牛磺酸对兔动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨牛磺酸对兔动脉粥样硬化血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax和caspase-3蛋白表达的影响.方法:将24只日本大耳白兔随机分为正常对照组、高脂模型组和牛磺酸组,14周后观察各组主动脉组织病理形态学改变,透射电镜观察斑块内平滑肌细胞超微结构变化,流式细胞术检测动脉粥样斑块内平滑肌细胞凋亡率,免疫组化染色法检测凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白表达,Western blot蛋白印记法检测caspase-3蛋白表达.结果:高脂模型组与正常对照组比较,动脉内膜出现典型的斑块,管腔极度狭窄,典型的凋亡平滑肌细胞明显增多,平滑肌细胞凋亡率、bax及caspase-3蛋白表达升高(P<0.01),bcl-2蛋白表达降低(P<0.05).牛磺酸组与高脂模型组比较,主动脉斑块缩小,动脉管腔狭窄减轻,凋亡平滑肌细胞不典型且较少,平滑肌细胞凋亡率、bax蛋白表达及caspase-3蛋白表达降低(P<0.01),bcl-2蛋白表达升高(P<0.05).结论:牛磺酸可能通过对bcl-2、bax及caspase-3蛋白表达的调控而降低动脉斑块内过度凋亡的平滑肌细胞,从而抑制粥样斑块的形成.     

球囊损伤血管内皮后平滑肌细胞凋亡相关基因表达及粉防已碱的作用

目的 :研究球囊损伤后血管平滑肌细胞 （VSMC）凋亡机制及粉防已碱 （Tet）对 VSMC凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法 :采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记法 （TU NEL ）和免疫组化技术检测球囊损伤内皮后 VSMC凋亡及 bcl- 1,bax蛋白表达的变化。结果 :球囊损伤后血管壁增生 ,血管中膜和内膜出现细胞凋亡。 Tet可明显促进 VSMS凋亡、降低球囊损伤后内膜及中膜厚度、增加管腔面积 （P<0 .0 5 ） ,促进 bax蛋白的表达、抑制 bcl- 2蛋白的表达 （P<0 .0 5 ）。结论 :bax,bcl- 2参与了球囊损伤内皮后血管平滑肌细胞凋亡的调节 ,Tet增加 VSMC细胞凋亡 ,防止血管再狭窄     

缺氧复氧对平滑肌细胞增殖与凋亡的影响及蝎毒的干预

目的 观察缺氧复氧及在此基础上给予蝎毒后血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的改变及凋亡相关基因bcl-2、bax的变化,探讨缺氧复氧对VSMC的损伤和蝎毒对缺氧复氧VSMC的保护作用及机制.方法 组织贴块法培养VSMC后随机分为6组:对照组、缺氧复氧模型组、模型+蝎毒组,其中蝎毒又分为5、10、20、40 mg/L不同浓度组.MTT测定细胞增殖变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法测定bcl-2、bax表达.结果 (1)MTT法测定对照组、模型组A值分别为1.70±0.24、2.23±0.27,二者存在显著性差异(P＜0.05).蝎毒5、20 mg/L组A值分别为1.99±0.28、2.13±0.24,与对照组比较有统计学意义(P＜0.05);10、40 mg/L组A值分别为1.92±0.16、1.89±0.74,与模型组比较有统计学意义(P＜0.05).(2)对照组细胞凋亡率为(26.4±1.4)%,模型组凋亡率为(17.4±0.9)%,两组之间存在显著差异(P＜0.05).蝎毒5、10、40 mg/L组细胞凋亡率分别为(25.6±2.8)%、(33.5±3.5)%、(34.5±5.2)%,与模型组比较均有统计学意义(均P＜0.05);20 mg/L组细胞凋亡率为(20.1±2.4)%,与对照组比较有统计学意义(P＜0.05).(3)与对照组比较,模型组bcl-2与bax蛋白阳性率及bcl-2/bax比值均有显著变化(P＜0.05);蝎毒各浓度组bcl-2/bax比值与模型组比较均降低(P＜0.05).结论 缺氧复氧后VSMC增殖增多,凋亡减少,蝎毒可以抑制缺氧复氧后VSMC的增殖,促进凋亡,并通过凋亡相关基因bcl-2、bax通路,使bcl-2/bax蛋白比值变化而介导细胞凋亡.     

