慢性乙型肝炎与非慢性乙型肝炎胆囊组织中乙型肝炎病毒DNA的检测

目的 探讨慢性乙型肝炎(HB)与非慢性HB患者的胆囊组织中HB病毒的感染情况。方法 应用PCR技术对慢性HB、非慢性HB的石蜡包埋胆囊标本进行乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测，结果HBV DNA阳性率分别为58．8％(20/34)、17．1％(6／35)。在HBV DNA阳性病例中胆石症检出率分别为60％(12／20)、16．6％(1／6)。结论 胆囊组织中确实含有HBV感染。慢性HB感染率高，而且慢性HB与胆石症发病率有关。     

乙型肝炎患者血清中HBeAg与乙型肝炎病毒DNA关系的探讨

目的探讨乙型肝炎患者血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)定量之间的关系。方法用化学发光法和荧光定量聚合酶链反应(PCR)法同时检测103例乙型肝炎患者血清HBeAg和HBVDNA水平,进行统计学分析。结果 103例乙型肝炎患者血清HBeAg和HBVDNA阳性率分别为40.78和61.17,差异具有统计学意义(χ2=7.473,P0.05);HBeAg和HBVDNA反映乙型肝炎病毒复制的敏感性差异有统计学意义(χ2=19.047,P0.05);经相关性分析,HBeAg和HBVDNA之间具有较好的相关性(r=0.738)。结论与HBeAg相比,HBVDNA能够更加敏感地反映乙型肝炎病毒的复制,但仍需二者有机结合、综合分析,以指导临床合理用药。     

不同乳汁成分乙型肝炎病毒DNA定量检测的结果分析

目的分析不同乳汁成分中乙型肝炎病毒(HBV)-DNA定量检测的结果,为乳汁标本HBV-DNA检测提供参考和依据。方法对152例乙肝产妇乳汁分别选用混匀乳汁、乳酪、乳清和沉淀进行HBV-DNA定量检测。结果选用不同的检测对象时,HBV-DNA检测的阳性率差异无统计学意义(χ2=0.437,P=0.933);HBV-DNA载量间差异有统计学意义(F=2.835,P=0.043),沉淀中HBV-DNA载量高于乳清中HBV-DNA载量;两两比较后,混匀乳汁、乳酪、乳清间检测结果差异无统计学意义(P0.05),混匀乳汁、乳酪、沉淀间检测结果差异无统计学意义(P0.05)。结论对乳汁标本进行HBV-DNA定量检测时,混匀乳汁可能是更为适合的检测对象。     

乙型肝炎病毒DNA、前S1抗原及e抗原在慢性乙型肝炎中的临床意义

目的　研究乙型肝炎病毒DNA (HBV DNA)、前S1抗原 (Pre S1)、乙型肝炎e抗原 (HBeAg)及丙氨酸转氨酶 (ALT)等指标在慢性乙型肝炎诊断及疗效观察的意义。方法　对 12 5例慢性乙型肝炎患者做HBV DNA、Pre S1、HBeAg及ALT值的测定 ;HBV DNA定量检测采用荧光聚合酶链反应系统 ,Pre S1的检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法 ,HBeAg的检测采用电化学发光法 ,ALT的检测采用速率法。结果　定性分析中 ,以HBV DNA为诊断金标准 ,Pre S1、HBeAg、ALT敏感性分别为5 0 .5 %、74 .7%、5 1.6 % ,特异性分别为 73.5 %、88.2 %、5 8.8% ,准确性分别为 5 6 .8%、78.4 %、5 3.6 % ;定量分析中 ,HBV DNA拷贝数与Pre S1吸光度、HBeAg光放射强度相关 ,分别为rs =0 .896 (P <0 .0 5 ) ,rs =0 .94 3(P <0 .0 5 ) ;HBV DNA拷贝数与ALT值不相关 ,rs =0 .6 5 7(P >0 .0 5 )。结论　HBeAg阳性是HBV病毒复制的较好指标 ,定量检测HBeAg光放射强度和Pre S1抗原可在一定程度上反映乙型肝炎病毒复制程度及抗病毒治疗的效果。     

