缺血预处理对肝脏缺血——再灌注损伤的保护作用机制及应用

随着肝脏外科的发展，在临床上肝移植术越来越多地应用于多种肝脏疾病。肝门阻断、选择性半肝血流阻断、全肝血流阻断等一系列外科技术的应用，以及肝移植、休克等过程中，均遇到肝脏缺血再灌注(Ischemia／reperfusion，I／R)损伤问题。如何提高肝脏的自我保护能力，调动其内源性的保护机制，目前已成为肝脏外科发展的方向和热点。本文就近年来国内、     

维生素E在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨维生素E在肝组织缺血再灌注(I/R)损伤的保护机制及对缺血预处理(IP)的影响。方法采用大鼠原位半肝缺血再灌注和缺血预处理模型,缺血前通过灌胃给予维生素E(250mg/kg),分析血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、全血还原型谷胱甘肽(GSH)、肝组织脂质过氧化物(LPO)、超氧化物歧化酶(SOD)含量及肝组织病理改变等各项指标。结果I/R导致明显的肝损伤,IP减轻肝I/R损伤,维生素E能减轻肝组织缺血再灌注损伤,但可以部分抵消IP的保护作用。结论维生素E能减轻肝组织缺血再灌注损伤,其作用是通过减少氧自由基产生而实现的。IP对鼠肝I/R有明显的保护作用,IP期间产生的一定量的自由基,对随后的I/R的保护作用具有重要意义。维生素E导致氧自由基减少是肝IP保护作用的不利因素。     

热休克预处理对大鼠胰腺移植后缺血性再灌注损伤的抑制作用

摘要 目的：通过热休克预处理（HPC）,探讨减轻大鼠胰腺移植后缺血再灌注损伤的发生机制。 方法：热休克预处理后动态检测大鼠胰腺组织热休克蛋白表达。建立大鼠胰腺移植缺血再灌注模型,选择表达热休克蛋白高峰时段供体大鼠胰腺移植作为实验组,未预处理的供体大鼠胰腺移植作为对照组。胰腺移植后6h,检测静脉血及移植胰腺。Western blot法检测胰腺组织中热休克蛋白70（HSP70）的表达,免疫组化法测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达。碘淀粉比色法检测血淀粉酶水平。光镜观察胰腺病理改变。 结果：HPC后供体大鼠胰腺中HSP70的表达在12h 达到高峰,与其它各时段比较具有显著差异（P<0.05）,与未预处理组比较差异也显著（P<0.01）,48h恢复到原来水平。对照组胰腺组织中TNF-α、中性粒细胞、血淀粉酶的水平明显升高,与假手术组相比差异显著（P<0.01）。实验组降低了胰腺组织中TNF-α、中性粒细胞、血淀粉酶的水平,与对照组比较差异具有统计学意义。（P<0.05）。实验组胰腺间质水肿及出血明显低于对照组。 结论：热休克预处理可以减轻大鼠胰腺移植后缺血再灌注损伤, 热休克预处理的延迟保护作用与HSP70的诱导生成有关。     

热休克预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌P-选择素表达的影响

目的观察热休克预处理对大鼠缺血再灌注损伤心肌P-选择素(PS)表达的影响。方法成年雌性Wistar大鼠40，只，随机分为3组。热休克组予全麻后高热处理致肛温达42士O．5℃维持15min制成热休克动物模型，24小时后热休克组及对照组结扎左冠状动脉前降支(LAD)1小时，再灌注2小时制成心肌缺血再灌注损伤动物模型，假手术组只于LAD处穿线。术毕测血清CK-MB、心梗范围、热休克蛋白70(HSP70)、PS。结果热休克组HsP70表达高于对照组及假手术组(P＜O．05)，后两组比较差异无显著意义(P＞O．05)；热休克组心梗范围、血清CK-MB、PS表达皆少于对照组(P＜O．05)；HSP70的表达与Ps的表达成负相关(r=-O．560)。结论热休克预处理对心肌缺血再灌注损伤有保护作用；Ps参与了心肌缺血再灌注损伤；HSP70可能有抑制缺血再灌注损伤心肌Ps表达的作用，这或许是热休克预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的另一保护机制。     

