萝卜硫素对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究萝卜硫素对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测萝卜硫素对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞术分析萝卜硫素对SGC-7901细胞周期和凋亡的影响,蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析萝卜硫素对SGC-7901细胞中Notch1、Hes1、Bax及Bcl-2蛋白表达的影响。结果 萝卜硫素能够显著抑制SGC-7901细胞的增殖,促使其凋亡,表现出时间和剂量依赖性,萝卜硫素还能将SGC-7901细胞停留在G_1期;萝卜硫素能显著抑制Notch1、Hes1、Bcl-2蛋白表达,诱导促凋亡蛋白Bax表达,与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 萝卜硫素可以明显诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,可能通过抑制Notch1/Hes1信号通路、降低Bcl-2/Bax比例实现。     

抑制TUBB3基因表达对胃癌细胞增殖 、凋亡 、侵袭和迁移的影响及机制研究

目的探讨抑制3型β微管蛋白(TUBB3)基因的表达对人胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。方法将TUBB3 siRNA和阴性对照分别转染人胃癌SGC-7901细胞,记为TUBB3 siRNA组和阴性对照组(NC组),将未行转染的细胞记为Control组,转染48 h后,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白的表达水平,CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白的表达水平。结果与NC组相比,TUBB3 siRNA组细胞中TUBB3 mRNA和蛋白表达明显下降,细胞增殖能力、侵袭和迁移能力均明显降低,细胞凋亡率明显升高,PNCA和MMP-2蛋白表达明显下降,Cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P均0.05)。Control组与NC组细胞的上述各指标的差异均无统计学意义(P均0.05)。结论抑制TUBB3基因表达能够显著抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移能力,诱导细胞凋亡,其作用机制与调控细胞中PNCA、Cleaved Caspase-3、MMP-2蛋白表达水平有关。     

蒿甲醚在体外及荷瘤小鼠体内条件下抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的机制

目的:探讨蒿甲醚(artemether,ART)在体外以及荷瘤小鼠体内对于人胃癌SGC-7901细胞的杀伤作用及增殖抑制作用及具体机制.方法:采用MTT法检测不同浓度ART在体外环境下对于人胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用,采用流式细胞术对经过不同浓度的A RT处理后的人胃癌S G C-7901细胞进行细胞周期分析,检测凋亡情况.建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,通过计算肿瘤体积和抑瘤率探讨ART在荷瘤裸鼠体内的抗肿瘤作用.利用Western blot方法探讨ART抑制肿瘤细胞生长增殖的具体机制.结果:MTT结果显示,相比于对照组ART对该株肿瘤细胞具有显著的杀伤作用(P0.05),分析应用的A RT变化、作用时间和细胞不良反应变化关系发现,ART对于人胃癌细胞株SGC-7901杀伤作用呈现时间依赖和剂量依赖特性(P0.05);FCM检测结果表明,ART抑制癌细胞增殖的机制主要是在于阻滞细胞周期进程,使其细胞周期停滞于G0/G1期和诱导细胞凋亡;与对照组比较,中、高剂量ART组对人胃癌S G C-7901细胞裸鼠移植瘤的生长抑制效果最明显(P0.05),抑瘤率分别为34.5%和41.0%.Westernblot法检测发现A R T处理后细胞增殖细胞核抗原(proliferating cellnuclearantigen,P C N A)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达量下降,Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associated X protein,Bax)蛋白表达量上升(P0.05).结论:ART对人胃癌细胞株SGC-7901有较明显的细胞毒效应,且具有时间依赖性和剂量依赖性;其抑制作用与阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡有关.ART对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,ART阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡可能与抑制PCNA、Bcl-2蛋白表达,促进Bax蛋白表达相关.     

