Kiss-1在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌MKN-45细胞增殖、迁移能力的影响

目的探讨肿瘤抑制因子(Kiss)-1在胃腺癌组织中的表达及对胃腺癌细胞增殖、迁移能力的影响。方法 qRT-PCR检测50例胃腺癌组织和对应的癌旁组织中Kiss-1水平。分别将Kiss-1小干扰RNA(siRNA Kiss-1)和对照小RNA(siRNA control)、Kiss-1过表达载体(p EGFP-N1-Kiss-1)和对照空载体(p EGFP-N1)转染至胃腺癌细胞株(MKN-45)中,培养48 h后,Western印迹检测细胞中Kiss-1、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2、β-连环蛋白(β-catenin)、C-myc蛋白水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂FH535作用胃腺癌细胞后,检测细胞增殖和凋亡情况。结果 Kiss-1在胃腺癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01)。p EGFP-N1-Kiss-1组细胞存活率和迁移率显著低于p EGFP-N1组,siRNA Kiss-1组显著高于siRNA control组(P<0.01)。p EGFP-N1-Kiss-1组细胞中MMP-9、MMP-2、β-catenin、C-myc水平显著低于p EGFP-N1组,siRNA Kiss-1组显著高于siRNA control组(P<0.01)。抑制剂作用后的胃腺癌细胞增殖迁移趋势与p EGFP-N1-Kiss-1组一致。结论 Kiss-1在胃腺癌组织中低表达,Kiss-1通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃腺癌细胞增殖迁移能力。     

Wnt信号通路对脑胶质瘤凋亡的影响及其机制

目的初探Wnt信号通路对脑胶质瘤U87细胞凋亡的影响及其机制。方法采用Annexin V-FITC/PI流式细胞仪和Western Blot法检测加入抑制剂LXAV939和不加抑制剂的两组实验的细胞凋亡率及其参与Wnt信号通路的Wnt1和β-catenin蛋白的表达情况。结果经抑制剂LXAV939处理的U87细胞的凋亡率明显大于对照组(P0.05);Wnt1和β-catenin蛋白的表达明显低于对照组(P0.05)。结论 Wnt信号抑制剂LXAV939能诱导脑胶质瘤U87细胞凋亡,其机制可能与下调Wnt1和β-catenin蛋白有关。     

干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探讨干扰Wnt1基因表达对乳腺癌细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用RNA干扰技术下调Wnt1基因表达,实验分为对照组(未做处理的细胞)、shRNA NC组(转染siRNA-NC)、shRNA Wnt1组(转染siRNA-Wnt1)。细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell法检测细胞的侵袭能力,免疫印迹实验(Western印迹)观察细胞中Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素(cyclin)-D1蛋白的表达量。结果转染siRNA-Wnt1到MCF-7细胞后,Wnt1蛋白的表达量受到显著抑制(P0.05);细胞的侵袭、迁移能力受到显著抑制(P0.05);β-catenin、cyclin-D1蛋白的表达下调(P0.05)。结论干扰Wnt1基因表达可以抑制MCF-7细胞的迁移和侵袭,其机制可能与Wnt1/β-catenin信号通路及其下游靶基因cyclin-D1蛋白表达下调有关。     

β连环蛋白在肝硬化大鼠心肌肥厚中的作用机制研究

目的探讨肝硬化大鼠心肌中的β连环蛋白(β-catenin)表达,以阐明β-catenin在肝硬化大鼠心肌肥厚中的作用机制。方法建立肝硬化大鼠模型,通过模型组和对照组比较,免疫组化法检测各组心肌组织中β-catenin表达水平; Western blot检测大鼠心肌中的β-catenin和Wnt诱导的分泌型蛋白1(WISP-1)表达差异。结果模型组体重增长较慢,且小于对照组。免疫组化及Western blot结果显示对照组β-catenin蛋白的表达水平低,肝硬化模型组β-catenin蛋白的表达水平高,二者比较差异有统计学意义(P 0. 01)。结论 Wnt/β-catenin(Wnt/β-连环蛋白)信号通路参与肝硬化所致心肌肥厚的病理过程。     

miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌SGC-7901细胞生物学特性的研究

背景 miR-183在胃癌、乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤组织中低表达,发挥抑癌基因的作用,但其在胃癌中作用机制目前尚不十分清楚.研究表明, miR-183可以通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制骨肉瘤细胞的生长、迁移和侵袭,而Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中高度激活与胃癌的发生和转移密切相关.但miR-183是否调节Wnt/β-catenin信号通路影响胃癌细胞生物学特性尚不清楚.目的探讨miR-183调控Wnt/β-catenin信号通路对胃癌细胞生物学特性的影响.方法采用q RT-PCR检测miR-183在不同胃癌细胞株中的表达情况,在胃癌细胞SGC-7901中转染miR-183mimics或mimics对照,分别设为miR-183组和miR-NC组, qRT-PCR检测转染效率,噻唑蓝增殖实验检测SGC-7901细胞增殖变化,流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡情况, Transwell实验检测SGC-7901细胞侵袭和迁移能力, Western blot法检测凋亡相关及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平.使用Wnt/β-catenin信号通路激动剂氯化锂处理过表达miR-183的SGC-7901细胞,观察SGC-7901细胞生物学特性的变化.结果与正常胃黏膜上皮GES-1细胞相比, 4株胃癌细胞中miR-183的表达水平明显降低(P 0.05).转染miR-183mimics后SGC-7901细胞中miR-183的表达水平显著升高(P0.05).过表达miR-183后SGC-7901细胞OD值降低(P0.05),凋亡率、Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P 0.05),侵袭和迁移细胞数减少(P0.05),β-catenin、p-GSK-3β和Cyclin D1蛋白表达水平下调(P0.05), GSK-3β蛋白表达水平上调(P 0.05).激活Wnt/β-catenin信号通路部分逆转了过表达miR-183对SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用及凋亡促进作用(P0.05).结论miR-183可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路阻碍人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力,促进细胞凋亡.     

慢病毒介导的KIAA1199表达下调对肝癌HuH-7细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的研究慢病毒介导的KIAA1199表达下调对肝癌Hu H-7细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法肝癌Hu H-7细胞感染LV3-KIAA1199 shRNA慢病毒,qRT-PCR和Western blotting测定下调效果,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术测定细胞凋亡。Western blotting检测激活的Caspase-3(C-Caspase-3)、激活的Caspase-9(C-Caspase-9)、β-catenin、C-myc蛋白表达。用Wnt/β-catenin信号通路激活剂Li Cl处理感染LV3-KIAA1199 shRNA慢病毒的肝癌细胞,检测细胞增殖、凋亡变化。结果感染LV3-KIAA1199shRNA慢病毒的肝癌Hu H-7细胞中KIAA1199 mRNA和蛋白水平均下降,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9表达水平升高,β-catenin、C-myc蛋白表达水平下降。Wnt/β-catenin信号通路激活剂Li Cl可以逆转下调KIAA1199对肝癌细胞增殖抑制和凋亡促进作用。结论慢病毒介导的KIAA1199表达下调通过阻断Wnt/β-catenin信号诱导肝癌Hu H-7细胞增殖抑制和凋亡增加。     

Wnt信号通路抑制剂对脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其作用机制研究

目的探究Wnt信号通路抑制剂(IWR-1)对脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用及其作用机制。方法2014年1月—2015年8月,体外培养脑胶质瘤细胞,给予不同浓度IWR-1处理,采用MTT法测定脑胶质瘤细胞增殖情况,并计算其抑制率,其中实验1组终浓度为5μmol/L IWR-1、培养液、细胞悬液,实验2组终浓度为10μmol/L IWR-1、培养液、细胞悬液,对照组添加等量培养液和细胞悬液。采用蛋白质印迹法检测Wnt5a蛋白、β-连锁蛋白表达水平。结果实验1组、实验2组脑胶质瘤细胞增殖抑制率高于对照组,实验2组脑胶质瘤细胞增殖抑制率高于实验1组(P0.05);培养48 h时实验1组、实验2组脑胶质瘤细胞增殖抑制率均高于培养24 h(P0.05);培养48 h与24 h对照组脑胶质瘤细胞增殖抑制率比较,差异无统计学意义(P0.05)。实验1组、实验2组脑胶质瘤细胞中Wnt5a蛋白、β-连锁蛋白表达水平低于对照组,实验2组脑胶质瘤细胞中Wnt5a蛋白、β-连锁蛋白表达水平低于实验1组(P0.05)。结论 IWR-1能有效抑制脑胶质瘤细胞增殖,其作用机制可能与抑制Wnt5a蛋白和β-连锁蛋白的表达有关。     

