CD28单克隆抗体对病毒性心肌炎小鼠的治疗作用

目的探讨CD28单克隆抗体（CD28 mAb）对柯萨奇病毒B3（CVB3）病毒性心肌炎（VMC）小鼠的死亡率、心肌病理改变及病毒滴度的影响。方法随机将106只BALB/c小鼠分为CD28 mAb组16只、病毒组40只、IgG组40只及正常对照组10只，腹腔注射半数组织感染量(TCID50 )为10-6/mL的柯萨奇B3病毒0.15?mL，正常对照组接种0.15?mL?的Eagle氏液。CD28 mAb组、IgG组接种病毒后6、72?h分别接种CD28 mAb(0.1?mg/kg)和IgG(0.1mg/kg)。于接种病毒后第7天处死所有小鼠，取心脏，在光镜下观察心肌病理变化，采用实时荧光定量PCR（RQ-PCR）检测心肌组织中CVB3mRNA的表达。结果CD28单克隆抗体组小鼠死亡率、心肌病理积分、心肌CVB3mRNA均低于病毒对照组(P均＜0.05)。结论CD28单克隆抗体可降低心肌病毒滴度，减轻VMC小鼠心肌炎症，降低VMC小鼠死亡率。     

胰岛素样生长因子Ⅱ受体在病毒性心肌炎小鼠心肌中的表达

目的：观察胰岛素样生长因子Ⅱ受体（ IGF－ⅡR）在病毒性心肌炎（ VMC）小鼠心肌组织中的动态表达并探讨其与心肌损伤的关系。方法随机将120只雄性4周龄BALB／c小鼠分为两组：VMC组80只,对照组40只。 VMC组腹腔接种含柯萨奇B3病毒的DMEM液建立VMC模型,对照组接种等量不含病毒的DMEM液。于感染后第3、7、14、28天每组各取10只收集心脏标本,HE染色观察心肌病理改变,免疫组织化学技术测定心肌IGF－ⅡR蛋白表达水平,RT－PCR技术测定心肌IGF－ⅡR mRNA的相对表达量;分析IGF－ⅡR的动态表达水平及其与心肌病变程度的相关性。结果 VMC组小鼠感染病毒后第3天心肌组织中的IGF－ⅡR蛋白表达开始增多,第7天达到高峰。 VMC组小鼠心肌组织中IGF－ⅡR的蛋白表达水平在各个时间点均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0．05）,且IGF－ⅡR蛋白表达水平与心肌病理学评分呈正相关。结论 IGF－ⅡR的表达上调可能在VMC小鼠心肌损伤中起一定作用。     

大黄素对病毒性心肌炎小鼠IL-23/IL-17炎症轴、Th17细胞及病毒复制的影响

目的探讨大黄素对病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌的保护作用及其分子机制。方法55只雄性BALB/c小鼠随机分为对
照组（n=15）、模型组（n=20）及大黄素组（n=20）,模型组、大黄素组小鼠腹腔接种0.1 ml内含柯萨奇病毒B3（CVB3）的Eagle’s液
建立VMC模型,对照组仅注射Eagle’s液,于接种当天,大黄素组以3 mg/ml大黄素溶液0.1 ml灌胃,其余2组以0.1 ml蒸馏水灌
胃,1次/d,共21 d,记录实验期间小鼠死亡数目,比较各组死亡率。第7天每组处死5只小鼠,取心脏,测定病毒滴度。第22天称
体质量（BW）后处死全部小鼠,收集外周血,剥离心脏,称心脏质量（HW）,计算HW/BW,行HE染色计算心肌病理积分,采用荧
光实时定量PCR、Western blotting分别检测心肌白介素-23（IL-23）、白介素-17（IL-17）mRNA和蛋白表达,通过酶联免疫吸附法
测定血清IL-23、IL-17浓度,流式细胞术分析Th17细胞频率,利用Western blotting测定心肌细胞核内核因子-κB（NF-κB）p65表
达,ELISA分析心肌白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量。结果大黄素组死亡率、心肌病理积分及
病毒滴度较模型组减少（P<0.05）。模型组HW/BW、心肌IL-23及IL-17 mRNA与蛋白表达水平、血清IL-23和IL-17浓度、Th17
细胞频率、胞核NF-κB p65表达水平及心肌IL-1β、IL-6、TNF-α含量显著高于对照组（P<0.01）,与模型组比较,大黄素组上述指
标明显降低（P<0.05）。结论大黄素可能通过抑制IL-23/IL-17炎症轴、Th17细胞增殖及病毒复制发挥抗VMC作用。
     

