LPS诱导的HepG2细胞NOTCH与LPS-TLR4-NF-κB炎症信号通路的“会话”研究

目的探讨在脂多糖(LPS)刺激下HepG2细胞Notch与LPS-TLR4-NF-κB炎症信号通路的相互影响。方法给予LPS处理HepG2细胞,提取细胞RNA,采用qRT-PCR法检测HepG2细胞Notch信号通路受体及其配体m RNA水平,给予γ分泌酶抑制剂(DAPT)、LPS或LPS联合DAPT处理细胞,采用Western blot法检测Notch受体胞内区域(NICD)和LPS-Toll样受体4(TLR4)蛋白表达水平。结果经LPS处理HepG2细胞后,Notch 1和Jag 1 m RNA水平分别升高了2.25倍(P0.001)和2.47倍(P0.001),NOTCH 3仅增加的0.0700倍(P0.05),Jag 2仅增加了0.420倍(P0.05),Dll 4增加了0.947倍(P0.01),而NOTCH 2却降低了0.857倍(P0.01),NOTCH 4降低了0.283倍(P0.05),Dll 1降低了0.750倍(P0.01)、Dll 3降低了0.393倍(P0.05);与对照组比,LPS处理组NICD和NF-κB蛋白表达水平显著增加,而DAPT处理组NICD和NF-κB蛋白表达显著减少。结论本研究结果揭示了在LPS刺激下,HepG2细胞Notch与TLR4-NF-κB信号通路之间的相互作用,抑制Notch信号通路可以显著改善LPS-TLR4引起的炎症反应。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对人主动脉内皮细胞IL-10和MCP-1表达的影响

目的探讨牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)对人主动脉内皮细胞白细胞介素(IL)-10和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1表达的影响。方法用不同浓度(0、10、100、150 ng/ml)的牙龈卟啉单胞菌脂多糖分别作用于人主动脉内皮细胞。酶联免疫吸附法、聚合酶链反应检测IL-10和MCP-1的表达。结果在一定浓度范围内,牙龈卟啉单胞菌LPS呈剂量依赖性促进人主动脉内皮细胞(HAECs)MCP-1的表达,同时减低IL-10的表达水平。结论牙龈卟啉单胞菌LPS可诱导人主动脉内皮细胞IL-10和MCP-1表达紊乱,从而促进动脉粥样硬化的发生。     

LPS诱导的HepG2细胞NOTCH与LPS-TLR4-NF-κB炎症信号通路的“会话”研究*

目的 探讨在脂多糖（LPS）刺激下HepG2细胞Notch与LPS-TLR4-NF-κB炎症信号通路的相互影响。方法 给予LPS处理HepG2细胞,提取细胞RNA,采用qRT-PCR法检测HepG2细胞Notch信号通路受体及其配体mRNA水平,给予γ分泌酶抑制剂（DAPT）、LPS或LPS联合DAPT处理细胞,采用Western blot法检测Notch受体胞内区域（NICD）和LPS-Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平。结果 经LPS处理HepG2细胞后,Notch 1和Jag 1 mRNA水平分别升高了2.25倍（P<0.001）和2.47倍（P<0.001）,NOTCH 3仅增加的0.0700倍（P>0.05）,Jag 2仅增加了0.420倍（P>0.05）,Dll 4增加了0.947倍（P<0.01）,而NOTCH 2却降低了0.857倍（P<0.01）,NOTCH 4降低了0.283倍（P>0.05）,Dll 1降低了0.750倍（P<0.01）、Dll 3降低了0.393倍（P>0.05）;与对照组比,LPS处理组NICD和NF-κB蛋白表达水平显著增加,而DAPT处理组NICD和NF-κB蛋白表达显著减少。结论 本研究结果揭示了在LPS刺激下,HepG2细胞Notch与TLR4-NF-κB信号通路之间的相互作用,抑制Notch信号通路可以显著改善LPS-TLR4引起的炎症反应。     

