桦褐孔菌醇诱导人卵巢癌SKOV3细胞株凋亡及其分子机制研究简

 目的 研究桦褐孔菌醇(inotodiol)诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡及其对相关蛋白Bcl-2、 Bax和caspase-3表达的影响。方法 选用人卵巢癌SKOV3细胞株进行体外培养, 四甲基偶氮唑蓝法检测桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响;应用透射电镜观察细胞形态学变化;通过TUNEL染色测定凋亡率;通过免疫细胞化学法检测凋亡相关蛋白Bcl-2, Bax和caspase-3的表达。结果 桦褐孔菌醇抑制人卵巢癌细胞增殖, 呈时间-剂量依赖性;形态学检测出现典型的细胞凋亡改变。50 mg·L^-1桦褐孔菌醇作用人卵巢癌SKOV3细胞24、48 h的凋亡率分别为(21.91±2.84)%和(43.83±3.22)%, 肿瘤细胞凋亡率(AR)随药物作用时间的延长而上升, 显示明显的时效关系(P<0.05)。免疫细胞化学法染色显示, 桦褐孔菌醇组人卵巢癌SKOV₃细胞Bcl-2基因蛋白的阳性表达率明显降低, 而Bax、caspase-3基因蛋白阳性表达率明显升高。结论 桦褐孔菌醇对人卵巢癌SKOV3细胞株有抗增殖和诱导凋亡作用, 该药可能是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达和上调促进凋亡基因Bax的表达及启动caspase凋亡信号而发挥抗癌作用。     

斑蝥酸钠维生素B6诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及周期阻滞

目的: 研究斑蝥酸钠维生素B6（艾易舒）注射液对人肝癌HepG2细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响,探讨其分子机制。 方法: 将不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6注射液（0,1,5,10 mg·L^-1）作用于人肝癌HepG2细胞12,24,48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞学技术检测细胞凋亡率及细胞周期的变化,Western blot检测蛋白激酶B（Akt）,磷酸化蛋白激酶B（pAkt）,B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白（Bax）,B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）及细胞周期依赖性激酶抑制因子p21蛋白表达变化,RT-PCR检测Bax,Bcl-2及p21 mRNA表达变化。 结果: 斑蝥酸钠维生素B6可显著抑制HepG2细胞的增殖,诱导细胞凋亡,具有显著的时间和浓度效应（P<0.05）;同时G₀/G₁期细胞比例显著升高,S期细胞比例显著降低（P<0.05）。Western blot结果显示斑蝥酸钠维生素B6可下调HepG2细胞中pAkt和Bcl-2蛋白的表达,上调Bax和p21蛋白的表达（P<0.05）。RT-PCR结果显示Bax,p21 mRNA的表达水平明显升高,而Bcl-2 mRNA的表达水平下降（P<0.05）。 结论: 斑蝥酸钠维生素B6可抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,诱导其凋亡并引发G₀/G₁期阻滞,其机制可能与斑蝥酸钠维生素B6参与调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路有关。     

红景天苷对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 红景天苷是从红景天的根茎部中提取得到的，是红景天中含量最高的天然活性化合物。该实验旨在研究红景天苷对人源性肝癌细胞（HepG2细胞）增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 选取未作任何处理的HepG2细胞作为空白组，以终浓度为20、40、80 μmol·L^-1红景天苷处理的HepG2细胞作为红景天苷组。采用多功能细胞分析仪测定红景天苷对HepG2细胞增殖的影响，划痕实验测定红景天苷对HepG2细胞迁移能力的影响，Transwell小室实验测定红景天苷对HepG2细胞侵袭能力的影响，倒置显微镜观察红景天苷对HepG2细胞形态的影响，透射电镜观察红景天苷对HepG2细胞中线粒体的影响，流式细胞术分析红景天苷对HepG2细胞凋亡及周期分布的影响，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定红景天苷对HepG2细胞相关凋亡基因的影响，蛋白免疫印迹法测定红景天苷对HepG2细胞相关迁移、侵袭及凋亡蛋白的影响。结果 与空白组比较，红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）细胞指数均明显下降（P<0.05），愈合面积均明显增加（P<0.05），且呈时间和浓度依赖性；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）中能够穿过Matrigel基质胶的HepG2细胞数量呈浓度依赖性减少；红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）总凋亡率呈浓度依赖性升高，且阻滞细胞于G₂/M期（P<0.05）；红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）表达呈浓度依赖性升高（P<0.05），神经钙黏附蛋白（N-cadherin）表达呈浓度依赖性降低（P<0.05）。红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Caspase-3蛋白及胱天蛋白酶-9（Caspase-9）蛋白表达均呈浓度依赖性升高（P<0.05），肌动蛋白结合蛋白（Girdin）及Bcl-2表达均呈浓度依赖性降低（P<0.05）。结论 红景天苷对HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭均具有抑制作用，且通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。表明红景天苷可作为一种潜在的肝癌化疗候选药物。     

