Aβ寡聚体预处理的BV2细胞对PC12细胞损伤的影响及其机制

目的 研究Aβ寡聚体预处理的BV2细胞对PC12细胞损伤的影响及机制,为阿尔茨海默病(AD)的抗炎治疗提供体外实验依据.方法 分别用不同浓度Aβ1-42寡聚体(0、10 μmol/L)作用于PC12细胞作为对照组(Aβ+PC12);用相应浓度的Aβ1-42寡聚体预处理BV2细胞24 h后与PC12细胞共育作为实验组1(Aβ+BV2+PC12);不同浓度IL-1β处理PC12细胞24 h作为实验组2(IL-1β+PC12);预先用IL-1ra(50 ng/ml)孵育PC12细胞1 h后,进行实验组1的细胞培养作为实验组3[(Aβ+ BV2)+(PC12+IL-1ra)].用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-1β水平/浓度,用Western印迹法检测tau(pS396)、tau蛋白表达情况.结果 Aβ寡聚体预处理的BV2细胞培养液中可检测出IL-1β,Aβ寡聚体浓度的增加与IL-1β含量增加呈现一定的量效关系.PC12细胞与Aβ寡聚体预处理24 h的BV2细胞共育后(实验组1),可见PC12细胞tau(pS396)蛋白表达较对照组进一步增多(P＜0.05),此作用可被IL-1ra部分抑制(P＜0.05).结论 BV2细胞可加重Aβ寡聚体对PC12细胞损伤过程;Aβ寡聚体可诱导BV2细胞产生IL-1β,IL-1β通过tau异常磷酸化通路参与的胶质炎症反应可能是PC12细胞损伤的机制之一.     

不同浓度Aβ_(25～35)对小胶质细胞上RAGE/NF-κB信号通路的影响

目的探讨不同浓度β-淀粉样蛋白(Aβ)_(25～35)对小胶质细胞上晚期糖基化终末产物受体(RAGE)/核因子(NF)-κB信号通路的影响。方法不同浓度Aβ_(25～35)(0、1、5、10及15μmol/L)与BV2共孵育48 h后显微镜下观察BV2细胞的形态变化,并检测细胞活性(MTT法),同时检测上清液白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平及上清液中Aβ_(25～35)剩余量,免疫细胞化学(ICC)、Western印迹(WB)法检测BV2上晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、核因子(NF)-κB蛋白的变化。结果随Aβ_(25～35)浓度梯度性增大,细胞形态发生明显变化,0μmol/L浓度组BV2处于静息状态,1、5μmol/L浓度组BV2伸出伪足呈阿米巴样的吞噬细胞状态,10、15μmol/L组呈巨噬细胞形态,但数量明显减少。1、5μmol/L组BV2细胞清除Aβ_(25～35)的量逐渐增多,10、15μmol/L浓度的BV2对Aβ_(25～35)的清除量明显降低(P0.05),同时10、15μmol/L组BV2活性显著降低(P0.05);随着Aβ_(25～35)浓度呈梯度性增加,上清液中IL-1β、TNF-α水平不断升高,10及15μmol/L浓度组IL-1β、TNF-α明显高于5μmol/L组(P0.05);10、15μmol/L浓度组RAGE及NF-κB细胞膜阳性反应面积、表达量较5μmol/L浓度组显著增加(P0.05)。结论 10μmol/L浓度的Aβ_(25～35)可使BV2细胞活性降低,对Aβ_(25～35)的清除能力减低,其机制可能与高浓度Aβ_(25～35)引起BV2上RAGE蛋白上调、NF-κB信号通路被激活有关。     