病毒性心肌炎小鼠体内NT-proBNP的水平变化及意义

目的 探讨氨基末端脑利钠肽前体( NT-proBNP)在病毒性心肌炎( VMC)小鼠体内的水平变化及其意义. 方法100只Balb/c小鼠随机分为VMC组( n=60 )和对照组( n=40). VMC组小鼠腹腔注射柯萨奇B3病毒(CVB3),对照组注射等量不含病毒的DMEM液. VMC模型建立后分别在第3、7、14、28天每组随机处死10只小鼠,留取血液和心脏标本. 使用ELISA法检测两组小鼠血清中NT-proBNP含量, HE染色观察心肌组织病理改变. 分析VMC组小鼠不同时间血清NT-proBNP含量与心肌组织病理积分的关系. 结果VMC组小鼠血清 NT-proBNP水平明显高于对照组( P<0. 05 ) ,且VMC组不同时间的NT-proBNP水平之间差异有统计学意义 ( P<0. 05 ). 血清NT-proBNP水平与心肌组织病理积分呈显著正相关性(r=0. 829, P<0. 05). 结论 血清NT-proBNP水平可反映VMC小鼠心肌损伤的严重程度,可作为判断其危险分层的血清学指标之一.     

芳基烃受体AhR对CVB3诱导病毒性心肌炎小鼠心肌细胞损伤和焦亡的影响

目的:探究抑制芳基烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)对柯萨奇B3病毒(coxsackievirus 3,CVB3)诱导的小鼠病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)心肌损伤及细胞焦亡的影响。方法:将60只BALB/c小鼠随机分为对照组(Control)、AhR抑制剂组(AhR inhibitor)、模型组(VMC)、VMC+AhR抑制剂组(VMC+AhR inhibitor),每组15只。VMC组和VMC+AhR抑制剂组小鼠腹腔注射CVB3建立心肌炎模型后,AhR抑制剂组和VMC+AhR抑制剂组小鼠腹腔注射AhR抑制剂CH223191(10mg/kg)。10d后,通过高分辨率Vevo2100小动物超声成像系统检测各组小鼠心脏超声指标,ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白l(cardiac troponin l,cTnl)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18的含量,苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化,TUNEL染...     

病毒性扩张型心肌病小鼠IL-6测定及意义

目的建立病毒性扩张型心肌病（DCM）小鼠模型并测定其血清白介素（IL-6）含量,初步探讨IL-6在DCM小鼠的致病机制。方法40只4周龄雄性BALB／c小鼠随机分成DCM（扩张型心肌病）组和正常组,每组各20只。DCM组每月腹腔注射柯萨奇病毒B3（CVB3）,6个月后建立DCM模型,取出小鼠心脏进行病理组织学观察,并采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测DCM组及正常组小鼠血清IL-6表达水平。结果腹腔反复注射病毒6个月后,DCM组小鼠心脏稍有增大,但最大横径与正常组相比差异无统计学意义（P〉0．05）,重量比正常组有所增加（P〈0．05）,左室游离壁厚度显著变薄（P〈0．05）。DCM组小鼠血清IL-6水平（150．6±47．2）pg／ml,正常组为（82．9±63．1）pg／ml（P〈0．05）。结论反复腹腔注射CVB3病毒能成功建立DCM模型,IL-6表达水平在DCM时明显升高,可能参与了DCM的发病过程。     

