Effect of GINS2 on Proliferation and Apoptosis in Leukemic Cell Line

Although previous researches have demonstrated that GINS2 express abundantly and abnormally in many malignant solid tumors, such as breast cancer, melanoma and hepatic carcinoma. However, the role and precise molecular mechanism in acute promyelocytic leukemia (APL) are rarely reported. In this current study, we investigated the possible effect and particular mechanism of GINS2 in occurrence and development of APL. We synthesized interference plasmid targeted GINS2 successfully in vitro and also constructed recombinant adenovirus vector carrying GINS2 gene in order to down-regulate or up-regulate GINS2 expression from two aspects of positive and negative in APL. After siRNA were transfected into HL60 cells, both GINS2 expression level of mRNA and protein in interfering group were down-regulated when compared with control groups. Together, MTT and flow cytometry technology showed that cell growth was significantly inhibited. Moreover, the expression lever of Bax was distinctly increased whereas Bcl2 was dramatically decreased in transfected group. Further experiments revealed that down-regulation of GINS2 expression inhibited DNA replication and had a G2/M phase block in HL60 cells. What''s more, ATM, CHK2, and P53 gene could involve in the pathogenic signaling pathways of HL60 cells when GINS2 gene was down-regulated. On the contrary, after HL60 cells were infected by recombinant adenovirus vector which contained GINS2 gene, we observed that over-expression of GINS2 could promote HL-60 cell proliferation. What''s more, GINS2 might implicate a potential target for leukemia gene therapy.     

Sirt1基因shRNA干扰载体构建及其对细胞增殖和凋亡的影响

本实验目的在于构建Sirt1 shRNA干扰载体,探讨Sirt1对HepG2、A549和293T细胞增殖和凋亡的影响。设计并合成Sirt1的shRNA序列,重组到pGenesil-1.0质粒载体中筛选出pGenesil-1.0-Sirt1阳性克隆并测序。将构建好载体转染HepG2、A549和293T细胞,用RT-PCR、Western blot检测各细胞中Sirt1表达水平,MTT测细胞增殖活性,加入阿霉素处理三组细胞后,用MTT检测细胞凋亡情况。结果表明成功构建Sirt1 shRNA干扰载体,各细胞株中Sirt1表达水平明显下降,Sirt1 shRNA克隆细胞株增殖能力降低,阿霉素处理后,各细胞株抗凋亡能力明显减弱,Sirt1在维持细胞增殖及抗细胞DNA损伤凋亡方面发挥重要作用,为进一步研究提供理论依据。     

Notch信号通路的研究现状

Notch信号通路是一条进化上十分保守的信号转导系统。Notch受体通过与配体的相互作用转导细胞信号,从而在细胞增殖、分化、凋亡中发挥重要的调控作用。Notch信号通路平衡细胞增殖、分化、凋亡的重要性提示其可能与肿瘤细胞的异常调控相关。近来研究发现,在许多肿瘤细胞系中存在notch基因的异常活化,且失控的Notch信号与肿瘤细胞的生长调控相关。文章综述了就新近有关Notch信号通路的生理功能及其对肿瘤细胞的调控作用。     

宫颈癌细胞增殖及凋亡与bcl-2表达的研究

本研究旨在探求宫颈癌变中细胞增殖和细胞凋亡的变化规律,以及凋亡出现频率与ｂｃｌ－２癌蛋白的关系。结果发现宫颈癌组织的增殖指数（ＰＩ）和凋亡指数（ＡＩ）明显高于正常宫颈组织和宫颈不典型增生组织（Ｐ＜０．０１）,而ＡＩ／ＰＩ显著低于两者（Ｐ＜０．０１）。ｂｃｌ－２癌蛋白常见于正常宫颈上皮和不典型增生上皮的基底细胞层,宫颈癌组织中其表达随临床期别升高呈下降趋势,ｂｃｌ－２阳性组的ＡＩ与阴性组无显著差异。证实宫颈癌变是细胞无限增殖,凋亡异常被抑制的结果。ｂｃｌ－２是宫颈癌变的早期特征,但不是调节细胞凋亡的唯一因素     