当归红芪超滤膜提取物抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达

目的 探讨当归红芪超滤膜提取物对心肌细胞凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白表达的影响.方法 用高浓度的过氧化氢(400 μmol/L)在Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立细胞凋亡模型,用不同浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15 g/L)进行治疗.光镜下观察细胞形态;逆转录-多聚酶链反应和蛋白印迹法检测bcl-2、bax蛋白在心肌细胞中的表达情况.结果 与正常对照组相比,高浓度过氧化氢损伤组bcl-2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);bax mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.05);bcl-2/bax比值显著降低(P<0.01),差异具有统计学意义.与损伤组比较,高浓度和中浓度药物治疗组bcl-2 mRNA及其蛋白表达显著增加(P<0.05);bax mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05);bcl-2/bax比值显著增加(P<0.01),差异具有统计学意义.低浓度药物治疗组则对bcl-2、bax表达无显著改变.结论 当归红芪超滤膜提取物可通过上调bcl-2/bax的比值抑制心肌细胞的凋亡,对心肌细胞具有抗凋亡的保护作用.     

促红细胞生成素预处理在心肌缺氧复氧损伤中对凋亡相关基因表达影响的研究

目的:观察促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)预处理在大鼠心肌缺氧复氧损伤(hypoxia/reoxygenation,H/R)中的抗凋亡效应以及对凋亡相关基因bcl-2及bax表达的影响。方法:Wistar成年雄性大鼠60只,分为2组,分别为对照组,EPO预处理组(EPO组),每组30只,EPO组大鼠经腹腔注射5000U/kg重组人促红细胞生成素(Recombinant human erythropoietin,RHuEPO),对照组注射同体积生理盐水。2组各15只大鼠于给药24h后,检测各项指标,其余15只大鼠置于常压缺氧环境中(O27%)12h后,移至常压常氧环境中2h,予H/R损伤,之后采取心肌标本,DNA末端转移酶标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡,免疫组化检测凋亡效应酶胱天蛋白酶-3(caspase-3)、凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2)及B细胞淋巴瘤/白血病相关x蛋白(Bcl-associated x protein,bax)蛋白表达水平,计算bcl-2/bax比值。结果:H/R损伤前2组心肌细胞凋亡率,caspase-3以及bax蛋白表达水平无显著性差异(P>0.05),EPO组bcl-2蛋白表达水平、bcl-2/bax比值显著高于对照组(P<0.01)。H/R损伤后2组心肌细胞凋亡率,caspase-3、bax及bcl-2蛋白表达水平显著高于损伤前(P<0.01),而bcl-2/bax比值显著低于损伤前(P<0.01),EPO组的心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),而bcl-2蛋白表达水平以及bcl-2/bax比值显著高于对照组(P<0.05,P<0.01),2组bax蛋白表达水平差异无显著性(P>0.05)。结论:EPO预处理在心肌H/R损伤中具有显著的抗凋亡效应;这一效应与其上调抗凋亡基因bcl-2的表达有关。     

三棱、莪术抗大鼠肝纤维化的作用机理探讨

目的 观察肝纤维化大鼠的肝细胞凋亡和肝组织中的bax、bcl-2蛋白表达情况,探讨其抗肝纤维化的作用机理.方法 以腹腔注射猪血清制备大鼠肝纤维化模型,三棱、莪术灌胃处理大鼠.以HE染色观察大鼠肝脏组织病理变化,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测bax、bcl-2蛋白表达.结果 三棱、莪术能改善肝脏组织病理学变化,降低肝纤维化大鼠的细胞凋亡、bax蛋白表达,提高bcl-2蛋白表达.结论 三棱、莪术通过调节细胞凋亡相关蛋白表达,抑制细胞凋亡,起到抗肝纤维化作用.     