miR-637靶向ERBB3对胃癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响及分子机制研究

背景研究发现miR-637可抑制结肠癌、甲状腺乳头状癌、胶质瘤等多种肿瘤细胞的侵袭、迁移;其在胃癌(gastric cancer, GC)中下调表达,但对GC细胞迁移、侵袭及凋亡的影响及分子机制尚不清楚.目的探讨miR-637对GC细胞迁移、侵袭及凋亡的影响及其作用机制.方法实验设置miR-NC组、miR-637组、anti-miR-NC组、anti-miR-637组、si-NC组、si-ERBB3组、miR-637+pc DNA3.1组、miR-637+pc DNA3.1-ERBB3组、miR-NC+WT-ERBB3组、miR-NC+MUT-ERBB3组、miR-637+WT-ERBB3组、miR-637+MUT-ERBB3组;q RT-PCR检测miR-637的表达水平;Westernblot检测蛋白表达; Transwell检测细胞迁移、侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果相较于癌旁组织, GC组织中miR-637的表达水平显著降低(P0.05);过表达miR-637和抑制人类表皮生长因子受体3(human epidermal growth factor receptor3,HER3/ERBB3)表达可抑制基质金属蛋白酶2和B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)的表达,促进上皮钙黏蛋白和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein, Bax)的表达;抑制GC细胞SGC-7901迁移、侵袭,促进细胞凋亡.miR-637靶向调控ERBB3的表达,过表达ERBB3能逆转miR-637对GC细胞SGC-7901迁移、侵袭抑制和凋亡促进的作用.结论miR-637可抑制GC细胞SGC-7901迁移、侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与靶向下调ERBB3的表达有关,将可为GC的预防和治疗提供新靶点.     

miR-195-5p靶向HMBOX1调控胃癌细胞增殖迁移侵袭及凋亡的机制

目的探讨miR-195-5p在胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡中的作用与机制。方法运用qRT-PCR法检测正常胃上皮细胞(GES)-1、胃癌细胞N87、 SGC-7901、HGC-27中miR-195-5p、含有1的同源框(HMBOX1)的表达;将miR-NC组(转染miR-NC)、miR-195-5p组(转染miR-195-5p mimics)、si-NC组(转染si-NC)、si-HMBOX1组(转染si-HMBOX1)、miR-195-5p+pcDNA组(共转染miR-195-5p mimics和pcDNA)、miR-195-5p+pcDNA-HMBOX1组(共转染miR-195-5p mimics和pcDNA-HMBOX1)转染至HGC-27;Western印迹检测细胞中HMBOX1、survivin、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Transwell法检测细胞迁移侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果相比于正常胃上皮GES-1细胞,胃癌细胞N87、 SGC-7901、HGC-27中miR-195-5p表达显著降低,HMBOX1表达显著升高;过表达miR-195-5p或敲减HMBOX1均可抑制HGC-27细胞增殖、迁移侵袭及促凋亡,下调survivin、MMP2、MMP9、Bcl-2,上调P21、Bcl-2相关X蛋白(Bax);miR-195-5p可靶向HMBOX1;过表达HMBOX1可恢复miR-195-5p对胃癌细胞的作用。结论 miR-195-5p能抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,机制与靶向HMBOX1相关,将可为胃癌的诊断及治疗提供依据。     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

调控线粒体膜电位青蒿琥酯诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡作用

目的研究青蒿琥酯(Art)抑制胃癌细胞(SGC-7901)生长作用机制,探讨Art调控SGC-7901细胞线粒体膜电位诱导SGC-7901细胞凋亡作用与Art抑制胃癌细胞生长作用关系。方法利用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的Art干预SGC-7901细胞24 h后的细胞凋亡,细胞线粒体膜电位及细胞中B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、B细胞淋巴瘤2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平。选取Art的浓度为30、60、120μmol/L。对照组使用生理盐水代替Art。结果 FCM检测结果显示,Art组SGC-7901细胞凋亡率显著高于对照组(均P0.05),且Art诱导SGC-7901细胞凋亡作用具有Art剂量依赖性。Art组SGC-7901细胞中Bcl-2蛋白表达水平及细胞线粒体膜电位水平显著低于对照组(P0.05),而SGC-7901细胞中的Bax及Caspase-3蛋白表达量显著高于对照组(均P0.05)。结论 Art具有抑制胃癌SGC-7901细胞生长作用,其作用机制与Art降低SGC-7901细胞线粒体膜电位从而诱导细胞凋亡有关。     