PNU上调大鼠皮质星形胶质细胞内源性Cryab抑制Aβ聚集

目的探讨PNU激活星形胶质细胞α7胆碱能受体(α7 n AChRs)上调内源性B-晶状体蛋白(Cryab)并抑制β淀粉样蛋白(Aβ)集聚的现象及其机制。方法分离24 h内新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并鉴定;体外制备Aβ_(1~42)寡聚体;将细胞分为对照组、PNU组、PNU+α7 n AChRs阻断剂(MLA)组、Aβ_(1~42)组、PNU+Aβ_(1~42)组、PI3K信号通路阻断剂LY294002+PNU+Aβ_(1~42)组。用蛋白印迹法检测细胞内Cryab、P-Akt(ser473)、Aβ寡聚体的表达水平。结果 (1)PNU可以显著上调星形胶质细胞内源性Cryab蛋白(P0.05);应用MLA阻断α7 n AChRs后,PNU上调内源性Cryab蛋白的作用被显著抑制(P0.05);使用LY294002阻断PI3K信号通路后,PNU上调内源性Cryab蛋白的作用被显著抑制(P0.01);(2)PNU能够显著上调磷酸化Akt蛋白水平(P0.05);应用MLA阻断α7 n AChRs后,PNU上调磷酸化Akt蛋白的作用被显著抑制(P0.01);使用LY294002阻断PI3K信号通路后,PNU上调磷酸化Akt蛋白的作用被显著抑制(P0.01);(3)在细胞裂解液及培养基中,PNU显著增强星形胶质细胞对Aβ聚集的抑制作用(P0.01);使用LY294002阻断PI3K信号通路后,PNU增强星形胶质细胞抑制Aβ聚集的功能显著减弱(P0.01)。结论PNU通过激活星形胶质细胞α7 n AChRs上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚;PI3K/Akt信号通路可能参与PNU激活星形胶质细胞α7 n AChRs上调内源性Cryab蛋白抑制Aβ集聚的过程。     

丁基苯酞通过p38丝裂原活化蛋白激酶通路拮抗β淀粉样蛋白致皮质神经元凋亡

目的研究丁基苯酞是否可以通过p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,抑制β淀粉样蛋白(Aβ)_(1 42)致原代培养皮质神经元凋亡。方法将原代培养的皮质神经元随机分为对照组、Aβ_(1-42)干预组(干预组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞0.1μmol/L组(A组)、Aβ_(1-42)+丁基苯酞1μmol/L组(B组)、Aβ_(1 42)+丁基苯酞10μmol/L组(C组)。Aβ_(1-42)作用24 h后,采用免疫荧光法染色观察细胞形态及凋亡比率,Western blot定量检测总p38、p-p38、caspase 3蛋白表达水平。结果免疫荧光双染显示,对照组神经元细胞体边缘光滑,突触长,细胞核完整;干预组细胞边缘塌陷,突触缩短,细胞核碎裂。与对照组比较,干预组、A、B、C组细胞凋亡率明显升高(P<0.05),干预组p p38和caspase-3蛋白表达明显增加(P相似文献   

羟基红花黄色素A抑制转化生长因子-β1诱导的与肺纤维化相关信号通路的机制研究

目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制转化生长因子-β1(transforming growth gactor-β1,TGF-β1)诱导的与肺纤维化相关信号通路的机制研究。方法:运用蛋白质印迹法(western blot)检测p38MAPK、Smad2磷酸化水平以及Smad2核转移情况。结果:HSYA能抑制TGF-β1组的p38MAPK、Smad2的磷酸化水平升高和Smad2的核转移,且高剂量HSYA组(16μmol/L)的抑制作用最明显(均P0.05),此外,TGF-β1+si RNA和TGF-β1+16μmol/L HSYA+si RNA组的p38 MAPK、Smad2的磷酸化水平无明显差异,TGF-β1+SB-431542和TGF-β1+SB-431542+16μmol/L HSYA组的p38MAPK、Smad2的磷酸化水平以及Smad2的核转移情况均无明显差异。结论:HSYA可抑制TGF-β1诱导NIH/3T3细胞与肺纤维化相关的信号转导,呈现明显的量效关系,其作用靶点可能为TGF-βRII。     

α1整合素活化在β淀粉样蛋白诱导神经细胞死亡中的作用

目的探讨神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)中β淀粉样蛋白(Aβ)诱导丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化的上游影响因素。方法选择SH-SY5Y为靶细胞,首先用MAPK信号通路上游抑制剂处理细胞,待细胞培养1 h之后,加入Aβ42纤维聚集体,细胞培养24 h后进行检测。首先采用甲氮甲唑蓝(MTT)法测定了细胞的存活率,然后利用Western印迹检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK)和ERK的蛋白表达水平,从而检测MAPK信号通路的激活水平。结果用锯鳞血抑肽或α1整合素蛋白封闭性抗体可以有效抑制Aβ引起的细胞死亡,并且阻止Aβ成纤维诱导MAPK的激活水平的提高(P<0.05)。用α1和β1整合素蛋白封闭抗体同时作用细胞时,得到了相似的结果。但是如果只用β1整合素蛋白封闭抗体单独作用细胞时,不能阻止Aβ成纤维诱导细胞死亡和MAPK的激活水平的提高。结论α1整合素,α1和β1整合素复合体是Aβ诱导SH-SY5Y细胞中MAPK信号通路激活从而介导细胞死亡的重要因素。推测α1整合素蛋白和α1、β1复合体可以作为治疗性干扰Aβ信号通路的靶点。     

