去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞增殖和分化的影响

观察去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系ＳＨＧ－４４细胞增殖和分化的影响。方法细胞培养、免疫组化、光镜和电镜观察及流式细胞仪检测。结论：ＮＤＧＡ对ＳＨＧ－４４细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用,且这种作用有周期特异性。     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用

探讨去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞裸鼠移植瘤的作用,方法采用光镜和电镜观察移植瘤细胞的形态变化,用流式细胞仪进行细胞周期分析;用免疫组化检测肿瘤细胞中ＧＦＡＰ、ＰＣＮＡ的蛋白表达情况。结果（１）ＮＤＧＡ可明显降低裸鼠移植瘤的成瘤率;（２）ＮＤＧＡ能抑制移植瘤细胞的生长和诱导其分化,使细胞增殖受阻于Ｇ１→Ｓ期。结论：ＮＤＧＡ在体内与体外有相同的抗胶质瘤作用。     

去甲二氢愈创木酸的抗肿瘤作用研究进展

去甲二氢愈创木酸(Nordihydroguaiareticacid,NDGA)是一种天然物质,广泛存在于多种含树脂的植物中,以常青灌木分叉拉瑞阿(Larreadivaricata)中含量最为丰富,化学合成这一物质也已有不少报道[1].     

去甲二氢愈创木酸对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5生长的影响

目的观察去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人恶性胶质瘤细胞系CHG-5体内外生长的影响.方法采用MTT法、流式细胞仪、光镜等技术观察CHG-5细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和裸鼠移植瘤生长情况.结果NDGA可显著抑制CHG-5细胞体外增殖,G0/G1期细胞明显增多,S、G2/M期细胞减少,凋亡细胞增加.采用接种后第5天按50 mg/kg腹腔内注射给药,治疗组移植瘤体积较对照组缩小,未见明显的毒副作用.结论NDGA对CHG-5细胞的体内外生长具有一定的抑制作用,其作用可能与细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

去甲二氢愈创木酸与氨甲喋呤、长春新碱配伍对人恶性胶质瘤细胞株的作用

目的：观察体外应用去甲二氢愈创木酸（NDGA）、氨甲喋呤（MTX）、长春新碱（VCR）3种药物单用或合用对人恶性胶质瘤细胞株SHG－44细胞的作用,并探讨其作用的可能机制。方法：用MTT法检测药物作用效应,用免疫组化染色法检测细胞CyclinD1基因的蛋白表达情况。结果：①3种药物单用及两药合用时随着药物浓度的增加其抗肿瘤效应也增加,且两药合用药物的效应增强;②先给NDGA24h后再给MTX或VCR,与同时给药对该细胞的抗肿瘤效应差异无显著性（P＞0.05）,而先给MTX或VCR24h后再给NDGA,与同时给药对细胞的抗肿瘤效应差异有显著性（P＜0.05）;③免疫组化染色结果显示,与对照组相比,NDGA处理后该细胞Cyclin D1基因的蛋白表达明显降低。结论：NDGA与MTX或VCR间有 协同作用,且这种作用可能与NDGA降低细胞cyclin D1基因的蛋白表达有关。     

去甲二氢愈创木酸抑制骨肉瘤细胞黏附、迁移和侵袭

目的研究去甲二氢愈创木酸(NDGA)对骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭特性的影响,并初步探讨其相关机制。方法不同浓度的NDGA处理MG63细胞,用CCK-8法、细胞划痕试验和Transwell小室模型分别测定其黏附力、迁移力和侵袭力,Western blot法检测MG63细胞基质金属酶(MMPs)表达量的变化。结果 NDGA明显抑制骨肉瘤MG63细胞株黏附、迁移和侵袭力(P<0.05);NDGA抑制MG63细胞的黏附、迁移和侵袭力呈剂量依赖性;Westernblot检测表明MG63细胞MMP-2和MMP-9的表达明显下调。结论 NDGA可抑制骨肉瘤MG63细胞的体外黏附,迁移和侵袭,这种抑制效应可能是通过减少骨肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的表达来实现。     