西咪替丁对胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响

目的:观察西咪替丁对人胃癌SGC-7901细胞增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:培养人胃癌SGC-7901细胞,以不同浓度的西咪替丁处理后用MTT法检测SGC-7901细胞的增殖情况;流式细胞术检测癌细胞周期和凋亡;Hoechst33258染色后荧光显微镜观察药物作用后癌细胞的形态变化;透射电镜观察用药后细胞超微结构的改变;Western印记法检测Bcl-2和Bax蛋白表达.结果:以不同浓度的西咪替丁分别处理人胃癌SGC-7901细胞24h和48 h,结果发现,在0.5,1,2.5,5,10 mmol/L时对SGC-7901细胞的增殖具有显著的抑制作用,与对照组相比差异显著(24 h:0.705±0.018,0.560±0.038,0.408±0.029,0.276±0.042,0.205±0.031 vs 0.803±0.012,P<0.05;48 h:0.902±0.024,0.671±0.015,0.420±0.030,0.180±0.037,0.0117±0.021 vs 1.079±0.040,P<0.05),并呈时间和剂量依懒性,而在0.25 mmol/L以下浓度对SGC-7901细胞未见明显细胞毒作用;0.5-10 mmol/L西咪替丁作用后,可观察到典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪检测可见凋亡峰,G0/G1期细胞明显增多(60.83±2.27,67.21±1.18,75.15±4.01,81.88±3.10,86.99±1.43 vs 50.28±1.97,P<0.05);西咪替丁还可下调SGC-7901细胞中的Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达.结论:西咪替丁可改变细胞周期分布,并能通过下调Bcl-2、上调Bax蛋白表达,诱导SGC-7901细胞凋亡,从而抑制细胞增殖.     

Notch1表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的探讨Notch1表达对肾癌细胞生物学行为的影响。方法通过Western印迹检测Notch1在人正常肾小管上皮细胞HK-2,人肾癌细胞786-O,Caki-1,769-P,GRC-1及ACHN中的表达;siRNA Notch1及siRNA NC转染肾癌细胞48 h后,Western印迹及RT-PCR检测转染情况,MTT法及Hoechst染色检测细胞活力及凋亡情况,Transwell法检测细胞迁移侵袭能力,Western印迹检测Bax,Bcl-2,基质金属蛋白酶(MMP)2,MMP9蛋白表达。结果 HK-2细胞中Notch1蛋白表达量显著低于5株肾癌细胞786-O,769-P,GRC-1,Caki-1及ACHN,且在Caki-1中Notch1表达量最高,因此作为后续实验的细胞株。siRNA Notch1及siRNA NC转染肾癌细胞48 h后,与siRNA NC组比较,siRNA Notch1组Notch1蛋白及mRNA表达量下调,细胞活力降低,细胞凋亡率提高,细胞侵袭数目减少,Bax表达量上调,Bcl-2、MMP2及MMP9表达量下调(P<0.01)。结论 Notch1低表达能显著抑制肾癌细胞Caki-1的恶性生物学行为,可能与调控细胞凋亡蛋白及下调MMPs表达有关。     

塞来昔布对幽门螺杆菌感染的胃癌细胞凋亡及炎症反应的影响

目的探讨塞来昔布对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的胃癌细胞凋亡及炎症反应的影响及机制。方法以终浓度为50、75、100μmol/L的塞来昔布作用于H.pylori感染的人胃癌SGC-7901细胞,MTT法检测作用24、48和72 h的细胞增殖;作用48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测PCNA、Bcl-2、Bax和p-AKT3蛋白表达,qRT-PCR检测IL-6、IL-8和miR-145表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-145和AKT3的靶向关系。结果不同浓度塞来昔布均可明显抑制SGC-7901细胞增殖,且呈剂量、时间依赖性(P0.05)。不同浓度塞来昔布均可明显促进细胞凋亡,下调PCNA、Bcl-2、p-AKT3、IL-6和IL-8表达,上调Bax和miR-145表达,呈剂量依赖性(P0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-145和AKT3存在靶向关系。结论塞来昔布可抑制H.pylori感染的胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,降低炎症因子IL-6和IL-8表达,机制可能与塞来昔布引起miR-145表达改变进而调控其靶基因AKT3表达有关。     