内源性硫化氢对柯萨奇病毒B3性心肌炎小鼠心肌内病毒复制的影响

目的观察内源性硫化氢（H2S）对柯萨奇病毒B3（CVB3）所致病毒性心肌炎（VMC）小鼠心肌内病毒复制的影响,探讨内源性H2S在VMC发病机理中的作用。方法雄性Balb／c小鼠通过腹腔接种CVB,复制VMC模型。75只雄性Balb／c小鼠随机分为5组（每组15只）：正常对照组、VMC组及胱硫醚-1-裂解酶（CSE）不可逆抑制剂-炔丙基甘氨酸（PAG）低、中、高剂量干预组（PAG给药采用皮下注射,PAG低、中、高剂量干预组的PAG剂量分别为：20．0、40．0、80．0mg·kg^-1,1次／d,共6次。PAG的首次给药为腹腔接种CVB,的同时皮下注射PAG）。于腹腔接种CVB,后第7天处死小鼠。用光镜观察心肌组织的病理变化;用分光光度法测定心肌组织的H2S含量;用酶免疫吸附法测定心肌组织的CSE活性及血清的心肌肌钙蛋白I（cTnI）含量;用逆转录．聚合酶链反应方法检测心肌组织CVB,mRNA表达。结果VMC组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于正常对照组（P〈0．01）,心肌组织的病理积分、CVB,mRNA表达水平及血清的cTn I含量明显高于正常对照组（P〈0．01）;PAG低、中、高剂量3个干预组心肌组织的CSE活性、H2S含量明显低于VMC组（P〈0．01）,心肌组织的病理积分、CVB,mRNA表达水平及血清的cTn I含量明显高于VMC组（P〈0．01）。结论心肌内源性H2S能抑制CVB,在心肌内复制。     

HSV-1心肌炎心肌凋亡细胞的检测与分析

目的研究单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus type-1，HSV-1）心肌炎心肌细胞凋亡。方法将60只小鼠随机分成感染组（40只），病毒稀释液组（20只）。给感染组每只小鼠接种滴度TCID50为10^-4 HSV—lvero细胞液0．1mL，给病毒稀释液组每只小鼠接种RPMI 1640液0．1mL。在接种6d后处死小鼠，用光镜、TUNEL、电镜检查其心肌组织。结果感染组病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）检出率65％，心肌细胞凋亡鼠检出率52．5％。凋亡心肌细胞核数占心肌细胞核总数的35．6％左右。病毒稀释液组未发现心肌炎性病变及凋亡细胞。结论心肌细胞凋亡与HSV-1VMC有一定的关系。     

黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒所致病毒性心肌炎小鼠急性期心肌组织连接蛋白43mRNA表达的影响

目的 探讨黄芪总黄酮（TFA）对柯萨奇 B_3 病毒性心肌炎（VMC）小鼠急性期心肌组织缝隙连接蛋白 43（connexin 43,Cx43）mRNA 表达的影响,探讨 TFA 对 VMC 并发心律失常发挥作用的机制。方法 Balb/c 小鼠腹腔注射柯萨奇 B_3 病毒感染建立 VMC 小鼠模型,予黄芪总黄酮各剂量组以不同剂量的 TFA 灌胃治疗;对照组及病毒感染组给予生理盐水灌胃,第 14 天无痛苦处死全部小鼠并留取心脏。使用 real-time PCR 技术比较各组心肌组织 Cx43mRNA 的水平。结果 TFA 各剂量组 Cx43 mRNA 表达明显高于模型组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 TFA 能明显提高 CVB 心肌炎小鼠急性期心肌组织 Cx43 mRNA 表达。     

Galectin-9在小鼠病毒性心肌炎中的表达及意义

目的检测病毒性心肌炎小鼠不同时间点血清中半乳糖凝集素-9(Galectin-9)的水平及心肌组织中Galec-tin-9mRNA的表达,探讨Galectin-9在病毒性心肌炎发生发展中的作用。方法选取58只5~6周BALB/c小鼠,随机分为病毒组50只和对照组8只。病毒组小鼠腹腔接种0.10mL TC ID50为10-5/L的柯萨奇病毒B3(CVB3)N ancy株病毒液,分别于接种病毒后第7、10、14、28天处死8只小鼠;对照组小鼠腹腔接种0.10mL不含病毒的Eag le氏液,28d时处死小鼠。取心脏,在光镜下观察心肌病理变化,计算心肌组织病理学积分。取外周血,用ELISA检测血清中Galectin-9的含量。采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)检测心肌组织中Galectin-9mRNA的表达。结果病毒组小鼠血清中Galectin-9含量在第7、10、14天均较对照组明显增高(P<0.01)。病毒组小鼠心肌组织Galectin-9mRNA的表达在第7、10天均较对照组增强(P<0.01)。病毒组小鼠血清中Galectin-9的含量及心肌组织中Galectin-9mRNA的表达均与心肌组织病理积分呈正相关(r分别为0.75,0.74;P<0.05)。病毒组小鼠血清中Galectin-9的含量与心肌组织中Galectin-9mRNA的表达呈正相关(r=0.71,P<0.05)。结论急性期病毒性心肌炎小鼠Galectin-9表达明显升高,且与心肌炎病变严重程度呈正相关,Galectin-9可能在病毒性心肌炎的发生发展中起一定作用。     

