清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1 PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达变化。结果:病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升为3倍、TGF-β1下降为1/3,清肺口服液含药血清组可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5、升高TGF-β1至RSV感染细胞的2倍。利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1,PDGF-BB表达有一定的影响。结论:(1)RSV感染可使HELF细胞PDGF-BBmRNA表达水平显著升高,TGF-β1mRNA表达水平显著下降;(2)清肺口服液可调节TGF-β1、PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的 观察清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升3倍,清肺口服液含药血清可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对PDGF-BB表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞PDGF-BB mRNA表达水平显著升高;清肺口服液可调节PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA表达变化。结果:病毒感染后ICAM-1、IL-8以GAPDH为内参的△Ct值明显小于正常细胞组及生理盐水血清对照组,而清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清作用后△Ct值显著增大。结论:(1)RSV病毒作用后ICAM-1及IL-8 mRNA表达水平显著升高;(2)清肺口服液可以降低ICAM-1、IL-8的表达,缓解RSV感染后细胞的异常变化,起到间接预防RSV肺炎的作用。     

清肺口服液含药血清对小鼠肺上皮细胞TGF-β1及PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对小鼠肺上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响。方法:用清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清分别作用于体外培养的小鼠肺上皮细胞TC-1,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法测定药物作用前后各组TC-1细胞TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达水平。结果:清肺口服液血清作用于TC-1细胞后,使TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达水平下调至原来的1/2;利巴韦林血清作用细胞后,细胞中TGF-β1 mRNA升高1倍、PDGF-BB mRNA升高2倍。结论:清肺口服液可能通过抑制TGF-β1与PDGF等细胞因子的过度表达,延缓肺泡炎及肺纤维化形成,在病毒性肺炎的治疗中发挥疗效。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA基因表达的影响

目的采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA基因表达的影响.方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA基因表达,并进行比较.结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强(P＜0.01),含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达(P＜0.01).结论腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR-NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一.     

清肺口服液对人喉癌细胞感染呼吸道合胞病毒后ICAM-1表达水平的影响

目的探讨清肺口服液对人喉癌细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后细胞间黏附分子-1（I-CAM-1）表达水平的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h时及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附试验法（ELISA法）测定各组人喉癌细胞ICAM-1表达变化。结果 48h时及72h后病毒模型组ICAM-1的表达明显高于清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组;空白血清组与病毒模型组无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异。72h后各组ICAM-1的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后ICAM-1的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1和血小板衍生生长因子-BB蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGF-β1、PDGF—BB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGF-β1、PDGF-BB含量均明显增多(P<0．01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGF-β1、PDGF—BB含量显著降低(P<0．01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF—BB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGF-β1、PDGF—BB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1mRNA基因表达的影响

目的:采用治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的有效中药制剂清肺口服液,研究其对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞的转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA基因表达的影响。方法: 以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测不同组细胞TGF-β1的mRNA 基因表达,并进行比较。结果:病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1mRNA基因表达明显增强（P <0．01）,含药血清组可显著降低3I、7b型腺病毒攻击后细胞TGF-β1的mRNA表达（P<0．01）。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGF-β1mRNA表达增高;清肺口服液可下调TGF-β1的mR- NA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对Hep-2细胞感染呼吸道合胞病毒后IL-6、IL-8调控的研究

目的探讨清肺口服液对人喉癌上皮细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）表达的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组人喉癌细胞IL-6、IL-8表达变化。结果 48h及72h后病毒模型组IL-6、IL-8的表达明显高于清肺口服液组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、利巴韦林组（Ⅱ、Ⅲ）,有显著差异,空白血清组（Ⅱ、Ⅲ）与病毒模型组无显著差异。清肺口服液组（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）与利巴韦林组（Ⅱ、Ⅲ）比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异;72h后各组IL-6、IL-8的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后IL-6、IL-8的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的观察清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1（TGF—β1）、血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）mRNA基因表达的影响。方法以3I、7b型腺病毒分别攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞,制备清肺口服液含药血清,作用于该细胞,另设正常细胞组、病毒对照组、利巴韦林组,采用原位杂交法检测TGF—β1、PDGF—BB mRNA基因的表达,进行各组间比较。结果病毒对照组较正常细胞组的TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达均明显升高（P〈0．01）,含药血清组对3I、7b型攻击后的TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达均有显著降低作用（P〈0．01）。结论清肺口服液可下调TGF—β1、PDGF—BB mRNA表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