慢性乙型肝炎病毒DNA定量检测的临床意义

近年来,随着核酸及核酸类似物、聚乙二醇干扰素α等抗病毒药物的问世,使得慢性乙型肝炎临床抗病毒治疗取得了明显发展,同时对乙型病毒肝炎的实验室检测也提出了新的要求,促进了实验室诊断技术的发展.本研究着重讨论临床抗病毒治疗中乙型肝炎病毒DNA定量检测的应用和重要性,指出HBV DNA的定量检测病毒学应答对于判定抗病毒疗效、调整临床抗病毒治疗方案、停药后随访及预测预后等有重要意义.     

乳汁前处理对乙型肝炎病毒DNA检测结果的影响

目的 使用新的乳汁前处理方法对乳汁中的HBV DNA含量进行检测,提高乳汁中HBV DNA的检出率,以期评价该方法的准确性及有效性.方法 应用Microcon YM 100超滤柱法与传统的提取方法提取乳汁中的DNA,通过实时荧光定量法检测HBV DNA,比较两种方法对乳汁中HBV DNA的检出率.结果 在50例乳汁样本...     

乙型肝炎病毒前S1蛋白、前S2蛋白、乙型肝炎病毒DNA和乙型肝炎病毒标志物的检测及其意义

乙型肝炎病毒前S1蛋白（HBVpre S1-Ag）、前S2蛋白（HBVpreS2-Ag）和S抗原（HBsAg）三者共同构成乙型肝炎病毒（HBV）的衣壳蛋白，分别由病毒负链DNAS区中的前S1基因、前S2基因和S基因所编码，病毒DNA存在于病毒的Dane颗粒的核内部，乙型肝炎核心抗原（HBcAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）分别由负链DNAC区中的C基因和PreC基因所编码。PreS1含有肝细胞膜受体，在HBV感染肝细胞和机体免疫应答反应中起重要作用。笔者对乙型肝炎患者血清中几种指标进行检测，并对其结果加以分析探讨，现报道如下。     

分子杂交化学发光法检测血清中乙型肝炎病毒DNA

目的：用非放射性的异羟基洋地黄毒甙（地高辛，Dig)标记探针与靶DNA杂交，结合化学发光检测系统检测乙肝患者血清中HBV DNA。方法：应用灵曼公司生产的Dig DNA标记检测试验盒。将Dig标记的HBV DNA探针与点印迹在尼龙膜或硝酸纤维素膜上的靶DNA杂交，杂交后的膜与Dig－AP抗体保温，然后用化学发光底物CSPD与之作用，导致在波长477nm处发光，感光于X光底片上。结果：待检的129份血清标本，用此法检测HBV DNA阳性率达58．4％，敏感性2.0pg-0.5pg。为了比较，329份血清标本用显色法测定，阳性率45．0％，敏感性5.0pg-1.0pg。对照组呈阴性结果。结论：Dig标记探针分子杂交化学发光法具有较高特异性，敏感性和简便等优点，可用于血清中HBV DNA的检测。     

Hepatitis B virus DNA and hepatitis B surface antigen levels in chronic hepatitis B