甘草次酸通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进脂多糖诱导的小胶质细胞M2极化

目的 探究甘草次酸(GA)通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路促进脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞M2极化。方法 将小鼠BV2小胶质细胞分为阴性对照(NC)组、LPS组(100μg/ml LPS)、GA组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA)、GA+抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)、抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)和GA+激活剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+300 ng/ml p38 MAPK通路激活剂)。用细胞计数试剂盒8法测定细胞活力,酶联免疫吸附测定炎性因子水平,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及p38 MAPK通路相关蛋白表达水平。结果 与LPS组比较,GA组和抑制剂组细胞足突增多、胞体变大、细胞间隔缩小,白细胞介素(IL)1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达显著降...     

川陈皮素抑制Aβ25~35诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激与凋亡作用

目的探讨川陈皮素对β淀粉样蛋白(Aβ)25~35诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及潜在机制。方法SH-SY5Y细胞培养至对数生长期,分为正常对照组、Aβ_25~35损伤组及川陈皮素25、50、100μmol/L组,培养24 h后检测细胞存活率、氧化应激水平、凋亡率、凋亡相关基因及磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化-雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白表达等指标。结果与Aβ_25~35损伤组比较,川陈皮素各浓度处理组SH-SY5Y细胞的存活率显著增加(P<0.05),而乳酸脱氢酶(LDH)活性显著降低(P<0.05);与Aβ_25~35损伤组比较,川陈皮素各浓度处理组SH-SY5Y细胞谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性显著增加(P<0.05),而丙二醛(MDA)含量显著降低(P<0.05);给予不同浓度川陈皮素处理后,与Aβ_25~35损伤组比较,SH-SY5Y细胞凋亡率、Bax mRNA表达显著降低(P<0.05),而Bcl-2 mRNA、Bcl-2/Bax值、p-Akt及p-mTOR蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论川陈皮素可以通过调控Akt/mTOR通路抑制Aβ_25~35诱导的SH-SY5Y细胞氧化应激及凋亡,进而对Aβ_25~35诱导的SH-SY5Y细胞损伤产生保护作用。     

胰岛素样生长因子-1对Aβ_(25～35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用及机制

目的观察胰岛素样生长因子(IGF)-1对Aβ_(25～35)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并初步探讨其可能机制。方法将SH-SY5Y细胞随机分为对照(Control)组,Aβ_(25～35)处理(Aβ_(25～35))组,IGF-1治疗(Aβ_(25～35)+IGF-1)组,Wortmannin抑制剂(Aβ_(25～35)+IGF-1+Wort)组,单纯渥曼青霉素(Wortmannin)组。CCK-8法检测细胞活力,检测乳酸脱氧酶(LDH)漏出率,判断细胞损伤程度,荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化,试剂盒测定丙二醛(MAD)含量及超氧化物气化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,流式细胞仪分析法测定细胞凋亡率,Western印迹法检测相关蛋白表达。结果与Aβ_(25～35)组相比,Aβ_(25～35)+IGF-1组细胞活力明显升高,LDH漏出率明显下降(P0.05)。IGF-1可明显减少Aβ_(25～35)诱导SH-SY5Y细胞ROS及MDA生成,增加SOD及GSH-Px酶活性(P0.05)。与Aβ_(25～35)组相比,IGF-1治疗还能增加蛋白激酶B(Akt)及叉头框蛋白(Fox)O3a磷酸化水平,降低Puma蛋白表达水平及细胞凋亡率(P0.05)。而加入磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)特异性抑制剂Wortmannin预处理,可阻断上述IGF-1的保护作用(P0.05)。结论 IGF-1对Aβ_(25～35)诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