清肺口服液对RSV感染后人胚肺细胞凋亡相关基因Fas、FasL表达的影响

目的:探讨清肺口服液治疗小儿呼吸道合胞病毒性肺炎的作用机制。方法:采用流式细胞仪检测法,测定不同稀释度含清肺口服液血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染后人胚肺细胞(HELF)凋亡相关基因Fas、FasL转录的影响。结果:清肺口服液可以下调RSV攻击后HELF细胞Fas、FasL的表达水平。结论:清肺口服液对RSV感染后HELF细胞有保护作用。     

清肺口服液对腺病毒3I、7b感染人胚肺成纤维细胞bcl-2mRNA表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞(HPF)bcl-2mRNA表达的影响。方法:细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3I、7b型腺病毒分别攻击,并分别加入相应药物至各组细胞中,用原位杂交方法比较各组细胞bcl-2mRNA的表达。结果:病毒对照组较正常细胞组细胞中bcl-2mRNA表达降低(P<0.01),含药血清组比病毒对照组细胞bcl-2mRNA表达明显上升(P<0.01)。结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞bcl-2mRNA表达降低。清肺口服液可增强bcl-2mRNA表达,从而抑制由腺病毒引发的细胞凋亡。这可能是其抗病毒作用机制之一。     

板蓝根含药血清对病毒感染RAW264.7细胞的TLR3信号通路的影响

目的:研究板蓝根含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染RAW264.7细胞中干扰素-β(IFN-β),Toll样受体3(TLR3),TBK1,干扰素调节因子3(IRF3)表达的影响,阐释其可能的抗RSV机制,为临床使用提供实验依据。方法:本实验分为6组,分别为空白组,RSV感染细胞模型组,板蓝根含药血清低、中、高体积分数组(40%,50%,60%板蓝根含药血清),利巴韦林含药血清组(70%利巴韦林含药血清)。除空白组外,其余各组接种RSV造成病毒感染模型,采用板蓝根含药血清或利巴韦林含药血清进行干预,12 h后收集细胞及其上清液,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中IFN-β含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测RAW264.7细胞中TLR3,TBK1,IRF3和IFN-βmRNA的表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测TLR3,TBK1,IRF3和p-IRF3蛋白的表达。结果:RSV感染RAW264.7细胞12 h后,与空白组比较,模型组TLR3,TBK1和IFN-βmRNA的表达显著升高,IFN-β,TLR3,TBK1和p-IRF3蛋白的表达也显著升高(P0.01),IRF3 mRNA和蛋白均无明显变化;与模型组比较,板蓝根含药血清中、高体积分数组能够显著下调RSV诱导的TLR3,TBK1和IFN-βmRNA的高表达(P0.05,P0.01),同时明显下调RSV诱导的TLR3,TBK1和p-IRF3蛋白的高表达(P0.05,P0.01),板蓝根含药血清各体积分数组的下调作用低于利巴韦林含药血清组,两者对IRF3 mRNA和蛋白均无明显调控作用。结论:RSV能够诱导TLR3信号转导通路的激活从而促进IFN-β的表达,而板蓝根含药血清通过下调TLR3信号通路关键信号分子TLR3,TBK1,p-IRF3使IFN-β适度表达。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞肿瘤坏死因子-α转化生长因子-β_1蛋白表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)、转化生长因子(TGF-β1)蛋白表达的影响。方法:用呼吸道合胞病毒Long株感染人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,并设空白血清、和正常细胞做对照,24h后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液TNF-α、TGF-β1蛋白水平。结果:清肺口服液含药血清组两种细胞因子明显升高(P0.01)。结论:清肺口服液含药血清可以在病毒感染早期升高TNF-α、TGF-β1蛋白表达,从而增加病毒清除,抑制过度的免疫反应,这可能是该药治疗呼吸道合胞病毒感染的机理之一。     