Despite universal vaccination, chronic hepatitis B (CHB) continues to be a major health burden worldwide, with an estimated 350–400 million people infected with the virus. Over the past decade, rapid progress has been made with regards to antiviral therapy for CHB, from conventional interferon to pegylated interferon, and with the earliest oral agent lamivudine to the current, more potent drugs such as entecavir and tenofovir. There have also been new developments in the diagnostic and monitoring tools for CHB. Qualitative hepatitis B surface antigen (HBsAg) testing has been used to diagnose patients infected with CHB. More recently, quantitative HBsAg titers have been used to predict treatment outcome when measured at baseline or early into treatment. The progress on the use of hepatitis B virus (HBV) DNA levels has been more rapid. Serum HBV DNA levels have been shown to be important in the natural history of CHB infection, with higher levels being significantly associated with the development of cirrhosis and hepatocellular carcinoma. For patients receiving antiviral therapy, the baseline and early on-treatment HBV DNA levels are important in determining treatment outcomes. Monitoring of HBV DNA levels during therapy will allow for early detection of drug resistance. The end-of-treatment and post-treatment HBV DNA levels have been demonstrated to be important indicators of treatment success and relapse, respectively. With newer and more powerful antiviral agents, and with the development of quantitative assays that are highly sensitive, further studies are needed to optimize the use of these tools and agents in the modern management of CHB.     

乙型肝炎病毒DNA检测及其与血清标志物的关系探讨

目的:利用荧光定量聚合酶链反应方法定量检测血清中乙型肝炎病毒的数量及探讨其乙型肝炎病毒标志物表现模式的关系。方法:361份临床血清标本,采用荧光定量聚合酶链反应及ELISA分别检测其乙型肝炎病毒DNA和乙型肝炎病毒标志物。结果:HBsAg( ),HBeAg( ),HBcAb( )患者血清乙型肝炎病毒DNA阳性率为99％,平均浓度为1.78×107拷贝／mL;HBsAg( ),HBe Ab( ),HBcAb( )患者中血清乙型肝炎病毒-DNA阳性率为30％,平均浓度为1.56×104拷贝／mL;两者之间乙型肝炎病毒DNA浓度有显著性差异。HBsAg( ),HBcAb( )患者血清乙型肝炎病毒DNA阳性率为21％,平均浓度为1.27×104拷贝／mL。结论:血清乙型肝炎病毒平均水平与乙型肝炎病毒标志物表现模式有关,荧光定量聚合酶链反应具有快速,特异,灵敏等优点,可检测乙型肝炎病毒的真实感染及复制情况,对乙型肝炎的诊断、治疗及预防具有较大的临床意义。     

血浆中丙型肝炎病毒核酸在不同保存条件下的稳定性

目的探讨不同保存条件和时间对丙型肝炎病毒(HCV)RNA稳定性的影响。方法将22份血浆样本置于-20℃保存4周,4℃保存12d,室温(20~25℃)保存7d,反复冻融5次,采用荧光定量聚合酶链反应测定HCV RNA水平,考察HCV RNA稳定性。结果样本在-20℃保存4周HCV RNA平均下降幅度小于或等于0.14lg,±95%CI≤0.20lg;4℃保存12dHCV RNA平均下降幅度小于或等于0.39lg,4℃保存12d时95%CI下限为-0.50lg,12d时±95%CI≤0.24lg;室温保存7dHCV RNA平均下降幅度小于或等于0.40lg,室温保存7d处理组95%CI下限为-0.53lg,7d时±95%CI≤0.29lg;反复冻融5次HCV RNA平均下降幅度小于或等于0.10lg,±95%CI≤0.15lg。结论血浆样本在-20℃保存4周、4℃保存9d、室温保存5d和反复冻融5次时,对HCV RNA水平影响不明显,但4℃保存12d或室温保存7d后,RNA水平显著降低,所以应避免在这种条件和时间下保存和运输血浆。     