沉默STC2对人结肠癌SW480细胞肝转移裸鼠模型的影响及作用机制研究

目的基于Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路探讨沉默斯钙素2(STC2)对人结肠癌SW480细胞肝转移裸鼠模型的影响及作用机制。方法将30只SPF级雄性BALB/c裸鼠随机分为3组,即pLL3.7-shSTC2组(沉默STC2,以pLL3.7-shSTC2转染SW480细胞构建),pLL3.7-NC组(阴性对照,以阴性病毒载体转染SW480细胞构建)和pLL3.7-Con组(空白对照,仅以转染试剂处理的SW480细胞),每组各10只。建模3周后处死裸鼠,观察各组裸鼠肝脏标本的转移瘤情况,肝组织行H-E染色后在显微镜下观察各组的病理改变。采用RT-PCR、免疫组织化学法及蛋白质印迹法(Western blotting)检测STC2、上皮间质转化(EMT)及Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达。结果与pLL3.7-NC组、pLL3.7-Con组相比,pLL3.7-shSTC2组的STC2蛋白表达水平明显降低(P0.05)。与pLL3.7-shSTC2组相比,pLL3.7-NC组和pLL3.7-Con组裸鼠的肝脏外形不规则程度、质地脆硬度及转移瘤的直径、数量、瘤体破溃等情况更为严重。Western blotting法检测结果显示,与pLL3.7-Con组、pLL3.7-NC组相比,pLL3.7-shSTC2组肝转移瘤组织中STC2、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、β-catenin、T细胞因子4(TCF-4)、C-myc及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的蛋白表达水平均明显降低(P均0.05),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平明显升高(P0.05)。RT-PCR法检测结果显示,与pLL3.7-Con组、pLL3.7-NC组相比,pLL3.7-shSTC2组肝转移瘤组织中TCF-4、C-myc及Cyclin D1的mRNA表达水平均明显降低(P均0.05)。免疫组织化学染色结果显示,与pLL3.7-Con组、pLL3.7-NC组相比,pLL3.7-shSTC2组肝转移瘤组织中β-catenin表达水平明显降低。结论沉默STC2可通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来减少结肠癌细胞的增殖、侵袭,从而抑制肿瘤肝转移。     

转录因子TEAD4调控WNK1表达介导Wnt/β-catenin信号通路促进结肠癌增殖和迁移

目的 探究转录因子TEA结构域转录因子(TEAD)4通过调控赖氨酸缺乏激酶(WNK)1表达介导Wnt/β-连环蛋白(catenin)信号通路促进结肠癌的增殖和迁移。方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测TEAD4在正常人结肠上皮细胞NCM-460和人结肠癌细胞系SW620、SW480、LOVO、HCT 116中的表达情况。构建低表达TEAD4和WNK1的SW620和LOVO细胞，并通过平板克隆实验和细胞划痕实验评估TEAD4和WNK1对宫颈癌细胞增殖和迁移的影响。通过生物分析找到TEAD4与WNK1启动子之间的结合位点序列，运用染色质免疫沉淀技术(ChIP)-qPCR验证TEAD4与WNK1启动子的结合情况。在沉默TEAD4的细胞中进一步过表达WNK1检测细胞增殖、迁移和Wnt/β-catenin信号通路的变化。结果 TEAD4在结肠癌细胞中显著高表达(P<0.05)。敲低TEAD4显著抑制结肠癌细胞的增殖和迁移(P<0.01)。沉默TEAD4能显著抑制WNK1的表达(P<0.01)。通过抑制Wnt/β-catenin信号通路显著减弱结肠癌细胞的增殖...     

Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

背景:结肠癌为常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均较高。Cullin7定位于染色体6p21. 1,与恶性肿瘤的发生、发展密切相关。目的:探讨Cullin7表达下调对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:采用q RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测结肠癌组织、癌旁组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达。以si RNA沉默Cullin7基因,并转染结肠癌HCT116细胞,q RT-PCR和蛋白质印迹法检测沉默效果。CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。以si RNA Cullin7联合Wnt信号通路抑制剂FH-535处理结肠癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测cleaved caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白表达。结果:结肠癌组织中Cullin7 m RNA和蛋白表达明显高于癌旁正常组织(P 0. 05)。与对照组相比,si RNA Cullin7 1组、si RNA Cullin7 2组、si RNA Cullin7 3组Cullin7 m RNA和蛋白表达均明显降低(P 0. 05),尤其是si RNA Cullin7 2组。与对照组相比,沉默Cullin7表达后,结肠癌细胞增殖活性明显下降,细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。与si RNA Cullin7 2组相比,联合Wnt信号通路抑制剂FH-535后,结肠癌细胞凋亡率明显增加,cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,β-catenin、C-myc蛋白表达明显下调(P 0. 05)。结论:Cullin7基因参与了结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡,沉默Cullin7可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

