螺旋霉素发酵工艺的研究

螺旋霉素产生菌螺旋霉素链霉菌变种 A.sp 99- 4经紫外光照射、光回复突变及螺旋霉素耐受等复合处理 ,使摇瓶发酵效价提高 30 % ;在摇瓶发酵培养基中加入正丙醇及 FH12 ,使发酵效价进一步提高4 0 % ;并初步研究了工艺的中试放大。     

重组人抗HBsAg单链抗体工程菌的中试发酵工艺研究

目的研究表达重组人抗HBsAg单链抗体工程菌的中试发酵工艺。方法首先采用摇瓶培养,对培养基配方、pH值、诱导表达时机和诱导剂量进行优化,确定基本发酵参数,然后在30L发酵罐上进行中试规模发酵培养。结果在摇瓶培养时,发现含有甘油和微量元素等成分的改良培养基效果明显优于LB培养基和2×YT培养基,另外,工程茵的最佳pH值为7.0,最佳诱导时机为对数中期,最佳诱导剂浓度为0.4mmoL/L异丙基-1-硫代-β-呋喃半乳糖,最佳诱导时间为4h,将摇瓶培养确定的关键参数应用到30L发酵罐中,控制溶氧大于30%,进行3批发酵试验,发现发酵产物的湿菌产量可达58-61.9g/L,目的蛋白质表达量可达28.9%-31.2%以上。结论建立了工程菌M15[pQE-scFv]的中试发酵工艺,为进一步开发打下良好基础。     

紫外分光光度法快速测定庆大霉素含量在优化培养基中的应用

目的 在庆大霉素发酵培养基优化过程中,探索庆大霉素含量的快速测定方法.方法 以紫外分光光度法作为庆大霉素含量测定手段,采用正交试验方法,对紫色小单孢菌产庆大霉素的发酵培养基及发酵条件进行优化.结果 通过统计学分析,确定发酵培养基最优组合为:黄豆饼粉3.5%,CaCO,0.5%,淀粉5.5%,CoCl20.0006%.优化的发酵条件为:种龄60h,接种量12mL,装液量50mL/500mL摇瓶.在此优化条件下添加一定量的氨基酸培养6d,庆大霉素效价较优化前提高了85.5%.结论 本文用紫外分光光度法与微生物法测定庆大霉素发酵液效价产生的误差小于4%,该方法可以用于庆大霉素液体发酵培养基优化的快速筛选.     

rhG-CSF基因工程菌发酵中pH值对表达率的影响

本文对重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)基因工程菌的摇瓶发酵和发酵工艺进行了研究。结果表明，在摇瓶发酵中梯度调低培养基pH值可以提高产物的表达率；在发酵罐发酵工艺中适当调高培养基pH值可以提高产物的表达率。     

紫外线诱变育种提高土霉素菌种的生产能力

以土霉素产生菌龟裂链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｒｉｍｏｓｕｓ）Ｌｆ－２为出发菌株，经紫外线处理后，再经摇瓶初筛、复筛获得高效价菌株Ｕｆ－３。又经Ｌ９（３４）的正交设计实验，确定了Ｕｆ－３的最佳培养基配比，使其摇瓶效价提高１５．２％。在２０ｍ３罐上放大试验，与出发菌株相比发酵效价提高１７．４％，发酵指数提高２３．９％     

利福霉素B发酵放大I．从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大

研究了溶氧和剪切力对地中海拟分枝酸菌XC－925发酵产生利福霉素B的影响，并对利福霉素B从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大及15L发酵罐流加补料发酵进行了研究。利用摇瓶研究结果表明地中海拟分枝酸菌XC－925发酵产生利福霉素B时对溶氧要求较高，而对剪切力不太敏感。以溶氧为依据，在15L发酵罐间歇发酵过程中，控制溶氧不低于25％，利福霉素B的发酵效价可达到1000u/ml左右，发酵周期（6d）较摇瓶发酵缩短了1d。15L发酵罐如采用流加补料发酵工艺，利福霉素B的发酵效价还会有较大幅度提高。     

利用均匀实验优化利福霉素SV发酵培养基氮源配比

应用均匀设计的方法对利福霉素SV发酵培养基中的氮源配比进行优化。研究了氮源中各成分对发酵效价的影响。确定各成分的最佳配比并用实验验证，使摇瓶发酵效价提高了10％以上。并对利福霉素SV产生菌在新、老培养基中的代谢特性进行了比较。     

格尔德霉素发酵工艺的优化

目的研究格尔德霉素产生菌吸水链霉菌SIPI.A.2039的发酵工艺,以提高产生菌生物合成格尔德霉素的能力。方法以本实验室保藏的吸水链霉菌SIPI.A.2039为出发菌株,从摇床转速、摇瓶装量、碳源、50L发酵罐参数等方面进行发酵工艺的优化研究。结果采用经过优化获得的发酵培养基和培养条件,发酵周期为144h时,格尔德霉素的摇瓶发酵效价可由原来的230μg/mL提高至2500μg/mL。在50L发酵罐中采用优化的溶解氧和补料工艺能够使格尔德霉素的发酵效价达到3700μg/mL,并使发酵周期比摇瓶缩短了48h。结论本实验得到的结果比国内外报道的格尔德霉素的发酵效价提高了两倍以上,该发酵工艺已经达到了产业化的要求。     