清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞转化生长因子-β1和血小板衍生生长因子-BB蛋白表达的影响

目的探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3Ⅰ、7b感染的人胚肺成纤维细胞之转化生长因子β1(TGFβ1)、血小板衍生生长因子BB(PDGFBB)蛋白表达的影响。方法细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3Ⅰ、7b型腺病毒分别攻击之,并分别加入相应药物至各组细胞中;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液中TGFβ1、PDGFBB的含量。结果病毒对照组较正常细胞组细胞中TGFβ1、PDGFBB含量均明显增多(P<0.01),含药血清组比病毒对照组的细胞TGFβ1、PDGFBB含量显著降低(P<0.01)。结论(1)腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞TGFβ1、PDGFBB蛋白表达增高;(2)清肺口服液可降低TGFβ1、PDGFBB细胞因子的蛋白表达,这可能是其抗病毒作用的机制之一。     

金欣口服液对RSV感染人胚肺成纤维细胞细胞凋亡的研究

目的:探讨细胞凋亡在RSV肺炎发病中的作用以及金欣口服液干预RSV感染的可能机制。方法:体外建立呼吸道合胞病毒A型LONG株攻击体外培养的人胚肺成纤维细胞(HELF)模型,设正常细胞组、病毒组、空白血清组、利巴韦林组和金欣口服液组。采用流式细胞术检测其对感染细胞不同时间点的总凋亡率、早期凋亡率。结果:RSV感染12、24h HELF细胞的总凋亡率、早期凋亡率均低于细胞对照组,且有显著性差异(P<0.05);空白血清组、利巴韦林组、金欣口服液组12、24h的总凋亡率、早期凋亡率均高于病毒对照组,且有显著性差异(P<0.05)。但增加的程度不同,12、24h HELF细胞的总凋亡率和24h早期凋亡率依次排序是空白血清组、利巴韦林组、金欣口服液组;12h早期凋亡率依次排序是利巴韦林组、空白血清组和金欣口服液组。RSV感染48、72、96h HELF细胞的总凋亡率、早期凋亡率均高于细胞对照组,且有显著性差异(P<0.05);空白血清组48、72、96h的总凋亡率均高于病毒对照组(P<0.05)、48h早期凋亡率无变化(P>0.05),72、96h早期凋亡率低于病毒对照组,且有显著性差异(P<0.05);利巴韦林组、金欣口服液组48、72、96h总凋亡率、早期凋亡率均低于病毒对照组,且有显著性差异(P<0.05)。但降低的程度不同,排序依次是金欣口服液组、利巴韦林组、空白血清组(P<0.05)。结论:金欣口服液直接或间接调控细胞凋亡,实现阻止RSV感染早期抑制细胞凋亡、感染后期促进凋亡的作用,从而阻止病毒在细胞内的进一步复制和清除,这可能是金欣口服液抗RSV病毒的作用机制之一。     