肢体缺血预处理对大鼠肝缺血-再灌注损伤的延迟性保护作用

目的观察肢体缺血预处理(LIPC)对大鼠肝缺血-再灌注(I-R)损伤的延迟性保护作用。方法雄性SD大鼠36只,随机分为对照组(S组),I-R组,LIPC组,每组12只。S组仅行开腹,不作其他处理;I-R组行肝缺血1h,再灌注3h;LIPC组先行双后肢缺血5min,反复3次24h后行肝缺血1h,再灌注3h。手术完毕,腹主动脉采血用于检测总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、血清ALT与AST;切取肝组织,测定肝脏的湿干比(W/D),免疫组化检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达,同时光电镜观察肝组织显微、超微结构的变化。结果与I-R组比较,LIPC组T-SOD活性增加(P<0.01),MDA水平、ALT、AST、W/D值及TNF-α的阳性表达均明显降低(P<0.01),肝脏的显微及超微结构损伤减轻。结论 LIPC对大鼠肝脏I-R损伤有明显的延迟性保护作用。其机制可能与增加机体抗氧化能力、抑制肝脏炎症反应、减轻肝脏水肿、抑制TNF-α的表达和改善肝组织微循环有关。     

葛根素预处理在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的抗氧化作用

目的观察葛根素预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的防护作用。方法雄性SD大鼠,建立肝脏缺血再灌注模型（HIR）。随机分为假手术组、HIR组和HIR-葛根素预处理组。黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸比色法分别测定肝组织中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性的变化,同时分析NO含量的改变。结果肝脏缺血再灌注损伤后,与假手术组比较,肝组织中MDA活性及NO含量均显著增加,而SOD活性显著降低;经40mg/kg剂量的葛根素预处理7d后,与模型组相比,肝组织中MDA活性及NO含量显著降低,而SOD活性增高。结论葛根素预处理对大鼠缺血再灌注肝脏损伤有一定的保护作用。     

高压氧预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的探讨高压氧预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法 40只雄性SD大鼠随机分为4组,假手术组(SO组);缺血再灌注组(IR组);高压氧预处理1组(HBO1组);高压氧预处理2组(HBO2组),每组10只。测定4组大鼠经处理后血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬酸氨基转移酶(AST)以及各组大鼠经处理后肝脏组织学变化。结果 HBO2组及IR组ALT、AST水平明显高于SO组(P<0.05);HBO2组ALT、AST水平高于IR组(P<0.05);与HBO1组比较,HBO2组及IR组ALT、AST浓度差异均有统计学意义(P<0.05);HBO1组ALT、AST水平虽有上升,但与SO组比较差异无统计学意义(P>0.05)。HBO1组肝脏组织、小叶及汇管区结构清晰,可见肝细胞轻度水肿及瘀血;IR组肝小叶及汇管区可见轻度炎细胞浸润,片状肝细胞水肿,少数明显内空泡样变,肝组织瘀血,肝细胞坏死轻微;HBO2组肝脏小叶结构存在,肝小叶及汇管区可见大量炎细胞浸润,肝细胞坏死严重,HBO2组肝细胞水肿、坏死范围大于IR组。结论适量的高压氧预处理对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,而过量高压氧预处理,5d加重大鼠肝脏缺血再灌注损伤。     

双后肢缺血预处理对肝脏缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

在兔肝脏缺血再灌注 ( I/R)模型基础上建立动物双后肢缺血预处理 ( IPC)及肝脏 IPC模型 ,观察其对肝脏保护作用。结果发现 ,双后肢 IPC组及肝脏 IPC组与单纯肝脏 I/R组比较 ,代表肝脏功能的血清肝酶 ( AL T、AST、ALP、γ-GT)均降低 ,P<0 .0 5 ;而双后肢 IPC与肝脏 IPC组比较无统计学意义 ,P>0 .0 5     

雌激素与雌激素受体在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用

目的 观察雌激素与雌激素受体在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用.方法 用Pringle's大鼠全肝缺血再灌注损伤模型,选取健康清洁级雄性SD大鼠120只,随机分成假手术组、肝缺血再灌注组和雌激素干预组(预处理+肝缺血再灌注组)3组,每组各40只;检测血清谷丙转氨酶(ALT)水平,HE染色观察肝脏组织形态学变化,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-a(TNF-a)水平,免疫组化方法检测肝脏组织核转录因子(NF-KB)和雌激素受体(ER)的表达情况.结果 假手术组,血清ALT,TNF-a水平升高不明显,ER,NF-KB表达无明显变化,肝脏组织形态学改变不明显;缺血再灌组、雌激素干预组的ALT,TNF-a水平与ER,NF-KB表达显著升高;但雌激素干预组ER表达明显高于缺血再灌组,缺血再灌组的NF-KB表达明显高于雌激素干预组,缺血再灌组的肝脏组织损伤程度显著高于雌激素干预组.结论 雌激素能刺激雌激素受体表达,进而降低TNF-a水平、抑制NF-KB表达,来减轻肝脏缺血再灌注损伤.     