EZH2抑制剂DZNeP对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响

目的探讨EZH2抑制剂DZNe P对人乳腺癌细胞增殖、凋亡及相关信号通路的影响。方法取对数生长期乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231,经2.5、5、10、20μmol/L DZNe P处理后(设不加DZNe P仅添加完全培养基组为对照组),采用四甲基偶氮唑盐比色法检测各组24、48、72 h的增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组24、48 h的凋亡率,收集20μmol/L DZNe P处理72 h的MCF-7、MDA-MB-231细胞,采用Western印迹检测磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路和Wnt/β-连接素(β-catenin)通路中的蛋白变化。结果 DZNe P在2.5~20μmol/L范围内可抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞增殖,且与对照组相比增殖抑制率升高(P0.05),该抑制效应呈浓度和时间依赖性;与对照组相比,DZNe P处理组的凋亡率均升高(P0.05),DZNe P各浓度处理48 h的凋亡率均高于24 h(P0.05);PI3K/Akt通路中,与对照组相比,20μmol/L DZNe P处理72 h后MCF-7、MDA-MB-231细胞的PTEN水平均升高,Akt水平均降低(P0.05);而在Wnt/β-catenin通路上,20μmol/L DZNe P处理72 h后两细胞株中的β-catenin、Cyclin D1和C-myc水平均降低(P0.05)。结论 DZNe P可抑制人乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,可能与抑制肿瘤恶性行为相关的PI3K/Akt、Wnt/β-catenin通路有关,在乳腺癌治疗上有一定应用前景。     

SOX1过表达抑制食管癌细胞的增殖并促进凋亡的发生

目的 探索SOX1过表达对食管癌细胞增殖及凋亡的作用及其机制。方法 构建SOX1过表达细胞株，检测SOX1 mRNA和蛋白表达，CCK-8检测细胞增殖，细胞划痕及结晶紫染色检测细胞的迁移及克隆形成能力，Hochest染色实验检测细胞凋亡情况，Western blotting检测GSK-3β及Wnt/β-catenin通路相关蛋白表达水平。结果 SOX1过表达组mRNA显著高于对照组(P<0.01)。CCK-8 OD值及增殖曲线绘制表明SOX1过表达组增殖速率显著降低(P<0.05);SOX1过表达组细胞的迁移速率和克隆形成能力明显下降(P<0.05);显微镜下观察到SOX1过表达组细胞的皱缩明显，提示凋亡的发生；Western blotting检测结果表明，SOX1过表达组GSK-3β上调，Wnt信号通路相关基因β-catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论 SOX1通过抑制Wnt/β-catenin信号传导抑制食管癌细胞的增殖和促进凋亡。     

沉默MMP-13对皮肤基底细胞癌细胞侵袭、迁移及Wnt信号通路的影响

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP)-13表达量降低对皮肤基底细胞癌(BCC)细胞侵袭、迁移能力及对Wnt信号通路的影响。方法以人BCC A431细胞为研究对象,转染MMP-13 siRNA载体,实验分3组,对照组:未做任何处理的细胞;MMP-13组:细胞转染空载体pL ightS with-MMP13-NC;MMP13-siRNA组:细胞转染重组质粒pL ightS with-MMP13-siRNA。Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力,Western印迹检测细胞中MMP-13、β-链蛋白(catenin)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)表达量。结果 MMP-13 siRNA组MMP-13蛋白表达量、细胞迁移、侵袭β-catenin、CyclinD1蛋白表达量均显著低于对照组及MMP-13组,E-cadherin蛋白含量显著高于对照组和MMP-13组(均P0.05)。结论沉默MMP-13的表达量可以降低BCC A431细胞的侵袭、迁移能力,其作用机制可能是通过抑制经典Wnt信号通路发挥作用的。     

