树舌多糖对HepA小鼠骨髓细胞染色体SCE影响的研究

目的：为了探讨树舌多糖抑制肿瘤的作用原理。方法：用树舌多糖作用于HepA(腹水型肝癌）小鼠。结果：其抑瘤效果显著，并且能明显降低其染色体SCE值。结论：经统计学分析差异显著，认为树舌多糖的抗肿瘤作用是从细胞和基因水平进行的。     

树舌多糖抗小鼠HepA机制的研究

目的　研究树舌多糖抗小鼠HepA瘤细胞的可能机制。方法　采用免疫组化方法研究树舌多糖对小鼠HepA瘤细胞P16、Rb基因及TNF -α表达影响。结果　树舌多糖作用后 ,小鼠HepA瘤细胞P16基因表达显著增强 (P <0 0 1) ,Rb基因表达增强 (P<0 0 5 ) ;小鼠HepA瘤细胞TNF -α表达显著增强 (P<0 0 1)。结论　树舌多糖对小鼠HepA瘤细胞P16、Rb基因及TNF -α表达有激活作用。对抑癌基因P16、Rb基因及TNF -α表达的激活可能是树舌多糖抗肿瘤的普遍机制之一。     

树舌多糖的免疫调节效应及其抑瘤作用

树舌多糖在体外可协同ConA激活T淋巴细胞增殖效应、诱导Th细胞产生淋巴因子活IL-2、γ-IFN),可直接刺激小鼠腹腔Mφ分泌IL-1样活性物质;在体内树舌多糖亦增强ConA诱导T淋巴细胞增殖效应、γ-IFN的产生。此外尚观察到:树舌多糖可使小鼠带瘤率降低及瘤重减轻,并部分拮抗由于接种肿瘤引起的小鼠体内NKC活性和脾细胞产生IL-2、γ-IFN的抑制。     

基因组差异甲基化片段筛选技术

分离和鉴定细胞之间的差异甲基化片段,不仅有助于了解基因的功能、分离疾病相关基因,而且可以发现与细胞分化或病变相关的甲基化标记。目前筛选差异甲基化DNA片段的方法主要有:甲基化敏感的限制性界标基因组扫描、甲基化敏感的代表性差异分析、甲基化敏感的限制性指纹技术、甲基化CpG岛扩增-代表性差异分析、微阵列技术等。其中微阵列法又先后建立有CpG岛微阵列、寡核苷酸微阵列和表达CpG岛序列标签微阵列。这些方法各有特点和适用范围,应根据具体研究目的和工作条件进行恰当的选择。     

DNA甲基化的研究方法学

随着胚胎学和肿瘤学基础研究的迅速发展，DNA甲基化作为基因表遗传学(epigenetics)的重要机制之一，受到越来越多的关注。对于DNA甲基化的研究，目前有很多方法，大致可以分为两类：一类是从DNA甲基转移酶(DNMTs)的角度，另一类是从DNA甲基化水平的角度进行研究，后者又分为总体DNA甲基化水平和特异基因序列DNA甲基化水平的检测。     

DNA甲基化的研究方法学

随着胚胎学和肿瘤学基础研究的迅速发展,DNA甲基化作为基因表遗传学(epigenetics)的重要机制之一,受到越来越多的关注。对于DNA甲基化的研究,目前有很多方法,大致可以分为两类:一类是从DNA甲基转移酶(DNMTs)的角度,另一类是从DNA甲基化水平的角度进行研究,后者又分为总体DNA甲基化水平和特异基因序列DNA甲基化水平的检测。     

DNA甲基化分析技术的研究进展

在生物中,特别是在真核生物中,DNA甲基化已成为阐明正常和病理基因表达现象的重要机制,因而已成为当前分子生物学的研究热点之一。由之而产生的DNA甲基化技术也有了长足的发展。目前至少已报道了三类10种此类技术。而近几年迅速发展起来的以HSO3^-转化为基础的各种DNA甲基化检测技术,因其具有简便可行,准确灵敏等诸多优点,最令人瞩目。本仅就这些方法的原因,灵敏度和准确性以及应用作一简要的综述。     