姜黄素对脂多糖刺激的肾小管近端上皮细胞分泌的相关炎症因子的影响

目的:本研究旨在观察姜黄素对脂多糖(LPS)刺激下的人肾小管近端上皮细胞分泌的单核细胞趋化因子(MCP-1)及白细胞介素8(IL-8)的表达水平变化,并初步探讨其作用机制. 方法:将肾小管上皮细胞(HK-2细胞)培养于KSF培养液中,设正常对照组给予正常培养液,LPS刺激组(1 ng/ml,100 ng/ml和10μg/ml),姜黄素干预组(LPS 100 ng/ml+姜黄素5 μM或50μM),分别培养4～24h后收集细胞,应用Real-time PCR检测各组细胞MCP.-及IL-8的表达.ELISA检测细胞培养上清液中MCP-1及IL-8的表达. 结果:在不同浓度的LPS刺激HK-2细胞24h后即可明显升高MCP-1及IL-8的mRNA表达水平,随着LPS浓度(1 ng/ml,100 ng/ml和10 μg/ml)增加,MCP-1 mRNA表达分别上升为对照组的1.74、2.15和14.7倍(P<0.01);IL-8 mRNA表达上升为对照组的2.74、5.4和16.45倍(P<0.01).而以100 ng/ml的LPS刺激HK-2细胞4～24h,观察姜黄素的干预作用,可见不同浓度的姜黄素(5μM和50 μM)均可显著抑制LPS所诱导的HK-2细胞MCP-1及IL-8 mRNA的表达,且以50μM姜黄素干预组为明显.同时ELISA检测细胞上清液中MCP-1蛋白水平,可见5μM姜黄素组在24h时较相应对照组下降9.5%(P<0.05),而50 μM姜黄素组在8h时即较相应对照组下降19.5%(P<0.01).而在4h和12h时,5μM的姜黄素干预组较相应对照组IL-8的表达下降的11..2%(P<0.05)和7.58%(P<0.01),在50 μM姜黄素干预组则为32.90%和18.79%(P<0.01). 结论:姜黄素可抑制LPS所诱导的肾小管上皮细胞MCP-1及IL-8的表达,提示姜黄素在肾脏炎症过程中具有抑制肾小管上皮细胞炎症因子分泌及潜在抗纤维化作用.     

TLR4/NF-κB信号通路在ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞分泌MCP-1中的作用

目的:探讨Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路在氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)分泌单核细胞趋化因子-1(MCP-1)中的作用。方法:取SD大鼠胸主动脉中膜培养血管平滑肌细胞,以2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L的TLR4中和抗体(TLR4阻断剂)、5μmol/L、10μmol/L、、20μmol/LPDTC(NF-κB特异性阻断剂)分别进行干预,并分别设置空白对照组和ox-LDL组,观察其对血管平滑肌细胞中ox-LDL诱导的MCP-1表达的影响。结果:与空白对照组比较,ox-LDL组VSMCs MCP-1mRNA及蛋白的表达明显升高(P<0.05);与ox-LDL组比较,用TLR4中和抗体预孵育后Anti-TLR4三组MCP-1mRNA[(1.23±0.21)比(0.81±0.02)、(0.75±0.01)、(0.49±0.01)]及其蛋白的表达[(0.64±0.05)ng/ml比(0.41±0.12)ng/ml、(0.32±0.07)ng/ml、(0.21±0.02)ng/ml]明显降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性;用PDTC预孵育后PDTC三组MCP-1mRNA[(1.37±0.19)比(1.02±0.08)、(0.87±0.01)、(0.56±0.02)]及其蛋白的表达[(0.65±0.07)ng/ml比(0.51±0.07)ng/ml、(0.30±0.08)ng/ml、(0.19±0.02)ng/ml]亦明显降低(P均<0.01),且呈浓度依赖性。结论:氧化性低密度脂蛋白是TLR4的内源性配体;氧化性低密度脂蛋白通过或部分通过TLR4/NF-κB信号通路介导血管平滑肌细胞单核细胞趋化因子-1的表达。     

Notch信号通路在风湿性心脏病炎症相关发病机制中的研究进展

风湿性心脏病是一种以长期、反复发作的风湿性心瓣膜炎导致慢性心瓣膜损害的疾病.炎症在风湿性心脏病的发生和发展中起到了重要作用.通过近年来的研究发现,Notch信号通路与高血压、先天性心脏病如二叶式主动脉瓣、心瓣膜钙化以及室间隔缺损等疾病的发生和发展相关.Notch信号通路与淋巴细胞发育和增殖及炎症过程有密切关系,考虑Notch信号通路在风湿性心脏病的发生和发展中起的重要作用.     