角蛋白酶产生茵培养条件优化的初步研究

目的对本实验室所筛选的两株角蛋白酶产生菌的发醇产酶培养条件进行初步的探究。方法用Folin酚法测定在各种发醇条件下角蛋白酶产生菌的酶活力。结果此两种菌摇瓶发酵F-2菌的最适培养条件是：培养温度45℃，按种量3％，装量20mL（250mL三角瓶），发醇液pH7．5。发酵时间64h；FD-8菌的最适培养条件是：培养温度45℃，接种量4％。装量20mL（250mL三角瓶），发酵液pH7．5，发酵时间64h。最高酶活力分别达到90U·mL^-1和100U·mL^-1。结论筛选出最适条件的组合。     

利福霉素B发酵放大Ⅰ.从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大

研究了溶氧和剪切力对地中海拟分枝酸菌XC-925发酵产生利福霉素B的影响,并对利福霉素B从摇瓶到15L发酵罐的发酵放大及15L发酵罐流加补料发酵进行了研究.利用摇瓶研究结果表明地中海拟分枝酸菌XC-925发酵产生利福霉素B时对溶氧要求较高,而对剪切力不太敏感.以溶氧为依据,在15L发酵罐间歇发酵过程中,控制溶氧不低于25%,利福霉素B的发酵效价可达到10000u/ml左右,发酵周期(6d)较摇瓶发酵缩短了1d.15L发酵罐如采用流加补料发酵工艺,利福霉素B的发酵效价还会有较大幅度提高.     

海洋小单孢菌FIM02523产rakicidin B发酵工艺研究#br#

目的 提高海洋小单孢菌FIM02523发酵液中的生物活性成分rakicidin B含量。方法 采用单因素实验、正交设计实验等方法优化发酵培养基组成比例及培养条件。结果 确定了最优rakicidin B发酵培养基：可溶性淀粉4.0%,蔗糖1.0%,大豆蛋白胨1.0%,酵母粉2.0%,甘氨酸0.1%,NaCl 0.5%,MgSO4 0.05%,CaCO3 0.5%;最优摇瓶发酵条件：发酵周期为120h,接种量5.0%,500mL摇瓶装量100mL,摇床转速220r/min,发酵温度30℃,培养基初始pH值为7.5。结论 优化后发酵工艺rakicidin B的发酵效价较初始工艺提高了约7.3倍。     

柚皮苷转化生成红花素及异红花素的研究

摘要：目的 利用一株日本曲霉，以柚皮苷为底物，转化生成红花素和异红花素并提高产物的发酵单位。方法 对 发酵培养基中氮源种类进行筛选并确定最适的添加浓度，考察微量元素对发酵的影响并确定最适添加浓度，降低溶解底 物的乙醇浓度并采用二次添加底物的方式等。结果 红花素发酵单位由66 μg/mL提高至389 μg/mL，异红花素发酵单位由 263 μg/mL提高至946 μg/mL。热豆粉是最佳氮源，添加浓度为0.3%；添加硫酸亚铁和氯化锰能够分别促进红花素和异红花素的 生成，其最适添加浓度分别为0.02%和0.01%；溶解底物的乙醇浓度由50%降低至26.6%，降低了乙醇对转化的不利影响；底物 添加次数由1次变为2次，有利于发酵单位的提高。结论 首次发现日本曲霉可直接转化柚皮苷生成红花素和异红花素，且柚皮 苷生物转化为红花素和异红花素的发酵单位较高。     

硫酸软骨素裂解酶发酵培养基的获得及发酵条件的优化

目的考察发酵培养基中碳源、氮源及无机盐等因素及各种发酵条件对温和气单孢菌YH311产硫酸软骨素裂解酶的影响,获得硫酸软骨素裂解酶最佳发酵培养基和发酵条件。方法采用单因素实验法、均匀设计法及正交设计法。结果获得的最优培养基配方(g·L-1)为:葡萄糖2 5 ,牛肉膏5 0 0 ,硫酸软骨素10 0 ,尿素0 5 ,MgSO4·7H2 O 9 0 ( pH 7 0 ) ;最适产酶条件为:2 % ( φ)种子液,2 8℃,2 0 0r·min-1,振荡通气培养2 4h。在优化条件下,硫酸软骨素裂解酶的产率可达110 0 0U·L-1。结论通过对发酵培养基及发酵条件的优化可将硫酸软骨素裂解酶的产量提高5倍。     