Ribosomal Proteins in Cell Proliferation and Apoptosis

Ribosomal proteins have the complex task of coordinating protein biosynthesis to maintain cell homeostasis and survival. Recent evidence suggests that a number of ribosomal proteins have secondary functions independent of their involvement in protein biosynthesis. A number of these proteins function as cell proliferation regulators and in some instances as inducers of cell death. Specifically, expression of human ribosomal protein L13a has been shown to induce apoptosis, presumably by arresting cell growth in the G2/M phase of the cell cycle. In addition, inhibition of expression of L13a induces apoptosis in target cells, suggesting that this protein is necessary for cell survival. Similar results have been obtained in the yeast Saccharomyces cerevisiae, where inactivation of the yeast homologues of L13a, rp22 and rp23, by homologous recombination results in severe growth retardation and death. In addition, a closely related ribosomal protein, L7, arrests cells in G1 and also induces apoptosis. Thus, it appears that a group of ribosomal proteins may function as cell cycle checkpoints and compose a new family of cell proliferation regulators.     

乌梢蛇蛋白对滑膜细胞增殖、凋亡及wt-p53／bcl-2mRNA表达的影响

目的研究乌梢蛇蛋白对体外培养的类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes,FLS）生长的抑制情况,探讨乌梢蛇蛋白影响FLS凋亡的可能分子机制。方法常规方法提取乌梢蛇总蛋白,组织贴块法培养FLS;采用不同剂量（高、中、低剂量）乌梢蛇蛋白作用FLS后,应用MTT法检测乌梢蛇蛋白对细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测细胞的凋亡情况．RT—PCR方法检测细胞wt-p53／bcl-2 mRNA的变化。结果乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS增殖率与空白对照组比较明显减少,细胞凋亡率明显增加．差异均有统计学意义（P〈0．01）;乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS的wt-p53 mRNA表达量增加,Bcl-2mRNA表达量降低,与空白对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论乌梢蛇蛋白可抑制FLS增殖和促进其凋亡。其作用机制可能是通过调节wt—p53／bcl-2基因表达来实现。     

lncRNA CERS6-AS1 通过调控 miR-138-2-3p 抑制人胶质瘤细胞系增殖

目的 探讨 lncRNA CERS6-AS1 对胶质瘤细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。 方法 qRT-PCR 法检测胶质瘤组织、 癌旁组织中 CERS6-AS1 和 miR-138-2-3p 的表达量; Pearson 法分析胶质瘤组织中 CERS6-AS1 与 miR-138-2-3p 表达量的相关性; 体外培养人胶质瘤细胞 T98G, 将 si-NC、 si-CERS6-AS1、 miR-NC、 miR-138-2-3p mimics、 si-CERS6-AS1 与 anti-miR-NC、 si-CERS6-AS1 与 anti-miR-138-2-3p 分 别 转 染 至 T98G 细胞; CCK-8 法、 平板克隆形成实验、 Transwell 小室实验分别检测细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭 能力; 双荧光素酶报告基因实验检测 CERS6-AS1 和 miR-138-2-3p 的靶向关系。 结果 与癌旁组织比较, 胶 质瘤组织中 CERS6-AS1 的表达量升高 (P< 0. 05), miR-138-2-3p 的表达量降低 (P< 0. 05); CERS6-AS1 与 miR-138-2-3p 呈负相关 (r = - 0. 8899, P< 0. 001); si-CERS6-AS1 组细胞活力、 克隆形成细胞数、 迁移及侵 袭细胞数均低于 si-NC 组 (P< 0. 05); CERS6-AS1 可靶向调节 miR-138-2-3p 的表达; miR-138-2-3p 组细胞活 力、 克隆形成细胞数、 迁移及侵袭细胞数均少于 miR-NC 组 (P< 0. 05); si-CERS6-AS1 + anti-miR-138-2-3p 组细胞活力、 克隆形成细胞数、 迁移及侵袭细胞数均比 si-CERS6-AS1 + anti-miR-NC 组增多 (P< 0. 05)。 结论 干扰 CERS6-AS1 表达可通过调控 miR-138-2-3p 而抑制胶质瘤细胞增殖、 克隆形成、 迁移及侵袭。     