促红细胞生成素预处理在心肌缺氧复氧损伤中对凋亡相关基因表达影响的研究

目的：观察促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）预处理在大鼠心肌缺氧复氧损伤（hypoxia/reoxygenation,H/R）中的抗凋亡效应以及对凋亡相关基因bcl-2及bax表达的影响。方法：Wistar成年雄性大鼠60只,分为2组,分别为对照组,EPO预处理组（EPO组）,每组30只,EPO组大鼠经腹腔注射5000U/kg重组人促红细胞生成素（Recombinant human erythropoietin,RHuEPO）,对照组注射同体积生理盐水。2组各15只大鼠于给药24h后,检测各项指标,其余15只大鼠置于常压缺氧环境中（O27%）12h后,移至常压常氧环境中2h,予H/R损伤,之后采取心肌标本,DNA末端转移酶标记法（TUNEL法）检测心肌细胞凋亡,免疫组化检测凋亡效应酶胱天蛋白酶-3（caspase-3）、凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2（B-cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2）及B细胞淋巴瘤/白血病相关x蛋白（Bcl-associated x protein,bax）蛋白表达水平,计算bcl-2/bax比值。结果：H/R损伤前2组心肌细胞凋亡率,caspase-3以及bax蛋白表达水平无显著性差异（P〉0.05）,EPO组bcl-2蛋白表达水平、bcl-2/bax比值显著高于对照组（P〈0.01）。H/R损伤后2组心肌细胞凋亡率,caspase-3、bax及bcl-2蛋白表达水平显著高于损伤前（P〈0.01）,而bcl-2/bax比值显著低于损伤前（P〈0.01）,EPO组的心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达水平显著低于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,而bcl-2蛋白表达水平以及bcl-2/bax比值显著高于对照组（P〈0.05,P〈0.01）,2组bax蛋白表达水平差异无显著性（P〉0.05）。结论：EPO预处理在心肌H/R损伤中具有显著的抗凋亡效应;这一效应与其上调抗凋亡基因bcl-2的表达有关。     

姜黄素对实验性肝纤维化大鼠肝脏bax和bcl-2表达的影响

[目的]探讨姜黄素(curcumin,CUR)对大鼠肝纤维化的防治作用及对肝组织bax和bcl-2蛋白及基因表达的影响.[方法]建立CCl4致大鼠实验性肝纤维化模型.用免疫组化法比较正常组、模型组以及CUR组的bcl2、bax蛋白的表达,用RT-PCR法比较各组肝组织bcb-2、bax mRNA的表达.[结果]CUR组肝组织炎症和纤维化程度较模型组显著减轻.bax蛋白主要表达在肝细胞质,而纤维间隔及汇管区呈低表达;beb-2主要表达在纤维间隔及汇管区.bax及bcl-2在模型组及CUR组表达均高于正常组(P<0.01),CUR组均较模型组降低(P<0.01).bax及bcI-2 mRNA在模型组及CUR组表达比正常组增高(P<0.01,<0.05),CUR组均较模型组降低(P<0.05).[结论]CUR可能通过降低肝细胞表达bax、减少肝细胞凋亡而减轻肝脏损伤,通过降低bcl-2表达、诱导肝星状细胞凋亡发挥减轻肝纤维化的作用,防治大鼠肝纤维化.     

益气除痰方对大鼠肺癌A549细胞的抑制作用及其机制

目的探讨益气除痰方对肺癌A549细胞的抑制作用及与细胞凋亡相关的机制。方法以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和流式细胞术碘化丙啶(PI)单染法检测益气除痰方对肺癌A549细胞活力和细胞凋亡率的影响,RT-PCR方法检测p53、bcl-2和bax的m RNA表达水平。结果MTT法检测结果表明益气除痰方显著抑制A549细胞的生长(P<0.05或P<0.01),抑制作用随药物作用时间和浓度增大而增大;流式细胞术结果表明益气除痰方对A549细胞的凋亡诱导作用随着药物剂量的增加而显著增大(P<0.05);RT-PCR结果显示与对照组(p53基因1.58±0.91、bax基因3.27±1.55和bcl-2基因12.09±2.67)相比,益气除痰方引起p53和bax的m RNA表达显著上调(p53和bax分别为13.89±2.52和12.83±1.95,P均<0.01),但bcl-2的m RNA表达显著下调(9.86±2.12,P<0.05)。结论益气除痰方可诱导肺癌A549细胞凋亡,具有抑制其生长的作用,这可能与p53和bax表达上调、bcl-2表达下调有关。     

色满卡林对H/R损伤心肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的 探讨色满卡林(CRK)对培养大鼠心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bax、bcl-2蛋白表达的影响.方法 原代培养SD大鼠心肌细胞随机分为5组:正常对照组:不施加任何处理因素正常培养;H/R损伤组:缺氧2 h、复氧30 min;CRK各浓度组:分别加入终浓度为2.5、5、10 μmol/L的CRK后均即刻缺氧2 h、复氧30 min.各组细胞经AV-PI双标记后应用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;Western blot法检测bax、bcl-2蛋白表达.结果 H/R组心肌细胞凋亡率与正常对照组比较明显增高,bax蛋白表达水平升高、bcl-2蛋白表达下降;CRK各浓度组与H/R组相比,心肌细胞凋亡率明显降低、bax蛋白表达水平下调、bcl-2蛋白表达水平上调,且有一定剂量依赖性.结论 CRK可抑制H/R致培养大鼠心肌细胞的凋亡,其作用可能是通过下调bax、上调bcl-2蛋白表达实现的.     