人参皂苷Rb1通过抑制PI3K/AKT信号通路保护脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应

目的探究人参皂苷Rb1在脂多糖(LPS)诱导的H9C2心肌细胞炎症反应中的作用及分子机制。方法建立LPS诱导的H9C2心肌细胞炎症反应模型。在用1μg/ml的LPS诱导H9C2心肌细胞炎症反应前,使用100μM人参皂苷Rb1或1μM PI3K抑制剂Wortmannin预处理1 h,2 h后收集细胞样本。利用q PCR检测白介素-6(IL-6),白介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的m RNA表达水平;用ELISA试剂盒检测细胞上清IL-6,IL-1β,TNF-α的蛋白表达;用WB实验检测p-AKT和AKT的表达水平。结果人参皂苷Rb1显著抑制LPS诱导的IL-6,IL-1β,TNF-α的m RNA(P0.001)和蛋白(P0.001)表达水平;人参皂苷Rb1显著抑制LPS诱导的PI3K/AKT信号通路的激活(P0.001);PI3K抑制剂Wortmannin也能显著抑制LPS诱导的p-AKT表达水平以及IL-6,IL-1β,TNF-α的m RNA(P0.001)和蛋白(P0.001)表达水平。结论人参皂苷Rb1通过抑制PI3K/AKT信号通路阻止LPS诱导的心肌细胞炎症反应。     

西红花酸对RAW264.7巨噬细胞TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用及机制探讨

目的探讨西红花酸对RAW264.7巨噬细胞株TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用及其机制。方法常规培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,设计合成My D88 siRNA,用LPS刺激RAW264.7巨噬细胞,同时用西红花酸和My D88 siRNA进行干预。RT-PCR法测定RAW264.7巨噬细胞IL-6、TNF-α、i NOS、MCP-1和IFN-β水平,Western blotting法测定NF-κB/p65和p-JNK1/2的水平,ELISA法检测IL-6和TNF-α水平。结果西红花酸可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞IL-6、TNF-α、i NOS、MCP-1 mRNA的表达,下调p-JNK1/2和p65蛋白表达水平,降低IL-6、TNF-α的分泌水平;My D88 siRNA可以阻断西红花酸对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞的作用,但西红花酸和My D88 siRNA对LPS刺激IFN-βmRNA表达的阻断作用不明显。结论西红花酸对RAW264.7巨噬细胞的TLR4/NF-κB信号通路的抑制作用可能通过My D88信号通路实现。     

内毒素急性肺损伤TLR4-LPS信号传导对NF-κB活性的影响

目的本文旨通过检测肺组织TLR4、NF-κB表达及支气管肺泡灌洗液炎症因子含量,探讨TLR4/NF-Kb信号在ALI发病中的作用。方法 30只大鼠随机分为对照组、ALI组和干预组。静脉注射LPS构建肺损伤模型,实时定量PCR及western blot检测肺组织TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β浓度。结果肺损伤评分:ALI组TLR4拮抗剂干预组对照组,肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β浓度较对照组分别增加了7倍和3.5倍。ALI组肺组织中TLR4和NF-κB表达明显增加,TLR4拮抗剂能抑制二者表达。结论 TLR4/NF-κB信号通路在脂多糖大鼠急性肺损伤模型的发展过程中起重要作用,TLR-4受体过表达诱导NF-κB活化及其下游炎症因子释放,加重急性肺损伤。     

内毒素急性肺损伤 TLR4-LPS 信号传导对 NF-κB 活性的影响黄继义简

目的 本文旨通过检测肺组织TLR4、NF-κB表达及支气管肺泡灌洗液炎症因子含量,探讨TLR4/NF-Kb信号在ALI发病中的作用.方法 30只大鼠随机分为对照组、ALI组和干预组.静脉注射LPS构建肺损伤模型,实时定量PCR及western blot检测肺组织TLR4、NF-κB表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β浓度.结果 肺损伤评分：ALI组〉TLR4拮抗剂干预组〉对照组,肺泡灌洗液TNF-α、IL-1β浓度较对照组分别增加了7倍和3.5倍.ALI组肺组织中TLR4和NF-κB表达明显增加,TLR4拮抗剂能抑制二者表达.结论 TLR4/NF-κB信号通路在脂多糖大鼠急性肺损伤模型的发展过程中起重要作用,TLR-4受体过表达诱导NF-κB活化及其下游炎症因子释放,加重急性肺损伤.     