白屈菜红碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制探讨

目的:研究白屈菜红碱(CHE)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制。方法:以肝癌HepG2细胞为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法测定CHE对细胞的增殖作用,荧光染料Hoechst 33285染色观察CHE对人肝癌细胞HepG2凋亡形态的变化,免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),Bcl-2家族的抑凋亡蛋白Bcl-xl,促凋亡相关半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白和基因表达。结果:与溶剂组比较,CHE能显著抑制HepG2细胞的增殖,其6,12,24 h的半数抑制浓度(IC50)分别为12.98,10.53,11.21μmol·L~(-1),在Hoechst 33258染色结果中,CHE组出现细胞凋亡的典型特征;与溶剂组比较,高浓度CHE能明显上调Bax,Caspase-3的蛋白及mRNA表达,明显降低Bcl-xl蛋白及mRNA表达(P0.05)。结论:白屈菜红碱能抑制肝癌细胞HepG2的增殖,并能上调促凋亡蛋白和mRNA,下调抗凋亡蛋白和mRNA表达,进而诱导凋亡。     

山楂乙醇提取物对肝癌细胞HepG2凋亡及相关因子表达的影响

目的:探讨山楂提取物体外对肝癌细胞株HepG2凋亡的影响。方法:山楂乙醇提取,并采用不同质量浓度(0.1,0.2,0.4,0.8 g·L-1)山楂提取物处理HepG2细胞24,48,72 h。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测提取物对肝癌细胞活力的影响;流式细胞术检测提取物处理细胞48 h后的凋亡率;实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因表达;免疫印迹法(Western blot)检测激活型Caspase-3(CleavedCaspase-3),Bcl-2,Bax蛋白表达。结果:山楂提取物对HepG2细胞的活力有显著抑制作用(P0.05),并以浓度及时间依赖的形式诱导细胞凋亡。山楂提取物可以显著促进Bax和Cleaved-Caspase-3基因和蛋白表达,抑制Bcl-2基因和蛋白表达。结论:山楂提取物抑制肝癌细胞HepG2的增殖,促进其发生凋亡,与Bax和Cleaved-Caspase-3的表达增加,Bcl-2/Bax降低有关。     

芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨芪楼丸通过调控JAK/STAT信号通路对人肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法 40只大鼠随机分为对照组(10 mL/kg生理盐水)和芪楼丸低、中、高剂量组(6.75、13.5、27 g/kg芪楼丸浸膏),各组连续干预5 d,腹主动脉取血制备含药血清。取对数生长期人肝癌HepG2细胞，分别给予各组芪楼丸含药血清干预24、48、72 h。采用CCK8法检测细胞增殖抑制情况，Annexin V-FITC/PI双染流式细胞法检测细胞凋亡情况，ELISA法检测细胞Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9水平，RT-qPCR法检测细胞Bax、Bcl-2 mRNA表达，Western blot法检测细胞JAK2、STAT3、STAT5、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果 与对照组比较，芪楼丸含药血清能抑制HepG2细胞增殖(P<0.01),促进细胞凋亡(P<0.01),细胞中Bax、caspase-3、caspase-9水平和Bax mRNA表达均升高(P<0.01),Bcl-2水平、Bcl-2 mRNA表达和JAK2、STAT3、p-JA...     