Aβ_(1～42)及二氮嗪预处理对神经细胞Na~+-K~+-ATP酶β亚基蛋白表达的影响

目的探讨Aβ1~42及二氮嗪预干预对神经细胞Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达的影响。方法原代培养大鼠皮层海马神经细胞,随机分为空白对照组、Aβ1~42组(2μmol/L)、二氮嗪(50μmol/L)预处理1 h后Aβ1~42组、单独二氮嗪预处理组,各组又分为24、72 h两个时间点,采用免疫荧光及免疫印迹法检测干预后不同培养时间细胞Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达水平的变化。结果免疫荧光显示:Aβ1~42作用细胞72 h降低了Na+-K+-ATP酶β亚基荧光强度;而经二氮嗪预处理后Aβ1~42作用72 h,与单独Aβ1~42组相比较荧光强度有所增强。Western印迹显示:二氮嗪预处理神经细胞1 h协同Aβ1~42作用24 h后及单独二氮嗪组Na+-K+-ATP酶β亚基的蛋白表达明显低于对照组及单独Aβ1~42组(P0.01)。Aβ1~42作用神经细胞72 h后,Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达较对照组显著降低(P0.05);二氮嗪预处理1h协同Aβ1~42共同作用于神经细胞72 h后,与单独Aβ1~42组相比较,增加了Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达量(P0.05)。结论 Aβ1~42作用72 h,Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达量降低,二氮嗪预处理1 h协同Aβ1~42共同作用于神经细胞72 h,Na+-K+-ATP酶β亚基蛋白表达量升高。     

红霉素对A549细胞中RV14介导的IL-6和IL-1β分泌的影响

目的 探讨红霉素(EM)对鼻病毒(RV14)介导的细胞因子产生和气道黏液高分泌的抑制作用.方法 EM预处理肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)3 h后,用RV14刺激细胞,然后采用ELISA检测细胞培养上清中细胞因子IL-6和IL-1β的浓度,并用western.印迹检测磷酸化p44/42MAPK信号分子变化情况.结果 EM明显抑制RV14介导的IL-6和IL-1β的产生和分泌(P＜0.01),并且对RVi4介导的p44/42MAPK的激活也有抑制作用(P＜0.01).结论 EM可有效抑制RV14介导的细胞因子的产生和分泌,并且这种抑制作用可能是通过阻断p44/42MAPK信号分子的激活来实现的.     

羟基红花黄色素A对香烟提取物诱导A549细胞炎症因子表达作用的研究

目的:探讨羟基红花黄色素A(HSYA)抑制香烟烟雾提取物(CSE)诱导的A549肺泡上皮细胞炎症介质表达升高的作用。方法:用CSE刺激A549肺泡上皮细胞建立损伤模型,细胞分七组:单纯HSYA组、Sham组、CSE组、CSE+HSYA低剂量组(1μmol/L)、CSE+HSYA中剂量组(4μmol/L)、CSE+HSYA高剂量组(16μmol/L)和CSE+阳性对照药红霉素(5μg/mL)组。以RT-qPCR技术检测白介素(IL)-6、白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、细胞间黏附分子(ICAM)-1和血管细胞黏附分子(VCAM)-1 mRNA的表达水平;ELISA法检测细胞培养液中IL-6、IL-1β及TNF-α的蛋白水平表达;蛋白质印迹法(western blot)检测细胞p38MAPK磷酸化的水平。结果:与Sham组相比,CSE组IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1和VCAM-1 mRNA水平均明显升高(P0.001),给予不同浓度的HSYA后炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制。与Sham组相比,CSE组细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α蛋白的表达水平明显升高(P0.001),给予不同浓度的HSYA后CSE所诱发的炎症因子的高表达受到抑制,红霉素组也见较明显的抑制。与Sham组比较,CSE组的p38 MAPK的磷酸化水平明显升高(P0.001),给予不同浓度的HSYA后细胞p38 MAPK的磷酸化水平升高受到抑制,红霉素组也可见明显的抑制。结论:HSYA可抑制CSE诱导A549细胞的炎症因子的表达升高。     

Aβ1～42寡聚体与纤维体的制备及鉴定

目的 探讨Aβ1～42寡聚体和纤维体的制备及其鉴定方法,进而比较两者的细胞毒性.方法 设定不同的环境条件将Aβ1～42单体分别聚集成寡聚体和纤维体两种状态,利用原子力显微镜观察Aβ1 ～42的不同聚集状态.CCK-8法比较Aβ1～42寡聚体与纤维体对BV-2细胞存活率的影响.结果 原子力显微镜下观察Aβ1～42寡聚体呈球状或椭圆球状颗粒,高度为5 nm左右,Aβ1～42纤维体在镜下呈现长条纤维状聚集,高度约为3 nm左右,长度＞1 000 nm.CCK-8法显示Aβ1～42寡聚体和纤维体均对BV-2细胞具有损伤作用,并成剂量-效应关系.在同一浓度水平条件下,Aβ1～42寡聚体组的BV-2细胞存活率显著低于纤维体组(P值＜0.05).结论 原子力显微镜可直观地观察到Aβ1-42的不同聚集状态,Aβ1～42寡聚体比纤维体更具细胞毒性.     