血管紧张素(1-7)通过Dll4/TLR-4/NF-κB通路减轻巨噬细胞的炎症反应

目的探讨Notch信号通路在血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]调控动脉粥样硬化(As)炎症反应中的作用。方法诱导人单核细胞白血病细胞株分化为巨噬细胞,然后随机分为对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组、Ang-(1-7)组和Ang-(1-7)+A-779组,以相应药物处理后用ox-LDL刺激建立泡沫细胞模型。利用q RT-PCR和Western blot检测Ang-(1-7)对泡沫细胞分化过程中Notch信号通路分子的影响,包括Notch受体(Notch1、Notch2、Notch3、Notch4)、Notch配体(Dll1、Dll3、Dll4、Jagged1、Jagged2)和目标基因Hes1,ELISA法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。进一步用可溶性Dll4(Dll4. Fc)激活Notch信号通路,用q RTPCR和Western blot检测Hes1和Toll样受体4(TLR-4)/核因子κB(NF-κB)通路的变化进一步验证Ang-(1-7)对Dll4通路的影响。结果给予Ang-(1-7)处理后,由ox-LDL刺激巨噬细胞产生的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α被显著抑制(P0. 05)。同时,在泡沫细胞中Notch信号通路各分子的表达发生了不同的变化。其中Notch信号通路下游靶基因Hes1 m RNA的表达量经ox-LDL刺激后均明显增加,Ang-(1-7)可部分抑制Hes1的激活,Ang-(1-7)受体拮抗剂A-779可逆转Ang-(1-7)的作用。Notch1、Notch2受体及Dll1配体的m RNA表达量在ox-LDL组明显下调,而Ang-(1-7)组明显上调(P0. 05)。而Notch3、Notch4受体及Jagged2、Dll4配体的m RNA表达量在ox-LDL组明显增加(P0. 05),给予Ang-(1-7)干预后,其表达量较ox-LDL组明显下降(P0. 05)。Dll3和Jagged1配体在各组间表达量无明显变化(P0. 05)。Western blot也可见ox-LDL刺激诱导Notch3、Notch4、Dll4和Hes1蛋白明显升高(P0. 05),Ang-(1-7)可明显下调其表达(P0. 05),而A-779能部分抑制Ang-(1-7)的作用(P0. 05)。利用Dll4. Fc激活Notch信号通路可见炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达显著增加(P0. 05),Hes1、TLR-4 m RNA和蛋白,以及i NOS m RNA的表达增高(P0. 05),并促进NF-κB核转位,Ang-(1-7)能明显下调其表达,A-779能部分逆转Ang-(1-7)的作用,差异有统计学差异(P0. 05)。结论 Ang-(1-7)可能通过调节Dll4相关通路,从而减轻TLR-4/NF-κB通路激活所致的巨噬细胞炎症因子分泌的作用。     