清肺口服液通过ERK1/2通路调控RSV所致呼吸道炎症损伤的机制

目的:通过研究清肺口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染后气道上皮细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)磷酸化蛋白及相关炎症因子表达的影响,探讨清肺口服液抗RSV感染及其继发炎症损伤的调节机制。方法:RSV体外感染人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,16-HBE)建立气道上皮炎症损伤模型,设置空白组,模型组(RSV),利巴韦林组(利巴韦林),清肺口服液高、中、低质量浓度组,共6组。其中空白组给予含2%FBS的RPIM 1640培养基进行培养,其余各组在空白组的基础上造模,模型组加入等量RSV(MOI=1),利巴韦林组加入等量利巴韦林注射液(0.2 mg·L-1),清肺口服液组给予清肺口服液高、中、低质量浓度(200,100,50 mg·L-1)进行干预。应用噻唑蓝(tetrazolium salt colorimetry,MTT)比色法检测清肺口服液对RSV感染16-HBE的毒性作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测清肺口服液对细胞中RSV复制的影响,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检验ERK1/2信号通路相关蛋白磷酸化表达变化,同时用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平。结果:与空白组比较,模型组RSV大量增殖,16-HBE出现典型的炎症损伤表现,ERK1/2磷酸化蛋白水平显著提高(P0.01),同时细胞上清中释放大量的炎症因子IL-6,IL-8(P0.01)。加入清肺口服液或利巴韦林后,16-HBE中的RSV复制水平显著降低(P0.01),且清肺口服液(200,100 mg·L-1)可显著下调ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P0.01),并显著降低细胞上清中炎症因子IL-6,IL-8的表达水平(P0.01)。结论:清肺口服液能够抑制RSV病毒复制并减轻RSV感染所致的气道炎症损伤,其机制可能与下调ERK1/2磷酸化蛋白水平及降低气道炎症因子的表达有关。     

清肺口服液拮抗呼吸道合胞病毒感染的血清药理学研究

目的 评价清肺口服液抗呼吸道合胞病毒(RSV)的活性.方法 采用MTT法,以利巴韦林为对照组,观察清肺口服液及不同给药方式对RSV的拮抗作用.结果 清肺口服液具有明显抗RSV的作用,与利巴韦林比较差异无统计学意义;清肺口服液的作用机制可能为抑制病毒吸附或增殖.结论 清肺口服液可以通过不同环节拮抗RSV病毒,是治疗RSV感染的有效复方制剂.     

清肺口服液含药血清对RSV感染人支气管上皮细胞STAT5和IL-10的影响

目的:探讨清肺口服液治疗RSV肺炎的作用机制。方法:建立RSV感染的16HBE细胞模型,随机分为正常细胞组、空白组、模型组、清肺口服液含药血清低剂量组和高剂量组,采用Real-time RT-PCR、Western blot和免疫荧光法分别检测细胞中STAT5和IL-10的表达水平以及RSV在细胞中的相对表达。结果:与正常细胞组和空白组相比,模型组STAT5 mRNA和IL-10蛋白水平降低(P0.05),RSV荧光强度较高(P0.01);与模型组比较,含药血清组低剂量组STAT5水平升高(P0.05),含药血清组IL-10水平升高(P0.05),含药血清组RSV荧光强度降低(P0.01)。结论:清肺口服液对STAT5和IL-10有一定的调控作用,可能是其抗RSV感染的内在机制。     

金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染RAW264.7细胞Toll样受体3表达的调控作用

目的:通过研究金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)活化诱导的Toll样受体3(TLR3)的干预作用,探讨其治疗RSV肺炎可能的免疫学机制。方法:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,采用金欣口服液含药血清进行干预,并设利巴韦林阳性对照,24h后收集细胞,Real time RT-PCR法测定TLR3 mRNA的表达变化;激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学染色法处理的各组细胞TLR3表达水平;ELISA法检测各组细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)含量,在核酸及蛋白水平探讨金欣口服液含药血清抗RSV感染的作用机制。结果:RSV感染RAW264.7细胞后24h,细胞中TLR3 mRNA和蛋白表达水平以及细胞培养上清中IL-6表达明显升高(P0.01),而金欣组TLR3及IL-6表达均显著低于RSV感染组(P0.01,P0.05),且效果优于利巴韦林组(P0.01,P0.05)。结论:金欣口服液含药血清能下调RSV活化诱导的TLR3及其下游炎症因子IL-6的高表达,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一。