表皮生长因子受体基因表达对胃癌分期的影响及诱导胃癌细胞增殖凋亡的机制

目的探讨表皮生长因子受体(EGFR)基因表达对胃癌分期的影响及诱导胃癌细胞增殖凋亡的机制。方法应用免疫组化法检测100例胃癌组织中EGFR基因的表达,分析其与临床病理特征的关系。培养胃癌细胞株SGC-7901,实验分为空白对照组、空载体组、EGFR-siRNA组,3组细胞转染12、24、48、72 h后,CCK8检测EGFR基因对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测EGFR基因对细胞凋亡的影响;Western印迹检测凋亡相关蛋白的表达。结果 100例胃癌组织中,EGFR表达阳性41例,对照组无阳性表达,差异有统计学意义(P<0.01);胃癌分化程度、浸润程度、淋巴转移中EGFR的表达差异显著(P<0.05),TNM分期与EGFR的表达差异极显著(P<0.01);随着时间的延长,3组细胞的增殖率均上升,EGFR-siRNA组增殖较缓慢,24 h的增殖率与空白对照组和空载体组比较显著降低(P<0.05),48 h和72 h的增殖率与空白对照组和空载体组比较显著降低(P<0.01);3组细胞转染48 h后,EGFR-siRNA组细胞的凋亡率显著低于空白对照组和空载体组(P<0.01);空白对照组和空载体组细胞中Bcl-2、Bax、酶切Caspase3 3个蛋白表达均无显著差异(P>0.05),EGFR-siRNA组细胞中Bax、酶切Caspase3蛋白表达显著高于空白对照组和空载体组,Bcl-2蛋白表达显著低于空白对照组和空载体组(P<0.01)。结论 EGFR基因的表达参与胃癌生长、侵袭、转移和分化过程,下调EGFR基因的表达能抑制胃癌细胞株SGC-7901增殖,促进细胞凋亡,凋亡可能与Bcl-2、Bax、Caspase3的调控有关。     

二氢青蒿素体外抑制胃癌细胞的黏附、迁移和侵袭

目的 探讨二氢青蒿素(DHA)对人胃癌SGC7901细胞体外黏附、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法 1.25、2.5、5、10、20 μmoL/LDHA作用体外培养的人胃癌SGC7901细胞24 h后,MTT法检测细胞活力;1.25、2.5、5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h后,细胞黏附分析检测细胞黏附率;细胞划痕实验观察其对细胞迁移能力的影响;Transwell小室侵袭实验观察其对细胞侵袭能力的影响;RT-PCR和Western印迹分别检测ICAM-1、MMP-2、MMP-9、TIMP-2 mRNA和蛋白的表达水平.结果 与对照组相比,1.25、2.5、5μmoL/L DHA对SGC7901细胞增殖没有影响,但显著抑制SGC7901细胞黏附、迁移和侵袭能力,且抑制作用具有剂量依赖性.RT-PCR和Western印迹结果显示,与对照组相比,5 μmol/L DHA作用人胃癌SGC7901细胞24 h,细胞内ICAM-1、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05),TIMP-2 mRNA和蛋白表达显著增加(P＜0.05).结论 DHA可体外抑制胃癌SGC7901细胞的黏附、迁移和侵袭能力,其机制可能与上调TIMP-2的表达,下调ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达有关.     

二甲双胍联合COX-2选择性抑制剂塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡的影响

目的探讨二甲双胍联合环氧化酶-2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对胃癌SGC-7901细胞增殖凋亡的影响及其机制。方法以不同浓度的二甲双胍和塞来昔布处理体外培养的SGC-7901细胞,MTT法检测细胞的存活率。联合实验分为:对照组(未加药)、二甲双胍组(加入浓度为10 mmol/L二甲双胍)、塞来昔布组(加入浓度为100μmol/L塞来昔布)和联合组(加入浓度为10 mmol/L二甲双胍和100μmol/L塞来昔布),药物作用72 h后,采用MTT法检测细胞的存活率,流式细胞仪检测细胞的周期变化和凋亡率,Western blotting检测PCNA、Cyclin D1、Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果二甲双胍和塞来昔布均能够呈时间-剂量依赖性抑制SGC-7901细胞增殖。与对照组相比,各加药组细胞的存活率均明显降低(P0.05),且联合组细胞的存活率明显低于二甲双胍和塞来昔布单药处理组(P0.05)。二甲双胍和塞来昔布均可使SGC-7901细胞在G_0/G_1期所占百分比增加,S期百分比减少(P0.05),但二甲双胍对G_2期细胞无明显影响(P0.05),而塞来昔布可使G_2期细胞所占百分比降低(P0.05);两药联用可增强单药处理组对G_0/G_1期的阻滞(P0.05)。二甲双胍和塞来昔布单药处理组细胞的凋亡率明显高于对照组(P0.05),联合用药后细胞的凋亡率明显高于单药处理组(P0.05)。二甲双胍和塞来昔布均能使SGC-7901细胞中PCNA、Cyclin D1和Bcl-2表达降低,而Bax表达升高(P0.05);联合用药后,细胞中PCNA、Cyclin D1、Bax和Bcl-2的表达变化明显高于二甲双胍和塞来昔布的单药作用(P0.05)。结论二甲双胍和COX-2选择性抑制剂塞来昔布联合作用可协同抑制胃癌SGC-7901细胞增殖,促进细胞凋亡,其作用机制可能与下调PCNA、Cyclin D1、Bcl-2和上调Bax表达有关。     

