μmol/L FeCl3组6.7%,50μmol/L FeCl3组4.7%,100μmol/L FeCl3组2.5%,150μmol/L FeC l3组12.6%。④浓度为100μmol/L DFO作用于A549细胞,6、12、24、48h FCM检测APO%为:5.2%、17.5%、42.9%、56.8%。浓度为10、50、100、150μmol/L 24hAPO%分别为10.4%,26.2%,42.9%,48.3%。结论三氯化铁可抑制A549细胞凋亡,去铁胺可诱导A549细胞凋亡,铁螯合剂可成为一种有效的抗肿瘤药物。     

槐耳清膏抑制结肠癌切除后肿瘤复发机制探讨

目的 探讨槐耳清膏抑制结肠癌肿瘤术后复发的作用及其机制.方法 采用36只4～6周龄BALB/c裸鼠,随机分为槐耳清膏组[槐耳清膏4.5 g/（kg·d）灌胃]、5-FU组（5-FU 150 mg/d灌胃）、空白对照组（生理盐水0.1 mL/d灌胃）,每组各12只.在皮下种植结肠癌细胞SW480构建荷瘤模型,待肿瘤生长3周后,切除初发肿瘤,观察各组药物对肿瘤复发生长及转移的影响.半定量RT-PCR检测复发肿瘤组织VEGF和HIF-1 αmRNA表达水平,Westernblot检测两者蛋白表达水平,采用免疫组织化学对复发肿瘤微血管密度（MVD）检测.结果 槐耳清膏组、5-FU组、空白对照组MVD分别为3.98％、1.65％、6.43％,槐耳清膏组、5-FU组MVD均低于空白对照组（P＜0.01）,5-FU组MVD低于槐耳清膏组（P＜0.05）.槐耳清膏组及5-FU组复发肿瘤中VEGF及HIF-1α mRNA表达水平均低于空白对照组（P＜0.01）.Westernblot检测显示槐耳清膏组及5-FU组VEGF和HIF-1 α的蛋白表达均较空白对照组下降（P＜0.01）,5-FU组复发肿瘤中VEGF和HIF-1α mRNA及蛋白的表达均高于槐耳清膏组（P＜0.05）.结论 槐耳清膏能够降低手术切除结肠癌后肿瘤复发及转移,可能与其抗血管生成作用有关.     

YAP调控肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的机制分析

目的探讨Yse相关蛋白(Yes-associated protein, YAP)对A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其机制。 方法采用MTS检测顺铂对肺腺癌A549细胞以及肺腺癌耐顺铂A549/DDP细胞的50%抑制浓度(IC₅₀)。使用qPCR以及Western blot检测A549和A549/DDP细胞中YAP mRNA以及蛋白的表达。Western blot检测维替泊芬(Verteporfin, VP)处理A549/DDP后YAP蛋白表达变化。将A549/DDP细胞设置为DMSO对照组、顺铂组(DDP组)、维替泊芬组(VP组)、顺铂联合维替泊芬组(DDP+VP组),采用MTS检测0、24和48 h各处理组细胞活力的变化。采用qPCR检测VP处理A549/DDP后干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA表达变化。 结果顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50分别为(4.07±0.03)μg/ml、(23.44±0.98)μg/ml,耐药指数为5.76。A549/DDP细胞中YAP显著高于A549细胞(P<0.05)。VP处理A549/DDP细胞后YAP蛋白表达水平较DMSO组明显降低。DDP+VP组较单独DDP组,其细胞活力在24 h和48 h均明显降低(P<0.05)。qPCR检测发现A549/DDP细胞经VP处理后,干细胞标志物ALDHA1、CD133、OCT4、NANOG、SOX2的mRNA均较DMSO组明显降低(P<0.05)。 结论YAP可能参与了肺癌细胞的顺铂耐药。抑制YAP可通过抑制肿瘤干细胞特性,进而发挥逆转耐药的作用。     