Notch1和Notch2在星形细胞瘤及髓母细胞瘤中的表达及其意义

目的 探讨Notch1和Notch2在人脑星形细胞瘤及髓母细胞瘤中的表达及其在肿瘤形成和发展中的作用.方法 应用组织芯片和免疫组织化学SP法染色以及Western blot技术检测正常脑组织、不同级别大脑星形细胞瘤、小脑髓母细胞瘤中Notch1和Notch2蛋白的表达情况.结果 正常脑组织中Notch1和Notch2蛋白呈阴性表达;Notch1在Ⅳ级星形细胞瘤中阳性比为15/15,Ⅲ级中阳性比为14/15,Ⅱ级中阳性比为10/15,Ⅰ级中阳性比为9/15,总阳性率为80.0%(48/60),阳性部位均为胞质.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级星形细胞瘤中表达阳性比及表达强度随肿瘤级别增高而增高.在髓母细胞瘤中阳性比为2/10,且表达水平较低.Notch2在Ⅳ级星形细胞瘤中无表达(0/15),Ⅲ级表达阳性比为1/15,Ⅱ级中阳性比为2/15,Ⅰ级中阳性比为3/15,总阳性率为10%(6/60),表达率及表达强度都很低.在髓母细胞瘤中阳性比为9/10.Notch1在各级别胶质瘤中表达强度的差异均有统计学意义(x2=18.495,P<0.05).Spearman等级相关检验证实肿瘤病理分级与Notch1表达强度之间呈正相关(r=0.859,P<0.05).在星形细胞瘤中,Notch1和Notch2表达的总阳性率差异有统计学意义(x2=56.807,P<0.05),在髓母细胞瘤中,Notch1和Notch2的表达差别有统计学意义(x2=13.778,P<0.05).结论 Notch1和Notch2在星形细胞瘤及髓母细胞瘤中表达不同,并呈现相反的趋势,可能与两者在脑发育过程中的作用不同有关.     

青藤碱对RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响

目的 通过研究青藤碱对肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响,深入探讨青藤碱的抗炎作用机理.方法 应用细胞培养,流式细胞术等方法,观察青藤碱等药物对体外培养的RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响.结果 青藤碱对肥大细胞增殖有明显的抑制作用,其IG50约为1 mmol/L,并能促进肥大细胞凋亡,且对RBL-2H3肥大细胞活化脱颗粒有较强的抑制作用.结论青藤碱可能部分通过下调肥大细胞功能发挥抗炎抗风湿作用.     

miR-502-3p 通过靶向结合 CBL 抑制卵巢癌增殖并诱导凋亡

目的 探究微小 RNA 502-3p (micro RNA 502-3p, miR-502-3p) 通过靶向结合 Casitas B 细胞淋巴 瘤 (Casitas B-cell lymphoma, CBL) 参与卵巢癌增殖和凋亡的机制。 方法 下载 GSE66957、 GSE119056、 TCGA_ OV 卵巢癌相关数据矩阵, 分析 miR-502-3p、 CBL 与卵巢癌的关系; 构建过表达 miR-502-3p、 CBL 的 SKOV3 和 HO8910 细胞系, 分别采用细胞计数试剂盒 ( cell counting kit 8, CCK-8)、 克隆形成实验、 流 式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况; 通过荷瘤裸鼠实验, 观察过表达 CBL 对肿瘤生长的影响; 验证 miR502-3p 与 CBL 的靶向关系。 结果 生物信息学分析显示, 卵巢癌组织中 CBL 水平高于癌旁组织, miR-502- 3p 水平低于癌旁组织, CBL 水平与患者预后、 细胞增殖基因表达有关 (P< 0. 05)。 miR-502-3p 与 CBL 存在 靶向关系, 与 Vector 组比较, CBL 组肿瘤的体积及重量增加 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, miR-502-3p 组 SKOV3、 HO8910 细胞中 CBL 蛋白表达、 细胞活力、 克隆数降低, 细胞凋亡率升高 (P< 0. 05), 但 CBL 可逆转上述细胞变化。 结论 miR-502-3p 可通过靶向下调 CBL 抑制卵巢癌细胞的增殖, 并诱导其凋亡。     

丹参酮对RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响

研究丹参酮对肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响,深入探讨丹参酮的抗炎药理机制。应用细胞培养、流式细胞术等方法,观察丹参酮等药物对体外培养的RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响。结果:丹参酮I、IIA对肥大细胞增殖有明显的抑制作用,其IC50约为20μmol/L,并能明显促进细胞凋亡,且对RBL-2H3细胞活化脱颗粒有较强的抑制作用。结论:丹参酮对肥大细胞功能具有明显的抑制作用,可能是其发挥抗炎作用的一个重要方面。     