rhEPO对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨rhEPO对大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用及其处理时间。方法:健康Wistar大鼠36只,随机分为对照组A、缺血前30 min预处理组B和缺血后5 min后处理组C 3组,每组12只。A组只给予夹闭肝蒂,B、C组均于皮下注射rhEPO 1 000 U/kg,三组均夹闭肝蒂45 min后恢复再灌注2 h,取血清及肝组织行AST、ALT、TNF-α、IL-1β检测及HE染色、NF-κβ的活化程度及计算肝组织凋亡指数(AI)。结果:与A组比较,B、C组肝细胞索排列较好,细胞坏死程度不明显。AST、ALT和TNF-α、IL-1β及NF-κB活化程度、AI在A组和B、C组之间均有显著差异(P<0.05),B和C组之间(除IL-1β外)也具有统计学意义(P<0.05)。结论:rhEPO对缺血再灌注损伤的肝脏具有保护作用且预处理较后处理效果好。     

热休克蛋白70对幼鼠心肌缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的研究川芎嗪（TMP）诱导热休克蛋白（HSP）70对未成熟心肌缺血再灌注损伤的保护作用,探讨其干预心肌缺血再灌注损伤的作用机制及合理用药途径,为临床使用提供理论依据。方法建立幼鼠在体心肌缺血再灌注模型。将96只体重60-75g SD幼鼠（〈21d）,随机分为3组：（1）假手术（SC）组,（2）缺血再灌注（IR）组,（3）TMP预处理后缺血再灌（TMP＋IR）组;每组再随机分为4个亚组：12h亚组、24h亚组、36h亚组、48h亚组,各亚组分别于腹腔药物注射[TMP＋IR组腹腔注射TMP（100mg／kg）,SC组与IR组腹腔注射等量0．9％氯化钠溶液]后12h、24h、36h、48h制作心肌缺血再灌注模型。测定血清中肌酸激酶同工酶（CK—MB）、乳酸脱氢酶（LDH）两种酶的含量,测定幼鼠心肌内HSP70的含量．应用电镜观察幼鼠心肌细胞超微结构的病理改变。结果IR组和TMP＋IR组各时间点血清中CK-MB、LDH含量明显高于SC组（P〈0．01）;IR组心肌中HsP70表达量较SC组略增加,TMP＋IR组HSP70的表达明显增加;电镜心肌细胞超微结构观察：SC组心肌细胞结构基本正常,IR组损伤最严重,TMP＋IR组心肌细胞损伤较IR组有明显改善。结论HSP70的表达可以减轻未成熟心肌的缺血再灌注损伤,可以提高未成熟心肌对损伤性应激的耐受能力。     

蒺藜皂苷预适应对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨蒺藜皂苷(GSTT)预适应对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。方法 56只大鼠随机分假手术组(Sham)、缺血/再灌注(I/R)组、缺血预适应组(IP)、阳性药(尼可地尔1.0mg·kg-1)组、GSTT100、30、10mg·kg-1组。采用分光光度法测定血清乳酸脱氢酶(LDH),二氨基二苯甲烷(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)水平。ELISA法测定血清TNF-α与IL-6的含量。光学显微镜下观察受损心肌病理组织学改变,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot检测心肌组织内caspase-3表达。结果与模型组比较,GSTT100、30mg·kg-1组LDH、MDA含量明显降低,SOD活性明显升高(P<0.01),TNF-α及IL-6含量也明显降低,凋亡细胞数明显减少(P<0.01),caspase-3表达下降,心肌组织形态明显改善。结论蒺藜皂苷预先给药对大鼠心肌缺血/再灌注损伤具有保护作用,能减少自由基生成,抑制细胞凋亡。     

