用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与克山病的关系

为探讨柯萨奇Ｂ病毒感染与黑龙江省急型克山病的关系。本文用缺口平移法制备生物标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与１３例急型克山病尸检心肌组织及脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织１０例，非病区７－８个月引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇病毒与克山病的关系

为进一步探讨柯萨奇病毒与克山病的关系，采用柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）制备的ｃＤＮＡ探针与黑龙江、山东、云南三省病区克山病尸检心肌组织及胎儿克山病心肌组织的石蜡切片进行了原位核酸杂交，并用脑外伤、ＣＯ中毒等意外死亡健康成人及冠心病、风心病尸检心肌组织和病区、非病区７～８个月引产胎儿心肌组织的石蜡包埋切片作为对照。结果急型克山病８／１３、慢型克山病３４／５０、亚急型克山病２２／２９呈现阳性杂交信号，提示有柯萨奇病毒ＲＮＡ的存在，冠心病２／１５、风心病１／１５、显著低于克山病，而健康成人对照组均为阴性，胎儿克山病一例呈阳性反应，病区引产胎儿心肌组织１０例中有２例也检出柯萨奇病毒ＲＮＡ，而非病区胎心则为阴性。结果提示在一些克山病的发生和发展过程与柯萨奇Ｂ组病毒的感染高度相关。     

用原位核酸杂交法探讨慢型克山病与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东慢型克山病与柯萨奇Ｂ组病毒的关系，用缺口平移法制备生物素标记ＣｏｘＢ３病毒的ｃＤＮＡ探针与慢型克山病１４例尸检心肌组织及１０例脑外伤，ＣＯ中毒等意外死亡的正常成人心肌组织及１０例非病区７￣８个月引产胎儿的心肌组织切片进行原位杂交，１４例慢克中有９例检测到柯萨奇Ｂ组病毒的ＫＮＡ，阳性率达６４％，而对照组均为阴性。提示柯萨奇Ｂ组病毒感染可能是山东慢型克山病发病因素之一。     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与黑龙江慢型克山病的关系

克山病是原因未明的地方性心肌病，慢型克山病有关病毒病因的研究未见有关报道，作者用生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与黑龙江病区慢型克山病尸检心肌组织及非正常死亡成人心肌组织和非病区７￣８个月引产胎儿心肌组织进行了原位杂交，以检测柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ。结果１３例慢型克山病中有９例呈现阳性杂交信号，阳性率达６９．２％，两对照组均为阴性。表明黑龙江慢型克山病心肌组织中有柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ的存在，     

山东省亚急型克山病患儿与柯萨奇B组病毒的关系

为探讨山东省亚急型克山病患儿与柯萨奇Ｂ组病毒的关系，用缺口平移法制备生物素标记的ＣＯＸＢ３病毒的ｃＤＮＡ探针，与亚包型克山病病例尸检心肌组织９例及１５例脑外务，ＣＯ中毒等意外死亡的正常民人心肌组织和１０例非病区７～８个月胎儿心组织切片进行原位杂交，结果９例山东亚急型克山病的５例检测到ＣＯＸＢ组病毒的ＲＮＡ，阳性率为５５．５％（５／９），而对照组均为阴性，结果提示ＣＯＸＢ组病毒感染是山东省亚急性型克     

用原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南慢型克山病的关系

为了探讨柯萨奇Ｂ组病毒感染与云南慢型克山病的关系，本文用缺口平移法制备生物素标记的柯萨奇Ｂ３病毒的ｃＤＮＡ探针与云南慢型克山病尸检心肌组织１５例及脑外伤等非正常死亡的尸检心肌组织１０例石腊切片及引产胎儿心肌组织１０例的石腊切片进行原位杂交。结果云南慢克１６例中有１１例出现阳性杂交信号，即有柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＶＢ）ＲＮＡ存在，阳性率达７３．３％。脑外伤等非正常死亡的心肌及胎心均为阴性。提示云南慢型克     