肝喜合剂含药血清对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究肝喜合剂对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用不同浓度肝喜合剂含药血清(10%、15%、20%)处理HepG2细胞，CCK-8法检测细胞存活率，流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况，RT-qPCR和Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9 mRNA和蛋白表达。结果 肝喜合剂含药血清可抑制HepG2细胞生长(P<0.05,P<0.01),促进HepG2细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),升高Bax、Puma、active caspase-9蛋白表达及Bax、Puma mRNA表达(P<0.05,P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 肝喜合剂可有效抑制HepG2细胞增殖，促进凋亡，其机制可能与促进凋亡相关因子Bax、Puma、caspase-9表达有关。     

蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的研究蛴螬石油醚提取物对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法MTT法检测蛴螬石油醚提取物对体外培养的HeLa细胞株增殖抑制作用及细胞毒活性;末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的脱氧核苷酸缺口末端标记(TdT-mediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测细胞凋亡;通过免疫细胞化学S-P法测定凋亡相关基因产物Bcl-2、Bax蛋白与凋亡相关蛋白caspase-8和caspase-3的表达情况。结果蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞的增殖抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性(P<0.01)。蛴螬石油醚提取物作用细胞后凋亡细胞数目随时间延长而增多;凋亡指数与药物处理呈时间依赖性和剂量依赖性。蛴螬石油醚提取物作用后Bcl-2蛋白表达均下降,Bax、caspase-8和caspase-3表达上升,4种蛋白表达各组间比较均差异显著(P<0.01)。结论蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞具有抑制增殖及诱导凋亡作用。蛴螬石油醚提取物对HeLa细胞抑制增殖作用(50μg/mL作用48h之前)主要以诱导凋亡为主。蛴螬石油醚提取物诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、caspase-8和caspase-3表达有关。     

薯蓣皂苷的次皂苷元B（DRG）体外诱导人大肠癌HCT-15细胞凋亡的机制研究

 目的 探讨中药单体薯蓣皂苷的次皂苷元B(DRG)体外诱导HCT-15细胞凋亡的分子作用机制。方法 采用Western blotting、体外Bcl-xL蛋白竞争结合检测实验及逆转录PCR（RT-PCR）对DRG诱导细胞凋亡的机制进行了研究。结果 在HCT-15细胞中,DRG促发了线粒体调控的凋亡途径,细胞色素c呈时效性地从线粒体中释放到胞质中,同时Bax与Bcl-2蛋白表达的相对比例上调,caspase-9、caspase-3和PARP等被剪切成具有活性的片段,但是caspase-7却未见剪切,同时还不影响P53和Bcl-xL的表达;而与死亡受体途径相关的FADD表达无明显变化,caspase-8酶原也未见剪切;另外,DRG也不抑制BH3短肽与Bcl-xL的结合;RT-PCR检测结果表明,DRG诱导HCT-15细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax的mRNA水平的改变,进而导致Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平则明显增加,说明DRG诱发的细胞凋亡中涉及到Bcl-2和Bax基因水平的变化。结论 DRG诱发HCT-15细胞凋亡的分子机制在于从基因水平影响Bax和Bcl-2靶基因的转录表达,上调Bax/Bcl-2蛋白表达水平比例,并最终通过激活经典的线粒体途径而不是死亡受体途径来发挥其HCT-15细胞凋亡诱导作用,且对P53呈非依赖型。     

八角莽草酸诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡及其机制研究

目的：研究八角莽草酸诱导人肝癌细胞HepG-2凋亡的作用和机制。方法：取对数生长期人肝癌HepG-2细胞,随机分为药物组和对照组,用0.125,0.5,1 g·L^-1不同浓度八角莽草酸作用人肝癌HepG-2细胞,采用MTT法测定莽草酸对HepG-2细胞增殖的影响;通过流式细胞仪检测在以上浓度的莽草酸对肝癌HepG-2细胞周期的影响;通过免疫细胞化学检测凋亡相关基因B细胞淋巴瘤白血病2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax蛋白）表达的改变。结果：MTT实验结果表明,各质量浓度0.125,0.5,1 g·L^-1的莽草酸对人肝癌HepG-2的生长具有显著的抑制作用（P<0.05）,呈现时间依赖性和剂量依赖性;流式结果表明莽草酸将人肝癌HepG-2细胞阻滞在G₁期,使细胞不能顺利地进入细胞DNA合成期S期,从而抑制了该细胞的增殖。免疫细胞化学检测凋亡相关基因Bcl-2蛋白表达明显减少、Bax表达明显增加;Bcl-2/Bax比例明显降低。结论：八角莽草酸在体外诱导人肝癌HepG-2细胞大量阻滞在G₁期,进入S期细胞减少,抑制细胞增殖,其作用可能通过降低Bcl-2/Bax比例来诱导细胞凋亡而实现的。     