衰老对DNA甲基化的影响

衰老的生化影响非常复杂,伴随着发生蛋白质、脂类和核酸的生物学明显改变,这些改变的一个重要方面就是DNA的甲基化,DNA甲基化是基因表达修饰的一种机制,基因调节元件内或附近序列的甲基化能通过DNA结合蛋白和染色质结构抑制基因的表达,依赖组织和基因伴随衰老发生甲基化的升高和降低,这些改变能产生病理效果包括恶性肿瘤发生,与衰老有关的自身免疫性疾病,以及其它可能的疾病.因此,虽然衰老会影响DNA甲基化,但DNA甲基化改变也会影响衰老.本篇综述概述伴随衰老一些特异基因甲基化状态改变的事实以及DNA甲基化型式改变的机制.因为这个领域仍然在发展中,可以预计这一领域的新知识会快速增长.     

车前多糖对小鼠免疫功能的影响

车前子为车前科植物车前的干燥成熟种子.中国药典记载[1],车前子药用有2种,即车前(P.asiatica L.又称大粒车前)和平车前(P.depressa Willd.又称小粒车前).车前子种皮中含有大量的粘液质.我国目前临床和民间多将种皮中的粘液质弃而不用,种皮中的多糖成分一直未被研究.本课题组对吉安车前研究发现,该车前子含有丰富的多糖成分[2].本文研究了吉安车前种皮粘液质中的精制多糖对小鼠免疫功能的影响,可为开发其新的临床应用提供理论依据.     

缺血、缺氧对小鼠海马DNA甲基化的影响

目的建立缺血、缺氧脑片模型,探讨缺血、缺氧对小鼠海马的损伤及其机制。方法利用C57BL/6J小鼠建立海马脑片缺血、缺氧性脑损伤(HIBD)模型,采用免疫组织化学染色法和Western blotting法分析正常对照组海马脑片与HIBD实验组海马脑片炎症损伤、DNA甲基化相关酶的表达情况。结果 HIBD实验组海马脑片氧化应激、炎症损伤细胞明显多于对照组(P0.01),诱发海马应激损伤;同时HIBD实验组海马脑片DNA甲基化水平高于对照组(P0.01)。结论脑片缺血、缺氧可促发炎症反应对海马组织造成损伤,DNA甲基化水平升高,提示DNA甲基化可能参与缺血、缺氧组织损伤过程;机制可能是HIBD影响DNA代谢活动,诱导DNA甲基化水平升高,DNA甲基化调控相关基因表达产生氧化应激,促发炎症反应,对海马造成损伤。     

天麻细粉和天麻素降血脂作用的实验研究

目的研究天麻细粉、天麻素的降血脂作用。方法采用金黄地鼠饲喂高脂饲料,分为正常对照组、高脂对照组(HF)、阳性对照组(舒降之)5.0mg/kg,天麻细粉125mg/kg、250mg/kg、500mg/kg、天麻素12.5mg/kg、25.0mg/kg、50.0mg/kg组,口服给药14d取血清测定总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量。结果天麻细粉和天麻素各剂量组均能降低高脂血症金黄地鼠血清中TC、TG、LDL-C含量,LDL-C/HDL-C比值、动脉硬化指数AI减小,均有显著性差异(P0.01及P0.05)。结论天麻细粉、天麻素具有降血脂作用。     

保元丹对小鼠免疫功能的实验研究

目的 了解保元丹对机体免疫功能的影响。方法 采用Balb/c健康雌性小鼠为实验动物模型,检测了保元丹对淋巴细胞转化值,半数溶血值,抗体生成细胞数,迟发性变态反应以及NK细胞活性的影响。结果 与对照组相比,保元丹高剂量组能显著提高小鼠血清溶血素半数溶血值(P<0.05)。中高剂量能显著提高小鼠淋巴细胞转化值和迟发性变态反应(P<0.05)。低中高3个剂量都能显著提高抗体生成细胞数和NK细胞活性(P<0.01)。结论 保元丹既能增强特异性免疫又能增强非特异性免疫,表明保元丹具有提高机体免疫功能的作用。     