白藜芦醇对肿瘤坏死因子α诱导内皮细胞白细胞介素6及基因表达谱的影响

目的观察白藜芦醇对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症因子的影响,并借助基因芯片技术及富集方法分析基因差异性表达情况,探讨白藜芦醇保护内皮功能的可能分子机制。方法应用体外HUVEC原代培养细胞,分别用10μg/L的TNF-α及加入不同浓度白藜芦醇刺激HUVEC后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液的炎症因子白细胞介素6(IL-6)和趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平,改良Boyden室模型评估单核细胞迁移。采用全基因组表达谱芯片筛选白藜芦醇干预HUVEC后的差异表达基因,同时用富集分析方法进行基因本体(GO)、京都基因和基因组学百科全书(KEGG)通路分析可能的分子功能。结果未加任何药物处理的HUVEC产生的IL-6浓度为(165.1±151.4)ng/L,MCP-1浓度为(65.44±12.14)ng/L;10μg/L的TNF-α刺激HUVEC后IL-6浓度为(346.8±86.0)ng/L,MCP-1浓度为(98.82±26.83)ng/L;10μmol/L白藜芦醇干预细胞后IL-6浓度为(183.8±146.7)ng/L,MCP-1浓度为(62.57±19.51)ng/L;20μmol/L白藜芦醇干预后IL-6浓度为(117.0±83.1)ng/L,MCP-1浓度为(55.73±23.34)ng/L;提示白藜芦醇呈浓度依赖性抑制TNF-α刺激HUVEC后的IL-6和MCP-1的水平(P0.05),同时白藜芦醇可明显减少单核细胞向内皮细胞的迁移(10μmol/L白藜芦醇降低了30%,20μmol/L白藜芦醇降低了80%,P0.01)。与单用TNF-α刺激HUVEC相比,白藜芦醇预处理后有1604个基因表达上调,2157个基因下调。GO功能分析提示差异表达基因主要富集在化学物质应激反应、细胞外基质组织、结构组织、心血管系统发育、炎症反应等生物学过程。KEGG通路分析显示磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt),血小板活化信号通路受到影响。结论白藜芦醇可抑制内皮细胞的炎症反应,可能通过多条信号机制影响炎症因子和保护心血管系统。     

利钠肽受体2的缺乏促进小鼠二叶主动脉瓣、主动脉瓣疾病、左心室功能不全以及升主动脉扩张

正主动脉瓣疾病是无有效药物治疗的细胞介导的病变过程。C型利钠肽(C-type natriuretic peptide,CNP)抑制瓣膜间质细胞(valve interstitial cells,VIC)的肌纤维形成和成骨过程,并且在出现主动脉瓣狭窄时水平下调。然而,CNP信号是否调节体内主动脉瓣的健康状态尚不清楚。该研究旨在确定小鼠CNP信号通路的缺失是否导致主动脉瓣疾病加速发展。方法:在培养的猪瓣膜间质细胞中,CNP通过鸟苷酸环     

乌司他丁对内毒素血症大鼠心肌TOLL样受体4表达的影响

目的 观察乌司他丁对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导心肌TOLL样受体4(TLR4)受体表达的影响及与炎症反应的关系.方法 选取8周龄的雄性SD大鼠32只,分成四组:正常对照组,内毒素血症组(LPS组),LPS+乌司他丁组,LPS+地塞米松组.除正常对照组以外,其余三组给予脂多糖8 mg/kg大鼠阴茎静脉注射,LPS+乌司他丁组与LPS+地塞米松组分别同时给予乌司他丁2.5万/kg、地塞米松5 mg/kg;正常对照组给予同量的生理盐水,3h后断头取血并取心肌液氮保存;ELISA法测血浆TNF-α的水平;放免法测定心肌组织中AngⅡ水平;RT-PCR法测定心肌组织TLR4 mRNA表达;免疫组化法和蛋白免疫印迹法测心肌组织TLR4含量.结果 (1)LPS组TNF-α、CRP、IL-6水平和心肌AngⅡ水平显著增高;与LPS组相比,乌司他丁组TNF-α 、CRP、IL-6和心肌AngⅡ显著降低(2)LPS可明显增加心肌中TLR 4 mRNA及蛋白表达,乌司他丁明显抑制心肌TLR4 mRNA及蛋白的表达.结论 乌司他丁能抑制LPS诱导大鼠心肌的炎症反应.乌司他丁能降低LPS诱导大鼠的心肌TLR4 mRNA及蛋白的表达.乌司他丁可能通过降低TLR4水平抑制LPS诱导的炎症反应.     