lncRNA HOXB-AS3 通过激活 PI3K-AKT 通路加剧急性髓样白血病患者细胞的增殖、 凋亡、 迁移和侵袭

目的 探究 lncRNA HOXB-AS3 对急性髓样白血病 (acute myeloid leukemia, AML) 的增殖、 凋亡和侵袭的影响和机制。 方法 RT-qPCR 检测 AML 患者骨髓单核细胞 (BMMCs) 和细胞系中 lncRNA HOXB-AS3 相对表达量。 慢病毒转染建立稳定表达 shRNA-HOXB-AS3-01, shRNA-HOXB-AS3-02 和 shRNA-HOXB-AS3-03 的 THP1 和 HL60 细胞系。 CCK-8 实验、 EdU 实验、 流式细胞术实验和 Transwell 实验分别检测 THP1和 HL60 细胞活力、 增殖、 凋亡和侵袭能力, Western 印迹检测蛋白相对表达量。 建立裸鼠 AML 移植瘤模型, 体内验证 HOXB-AS3 低表达对肿瘤生长的影响。 结果 lncRNA HOXB-AS3 在 AML 患者 BMMCs 和细胞系中的表达量显著增加。 在细胞实验中, HOXB-AS3 低表达显著抑制 THP1 和 HL60 细胞活力、 增殖和侵袭, 增加细胞凋亡率, 上调 cleaved caspase-3、 cleaved caspase-9 和 E-cadherin 蛋白的表达, 下调 N-cadherin、VEGF、 PI3Kp85α 和 p-AKT 蛋白的表达。 在体内实验中, HOXB-AS3 低表达显著抑制肿瘤生长, 下调PI3Kp85α 和 p-AKT 蛋白表达。 结论 lncRNA HOXB-AS3 通过激活 PI3K-AKT 通路加剧 AML 细胞的增殖、凋亡和侵袭。     

RNA干扰EP—CAM基因表达对胆囊癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：利用RNA干扰技术抑制人胆囊癌GBC-SD细胞中上皮细胞黏附分子（EP-CAM）基因的表达,探讨抑制EP-CAM基因后对GBC-SD细胞增殖、凋亡的影响.方法：构建靶向EP-CAM基因的miRNA重组质粒,转染GBC-SD细胞,用RT-PCR和Western Blot分别检测EP-CAM基因的mRNA及蛋白的表达情况,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化.结果：靶向EP-CAM的miRNA重组质粒pcDNA^TM6.2-GW/EmGFPmiR-EPCAM-1构建成功,重组质粒能显著抑制靶基因EP-CAM的mRNA及蛋白表达.与对照组比较,干扰后的细胞凋亡率无明显变化（P＞0.05）,但细胞增殖活性受到明显抑制（P＜0.05）.结论：靶向EP-CAM基因的miRNA重组质粒能有效抑制EP-CAM基因的表达,抑制GBC-SD细胞的增殖.     

miR-300通过LEF-1调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡的实验研究

目的探究miR-300介导LKF-1调控卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用的机制。方法体外培养卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞,使用RT-PCR检测卵巢癌SK0V3细胞及正常卵巢上皮细胞中LEF-1及miR-300的表达情况;利用生物信息学软件预测LEF-1为miR-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证;将卵巢癌细胞分为空白对照组、空白转染组和miR-300抑制剂组。空白转染组使用miR-NC转染卵巢癌SKOV3细胞;miR-300抑制剂组采用miR-300 inhibitor转染细胞。使用CCK-8检测细胞增殖情况;使用蛋A质印记检测各组细胞的增殖相关蛋白Ki-67表达情况;划痕实验法检测各组细胞迁移能力;使用蛋白质印记法检测迁移相关蛋白N-cadherin、E-cadherin表达情况;使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;使用蛋A质印记法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果卵巢癌SK0V3细胞中LEF-1及miR-300的表达显著高于正常卵巢上皮细胞(T=4.528,P=0.017;T=6.328,P=0.017);相比空白对照组,空白转染组卵巢癌细胞增殖、迁移能力均无显著改变(P>0.05);相比空白转染组,miR-300抑制剂组Ki-67蛋内相对表达(T15.687;P=0.001)、增长率(T=9.732;P=0.024)、划痕愈合率(T=11.558;P=O.005)、E-cadherin蛋白相对表达(T=18.558;P=0.003)、Bcl-2蛋白相对表达(T=11.001;P=0.035)均显著降低;N-cadherin蛋白相对表达(T=22.478;P=0.001)、B ax蛋白相对表达(T=18.528;P=0.004)、细胞凋亡率(T=19.975;P=0.000)均显著升高。结论miR-300可以介导LEF-1抑制卵巢癌细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制与调控增殖、凋亡相关蛋白和调控EMT过程相关。     