参麦注射液对抗大鼠心肌缺血再灌注性心律失常作用

目的:探讨参麦注射液对抗大鼠心肌缺血再灌注性心律失常的影响及其作用机制.方法:结扎/松解Wistar大鼠左冠状动脉前降支,建立假手术组(Sham)、缺血组(MI)、再灌注组(MI/R)、参麦组(SM)动物模型.动态Ⅱ导联心电图监测各组心律失常发生率及持续时间,再灌注15 min和60 min S-T段改变;免疫组化技术和图像分析技术检测心肌细胞内HSP70表达;硫代巴比妥酸(TBA)法和黄嘌呤氧化酶法分别测心肌组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力;优化紫外分光光度法测血清肌酸激酶(CK)活性.结果:(1)SM组心律失常发生率及持续时间均明显低于其他各组,S-T段降低(P＜0.05).(2)SM组心肌组织HSP70表达量、SOD活力高于MI/R组(P＜0.05),MDA含量及血清CK活性低于MI/R组(P＜0.05).结论:参麦注射液有效地对抗再灌注损伤所致的心律失常的发生率及持续时间,其作用机制可能与增加再灌注心肌组织HSP70含量、SOD活性,减少膜脂质过氧化,稳定膜结构有关.     

高密度脂蛋白对缺血再灌注大鼠心肌损伤保护作用的研究

目的 探讨高密度脂蛋白(HDL)预处理对大鼠心肌缺血再灌注的影响.方法 将42只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)和缺血再灌注HDL预处理组(H/IPC).以穿线结扎左冠状动脉制备心肌缺血再罐注模型,H/IR组缺血前10 min经尾静脉注入HDL(30 mg/kg).检测3组大鼠缺血再灌注后30、60、120、240 min血清肌酸激酶(CK)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的含量;观察3组大鼠缺血再灌注后120 min心肌组织病理学变化.结果 H/IPC组与IR组比较,大鼠CK、ICAM-1含量均降低,下降率分别为36.5%、32.0%、12.6%(P＜0.01);S组CK、ICAM-1含量明显低于IR组(P＜0.01),S组心肌纤维大小均匀、线粒体结构清楚;与IR组比较,H/IPC组伤后240 min心肌细胞变性、炎性细胞浸润及线粒体肿胀程度减轻,且未见细胞溶解坏死.结论 HDL对大鼠心功能的保护作用,可能与HDL抑制ICAM-1的表达有关.     

Heme oxygenase-1 could mediate the protective effects of hyperbaric oxygen preconditioning against hepatic ischemia-reperfusion injury in rats

1. Heme oxygenase 1 (HO-1) has been shown to play a pivotal role in the maintenance of cellular homeostasis when the liver undergoes sublethal stress, such as ischaemia-reperfusion (I/R) injury. In the present study, we investigated the protective role of HO-1 in hyperbaric oxygen (HBO) preconditioning against liver injury after I/R. 2. A total hepatic ischaemia (30 min) and reperfusion (60 min) injury model in rats was used in the present study. Preconditioned groups were exposed to HBO 24 h prior to the induction of I/R injury. Other groups were injected with zinc protoporphyrin IX (ZnPP) intraperitoneally 1 h before I/R to inhibit HO-1 activity. At the end of the reperfusion period, blood and liver samples were collected for the analysis of liver injury markers, morphological changes, and HO-1 expression and activity in the liver. 3. In untreated rats, I/R induced an increase in hepatic injury markers, such as plasma transaminases, inflammatory cytokines (tumour necrosis factor-α and interleukin-1β), and tissue malondialdehyde. However, HBO preconditioning attenuated the I/R-induced increases in these hepatic injury markers, and prevented both the necrosis and apoptosis of hepatocytes induced by I/R injury. Furthermore, HBO preconditioning significantly increased HO-1 mRNA and protein levels in the liver. In rats in which HO-1 activity had been inhibited with ZnPP pretreatment, the protective effects of HBO preconditioning against I/R injury were abolished. 4. In conclusion, HBO preconditioning can protect the liver against I/R injury and it appears that this effect might be mediated by the induction of HO-1.     