Notch信号通路介导血小板源生长因子AA诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的探讨Notch信号通路在血小板源生长因子AA(PDGF-AA)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移中的作用及机制。方法脱臼处死1~2月龄雄性SD大鼠,无菌取腹主动脉,剥弃外膜及去除内皮后,贴块法培养VSMC,α-SM-actin染色鉴定。实验分为四组:对照组、γ-secretase抑制剂组(DAPT组)、PDGF-AA组和PDGFAA+γ-secretase抑制剂组(PDGF-AA+DAPT组)。实时荧光定量PCR(Real-time q PCR)检测Notch信号分子mRNA表达;Cell Titer96 Aqueous One Solution试剂盒检测细胞增殖活性;采用细胞划痕实验检测VSMC的迁移能力。结果腹主动脉VSMC表达Notch信号通路Jagged1、Jagged2、Notch1~3等几种主要的配体及受体;PDGF-AA刺激24h和48 h后分别导致Jagged2和Jagged1 mRNA表达显著增强(P0.01,n=4);与0 h相比,PDGF-AA刺激72 h后,Notch1、Notch3 mRNA表达显著增高(P0.01,n=4),而刺激24 h后Notch2 mRNA表达显著降低。PDGF-AA显著促进HES1(P0.05,n=4)、HEY2(P0.05,n=4)和转录因子Rbp-jКmRNA(P0.05,n=4)表达,DAPT抑制PDGF-AA介导的HES1、HEY2 mRNA表达增强(P0.01,n=4),但是进一步促进PDGF-AA诱导的Rbp-jКmRNA表达(P0.05,n=4);PDGF-AA刺激促进VSMC增殖(P0.01,n=5)和减少划痕余留面积(P0.01,n=4),两种效应均可被DAPT显著阻抑(P0.01,n=4)。结论 PDGF-AA调节了VSMC Notch信号分子表达,PDGF-AA部分通过激活Notch信号通路调节VSMC的增殖和迁移。     

白细胞介素17促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨样细胞转化

目的研究白细胞介素17(IL-17)是否促进主动脉瓣膜钙化形成及其可能机制。方法利用体外主动脉瓣膜间质细胞培养技术,瓣膜间质细胞培养传代3⁵次后,采用简单随机抽样法分为两组:(1)对照组,细胞培养基中添加2 ml RPMI-1640完全培养液;(2)实验组,细胞培养基中添加2 ml RPMI-1640完全培养液和IL-17(50 ng/ml)。继续孵育48 h后,用细胞茜素红钙染色检测两组瓣膜间质细胞钙化情况,用Western blot和RT-PCR检测两组瓣膜间质细胞碱性磷酸酶(ALP)及骨形态蛋白2(BMP-2)的表达情况。结果实验组细胞中明显钙结节形成,对照组细胞中少量钙结节形成;与对照组比较,实验组细胞ALP和BMP-2蛋白(0.741±0.063比0.184±0.032;0.900±0.060比0.396±0.030,均为P<0.01)与基因(0.236±0.004比0.106±0.003;0.523±0.052比0.194±0.047,均为P<0.01)表达量均明显升高。结论 IL-17可促进主动脉瓣膜间质细胞向成骨样细胞转化。     

雌激素对绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路的影响

目的观察雌激素对绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞(OP-hBMSCs)Notch信号通路的影响。方法无菌条件下抽取绝经后骨质疏松患者和健康女性骨髓间充质干细胞(hBMSCs),分离培养并传代。通过流式细胞仪分子表型鉴定确定培养的细胞为骨髓间充质干细胞。比较绝经后骨质疏松患者与健康女性骨髓间充质干细胞的生物特征。通过实时定量-聚合酶链式反应(RT-PCR)比较OP-hBMSCs与hBMSCs中Notch信号通路关键分子(Notch1、Jagged1、Hes1)的表达水平。对人骨髓间充质干细胞进行成骨诱导与成脂诱导,观察雌激素对Notch信号通路Notch1,Jagged1、Hes1表达的影响。结果与正常健康女性相比,绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞Notch信号通路减弱(P0.01)。给予雌激素后,可逆转绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞已减弱的Notch信号通路活性,使Notch信号通路下游分子Hes1表达上升近3倍。雌激素促进OP-hBMSCs向成骨分化,抑制成脂分化,Notch信号通路关键分子的表达均明显增高(P0.01)。结论 Notch信号通路在绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞显著减弱。Notch信号通路可能在绝经后骨质疏松症的发生过程中起着重要作用,可能成为雌激素治疗绝经后骨质疏松症的新机制。     