DNA甲基化年龄预测研究进展

衰老是生物体多个器官、组织和细胞功能下降的一个过程,与衰老相关的疾病会在衰老过程中逐渐出现,同时伴随着表观遗传学机制的变化。相关领域的研究也表明,表观遗传学机制的变化过程与生物学年龄的增长密切相关。随着全球老龄化现象的加剧,抗衰老逐渐成为一个备受关注的研究方向,然而衰老过程的表观遗传学表征、机理和定量分析方式仍然需要深入研究。该文对当前基于DNA甲基化的衰老与年龄预测的领域研究进展进行梳理,介绍表观遗传时钟、生物时钟和DNA甲基化的基本原理,以及相应表观遗传时钟的典型研究方法和有效样本资源,并深入讨论该领域研究存在的挑战及发展趋势,旨在为研究者提供全面的参考,促进抗衰老相关临床实践和大健康应用的发展。     

Blood-based DNA methylation of DNA repair genes in the non-homologous end-joining (NEHJ) pathway in patient with glioma

To investigate the blood-based DNA methylation of repair genes including LIG4, XRCC4, XRCC5, XRCC6 and XRCC7 that involved in non-homologous end-joining (NEHJ) DNA repair pathway in patients with glioma. Blood samples were obtained from 114 glioma patients, 96 normal controls, and 81 glioma patients after radiotherapy and chemotherapy. Blood-based DNA methylation of the five NHEJ repair genes was assayed by methylation-specific polymerase chain reaction (MSP). The DNA methylation level of XRCC5 and XRCC7 in glioma group are significantly higher than those of normal group (P<0.001). Moreover, radiotherapy treatment significantly increased methylation level of XRCC5 and XRCC7 compared to glioma group. No significant difference for the methylation of the other three genes, LIG4, XRCC4 and XRCC6 were detected among three groups. In conclusion: our findings indicate that DNA methylation modification plays an important role to regulate the gene expression of XRCC5 and XRCC7, from the results that the gene methylation level of the glioma group is higher than that of the normal group. Increased methylation of XRCC5 and XRCC7 in blood samples of glioma patients and patients with radiotherapy and chemotherapy suggests that blood-based methylation level of XRCC5 and XRCC7 could be a potential indicator for evaluating of the effect of radiotherapy and chemotherapy for glioma patient.     

人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究

目的　检测HIV 2核心蛋白DNA疫苗诱导Balb c小鼠免疫应答的能力。方法　将表达HIV 2核心蛋白DNA疫苗质粒pVAXIgag肌注Balb c小鼠 ,分析CD4 、CD8 T淋巴细胞的数量、脾特异性CTL反应、血清中HIV 2的特异性抗体水平。结果　重组质粒pVAXI gag免疫组与空载体pVAXI及PBS对照组相比较差异显著 ,血清抗体滴度及淋巴细胞杀伤效应为P <0 .0 1,脾T细胞亚群的数量为P <0 .0 5。结论　HIV 2核心蛋白DNA疫苗能诱导Balb c小鼠产生特异性细胞免疫应答和体液免疫应答     

DNA from bovine papillomavirus type 2 induces warts in a xenograft model

Bovine papillomavirus (BPV) type 2 DNA was inoculated into calf scrotal skin before grafting onto severe combined immunodeficient mice. Inoculation with viral DNA isolated from a bovine wart induced fibropapillomas that exhibited all the morphological features of a BPV infection in cattle. The production of capsid protein and infectious BPV2 particles was demonstrated by immunohistochemistry and a transformed cell focus assay. In contrast, the injection of molecularly cloned viral genomic DNA led to the induction of papilloma-like lesions in the epidermis, but a fibroma was not formed. In addition, only early genes were expressed and infectious virus particles could not be detected. A restriction enzyme accessibility assay suggested that the methylation status of the molecularly cloned BPV2 DNA was different from that of native viral DNA. A possible correlation between methylation status and tumour phenotype is discussed.     