大黄蛰虫丸对肝星状细胞p38MAPK通路活化的影响

目的:通过TGF-β1对p38 MAPK通路的激活,探讨大黄蛰虫丸对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)活化的影响。方法:体外培养肝星状细胞,MTT法观察不同浓度大黄蛰虫丸对肝星状细胞增殖的影响并绘制出细胞生长曲线,Westernblot检测磷酸化p38MAPK的表达。结果:随着浓度的增高,大黄蛰虫丸对肝星状细胞的增殖表现为先促进后抑制,当浓度为320ng/ml时开始表现出抑制作用;TGF-β1促进了HSC-T6细胞磷酸化p38 MAPK的表达,而大黄蛰虫丸明显抑制了这个过程。结论:高浓度的大黄蛰虫丸能够抑制肝星状细胞的增殖,其抗肝脏纤维化的作用可能与抑制p38 MAPK通路信号而减少p38 MAPK的磷酸化表达有关。     

p38MAPK对肉豆蔻提取物干预的小胶质细胞CREB表达的影响

目的探讨肉豆蔻提取物对鼠性小胶质BV2细胞的调控作用。方法应用WST-8试剂盒和Westernblot技术,观察肉豆蔻提取物对体外培养的鼠性小胶质BV2细胞的生存率及脂多糖（LPS）诱导的p38MAPK、磷酸化p38MAPK和cAMP应答元件结合蛋白（CREB）表达的影响。结果肉豆蔻提取物对BV2细胞无毒性,且抑制LPS所诱导的磷酸化p38MAPK和CREB的表达。结论肉豆蔻提取物可抑制LPS所诱导的小胶质细胞p38MAPK磷酸化和CREB的表达。     

硫化氢在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡中的作用

目的探讨硫化氢(H2S)在p38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)凋亡中的作用及磷酸化P38、Caspase-3蛋白表达的变化。方法实验设对照组(HSC加含10%胎牛血清的DMEM培养液)、二甲基亚砜(DMSO)组(对照组基础上加DMSO,使其终浓度为0.1%)、NaHS组(对照组基础上加NaHS,使其终浓度为50μmol/L)、SB组(DMSO组基础上加SB203580,使其终浓度为75μmol/L)、SB加NaHS(SB+NaHS)组;采用Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测磷酸化p38MAPK表达及Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,SB组和SB+NaHS组HSC-T6的凋亡率增加(P0.05),NaHS组p38MAPK磷酸化水平及Caspase-3表达均明显增高(P0.01);与NaHS组比较,SB组和SB+NaHS组细胞凋亡率增加明显(P0.01),p38MAPK磷酸化水平表达降低(P0.01);SB+NaHS组较SB组Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)。结论 p38MAPK及Caspase-3在H2S刺激的HSC-T6中表达增强,H2S能促使SB203580诱导的HSC-T6细胞凋亡,其作用机制可能与活化p38MAPK的磷酸化途径,进而激活Caspase-3的表达有关。     

二氮嗪预处理对Aβ_(1~42)作用神经元NR2B亚基蛋白表达的影响

目的研究ATP敏感的钾离子通道开放剂二氮嗪(diazoxide)预处理对Aβ1~42作用原代培养神经元N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体2B(NR2B)亚基蛋白表达的影响。方法原代培养大鼠皮层海马神经元并进行鉴定,将细胞随机分为对照组、单纯Aβ1~42干预组、二氮嗪预处理1h后Aβ1~42干预组(Aβ1~42+diazoxide)、单纯二氮嗪预处理组,并采用免疫印迹检测不同时间点(24 h、72 h)细胞NR2B亚基蛋白表达水平的变化。结果 Aβ1~42(2μmol/L)作用神经元24 h后,与对照组相比,单纯Aβ1~42干预组和Aβ1~42+diazoxide组的NR2B亚基蛋白表达均无明显改变。Aβ1~42作用神经元72 h后,与对照组比较,单纯Aβ1~42组NR2B亚基蛋白表达量显著升高(P0.05);而与单纯Aβ1~42干预组相比,Aβ1~42+diazoxide组NR2B亚基蛋白表达明显降低(P0.05)。结论 Aβ1~42作用原代培养神经元72 h,能够显著增加神经细胞NR2B亚基蛋白的表达量;同时,二氮嗪能拮抗Aβ1~42所引起的NR2B亚基蛋白表达量升高,提示二氮嗪可能通过NMDA受体通路影响Aβ1~42的细胞毒性作用。     