乙型肝炎病毒血清DNA定量检测的临床意义

目的　探讨乙型肝炎病毒 (HBV)感染者乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 (HBV DNA)定量检测的临床意义 ,以及与乙型肝炎血清学e系统 (HBe)标志、丙氨酸转氨酶 (ALT)和天冬氨酸转氨酶 (AST)水平的相关性。方法　采用荧光标记探针定量聚合酶链反应 (PCR)技术、酶联免疫吸附测定法及速率法 ,对 14 0例乙型肝炎病毒感染者乙型肝炎病毒血清DNA含量、血清学标志、ALT和AST进行检测 ;同时动态检测了 2 0例乙肝患者 2 4周拉米夫定治疗期间的血清HBe标记系统和HBV DNA含量变化。结果　e抗原 (HBeAg)阳性组的HBV DNA含量 (M =6 .4 8)显著高于e抗体 (HBeAb)阳性组的HBV DNA含量 (M =4 .2 8) ,差异有统计学意义 (H =2 8.4 8,P <0 .0 0 1) ;不同临床类型乙肝患者的HBV DNA含量检测结果之间的比较 ,差异无统计学意义 (H =2 .181,P >0 .0 5 ) ;在拉米夫定治疗期间 ,血清HBV DNA含量的下降和转阴明显先于血清学标志系统的转换。结论　HBeAg是反映HBV DNA复制的重要指标 ,HBeAg阳性表示乙型肝炎病毒复制活跃 ,但在抗病毒治疗期间 ,血清学标志指标反映HBV复制状态存在局限性 ,HBV DNA定量检测是反映HBV复制和判断药物疗效的最直接、可靠的指标 ;乙型肝炎患者病程的变化、ALT和AST水平与HBV复制是否活跃没有直接相关关系     

不同HBV DNA载量乙型肝炎患者血小板参数变化研究

目的 分析不同乙型肝炎(简称乙肝)病毒DNA(HBV DNA)载量乙肝患者血小板参数的变化,探讨血小板参数变化在抗病毒治疗中的临床意义.方法 随机选择确诊乙肝或HBV携带患者,在检测其血清HBV DNA载量的同时检测血小板5项参数[血小板计数(PLT)、大血小板比率(P-LCR)、血小板比容(PCT)、平均血小板体积(MPV)和血小板分布宽度(PDW)],以HBV DNA载量数量级不同分为三组:<103、103～105、>105 copy/mL,分析三组之间血小板参数的差异性.结果 三组HBV DNA不同载量血小板参数有明显差异,并且随着载量的增高,PLT和PCT减低,P-LCR、MPV和PDW则增高.结论血小板参数的变化对初步判断HBV复制的严重性有一定临床意义,乙肝患者血小板参数严重异常者应判断是否病毒复制严重,并及时进行抗病毒治疗,以减轻HBV对骨髓的抑制作用.     

慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA定量检测的临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（HBV cccDNA）的临床意义。方法选取经肝组织病理学诊断的慢性乙型肝炎患者57例,其中乙型肝炎e抗原（HBeAg）阳性37例,HBeAg阴性20例;肝组织炎症轻度33例,肝组织炎症中度24例。采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）同时定量检测其血清HBVDNA和cccDNA。结果HBeAg阳性组血清HBV cccDNA对数值和阳性率分别高于阴性组,8.1±1.3vs6.5±1.9,73.0%vs30.0%（均P〈0.01）。肝组织炎症轻度组（G1～G2）血清HBVcccDNA对数值低于中度组（G3）,7.1±0.4vs8.5±0.4（P〈0.01）。血清cccDNA与丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶呈正相关（r=0.612、0.632,均P〈0.05）。结论血清HBVcccDNA为病毒复制的标志物,与肝组织细胞损伤相关。     

乙肝患者血清HBV外膜大蛋白与HBV DNA的关系

目的:通过对乙型肝炎(乙肝)患者血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)和HBV DNA的检测,探讨二者在判断乙肝病情和HBV复制情况时的相关性及其在临床上的意义。方法:采用荧光定量PCR方法对238份乙肝患者血清的HBV DNA进行检测,采用酶联免疫吸附试验,对上述标本进行HBV-LP和HBV血清免疫学标志物(HBV-M)模式的检测。结果:HBV-LP检出率与HBV DNA的检出率差异有显著性(P<0.05),不同HBV-M模式的HBV DNA与HBV-LP的检出结果差异有显著性(P<0.05),HBV DNA拷贝数与HBV-LP的表达有相关性(r=0.677,P<0.001)。结论:血清中HBV-LP的含量与HBV DNA的拷贝数具有较好的相关性,但HBV-LP尚不能完全代替HBV DNA的检测来反映HBV复制情况。     