Impact and quantification of the sources of error in DNA pooling designs

The analysis of genome wide variation offers the possibility of unravelling the genes involved in the pathogenesis of disease. Genome wide association studies are also particularly useful for identifying and validating targets for therapeutic intervention as well as for detecting markers for drug efficacy and side effects. The cost of such large-scale genetic association studies may be reduced substantially by the analysis of pooled DNA from multiple individuals. However, experimental errors inherent in pooling studies lead to a potential increase in the false positive rate and a loss in power compared to individual genotyping. Here we quantify various sources of experimental error using empirical data from typical pooling experiments and corresponding individual genotyping counts using two statistical methods. We provide analytical formulas for calculating these different errors in the absence of complete information, such as replicate pool formation, and for adjusting for the errors in the statistical analysis. We demonstrate that DNA pooling has the potential of estimating allele frequencies accurately, and adjusting the pooled allele frequency estimates for differential allelic amplification considerably improves accuracy. Estimates of the components of error show that differential allelic amplification is the most important contributor to the error variance in absolute allele frequency estimation, followed by allele frequency measurement and pool formation errors. Our results emphasise the importance of minimising experimental errors and obtaining correct error estimates in genetic association studies.     

面部表情反馈对大学生心理亚健康影响的实验研究

目的 通过面部表情反馈实验,探索面部表情的调节对心理亚健康的影响.方法 运用亚健康自评量表和症状自评量表(SCL- 90)进行问卷调查筛选,选取21名被试通过匹配分成实验组1、实验组2、控制组进行面部表情反馈实验研究.结果 实验组1与控制组的后侧比较,实验组1在躯体化,人际敏感,焦虑和精神病性上显著低于控制组(t=-2.25,-2.45,-2.42,-2.39;P＜0.05);实验组2与控制组的后侧比较,实验组2在躯体化上,人际敏感和焦虑显著低于控制组(t=-2.06,-2.16,-2.23;P＜0.05);而实验组1和实验组2相比没有显著差异.结论 面部表情反馈对大学生心理亚健康有明显的影响.     

烧骨DNA提取与检测技术的实验研究

目的　探索烧骨DNA提取与检测方法。 方法　常压下以200℃分别对30例成人股骨焚烧1h后,生物冷冻研磨,EDTA脱钙,改良酚－氯仿提取DNA,光度计检测DNA浓度和纯度;5色荧光标记,PCR复合扩增,基因分析仪毛细管电泳,软件收集数据和分析。 结果　改良酚-氯仿法提取烧骨DNA浓度为(28.5±1.7 )ng/μl,16个基因位点基本齐全,相对荧光单位（RFU）＞500;传统酚-氯仿法提取烧骨DNA浓度为(4.7±0.8 )ng/μl,基因位点检出不全,RFU＜500。 结论　改良酚-氯仿法、PCR复合扩增、基因分析能对烧骨DNA进行有效提取和检测,但操作时要严格规程。     

E.coli DNA抗肿瘤免疫的实验研究

目的探讨 E.coli DNA抗肿瘤免疫的效果及免疫作用机制。方法纯化提取大肠埃希菌染色体 DNA(E.coliDNA)进行抗肿瘤治疗及免疫学指标测定。结果 E.coli DNA体内多种途径给药均可抑制肿瘤生长 ,增强正常小鼠 NK细胞杀伤活性 ,在荷瘤小鼠亦测出 NK/ MΦ 细胞的杀伤活性增强 ,对荷瘤所致的 NK细胞功能下降有提高作用 ,还可诱生荷瘤小鼠体内 γ- IFN,调节其 TNF- α水平。结论 E.coli DNA具有抗肿瘤免疫特性 ,为微生物 DNA制剂开发应用于抗肿瘤治疗提供了科学依据。