紫檀芪对胃癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的探讨紫檀芪对胃癌细胞增殖和凋亡的作用及其相关机制。方法 CCK-8法检测胃癌细胞增殖和活性;细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移与侵袭能力;Hoechst 33258荧光染色法和Annexin V-PE/7-AAD双染法流式细胞术检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平的变化;Western blotting检测AIF、Bax、Bcl-2、CytC、Survivin、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、MMP-9和MMP-2蛋白水平。结果与对照组相比,紫檀芪对胃癌细胞增殖有明显的抑制作用(P0.05),呈剂量和时间依赖性,且能显著抑制胃癌细胞的迁移与侵袭(P0.05);Hoechst 33258染色和流式结果显示,紫檀芪明显促进胃癌细胞凋亡(P0.05);紫檀芪诱导细胞内ROS产生(P0.05),增加AIF、Bax、CytC、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达,降低Bcl-2、Survivin、MMP-9和MMP-2的蛋白水平(P0.05)。结论紫檀芪可能通过胞内ROS激活线粒体途径,从而抑制胃癌细胞增殖,诱导胃癌细胞凋亡。     

白毛夏枯草水提取物对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 分析白毛夏枯草水提取物对胃癌BGC823细胞增殖、凋亡的影响。方法 分别采用0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/ml的白毛夏枯草水提取物处理BGC823细胞,未做处理的BGC823细胞作为对照组,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell小室检测细胞迁移、侵袭,Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、凋亡蛋白B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、髓细胞白血病因子(Mcl)-1及剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶(Cleaved Caspase)-3蛋白水平。结果 随着白毛夏枯草水提取物浓度的增加,BGC823细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、Bax及Cleaved Caspase-3蛋白水平依次显著升高,BGC823细胞迁移数、侵袭数、MMP-2、MMP-9、Bcl-2、Mcl-1蛋白水平依次显著下降,均呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 白毛夏枯草水提取物可抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,促进胃癌细胞凋亡。     

大黄素对人胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响与初步机制

目的:探讨大黄素诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡及其相关机制.方法:采用CCK-8法和Tunel染色法检测不同浓度大黄素处理后,SGC-7901细胞凋亡的变化;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax、cleavedCaspase3、cleaved-PARP、pre Caspase3、PARP的蛋白表达水平;JC-1染色荧光显微观察线粒体膜电位的变化.结果:CCK-8法和Tunel染色法显示大黄素呈浓度依赖性促进SGC-7901细胞的凋亡(存活率100.73%±8.97%vs 45.27%±3.75%,P0.05);免疫印迹法显示给予60μm o l/L大黄素处理后,与空白对照组相比,细胞中B c l-2的蛋白表达显著降低(0.31±0.02 v s1.01±0.06,P0.05),而B a x的表达显著增加(1.98±0.12 vs 1.00±0.08,P0.05),导致Bcl-2/Bax比值显著降低(0.14±0.01 vs 1.02±0.13,P0.05);再者,JC-1染色显示线粒体膜电位降低;活性的cleaved-Caspase3(1.73±0.13 vs 0.98±0.06,P0.05)、cleavedPARP(2.29±0.17 vs 1.01±0.08,P0.05)表达增加.结论:大黄素呈浓度依赖性促进SGC-7901细胞的凋亡,其作用机制可能与线粒体途径凋亡有关.     