无创性肢体缺血预适应增强大鼠缺血/再灌注损伤后心肌抗氧化能力

目的研究无创性肢体缺血预适应对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用,并从氧化-抗氧化角度初步探讨其作用机制。方法大鼠被随机分为缺血/再灌注(I/R)、心脏缺血预适应(CIP)和肢体缺血预适应(LIP)3组。LIP组连续3d经历左后肢缺血预适应。d4,各组动物均经历心肌缺血/再灌注损伤,CIP组于缺血前行心肌缺血预适应。连续监测心电图变化,检测心肌梗死范围,测定心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果与I/R组比较,LIP及CIP组ST-段抬高幅度降低,室早出现时间推迟,持续时间缩短,室性心律失常发生率降低,心肌梗死范围缩小,SOD、GSH-PX活性升高,XOD活性降低,MDA含量减少。结论LIP具有与CIP相似的心脏保护作用,其机制与增强心肌抗氧化能力有关。     

褪黑素对急性肾脏缺血-再灌注损伤小鼠热休克蛋白表达的影响

目的 建立小鼠肾脏缺血-再灌注损伤模型,观察褪黑素时热休克蛋白合成的影响,了解褪黑素对小鼠急性肾脏缺血-再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 昆明种小鼠40只,随机分成假手术组、缺血-再灌注组和褪黑素高、低剂量组.缺血-再灌注24 h后观察肾脏组织的病理学改变,并通过免疫组织化学方法观察小鼠肾脏热休克蛋白的表达.结果 与假手术组相比,缺血-再灌注组肾小管上皮细胞呈明显的缺血性改变,肾小球内中性粒细胞数目明显增多,肾脏热休克蛋白表达明显增强;褪黑素高、低剂量组与缺血-再灌注组相比,肾小管上皮细胞缺血性改变减轻,肾小球内中性粒细胞数目明显减少,肾脏热休克蛋白表达明显增强.结论 褪黑素通过诱导热休克蛋白的合成,能减轻小鼠急性肾缺血-再灌注的损伤.     

血必净对大鼠肝缺血-再灌注后肾损伤的保护作用

目的 探讨血必净注射液对肝脏缺血-再灌注后肾损伤的保护作用及机制.方法 将90只健康雄性Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(SOG组)30只,缺血再灌注组(I/R组)30只,血必净组(XBJ组)30只.血必净组术前3 d经尾静脉注射血必净注射液5ml·kg-1·d-1.于再灌注6 h、12 h、24 h各组分别随机选取10只大鼠进行标本检测:观察动物肾脏组织病理切片;测量肾脏组织中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的含量.结果 光镜下I/R组、XBJ组与SOG组在相同时相点比较,I/R组病理改变较XBJ组严重; XBJ组与I/R组在相同时相点比较MDA含量显著下降,SOD活性显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 血必净注射液对肝脏缺血-再灌注后肾损伤具有保护作用,该作用与减少氧自由基的产生有关.     

无创性延迟肢体缺血预适应对抗大鼠脑缺血再灌注损伤的内皮机制

目的:研究无创性延迟肢体缺血预适应(noninvasive delayed limb ischemic preconditioning,NDLIP)对脑缺血再灌注大鼠内皮细胞分泌功能的影响并探讨其作用机制。方法:健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham)、脑缺血再灌损伤(ischemia-reperfusion injury, I/R)组、早期脑缺血预适应(early cerebral ischemic preconditioning,ECIP)组和NDLIP组,建立大鼠脑缺血再灌注模型,实施1 h缺血/24 h再灌注,ECIP组于缺血前左侧颈总动脉行3次5 min缺血/5 min再灌注,NDLIP组于缺血前3 d每天左后肢实施3次5 min缺血/5 min再灌注。TTC染色法测定脑梗死面积,分别在缺血前及再灌注24 h后测定血清内皮素(endothelin, ET-1)、一氧化氮(nitric oxide, NO)的含量及组织纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator, t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂(plasminogen activator inhibitor, PAI-1)的活力。结果:缺血前,与I/R组比较,ECIP组和NDLIP组血清NO浓度升高(P<0.05),ET-1/NO比值降低(P<0.05),再灌注后,与I/R组比较,ECIP组和NDLIP组梗死范围显著减小,血清ET-1降低(P<0.01),NO增加(P<0.01),ET-1/NO比值降低(P<0.05),t-PA活力升高(P<0.01),PAI-1活力降低(P<0.01)。结论:NDLIP可能是通过调整内皮细胞分泌收缩与舒张、促凝与抗凝物质的平衡,抵抗脑缺血再灌注损伤的作用,其保护程度与ECIP相当。