去甲二氢愈创木酸对恶性胶质瘤细胞基因组甲基化水平的影响及其意义

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞分化过程中基因组甲基化状态改变及其意义。方法：合成甲基化敏感性AP－PCR引物,用AP－PCR方法检测SHG－44细胞基因组甲基化状态,观察NDGA诱导该细胞分化过程中甲基化水平的变化。结果：对照组基因组DNA经MspI酶解后AP－PCR扩增片段比HpaII酶解后的扩增片段小,几乎未见存留大片段,至少有3个片段与HpaII酶解片段不同。同一时相点HpaII酶解后扩增产物相比,NDGA处理后基因组DNA Msp I酶解后的扩增产物量较少、条带较多,且随时相点延长产物量逐渐增加,条带增多。结论：NDGA诱导人恶性胶质瘤细胞SHG－44细胞分化过程中基因组甲基化状态增高,推测基因组甲基化状态可能是NDGA诱导胶质瘤细胞分化的作用靶点之一。     

去甲二氢愈创木酸对SHG-44胶质瘤细胞GFAP基因表达的影响

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞分化过程中中对GFAP基因表达的影响及其意义。方法：用免疫组织化学和原位杂交方法定性、定量检测人恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞GFAP基因的表达水平。结果：NDGA处理后,瘤细胞GFAP蛋白及mRNA表达水平明显增高（P＜0.01）。结论：NDGA具有诱导恶性胶质瘤细胞GFAP基因表达的作用,推测GFAP基因表达上调可能是NDGA诱导胶质瘤细胞分化的作用机制之一。     

bcl-2、c-myc基因表达在去甲二氢愈创木酸诱导人恶性胶质瘤细胞凋亡中的意义

目的：观察bcl-2、c-myc在去甲二氢愈创木酸（NDGA）诱导恶性胶质瘤细胞系SHG－44细胞凋亡中的变化及意义。方法：利用光镜和电镜观察及TUNEL法检测培养细胞凋亡的情况,用免疫组织化学、原位杂交和图像分析等方法检测bcl-2、c-myc基因mRNA和蛋白的表达水平。结果:①一定浓度的NDGA处理SHG－44细胞12－96h,均可诱导SHG－44细胞发生凋亡,且随着作用时间的延长,凋亡细胞数增加越明显;②经NDGA处理细胞后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc蛋白表达水平降低,且随着作用时间的延长,这种趋势更加明显,与细胞调亡的发生密切相关;③原位杂交结果显示,NDGA处理细胞不同时间后,出现SHG－44细胞bcl-2、c-myc基因mRNA的表达水平降低,结果与免疫组化检测一致。结论：NDGA诱导SHG－44细胞的凋亡可能与其下调bcl-2、c-myc基因的表达有关,但其确切机制有待进一步深入研究。     

去甲二氢愈创木酸对内皮细胞影响的形态学观察

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）对内皮细胞形态的影响及特点。方法：采用倒置显微镜、光镜、电镜和流式细胞仪观察分析不同浓度NDGA作用下人脐静脉内皮细胞系ECV－304细胞形态和细胞调亡峰的变化。结果：①不同浓度（50－200μmol/L）的NDGA处理ECV－304细胞24－72h后或一定浓度（100μmol/L）的NDGA处理ECV－304细胞不同时间（1－7d）后,内皮细胞由多角形变长,呈梭形,细胞稀疏,核分裂明显减少,显示细胞增殖的抑制,上述变化与NDGA的浓度和作用时间有关;②NDGA处理后,部分细胞呈现出调亡样形态学改变,以48h为明显。流式细胞仪检测也出现明显高于对照的调亡峰即亚G0峰,12h时相点最高（20.42％）。此外,处理后的细胞也有变性、坏死等病理变化,与NDGA的浓度呈正比。结论：NDGA对内皮细胞的生长和增殖有抑制,形态学初步证明也有诱导调亡等作用,这在影响血管生成中可能具有一定意义。     

Study of apoptosis induced by nordihydroguaiaretic acid in human ma-lignant glioma cell line SHG-44

Objective: To investigate the effect and mechanism of nordihydroguaiaretic acid (NDGA) on apop-tosis in human malignant glioma cell line SHG-44. Methods: Cell growth inhibition was measured with MTT assay. Cell apoptosis was observed with light and electron microscopy and TUNEL. Expression of bcl-2 gene was measured with immunohistochemistry, in situ hybridization and image analyses. Results: NDGA at the concentration of 100 μmol/L inhibited the proliferation of SHG-44 cells and induced apoptosis in a time-de-pendent manner. The expression of Bcl-2 protein in SHG-44 cells was decreased in the present of 100 μmol/L NDGA along with the duration of treatment in a negative correlation with the degree of cell apoptosis. The bcl-2 mRNA expressed in SHG-44 cells was reduced after treatment with 100 μmol/L NDGA, apparently consistent with the immunohistochemical results. Conclusion.- NDGA can induce apoptosis of human malig-nant glioma cells probably by down-regulating expression of bcl-2 gene, though the exact mechanism needs further study.     