阿司匹林对Aβ_(25-35)诱导神经元炎性损伤的保护作用研究

目的观察阿司匹林对Aβ_(25-35)诱导神经炎性反应中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(1L-1β)、核因子κB(NF-κB)/p65核蛋白和磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKB-α)总蛋白表达的影响,探讨NF-κB通路在此过程中的作用。方法取孕龄17~18 d SD大鼠的海马神经元,将培养至第7天的神经元随机分为4组:(1)Aβ组:加入终浓度为20μmol/L的Aβ_(25-35);(2)低剂量阿司匹林组:加入终浓度为50μmol/L的阿司匹林和20μmol/L的Aβ_(25-35);(3)高剂量阿司匹林组:加入终浓度为100μmoL/L的阿司匹林和20μmol/L的Aβ_(25-35);(4)空白对照组:加入等量维持培养基。继续培养48 h后,采用双抗体夹心ELISA法测定上清液中TNF-α和IL-1β含量,Western-Blot法检测NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平。结果(1)与对照组比较,Aβ组TNF-α和IL-1β的含量明显升高(P0.01),NF-κB/p65核蛋白和pIKB-α总蛋白的表达水平也明显升高(P0.01);(2)与Aβ组比较,低剂量和高剂量阿司匹林均可降低TNF-α和IL-1β的含量(P0.05),并减少NF-κB/p65核蛋白和pIκB-α总蛋白表达水平(P0.05);(3)低剂量和高剂量阿司匹林组两组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论阿司匹林可能通过抑制NF-KB的激活来减轻Aβ_(25-35)诱导神经元的炎性损伤。     

周期性机械牵拉诱导A549细胞p38MAPK的表达

目的 探讨p38蛋白激酶(p38 MAPK)是否参与周期性机械牵拉刺激在人肺泡Ⅱ型上皮A549细胞的信号转导过程.方法 实验分对照组(刺激前)、机械牵拉(刺激后)5、15、30、60 min共5组,每组3皿细胞.建立离体的A549细胞机械牵拉模型:以大小为1000 μstrain的牵拉力刺激细胞,在刺激前和刺激后5、15、30、60 min时间点进行观察.结果 A549细胞经机械牵拉刺激后,磷酸化p38蛋白水平增加,以30 min时间点最为明显.随着机械牵拉时间的延长,在60 min时间点磷酸化p38蛋白水平下降至约基线水平.结论 机械牵拉刺激信号可激活A549细胞p38 MAPK,从而引起继发细胞信号转导及功能改变.     

洛伐他汀上调体外培养神经细胞毒蕈碱型乙酰胆碱受体及对抗β-淀粉样肽对该受体表达的抑制作用

目的观察洛伐他汀是否对毒蕈碱型乙酰胆碱受体(mAChRs)有上调作用,探讨其是否具有抗β-淀粉样肽(Aβ)的作用。方法选择原代培养的大鼠海马神经细胞和SH-SY5Y细胞,采用洛伐他汀和Aβ寡聚体(AβOs)分别或联合处理培养细胞24~48 h后,采用蛋白印迹法和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测细胞中M1 mAChR和M3 mAChR蛋白及mRNA表达水平。结果免疫荧光染色显示原代大鼠海马神经细胞的体外培养纯度达85%以上;不同浓度洛伐他汀处理神经细胞24 h后,M1 mAChR和M3 mAChR蛋白及mRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05);0.5μmol/L AβOs处理神经细胞48 h后,其M1 mAChR和M3 mAChR蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P<0.05);但预先用0.1μmol/L洛伐他汀处理神经细胞24 h,可减轻AβOs导致的M1 mAChR和M3 mAChR表达水平下降。结论洛伐他汀可能具有上调mAChRs表达水平的作用,对抗Aβ对该受体的作用。