山绿茶中Ilexgenin A对HepG2肿瘤细胞抑制作用的研究

目的:探讨3β,19α-二羟基乌苏-12-烯-24,28-二羧酸(IA)对肝癌细胞株HepG2细胞周期、凋亡的影响及其作用机制。方法:人肝癌细胞株HepG2以IA 20,40,60,80 g·L-1作用不同的时间后,分别使用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT),吖啶橙(AO)荧光染色法,免疫细胞化学SP法,流式细胞术检测HepG2细胞的增殖抑制情况,细胞周期和凋亡的形态学变化,以及细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax表达的变化。结果:IA对HepG2细胞增殖有抑制作用,其作用随着药物浓度和作用时间的增加而增强。IA作用24 h后HepG2细胞周期的主要特点是大量细胞累积于G1期,进入S期的细胞减少,IA能够诱导HepG2细胞凋亡,IA(40,60,80 g·L-1)经过24 h作用后,细胞凋亡率分别为7.89%,8.37%,9.93%,AO染色观察到大量凋亡细胞,凋亡细胞染色减弱、荧光较暗、呈均匀一致的圆状或固缩状,细胞内Bcl-2的表达随着药物浓度增加逐渐减少;Bax蛋白的表达随着药物浓度增加逐渐增加。结论:IA能够抑制HepG2细胞的增殖,并使细胞大量累积于G1期,进入S期的细胞减少,通过影响凋亡蛋白表达诱导细胞凋亡。     

垂盆草总黄酮影响肝星状细胞凋亡的作用机制研究

目的:研究垂盆草总黄酮(SSTF)对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)凋亡的影响及其作用机制。方法:将不同质量浓度的SSTF与HSC-T6细胞共培养不同时间后,MTT法检测SSTF对HSC-T6细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪Annexin-V/PI双染方法检测SSTF对HSC-T6细胞凋亡的影响;应用Western blotting和Real-time PCR方法观察药物对凋亡相关细胞因子Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白及mRNA表达的影响。结果:SSTF能显著抑制HSC-T6细胞增殖、诱导细胞凋亡,且呈剂量和时间依赖;Western blotting结果显示,SSTF通过抑制Bcl-2,促进Bax和Caspase-3蛋白表达促进细胞凋亡;进一步采用Real-time PCR研究发现,Bcl-2能够从mRNA水平抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3表达。结论:SSTF具有促进HSC-T6凋亡的作用,这种作用的发挥主要是通过抑制Bcl-2、促进Bax和Caspase-3蛋白和mRNA的表达实现的。     

芥子碱硫氰酸盐增强HepG2细胞对吉西他滨敏感性的作用

目的探讨芥子碱硫氰酸盐增强人肝癌细胞HepG2对吉西他滨敏感性的作用及分子机制。方法应用计算机分子对接技术分析芥子碱硫氰酸盐结合多耐药性相关蛋白ABCB1和ABCG2的能力,罗丹明123实验检测芥子碱硫氰酸盐对HepG2细胞外排药物能力的影响,CCK-8、克隆形成实验、流式细胞术分别检测芥子碱硫氰酸盐联合吉西他滨对HepG2细胞增殖、克隆形成、凋亡的影响,Western blot实验检测芥子碱硫氰酸盐联合吉西他滨对HepG2细胞中ABCB1、ABCG2、活化半胱天冬酶-8(Cleave caspase-8)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、凋亡相关基因(Bax)表达的影响。结果芥子碱硫氰酸盐可稳定结合多耐药性相关蛋白ABCB1、ABCG2,降低HepG2细胞外排药物的能力,增强吉西他滨对HepG2细胞增殖和克隆形成的抑制作用(P<0.05)及吉西他滨诱导HepG2凋亡的能力(P<0.05),抑制ABCB1、ABCG2蛋白表达,增强吉西他滨诱导的Bcl-2表达减少及Cleave caspase8、Bax表达增加(P<0.05)。结论芥子碱硫氰酸盐能靶向抑制多耐药相关蛋白ABCB1和ABCG2,增强肝癌HepG2细胞对吉西他滨的敏感性。     