槲皮素通过抑制核因子-κB表达诱导A549细胞凋亡

目的观察槲皮素对人肺腺癌A549细胞核因子(NF)-κB信号通路的影响,探讨其诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞凋亡的作用机制。方法体外培养A549细胞,实验分为槲皮素组(给予终浓度为30μg/ml槲皮素)、顺铂组(给予终浓度为3μg/ml顺铂)及对照组〔给予等体积二甲基亚砜(DMSO)〕。采用ELISA法检测Caspase-3浓度;采用免疫组化荧光染色检测PARP裂解片段阳性细胞荧光强度;采用Western印迹分析检测NF-κB蛋白的相对表达强度。结果槲皮素可明显升高Caspase-3浓度、增强多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)裂解片段阳性细胞荧光强度、抑制NF-κB的表达,与对照组差异显著(P0.05,P0.01)。结论槲皮素可通过抑制NF-κB表达而诱导A549细胞凋亡,可能是其抗NSCLC的机制之一。     

达肝素钠对A549细胞生长状态及细胞周期的影响

目的研究达肝素钠对体外生长的肺腺癌A549细胞活性及细胞周期的影响。方法用6种不同浓度(0、2、10、50、100和500IU/ml)的达肝素钠干预A549细胞的生长,用MTT方法在4个时间点(6、12、24和36h)检测细胞活性;将经过24h普通培养的A549细胞继续在含有50IU/ml达肝素钠的培养液中培育,以正常培育的细胞作为对照组,将两组细胞24h后以PI染液染色,用流式细胞仪检测并分析细胞周期。结果达肝素钠降低A549细胞活性,这种作用表现出时间依赖性和浓度依赖性;达肝素钠主要抑制细胞在G1期。结论达肝素钠对A549细胞活性的降低与对细胞周期的抑制作用有关。     

红花多糖对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨不同浓度的红花多糖(safflower polysaccharide,SPS)对人非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法根据台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线及计算细胞活力;用不同浓度(0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28,2.56mg/m L)的红花多糖处理A549细胞24、48、72h后在倒置显微镜下观察细胞形态学改变;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度(0.04,0.08,0.16,0.32,0.64,1.28,2.56mg/m L)的红花多糖对人非小细胞肺癌细胞体外生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI荧光双标流式细胞术检测细胞凋亡率。结果台盼蓝染色后发现在第2-6天细胞呈对数生长,在第3-5天细胞活力最好;不同浓度SPS处理24,48,72h后,各时间点均以0.64mg/m L的SPS抑制率最高;不同浓度SPS处理48h后,倒置显微镜下A549细胞表现为皱缩、变圆等细胞凋亡性;各浓度组A549细胞的凋亡率增加呈剂量依赖性,而1.28mg/m L组除外。结论红花多糖能明显抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖,诱导A549细胞的凋亡,在SPS浓度为0.64mg/m L最为显著。     

槐耳对人胃癌细胞MGC803增殖和凋亡的影响

[目的]观察中药槐耳对胃癌细胞株MGC803增殖和凋亡的影响.[方法]以不同浓度的槐耳（4、8、16、32、64 mg/ml）分别作用于体外培养的人胃癌细胞MGC803,通过MTT法、划痕实验等检测槐耳对MGC803细胞增殖和迁移的作用,倒置显微镜下观察细胞的形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果]MTT实验显示槐耳可抑制MGC803细胞的生长,呈时间及浓度依赖性;显微镜下可观察到细胞肿胀、破裂、呈坏死状;划痕实验显示,4、8 mg/ml槐耳分别作用MGC803细胞,划痕愈合明显慢于对照组,呈剂量依赖关系;流式细胞仪可检测到MGC803细胞凋亡率明显增加,呈时间及浓度依赖性.[结论]槐耳可抑制人胃癌MGC803细胞的迁移,且能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人胃癌细胞MGC803的生长.