Mild hypothermia inhibits the Notch 3 and Notch 4 activation and seizure after stroke in the rat model

Ischemic brain injury is an important cause for seizure. Mild hypothermia of the brain or the whole body is an effective way to remit the post-stroke seizure. Our previous study revealed an implication of Notch 1 and 2 in the post-stroke seizure. This study further investigated the involvement of Notch 3 and 4 in post-stroke seizure and the effect of mild hypothermia on these two factors. A global cerebral ischemia (GCI) model was conducted in Sprague Dawley rats. Seizure activity was evaluated by the frequency of seizure attacks, seizure severity scores, and seizure discharges. Seizures were frequently occurred in the first and the second 24?h after GCI, however active whole-body cooling (mild hypothermia) and DAPT (Notch inhibitor) injection into the hippocampus, alone or in combination, alleviated seizure activity after GCI. Immunohistochemistry and Western blot assays revealed the up-regulation of Notch intracellular domain (NICD) 3 and 4 in the cerebral cortex and hippocampus following GCI, but mild hypothermia and DAPT inhibited the up-regulation of NICD 3 and 4. NF-κB, PPARα, PPARγ, cyclin D1, Sox2 and Pax6 are associated with the pathogenesis of diverse type of seizures. GCI induced NF-κB, cyclin D1, and Pax6 activity, but suppressed PPARγ. These effects of GCI were abolished by both mild hypothermia and DAPT treatment. This indicated the implication of Notch signaling in the effects of GCI. Collectively, mild hypothermia inhibits Notch 3 and Notch 4 activation and seizure after stroke in the rat model. This study adds to the further understanding of the pathogenesis of post-stroke seizures and the protective mechanism of mild hypothermia.     

H3N2 Influenza A Virus Replicates in Immortalized Human First Trimester Trophoblast Cell Lines and Induces Their Rapid Apoptosis

Problem  Epidemiological data suggested that pandemic influenza increased the risks of spontaneous abortion and premature labor, while seasonal influenza also increased the risk of schizophrenia in adolescence. However, their pathogenesis is so far unknown.
Method of study  The first trimester trophoblast cell lines, namely, Swan71 and HTR8 cells were challenged with A/Udorn/72 influenza virus (H3N2). At indicated time points, cells were examined for expression of influenza proteins. Viral replication in culture media, apoptosis and the expression of human leukocyte antigen (HLA)-G were also examined.
Results Intracellular localization of viral proteins was observed. Twenty-four hours after inoculation, virus was detected in culture media while most cells fell into apoptosis. During apoptosis, expression of HLA-G was unchanged.
Conclusion  We revealed replication of low pathogenic influenza virus in the first trimester trophoblast cell lines. Placental damages are likely to be induced by direct cytopathic effects of influenza virus and subsequent apoptosis rather than down regulation of HLA-G expression and subsequent rejection by maternal immune system.     

PARP-1抑制剂对人肝癌细胞HepG2增殖和迁移的抑制作用

目的 研究证实聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1(poly ADP ribose polymerase,PARP-1)抑制剂对肿瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭有影响,但对肝癌细胞生物学特性的影响尚不清楚,此研究的目的是观察3种不同的PARP-1抑制剂对人肝癌细胞株HepG2增殖、凋亡及迁移的影响及可能机制.方法 MTT检测体外不同浓度的PARP-1抑制剂AG014699,BSI-201,AZD-2281处理后HepG2细胞的增殖;随后选择抑制效果明显的抑制剂AG014699和BSI-201处理HepG2;Western印迹法检测HepG2细胞Casepase3、Casepase8、Bax、Bcl-2、PTEN、Timp3、MMP3蛋白的表达水平.Transwell实验检测AG014699和BSI-201对HepG2细胞迁移的影响.结果 AG014699,BSI-201,AZD-2281均具有抑制HepG2细胞增殖的作用,具有时间和浓度依赖性,作用HepG2细胞48 h后的Caspase3、Caspase8、Bax、PTEN、Timp3蛋白的表达水平随药物浓度的增加而增高,而Bcl-2和MMP3蛋白水平随药物浓度的增加而降低且与对照组相比有显著性差异(P<0.01).结论 在体外PARP-1抑制剂AG014699、BSI-201、AZD-2281明显抑制HepG2细胞的增殖,但AG014699和BSI-201展示较好的敏感性,同时二者诱导肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞的迁移,这其中的机制可能与影响凋亡信号的通路以及迁移相关蛋白的表达有关.