淫羊藿苷对食管癌细胞EC9706增殖与凋亡的影响

目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对食管癌细胞EC9706增殖的影响,明确其作用机制。方法:ICA(40,160,640 nmol·L^-1)作用EC9706细胞48 h后,应用CCK8法检测EC9706细胞增殖;应用Hoechest33342染色和荧光显微镜检测细胞凋亡;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax) mRNA表达;应用免疫印迹法检测Bax,Bcl-2的蛋白表达。结果:ICA能显著抑制EC9706细胞增殖;ICA作用EC9706细胞出现细胞凋亡形态学改变;免疫印迹结果显示Bax蛋白表达减少,而Bcl-2蛋白表达增多。结论:ICA能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖,其凋亡作用机制可能与上调Bax蛋白,下调Bcl-2蛋白的表达相关。     

黄芩汤体外诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及其对凋亡相关因子表达的影响

目的：研究黄芩汤对人结肠癌SW620细胞凋亡的作用及其机制。方法：CCK-8和MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;酶标免疫测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性。结果：与对照组相比,不同浓度黄芩汤处理的细胞增殖抑制率显著增加（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.05或P<0.01）,抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促细胞凋亡蛋白Bax表达明显增高（P<0.05或P<0.01）,Caspase-3和Caspase-8活性增强（P<0.05或P<0.01）,并呈量效依赖关系。结论：黄芩汤能够有效的促进结肠癌SW620细胞凋亡,其机制可能与抑制Bcl-2表达而促进Bax表达并增强Caspase的活性有关。     

双氢青蒿素通过调节凋亡相关蛋白的表达及活性氧的产生而抑制胰腺癌JF-305细胞的增殖

探讨双氢青蒿素诱导人胰腺癌JF-305细胞凋亡作用及活性氧在双氢青蒿素诱导JF-305细胞凋亡中的作用。采用MTT法考察不同浓度双氢青蒿素对人胰腺癌JF-305细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期,Hochest 333258荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V荧光染色法检测JF-305细胞凋亡的变化,DCFH-DA检测凋亡过程中活性氧(ROS)的变化。Western blot检测细胞内Bax,Bcl-2,Cleaved caspase-3,Cleaved caspase-9和Cyto C蛋白表达的变化。与对照相比,双氢青蒿素作用JF-305细胞48 h,细胞增殖受到明显抑制(P0.05);细胞被阻滞于G2/M期;细胞出现核浓缩聚集、碎裂的凋亡形态,细胞凋亡比例升高(P0.05);DCFH-DA检测双氢青蒿素给药组细胞ROS明显升高(P0.05);Western blot结果显示,双氢青蒿素作用后细胞内Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调,Bax/Bcl-2蛋白表达比例升高,Cleaved caspase-3,Cleaved caspase-9和Cyto C蛋白表达升高。双氢青蒿素能诱导JF-305细胞凋亡,其凋亡过程可能与ROS的生成增加相关。     

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??OBJECTIVE To study the apoptosis of human gastric cancer cell line BGC-823 induced by liposome of total glucosides from paeonia(TGP liposome ). METHODS The inhibition of cell proliferation was determined by Cell Counting Kit-8 assay.The morphological changes of the apoptosis cells were observed by HE staining,Hoechst 33258 fluorescent staining, transmission electron microscope. Changes of apoptosis related factor Bcl-2 and Bax protein expression were detected by Western blot. RESULTS TGP liposome significantly inhibited proliferation of BGC-823 cells in a dose-dependent manner(P<0.05). GC-823 cells induced by TGP liposome for 48 h was observed on morphological changes such as karyopyknosis and karyorrhexis and apoptotic bodies. Bcl-2 expression was reduced, but Bax expression was increased,so the ratio of Bcl-2 /Bax decreased. CONCLUSION TGP liposome can induce the apoptosis of BGC-823 cells and inhibit its proliferation, its mechanism may be related to down-regulating protein expression of Bcl-2, up-regulating protein expression of Bax, reducing Bcl-2/Bax value.