初诊慢肝患者血清中乙肝病毒DNA载量与血清标志物的关系

目的探讨初诊慢性乙型肝炎血清标志物与HBV DNA的关系。对象与方法采用酶联免疫方法和荧光定量聚合酶链反应分别对512例不同乙肝病人及202例HBeAg阴性、257例HBeAg阳性慢肝病人进行血清标志物、HBV DNA定量检测并分析结果。结果慢肝组有315例(68.9%)病毒颗粒浓度高于107,肝硬化组7例(13.2%)病毒颗粒浓度高于107;HBeAg阳性慢肝组245例(95.3%)患者病毒颗粒含量高浓度,HBeAg阴性慢肝组68例(33.7%)患者病毒颗粒含量在105-7copy/mL区段。结果慢肝组与肝硬化组相比,高浓度病毒以慢肝组中最明显,病情发展至肝硬化期病毒含量多数不高;慢肝病人中不同乙肝血清标志物模式其病毒含量分布特点不同,与HBeAg阳性慢肝组相比HBeAg阴性组体内病毒复制水平低(p<0.01),传染性较前者弱。最常见前C区突变,导致HBeAg阴性CHB病情加重和病毒复制增加。     

前S1蛋白与乙肝病毒DNA和e抗原对乙肝病毒复制诊断的研究

乙型肝炎病毒(HBV)的衣壳蛋白包括S蛋白与前S蛋白,后者又分为前S1蛋白(Pre-S1)和前S2蛋白(Pre-S2)。Pre-S1蛋白含有肝细胞膜受体,在HBV感染肝细胞和机体免疫应答的过程中起重要作用。对慢性乙型肝炎患者与健康对照者进行了HBV标志物、Pre-S1蛋白和HBV DNA的检测,旨在分析Pre-S1     

慢性HBV感染者肝组织HBV cccDNA的定量检测

目的建立一种肝活检组织中HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）的定量检测方法。方法待检肝组织标本共21份，来源于江苏省人民医院肝脏手术患者，包括19份慢性HBV感染，其中HBeAg（＋）标本10份，HBeAg（-）标本9份，4份非HBV感染为阴性对照组，取HBVDNA阳性的患者外周血作为rcDNA组。检测方法的主要步骤为肝组织经蛋白酶K和细胞裂解缓冲液消化后，用液相抽提法提取核酸，将提取的核酸溶液分为2等份。1份用特异性降解单链DNA的核酸酶加以消化，纯化后使用跨缺口引物和SYBR GreenⅠ荧光染料进行实时荧光定量PCR分析；另1等份则用以定量检测肝细胞看家基因（β-Globin）作为样本细胞参数。检测结果的特异性主要通过PCR反应产物的序列分析及rcDNA组结果的对照进行证实，HBeAg（＋）组和HBeAg（-）组cccDNA水平的差异通过两样本t检验进行分析。结果PCR产物经琼脂糖凝胶电泳分析显示扩增产物的碱基数为350bp左右，DNA测序分析提示产物与目的片段的序列符合率为99％以上，且以rcDNA为对照的结果均为阴性，排除最有可能造成假阳性的rcDNA对结果的干扰。本方法对10mg HBeAg（＋）肝组织标本的cccDNA的检测阳性率为100％。血清HBeAg（＋）的肝组织样本的平均HBV cccDNA水平高于HBeAb（＋）的肝组织标本（P〈0．05）。结论通过上述三种途径证实了本文所建立方法的特异性。应用SYBR GreenⅠ荧光染料和β-Globin作为样本细胞参数所建立的实时荧光定量PCR方法检测肝细胞内HBV cccDNA，具有较高的特异性、敏感性，且成本较低的特点。