AnnexinA2-siRNA对甲状腺乳头状癌细胞增殖、侵袭和转移的作用及机制

目的观察siRNA靶向干扰膜联蛋白(Annexin)A2对甲状腺乳头状癌(PTC)K1细胞侵袭、迁移能力的影响,并探讨其可能的相关机制。方法首先利用实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PTC、甲状腺良性肿瘤和正常组织中AnnexinA2 mRNA的表达;采用Western印迹检测细胞中AnnexinA2蛋白的表达水平。实验分为:空白对照组、siRNA-NC组和siRNA-AnnexinA2组;利用脂质体lipofectamine^TM 2000瞬时转染的方法沉默PTCK1细胞中AnnexinA2的表达,采用qRT-PCR和Western印迹验证K1细胞转染的干扰效果;采用噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell小室法分别检测K1细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力的变化,进一步采用qRT-PCR和Western印迹分别检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin和下游因子c-myc、细胞周期蛋白(cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白和mRNA的表达变化。结果小干扰RNA转染成功沉默了K1细胞中AnnexinA2基因的表达;转染成功后,与空白对照组和siRNA-NC组相比,siRNA-AnnexinA2组细胞的增殖活性明显受到抑制(P<0.05);siRNA-AnnexinA2组中细胞的迁移和侵袭能力显著受到抑制(均P<0.05);沉默AnnexinA2基因后明显抑制了β-catenin、c-myc、cyclinD1、MMP-2、MMP-9的表达水平(均P<0.05)。结论AnnexinA2基因的沉默抑制K1细胞的侵袭、转移能力,其机制可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路的活性来实现的,从而为PTC分子生物治疗提供新的靶标。     

茯苓酸通过Wnt信号通路对肾癌细胞生物学特性的影响

目的研究茯苓酸(PA)对人肾癌786-0细胞生物学特性的影响,并探讨其对Wnt信号通路的调控作用。方法以不同浓度的PA处理人肾癌786-0细胞,培养0、24、48、72 h采用噻唑蓝(MTT)法检测肾癌细胞存活率,采用流式细胞术检测肾癌细胞凋亡情况,采用划痕实验检测肾癌细胞转移能力,采用Transwell实验检测肾癌细胞体外侵袭能力,采用Western印迹法检测Wnt蛋白、β-连环蛋白(catenin)、Cyclin D1蛋白表达水平。用Wnt信号通路激活剂氯化锂(LiCl)处理40μg/ml PA诱导的肾癌细胞,以同样的方法检测肾癌细胞凋亡率。结果不同浓度的PA作用于肾癌细胞后,对肾癌细胞增殖有显著抑制作用,随着PA浓度显著增加、作用时间的延长肾癌细胞增殖抑制率显著升高(P0.05);肾癌细胞的凋亡率随着PA浓度的增加而升高(P0.05);随PA浓度增加肾癌细胞侵袭能力及迁移能力显著降低(P0.05);Wnt、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达量显著下降(P0.05);Wnt信号通路激活剂能够消除PA对肾癌细胞诱导的凋亡(P0.05)。结论 PA可抑制肾癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制细胞侵袭和迁移能力,PA可抑制Wnt信号通路的激活诱导肾癌786-0细胞凋亡。     

干预Bcl-2基因表达对骨肉瘤细胞侵袭、迁移能力的影响

目的探究干扰B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2基因表达对骨肉瘤细胞侵袭、迁移的影响及可能的作用机制。方法采用siRNA特异性下调Bcl-2基因表达,实验分为空白组、MG-63-NC组(转染siRNA-NC)和MG-63-siRNA组(转染siRNA-Bcl-2)。Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力,Western印迹检测细胞中Bcl-2、β-连环蛋白(catenin)、c-Myc蛋白的表达量。结果 MG-63-siRNA组Bcl-2蛋白表达量显著低于空白组(P0.05);MG-63-siRNA组细胞侵袭、迁移能力显著抑制(P0.05);与空白组相比,MG-63-siRNA组细胞中β-catenin、c-Myc蛋白表达显著下调(P0.05)。结论干扰Bcl-2抑制骨肉瘤MG-63细胞的迁移和侵袭,可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路介导的下游靶蛋白c-Myc的表达。     

和厚朴酚通过Wnt/β-连环蛋白通路抗动脉粥样硬化

目的 体内外观察和厚朴酚(HNK)对动脉粥样硬化(AS)模型Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及动脉硬化的影响;探讨和厚朴酚调控Wnt/β-catenin信号通路对AS形成过程影响的可能机制。方法 动物实验：8只SD大鼠作为正常对照组,24只高脂喂养SD大鼠随机分为AS组(高脂喂养+维生素D₂注射建立AS模型),AS+HNK组[建立模型后HNK腹腔注射5 mg/(kg·d),2次/d,连续8周]和AS+HNK-PNU组[AS+HNK组的基础上加用Wnt/β-catenin拮抗剂PNU-74654 100 mg/(kg·d),连续8周],每组8只。检测各组血脂水平,HE染色图像分析测定胸主动脉中膜面积及血管壁厚度,免疫印迹法检测大鼠胸主动脉组织Wnt/β-catenin的蛋白表达。细胞实验：培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)及人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)分为对照组、AS模型组[使用20 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)干预48 h诱导建立细胞AS模型],AS+HNK组(AS+HNK 32μmol/L干预48 h)、AS+HNK-PN...     