氯吡格雷对兔髂腹动脉球囊损伤后内膜增生的影响和机制研究

目的探讨抗血小板药氯吡格雷对兔髂腹动脉球囊损伤后内膜增生的影响和机制。方法37只新西兰兔随机分为正常对照组(7只)、模型组(10只)、氯吡格雷组(10只)和阿托伐他汀组(10只)。检测血脂和高敏C反应蛋白(hs-CRP)。观察动脉病理形态学改变,测量内膜、中膜厚度和面积,原位杂交检测血小板源性生长因子(PDGF)mRNA在髂动脉的表达,免疫组织化学染色测定凋亡蛋白bcl-2和bax的表达。结果与模型组比较,氯吡格雷组血清hs-CRP浓度、内膜/中膜厚度比、内膜/中膜面积比显著减少(P<0.05);髂动脉PDGFmRNA的表达明显降低(P<0.05),bcl-2表达下降不明显,bax表达明显升高,bcl-2/bax比值明显降低(P<0.05),氯吡格雷对血脂无明显影响。结论氯吡格雷减轻兔髂腹动脉球囊损伤后血管内膜增生,机制与降低动脉炎症反应,抑制PDGF表达和促进细胞凋亡有关。     

神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达与细胞内液pH变化的关系

为探讨细胞内液pH在神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡过程中的变化 ,以体外培养血管平滑肌细胞模型为研究对象 ,运用激光共聚焦显微镜和免疫荧光组织化学技术 ,定量和动态观察研究神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因bcl 2和bax表达与细胞内液pH变化之间的关系。结果发现 ,在神经肽Y作用下 ,体外培养的血管平滑肌细胞凋亡相关基因bcl 2和bax表达的平均荧光值分别为 134 9.6 7± 10 8.2 8和 1397.5 0± 10 4.43,与对照组的 986 .6 4± 91.2 2和 10 6 0 .44± 10 7.5 4相比 ,差异明显 (P <0 .0 1) ,bax与bcl 2两者平均荧光值之比为 1.0 4;神经肽Y还可降低血管平滑肌细胞内液pH的平均荧光值 ,使细胞浆酸化。此结果提示 ,神经肽Y诱导血管平滑肌细胞凋亡相关基因的表达与神经肽Y降低细胞内液酸碱度、细胞浆酸化有关。     

舒心益脉煎对气滞血瘀型大鼠动脉内膜损伤后细胞凋亡及基因蛋白产物的影响

探讨气滞血瘀型大鼠胸主动脉内膜剥脱后内膜增生中，舒心益脉煎对血管平滑肌细胞凋亡及相关基因Fas抗原和Fas配体的影响。将58只大鼠随机分为假且10只，舒心益脉煎组和对照组各24只。后两组大鼠行胸主动脉内膜剥脱术，舒心益脉煎组动物于术前7d至术后14d每日接受舒心益脉煎治疗。术后14d处死动物，用免疫组织化学法测定Fas抗原与Fas配体在血管中的表达，原位末端标记法测定凋亡细胞。术后14d血管新生内膜中有平滑肌细胞凋亡；舒心益脉煎显著增加新生内膜中Fas抗原与Fas配体的表达，增加血管平滑肌细胞凋亡，减少新生内膜面积。说明舒心益脉煎可能通过Fas系统调节动脉血管内皮损伤修复过程中血管平滑肌细胞凋亡，从而抑制新生内膜形成。     

神经肽Y对血管平滑肌细胞凋亡相关基因表达的诱导作用

为探讨神经肽Ｙ对血管壁平滑肌细胞凋亡相关基因表达的诱导作用,以体外培养血管平滑肌细胞模型为研究对象,运用免疫荧光组织化学技术和激光共聚焦显微镜定量研究神经肽Ｙ因管平滑肌细胞凋亡基因ｂｃｌ－２,ｂａｘ和ｆａｓ表达的影响,以阐明神经肽Ｙ参与高血压和动脉粥样硬化等心血管疾病发生的分子机制。     

Docosahexaenoic acid, a peroxisome proliferator-activated receptor-alpha ligand, induces apoptosis in vascular smooth muscle cells by stimulation of p38 mitogen-activated protein kinase