miRNA-21调控胃癌细胞增殖及侵袭的机制

目的探讨靶向沉默miRNA-21表达对胃癌细胞增殖及侵袭的影响和机制。方法将人胃癌SGC-7901细胞分为正常对照组、转染siRNA Control的阴性对照组和转染siRNA miRNA-21基因的沉默组,按照Invitrogen公司的脂质体Lipofectamine~(TM)2000方法进行转染,48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;Transwell小室检测细胞侵袭能力;Western印迹检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达。结果转染siRNA miRNA-21后能显著降低miRNA-21的表达(P<0.01);与正常对照组及转染阴性组比较,沉默组细胞存活率、细胞侵袭数显著降低,MMP-2、MMP-9、Notch1、Hes1蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论靶向沉默miRNA-21表达能显著降低胃癌细胞的增殖及侵袭能力,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

胃癌细胞多药耐药相关基因的表达与其侵袭转移能力的相关性研究

目的探讨胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的多药耐药相关基因的表达与其侵袭转移能力的关系。方法采用实时荧光定量PCR技术检测胃癌细胞株BGC-823、SGC-7901的多药耐药相关基因(包括ABCB1、MMP2、CDH1、CD44)的mRNA表达水平。采用细胞划痕实验、Transwell迁徙实验评价两株胃癌细胞的侵袭转移能力,进而探讨胃癌细胞多药耐药相关基因的表达与侵袭转移能力的关系。结果荧光定量PCR实验发现胃癌细胞株BGC-823的ABCB1、CDH1、CD44基因表达较SGC-7901高,而MMP2基因的表达在SGC-7901中较高。细胞划痕实验及Transwell迁徙实验显示胃癌细胞株BGC-823的迁徙能力比SGC-7901强。结论胃癌细胞的多药耐药与侵袭转移有一定的关系,CD44的高表达在胃癌细胞的侵袭转移中可能起主要作用。     

siRNA沉默PKM2抑制人胃腺癌SGC-7901细胞增殖能力和糖酵解水平

背景:M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈特异性高表达,与肿瘤的生长和糖酵解水平密切相关,是潜在的治疗靶点。目的:探讨siRNA沉默PKM2对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及糖酵解水平的影响。方法:选择未转染SGC-7901细胞、转染空质粒pU6 SGC-7901细胞以及转染PKM2 siRNA的SGC-7901细胞,采用蛋白质印迹法和Real-time PCR检测PKM2 mRNA和蛋白表达;免疫荧光法检测PKM2在细胞内的表达和分布;CCK-8法、流式细胞分析、细胞迁移和细胞侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭能力;蛋白质印迹法、分光光度法分别检测葡萄糖转运蛋白-1(Glut-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达以及葡萄糖、乳酸浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:与其余两组相比,PKM2 siRNA转染组细胞PKM2 mRNA和蛋白表达明显下降(P0.05),胞内表达明显减弱,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降,细胞凋亡明显增加(P0.05),Glut-1、LDHA蛋白表达明显下降(P0.05),葡萄糖摄取率、乳酸产量、LDH活性明显减低(P0.05)。结论:RNA干扰能抑制胃癌SGC-7901细胞PKM2mRNA和蛋白表达,进而抑制胃癌细胞的增殖能力和糖酵解水平。     

槲寄生多糖调控胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

背景胃癌(gastric cancer, GC)是严重危害人体健康的恶性肿瘤,其发病率和死亡率分别占世界恶性肿瘤的第5位和第3位.中医药治疗能够减轻患者病痛,改善术后复发,槲寄生多糖(viscum coloratum polysaccharide,VCP)是槲寄生抗肿瘤的主要活性成分之一,能够抑制癌细胞增殖并诱导凋亡.目的观察VCP对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响并探讨其潜在作用机制.方法以不同浓度(20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL)VCP干预SGC-7901人GC细胞48h,MTT法检测细胞活力.以100μg/mLVCP干预SGC-7901细胞, Western blot、Transwell小室分别检测细胞中周期蛋白依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent proteinkinases4,CDK4)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)和核转录因子κB p65蛋白表达及细胞迁移和侵袭能力变化.结果不同浓度VCP均可抑制SGC-7901细胞活力(P0.05),呈浓度依赖性. Western blot和Transwell实验结果表明:与对照组相比, 100μg/mLVCP处理的SGC-7901细胞中CDK4、MMP-2、MMP-9、核转录因子-κB(nuclearfactorkappabeta,NF-κB)p65蛋白表达下调(P 0.05),同时视野内迁移和侵袭细胞数明显减少(P 0.05).结论 VCP对SGC-7901人GC细胞增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,其机制可能与NF-κB信号通路及CDK4、MMP-2和MMP-9蛋白有关.