去甲二氢愈创木酸对活体血管生成作用的实验研究

目的　观察去甲二氢愈创木酸 (NDGA)对在体血管生成的影响。方法　采用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)试验 ,检测NDGA对血管生成的影响。结果　 2 .5× 1 0 -6mmol以上量的NDGA均对血管生成有抑制作用 ,在实验剂量 ( 0 .5～ 5 0 )× 1 0 -6mmol范围内 ,随给药量的增加 ,其抑制作用愈加明显。采用Bouin’s液原位固定后取膜、DAB染色、普通显微镜下观察或用图像分析方法可使结果更具可信性与可比性。结论　NDGA可抑制血管生成 ,对肿瘤及其它病理情况下的抗血管生成治疗可能具有重要的应用价值     

去甲二氢愈创木酸治疗子宫内膜异位症的实验研究

目的 探讨血管生成抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对子宫内膜异位症巴马香猪动物模型的影响.方法 采用建模成功的巴马香猪6头,分为实验组NDGA组4头和对照组PBS组2头,实验组隔日皮下注射NDGA和对照组给予等体积的PBS溶液,连续给药20 d.观察给药前、后血清激素水平和异位内膜包块的变化情况,以及FⅧRag和VEGF的表达情况.结果 NDGA组血清E2显著降低(P＜0.05).NDGA组异位内膜包块不同程度的缩小,甚至少部分消失;PBS组包块无明显变化,部分略有增大.NDGA能显著抑制子宫内膜腺体数目减少,间质紧密;PBS组子宫腺体数目多,间质疏松.NDGA组减少微血管密度(MVD)的数目和VEGF的弱表达(P＜0.05);PBS组微血管密度(MVD)的数目多和VEGF的强表达(P＜0.05).结论 NDGA组种植的异位灶缩小甚至部分消失.     

蜂毒肽对人神经胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

目的 研究蜂毒肽对体外培养的入神经胶质瘤细胞的增殖抑制和诱导凋亡的作用.方法 MTT法检测蜂毒肽对两种人神经胶质瘤细胞(U87、U251)的增殖抑制率;流式细胞仪和凝胶电泳法检测蜂毒肽对两种肿瘤细胞的凋亡诱导作用.结果 蜂毒肽能够明显抑制两种细胞的生长(P＜0.05);浓度为1、10、20、40、80、160、200 mg/L的蜂毒肽诱导U87和U251细胞的凋亡率分别达到12.80%、16.92%、22.69%、34.05%、41.82%、59.87%、80.25%和11.61%、16.21%、22.03%、30.57%、41.10%、58.33%、79.12%,其诱导凋亡作用与剂量呈正相关.结论 蜂毒肽对人神经胶质瘤细胞具有明显的增殖抑制和促进凋亡作用.     

胶质瘤中hsa-miR-20a的表达及对细胞增殖的影响

目的探讨hsa-miR-20在胶质瘤中的表达情况及对胶质瘤细胞增殖的影响。方法应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法检测正常脑组织和不同级别脑胶质瘤组织中miR-20a的表达情况;脂质体转染miR-20a模拟物后,通过MTT比色法及流式细胞术观察胶质瘤U251细胞增殖的变化。结果 (1)与正常脑组织相比,胶质瘤组织miR-20a的表达水平显著增高(P=0.035);(2)胶质瘤组织恶性程度越高,miR-20a表达越高(P<0.001);(3)u251细胞转染miR-20a模拟物后,增殖能力明显加快,S期细胞比例明显增多(P<0.001)。结论 miR-20a能促进胶质瘤细胞的增殖,其高表达在脑胶质瘤的发生、发展中起重要作用。