L-精氨酸诱导小鼠急性坏死性胰腺炎肠屏障损伤的实验研究

背景:研究表明,肠屏障功能障碍与急性坏死性胰腺炎(ANP)的发生、发展密切相关。目的:探讨L-精氨酸诱导的ANP小鼠肠屏障损伤及其加重ANP的机制。方法:将30只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(SO组)和ANP组。ANP组小鼠给予腹腔注射8%L-精氨酸(4.5 g/kg)共两次,间隔为1 h; SO组则腹腔注射等体积0.9%NaCl溶液。造模24 h、48 h和72 h后处死小鼠,行HE染色评估胰腺和肠道病理学评分,检测血清淀粉酶、脂肪酶水平,以ELISA法评估炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)和肠道通透性(DAO、D-乳酸、LPS)水平,蛋白质印迹法检测胰腺组织和肠道组织TLR4、MyD88蛋白表达。结果:与SO组相比,ANP组相应时间点胰腺组织和回肠组织病理学评分显著增高(P0.05),血清淀粉酶、脂肪酶、炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)、肠道通透性指标(DAO、D-乳酸、LPS)水平均显著增高(P0.05),胰腺组织和回肠组织TLR4、MyD88蛋白表达显著增高(P0.05)。结论:L-精氨酸诱导的ANP小鼠肠道通透性增加,LPS释放增多,可能通过激活TLR4-My D88信号通路促进肠道、全身炎症反应,进而加重ANP。     

抑制PI3K/AKt信号通路对帕金森病炎症细胞模型反应的影响

目的探讨LY294002(LY)抑制磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKt)信号通路后对帕金森病(PD)细胞模型中炎症反应的影响。方法体外培养小鼠小胶质瘤细胞(BV2),分为对照组、脂多糖(LPS)组、LY+LPS组及LY组。LPS刺激BV2细胞来诱导炎症反应,运用Western印迹检测PI3K/AKt信号通路标志物磷酸化(p)-AKt蛋白表达情况;LY抑制PI3K/AKt信号通路后,运用荧光定量PCR (Q-PCR)检测炎症因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的mRNA的表达情况,Western印迹检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达情况。结果与对照组相比,LPS组p-AKt蛋白表达显著下降(P0.01);与LPS组相比,LY+LPS组p-AKt蛋白下降更明显(P0.01);与对照组相比,LPS组IL-1β、TNF-αmRNA及iNOS蛋白表达均显著升高(均P0.01);与LPS组相比,LY+LPS组中IL-1β和TNF-αmRNA及iNOS蛋白表达均显著下降(均P0.01)。结论 LY抑制PI3K/AKt信号通路对BV2细胞中的LPS诱导的炎症反应有一定的抑制作用。     

生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素诱导抑制性-κBα及细胞因子的影响

目的:探讨生脉散对急性肝衰竭大鼠内毒素(LPS,即大肠杆菌脂多糖)诱导细胞因子水平及大鼠肠道组织抑制性-κBα(I-κBα)蛋白表达的影响.方法:采用D-氨基半乳糖(D-Gal)腹腔注射复制急性肝衰竭大鼠模型,观察LPS诱导2小时及8小时后生脉散对血清内毒素、细胞因子水平及大鼠肠道组织I-κBα蛋白表达的影响.结果:D-Gal能明显增加大鼠血清白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和白细胞介素1β(IL-1β)水平(P＜0.001),随着D-Gal作用时间延长,其增加的趋势明显减弱,但对血清LPS、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平无明显影响(P＞0.05);生脉散能显著降低D-Gal肝衰竭大鼠血清IL-6、ICAM-1和IL-1β水平(P＜0.001,P＜0.05).LPS攻击2小时和8小时,能明显升高D-Gal大鼠血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平(P＜0.001);除在8小时对TNF-α无影响外(P＞0.05),生脉散能明显减轻LPS攻击D-Gal大鼠后对血清LPS、TNF-α、IL-6、ICAM-1和IL-1β水平的影响(P＜0.001,P＜0.05);采用Western blot方法,检测大鼠肠道组织胞浆蛋白I-κBα表达发现,LPS可调节肠道组织I-κBα蛋白表达,诱导NF-κB激活,生脉散可抑制NF-κB激活.结论:在急性肝衰竭模型中,LPS能增加TNF-α、IL-1β、IL-6和ICAM-1等炎症因子水平,诱导I-κBα表达;生脉散可降低LPS水平,并抑制LPS诱导的炎症因子水平和I-κBα在胞浆内的表达,阻断了炎性介质及LPS本身对机体的损伤.