原位核酸杂交法探讨柯萨奇B组病毒与云南亚急型克山病的关系

用光敏生物素标记的柯萨奇 B_3病毒 cDNA 探针,与云南病区20例经临床和病理检查确诊为亚急型克山病的心肌组织切片进行原位核酸杂交,以检测柯萨奇 B 组病毒 RNA。结果有18例出现阳性杂交信号,阳性率达90%。说明云南亚急型克山病心肌组织中有柯萨奇 B 组病毒 RNA 的存在。提示云南亚急型克山病的发生与柯萨奇 B 组病毒的持续感染密切相关。     

柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌中形态特征及其与发病的关系

目的：探讨柯萨奇病毒RNA阳性信号在克山病心肌细胞中的特征及病毒感染与发病的关系。方法：以65例不同型别克山病尸检心肌组织蜡块为研究对象，用寡核苷酸探针与组织切片进行原位核酸杂交，以检测柯萨奇B组和A组病毒RNA。结果：急型、亚急型及慢我山病的阳性杂交信号检出率分别为83．0％、87．9％及80．0％。阳性信号在急型、亚急型克山病心肌中颗粒粗大，境界较清晰，但分布比较局限；在慢型克山病中阳性信号多散在分布于各部位心肌细胞内，但颗粒较细小，境界不清。结论：心肌组织蜡块长期保存不影响杂交结果；吉林省各型克山病均与柯萨奇病毒感染密切相关，提示病毒感染是克山病复合病因的重要组成部分。     

克山病尸检心肌标本柯萨奇B组病毒RNA片段的序列分析

目的通过原位核酸杂交技术和RT-PCR技术探讨柯萨奇B组病毒感染与吉林亚急型克山病的关系.方法以柯萨奇B组病毒基因组的一段共同序列做寡核苷酸探针,于5′端行生物素标记,检测亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中柯萨奇病毒的感染率;选取阳性标本做RT-PCR,并对PCR产物进行核苷酸序列分析,比较其与柯萨奇B组病毒各血清型之间的差异.结果 9例亚急型克山病患者尸检心肌组织标本中有7例原位核酸杂交结果阳性,阳性率为77.78%;所选3例原位核酸杂交结果阳性标本RT-PCR均有长541 bp的DNA条带出现,测序结果表明该片段与柯萨奇病毒B3同区域序列一致,与B1、B4、B5的同源性较大.结论亚急型克山病患者体内有柯萨奇B组病毒RNA存在,柯萨奇病毒可能在克山病的发生发展中扮演重要的角色.     

用原位核酸杂交技术探讨肠道病毒与急型克山病的关系

目的 探讨肠道病毒(柯萨奇病毒)与吉林省急型克山病的关系。方法 用柯萨奇病毒B3、B4、B5、A9共同序列作寡核苷酸探针对吉林省急型克山病尸捡心肌组织12例及病区与非病区尸捡正常心肌组织各7例进行原位核酸杂交。结果 吉林省急型克山病12例中有11例出现阳性杂交信号，即有肠道病毒RNA存在，阳性率为91．66％，对照组均为阴性。结论 吉林省急型克山病病人心肌组织中有肠道病毒感染，提示急型克山病的发病可能与肠道病毒感染有关。     

克山病的心肌损伤与肠道病毒感染及细胞凋亡关系的研究

本文对亚急型，慢型克山病各１０例尸检心肌组织切片分别用ＣＶＢ３的ｃＤＮＡ探针作原位杂交和ｏｎｃｏｒ公司的细胞凋亡原位检测试剂进行检测。     

应用原位杂交法对比研究慢型克山病、扩张型心肌病与肠道病毒的关系

本文用生物素标记的柯萨奇B_3病毒(CVB_3)的cDNA探针,通过原位杂交技术检测50例组织学诊断为慢型克山病、14例扩张型心肌病的心肌石蜡包埋切片,并以15例正常心肌标本作阴性对照。结果50例慢型克山病有34例出现阳性结果。14例扩张型心肌病有7例出现阳性结果。15例正常对照心肌标本杂交均为阴性,从而确定慢型克山病的心肌组织中、扩张型心肌病的心肌组织中有肠道病毒核酸存在,表明肠道病毒感染与慢型克山病、扩张型心肌病的发病高度相关。经统计学处理二者之间无明显差异。     