Omega-3 fatty acids (n-3 FAs) have been shown to exert a blood pressure-lowering effect in hypertension, possibly in part by influencing vascular structure. We previously demonstrated that n-3 FAs induce vascular smooth muscle cell (VSMC) apoptosis, which could exert an effect on the structure of blood vessels. In the present study, we investigated signaling pathways through which n-3 FAs mediate apoptosis in VSMCs. Cultured mesenteric VSMCs from Sprague-Dawley rats were stimulated with docosahexaenoic acid (DHA), a representative n-3 FAs. Morphological changes in apoptosis and DNA fragmentation were examined with phase-contrast microscopy and fluorescence microscopy with Hoechst 33342 staining. To clarify possible pathways of apoptosis, we evaluated the expression of phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinases, bax, bcl-2, cytochrome c, and peroxisome proliferator-activated receptor-alpha (PPAR-alpha) with Western blot analysis. DHA treatment induced cell shrinkage, cell membrane blebbing, and apoptotic bodies in VSMCs. DHA time-dependently activated p38 mitogen-activated protein kinases, bax, PPAR-alpha, and cytochrome c, with maximal effects obtained after 5 and 30 minutes and 1 and 3 hours, respectively. SB-203580 and SB-202190, selective p38 inhibitors, reduced DHA-elicited apoptosis and expression of PPAR-alpha but had no effect on the expression of bax or cytochrome c. The present results indicate that DHA induces apoptosis in VSMCs through >/=2 distinct mechanisms: (1) a p38-dependent pathway that regulates PPAR-alpha and (2) a p38-independent pathway via dissipation of mitochondrial membrane potential and cytochrome c release. The death-signaling pathway stimulated by DHA may involve an integration of these multiple pathways. By triggering VSMC apoptosis, DHA may play a pathophysiological role in vascular remodeling in cardiovascular disease.     

重症肺炎时心肌bcl-2、bax基因表达及相关因素的实验研究

目的 研究重症肺炎的bcl-2基因和bax基因表达及其相关因素。方法 30只大鼠建立金葡菌肺炎模型、20只大鼠作对照，检测大鼠心肌细胞凋亡率、心肌病理积分、心肌细胞bcl-2、bax基因表达、心功能及血清脑钠肽，并分析其相互关系。结果 重症肺炎时心肌心功能降低者bcl-2基因及bax基因表达增加，bcl-2基因及bax基因表达与心肌病理积分、心肌细胞凋亡、脑钠肽呈正相关；bax基因表达与心功能呈负相关；bax基因与上述指标之间的相关性高于bcl-2基因。结论 重症肺炎可并发心衰，其发生机制与bcl-2基因及bax基因过度表达有关。     

洛沙坦对高血压大鼠血管平滑肌细胞凋亡及凋亡基因Bax和Bcl-2的影响

目的研究血管紧张素Ⅱ ATI-R阻滞剂洛沙坦对自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡及凋亡基因Bax、Bcl-2的影响。方法末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡及RT—PCR、免疫组化方法分别检测Bax、Bcl-2基因及其蛋白的表达。结果从（12～24）周龄，SHR VSMC凋亡逐渐减低，24周龄时，凋亡指数（APOI）低于同周龄正常血压大鼠（WKY）（P〈0.05）；洛沙坦应用8周和12周。使APOI增加71％、35％（P〈0．05）。随大鼠周龄增加，SHR胸主动脉Bax基因表达逐渐下调。与APOI变化趋势一致。洛沙坦降压治疗可使SHR胸主动脉Bax蛋白表达上调。Bcl-2蛋白下调。结论洛沙坦长期降压治疗促进Bax蛋白表达和／或抑制Bcl-2蛋白表达，其机制可促进VSMC凋亡。     

灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的探讨灯盏花素对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及对bax和bcl-2 mRNA表达的影响。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组（NC）、糖尿病组（DM）和灯盏花治疗组（EB）,EB组行灯盏花素20mg·kg^-1·d^-1腹腔内注射。给药后2周和6周处死,检测肾脏细胞凋亡、肾脏bax和bcl-2 mRNA的表达。结果与NC组比较,（1）DM组及EB组肾小管凋亡细胞数明显增多,且DM组高于EB组;（2）DM组肾脏bax、bcl-2 mRNA的表达显著增强,bax／bcl-2值明显升高;EB组与DM组比较bcl-2 mRNA表达增强,bax mRNA减弱,bax／bcl-2比值降低;（3）EB组及DM组体重下降,肾指数、肾小球面积、体积升高,且EB组较DM组体重增加,肾指数、肾小球面积、体积下降。血尿素氮、肌酐比较：DM组〉EB组〉NC组。结论灯盏花素可能通过影响凋亡相关基因bcl-2和bax的表达而抑制。肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。