产梓醇地黄内生菌的分离鉴定及遗传稳定性研究

通过组织分离法从野生地黄组织中分离得到24株内生菌,采用2,4-二硝基苯肼显色法对所分离的菌株进行产梓醇性能的测定,筛选得到一株产梓醇性能较好的菌株BLCC1-0148,研究其10代内培养物产梓醇性能的遗传稳定性,结合菌落形态特征及菌株特异性序列分析等手段,最终将BLCC1-0148鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus Cereus)。利用正交设计试验对高产菌株BLCC1-0148进行发酵条件的优化,最佳发酵培养基如下:葡萄糖0.5%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.75%、氯化钠1%;发酵温度37℃,摇床转数180 rpm,发酵时间3 d,梓醇产量达到839μg·mL-1;     

响应面法优化链霉菌HY6-S36产星孢菌素的发酵条件

摘要：目的 优化链霉菌HY6-S36产星孢菌素的发酵条件,以提高星孢菌素的产量。方法 在单因素试验的基础上通过 Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验、Box-benhnken(BB)响应面法优化发酵条件。结果 优化后,最佳培养条件为麦芽糊精 69.8g/L,豆粉49.6g/L,烟酸0.5g/L,碳酸钙4.0g/L,转速200r/min,pH7.2,装液量30mL/250mL,接种量5%,温度28℃,发酵 时间7d,摇瓶产量为996mg/L。经50L发酵罐放大培养,发酵效价达1063mg/L。结论 在此优化条件下,星孢菌素的摇瓶产量 提高了177%。     

常压室温等离子体诱变选育他克莫司高产菌株及发酵条件优化

目的 选育他克莫司高产菌株,提高发酵单位。方法 采用常压室温等离子体(ARTP)技术对一株他克莫司出发菌株FK13-2-14进行诱变,对高产菌株的种子瓶接种量、异亮氨酸的添加量及添加时间等发酵条件进行优化。结果 获得1株稳定的突变高产菌株FK18-1-56,摇瓶发酵单位提高了162%;优化后种子瓶接种量为1.5cm2/40mL,异亮氨酸添加时间为48h,添加量为3.0g/L。高产菌株在优化后的发酵条件下,100L罐发酵单位达到997μg/mL,比出发菌株提高了128%。结论 利用常压室温等离子体诱变技术得到他克莫司高产菌株,经发酵工艺优化后,大幅度提高了他克莫司的工业发酵水平。     

前体物质对Glarea lozoyensis发酵产生纽莫康定B0的影响(英文)

纽莫康定B0是棘白菌素类化合物，其半合成衍生物卡泊芬净已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗无效或无法耐受其他抗真菌药的患者的侵袭性曲霉病。然而，通过发酵产生的纽莫康定B0的效价较低，限制了卡泊芬净的工业生产。本研究将优化好的的培养基进行了改良，添加了4种前体物质。研究结果表明，大豆油、亮氨酸、异丁醇和甲硫氨酸显著影响发酵单位；进一步的正交试验结果表明，大豆油(A)对纽莫康定B0效价的影响极显著(P<0.05)，亮氨酸(Ｂ)、异丁醇(C)和甲硫氨酸(D)影响次之，最优发酵条件为A2B2C3D2即大豆油6.0g/L，亮氨酸1.0g/L，异丁醇4.0ml/L，甲硫氨酸0.3g/L时，纽莫康定B0发酵单位达到1295mg/L左右。此外，还应用正交试验验证各因素的显着性。当将kLa作为指导参数，使用A315型叶轮的100L发酵罐进行放大和工业规模生产时，与原始效价相比，纽莫康定B0产量增加了361%，并达到了2250mg/mL的水平。     

微生物来源的缩肽类化合物enopeptin A的研究(I)：菌种选育及发酵工艺研究

Enopeptin A是一种缩酚酸肽类化合物,具有抗菌、抗病毒等生物活性。以本实验室保藏的链霉菌SIIA-H7264为出发菌,通过紫外(UV)照射、甲基磺酸乙酯(EMS)诱变、亚硝基胍(NTG)诱变以及常压室温等离子体(ARTP)诱变,获得1株高产突变株A-21,其发酵产物Enopeptin A的产量较出发菌株提高了3倍。对发酵条件、发酵培养基组分进行单因素及响应面优化试验,最终Enopeptin A的产量达到1750μg/mL,较初始工艺提高了2.98倍。     

螺旋霉素链霉菌噬菌体的分离和鉴定

从螺旋霉素的异常发酵液及土壤样品中分离到19株螺旋霉素链霉素噬菌体,对每一噬菌体进行了纯化,根据血清中和反应,这些噬菌体可分为4种血清型(P_(11)型、1010型、1012型及4031型)。P_(11)型和1012型噬斑小而清晰,4031型和1010型大而不清晰。观察了4种血清型的代表性噬菌体形态和它们的DNA的限制性内切酶酶切片断长度,多态性。