克山病的心肌损伤与细胞凋亡

为探讨克山病的心肌损伤与细胞凋亡的关系，采用Ｏｎｃｏｒ公司的细胞凋亡原位检测试剂盒（ＴＵＮＥＬ）对３０例克山病尸检心肌组织进行了检测，其中急型、亚急型、慢型克山病心肌组织各１０例，以因交通事故死亡的５例正常人尸检心肌组织作为对照，结果显示，急型、亚急型、慢型克山病心肌组织中凋亡细胞阳性检出率分别为２／１０、８／１０与７／１０。５例正常心肌组织中，未检出凋亡细胞，以上结果提示：在克山病的发生发展中有凋亡机制参与。     

Coxsackievirus B3 infection and its mutation in Keshan disease

AIM: To investigate coxsackievirus B(3) infection and its gene mutation in Keshan disease. METHODS: The expression of Coxsackievirus B(3) RNA was detected in autopsy specimens of acute (12 cases), sub-acute (27 cases) and chronic (15 cases) Keshan disease by in situ hybridization. In sub-acute Keshan disease specimens, 3 cases with positive result by in situ hybridization were selected RT-PCR analysis. The DNA segments were then sequenced. RESULTS: Coxsackievirus B(3) RNA was detected in the cytoplasm of myocardiocyte. The positive rate was 83% in acute, 67% in sub-acute and 80% in chronic Keshan disease. In the conservative region of Coxsackievirus B(3) genome, there was a mutation in 234 (C-T) compared to the non-cardiovirulent strain, CVB(3/0). CONCLUSION: Coxsackievirus B(3) RNA can survive and replicate in heart muscle of Keshan disease, which may play an important role in the occurrence of Keshan disease. The possible mechanism of occurrence of Keshan disease is associated with point a mutation in Coxsackievirus B(3) genome.     

低硒小鼠柯萨奇B组病毒重叠感染与心肌损伤关系的研究

目的 探讨Se缺乏、CVB4、CVB3m重叠感染与心肌损伤的关系。方法 采用低Se及相对低蛋白合成饲料、饮用含Se元素水与不含硒的水的方法,饲养小鼠及其所产的幼鼠,于出生7d,幼鼠先后感染CVB4,CVB3m,2型病毒感染间隔为7d,感染CVB3m病毒后7、14、21d分别处死小鼠,取心脏做光镜、电镜检测。结果 Se缺乏组小鼠,心肌可见轻度损伤,心肌细胞色素氧化酶活力下降。病毒感染7d后,低Se 病毒组小鼠与补Se 病毒组小鼠比较,低硒病毒组血清CVB3m抗体效价1:256,补硒病毒组中和抗体效价为1:512,低硒组感染病毒的毒力增加,心肌中病毒分离滴度低硒组明显高于补硒组,心肌细胞色素氧化进一步下降,心肌损伤检出率达63.6%,心肌变性坏死的数量多,损伤面积大。结论 Se缺乏是克山病心肌损害因素之一,而柯萨奇B组2型病毒重叠感染在克山病心肌损伤过程中的作用也不能忽视。硒具有某种程度的抗病毒作用或抑病毒作用。     

肌红蛋白在克山病诊断中的意义

目的 通过比较不同类型克山病患血清中肌红蛋白（Mb）的变化，探讨了肌红蛋白在诊断克山病心肌坏死中的意义。方法 采用固相酶免疫微量法。结果 不同类型克山病患的血清中Mb含量有所改变，但是只有亚急型克山病组与对照组相比差异显，随心肌坏死程度加重，Mb含量也随之增高。结论 血清中肌红蛋白含量变化可作为克山病急性心肌坏死早期诊断指标。     

亚急型克山病与肠道病毒的关系

目的 用RT-PCR技术探讨亚急型克山病与肠道病毒的关系。方法 用RT-PCR技术对3例亚急型克山病尸检病例心肌组织中肠道病毒进行检测，并对所得片段进行序列分析。结果 对CVB35′NTR的序列分析表明，亚急型克山病患者心肌组织中存在的CV83RNA的5′NTR第234位点与已知的无心肌毒性的毒株CVB3/0不同，而与已知的有心肌毒性的毒株相同。结论 CVB3病毒RNA可在克山病患者心肌组织中有生存、复制，可能对克山病的发生发展起重要作用。克山病的发生可能与CV83基因组5′NTR中234点突变有关。