基于Wnt/β-catenin信号通路探究小金丹对直肠癌细胞增殖、迁移和EMT的影响

目的 基于Wnt/β-连环蛋白(catenin)信号通路探究小金丹对直肠癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响。方法 直肠癌细胞HR-8348分为对照组、低剂量组(20 mg/L小金丹处理)、中剂量组(40 mg/L小金丹处理)、高剂量组(80 mg/L小金丹处理)、高剂量+LiCl组(80 mg/L小金丹和LiCl处理),Western印迹检测β-catenin、c-myc、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)2、上皮性钙黏附素(E-cadherin)、神经性钙黏附素(N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达,噻唑蓝(MTT)检测增殖,碘化丙啶(PI)单染法检测周期,膜联蛋白(Annexin)V-FITC/PI双染法检测凋亡,Transwell小室检测迁移和侵袭。结果 与对照组比较,低、中、高剂量组β-catenin、c-myc、CyclinD1、CDK2、N-cadherin、MMP-9、Bcl-2蛋白表达量逐渐降低,细胞增殖活性、迁移数目、侵袭数目逐渐降低,G0/G1...     

姜黄素调控食管癌Eca-109细胞分化、增殖、凋亡的机制

目的探讨姜黄素对食管癌Eca-109细胞的分化、增殖、凋亡及分泌信号蛋白(Wnt)信号通路的影响及机制。方法 MTT法检测8、16、32、64μmol/L的姜黄素作用于食管癌Eca-109细胞24、48、72 h后细胞存活情况,计算细胞凋亡率,原位末端标记法(TUNEL)检测48 h后细胞凋亡情况,RT-PCR检测48 h后细胞中β连环蛋白(β-catenin)、GSK-3β、c-myc的mRNA的表达情况,Western印迹检测48 h后细胞中β-catenin、GSK-3β、c-myc蛋白的表达情况。结果姜黄素对食管癌Eca-109细胞的抑制作用随着作用时间和作用浓度的增加而增加,姜黄素作用24 h IC50为28.1μmol/L,48 h为23.2μmol/L,72 h为15.6μmol/L。TUNEL检测细胞凋亡率随着药物作用浓度的增加而增加。β-catenin、c-myc的转录水平随着药物浓度的增加而减弱。GSK-3β的转录水平随着药物浓度的增加而加强。β-catenin、c-myc蛋白表达量随着药物浓度的增加而减弱。GSK-3β蛋白表达水平随着药物浓度的增加而加强。结论姜黄素可以抑制食管癌Eca-109细胞增殖,促进细胞凋亡。姜黄素可以上调Wnt信号通路中GSK-3β酶的表达、促进β-catenin蛋白降解,从而抑制c-myc基因的转录,抑制癌细胞生长增殖。     

YAP调控Wnt信号通路影响肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨Yes相关蛋白(Yes associated protein,YAP)对肝癌细胞凋亡的影响。方法 Western blotting方法检测人肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449和人正常肝细胞7702中YAP的表达水平。在肝癌细胞中转染YAP小干扰RNA1(YAP siRNA1组)和YAP小干扰RNA2(YAP siRNA2组),同时转染对照siRNA(siRNA-NC组),未转染组只加入转染试剂,培养48 h后,Western blotting检测细胞中YAP水平,筛选出干扰效率较高的YAP siRNA2继续研究。MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,激光扫描共聚焦显微镜法检测活性氧(ROS)水平,Western blotting检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、Wnt信号通路下游靶基因(C-myc)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果人肝癌细胞Hu H-7、Hep G2、SNU-449中YAP表达水平均高于人正常肝细胞7702,且在Hep G2细胞中YAP的表达水平最高。YAP siRNA1、YAP siRNA2能够成功干扰肝癌细胞中YAP的表达水平,且YAP siRNA2的干扰效率最高。YAP siRNA2组细胞存活率和细胞中β-catenin、C-myc水平均低于未转染组,凋亡率和细胞中Cleaved Caspase-3、ROS水平均高于未转染组(P0.01)。结论干扰YAP表达后能够促进肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞增殖,Wnt信号通路是其可能的作用机制之一。