大蒜多糖对小鼠病毒性心肌炎的治疗作用

目的 :探讨大蒜多糖对实验性小鼠病毒性心肌炎的治疗作用。方法 :采用BALB C小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3(CVB3)建立实验性小鼠病毒性心肌炎模型。小鼠随机分为正常对照组、模型组、大蒜多糖组、黄芪组。注射病毒 1h后给药 ,连续 7d ,于第 8d处死存活鼠取材。观察小鼠存活率及心肌病理变化 ,测定血清心肌酶、丙二醛(MDA)、一氧化氮 (NO)含量和谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)活力、心肌组织中病毒滴度及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达。结果 :大蒜多糖治疗组与模型组相比小鼠存活率明显增高 ,心肌组织病理损伤减轻 ,血清心肌酶、MDA、NO含量显著降低 ,GSH Px活力升高 ,心肌组织中病毒滴度及iNOS表达降低。结论 :大蒜多糖对实验性小鼠病毒性心肌炎具有治疗作用     

哈巴苷对病毒性心肌炎模型小鼠的影响

目的:本研究旨在探讨哈巴苷对病毒性心肌炎模型小鼠的作用。方法:将小鼠随机分为6组:对照组、柯萨奇病毒B3(coxsackievirus group B type3,CVB3)组、哈巴苷(低、中、高剂量)组和卡托普利组,采用CVB3诱导病毒性心肌炎小鼠模型。HE染色观察心肌病理损伤程度;紫外分光光度法检测肌酸激酶同工酶-MB(creatine kinase lsoenzyme-MB,CK-MB)、乳酸脱氢酶(lactatedehy drogenase,LDH)、心肌肌钙蛋白I(myocardialtroponin I,cTnI)和心肌钙蛋白T(cardiac troponin,cTnT)水平;超声心动图检测小鼠左室舒张期后壁厚度(LVPWd)、射血分数(EF%)、舒张早期二尖瓣血流速度(E)、舒张早期二尖瓣环运动速度(E′IVS);ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β);蛋白免疫印迹法检测NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)、半胱天冬酶-1(cleaved caspase-1)的蛋白表达。结果:与CVB3组相比,哈巴苷低、中、高剂量组和卡托普利组心肌病理损伤程度明显改善;CK-MB、LDH、cTnI、cTnT水平明显降低(P<0.05);LVPWD、E/E′IVS明显降低(P<0.05),EF%明显升高(P<0.05);TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显降低(P<0.05);NLRP3、cleaved caspase-1蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论:哈巴苷对CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠具有治疗作用。     

芪芍五味子复方制剂抗CVB3病毒抑制心肌细胞凋亡机制的研究

目的 研究中药芪芍五味子复方制剂抗柯萨奇B3病毒(CVB3)效果及抑制病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的机制.方法 采用细胞培养法观察细胞病变效应(CPE)与广谱抗病毒药物病毒唑对照,进行复方制剂体外抗病毒实验;BALB/c小鼠接种CVB3建立病毒性心肌炎动物模型,随机分为正常对照组、病毒对照组、复方制剂治疗组和维生素C与病毒唑联用组,观察各组心肌病理变化,Real-time定量PCR检测小鼠心肌CVB3RNA水平,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡和坏死率.结果 复方制剂体外最大无毒浓度为19.53g/L,预防给药、同时给药和治疗给药3种方式细胞培养所需有效药物浓度均低于病毒唑;与同期病毒对照组小鼠比较,复方制剂治疗组小鼠心肌炎症性病理变化明显减轻,CVB3RNA拷贝数降低(P<0.05),心肌细胞凋亡和坏死率显著降低(P<0.05).结论 芪芍五味子复方制剂可有效抗病毒,抑制病毒诱导心肌细胞凋亡,对CVB3感染小鼠心肌有良好的保护作用.     

硒对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用及其作用机制

目的: 探讨硒对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,阐明其对PI3K-Akt信号传导通路中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)及其下游靶基因编码的Bax和Bcl-2蛋白的作用机制。 方法: 60只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组和硒干预组(n=20)。正常对照组小鼠连续3 d腹腔注射不含病毒的培养液200 μL;病毒对照组小鼠腹腔注射100半数组织培养感染剂量(TCID₅₀)柯萨奇病毒B组病毒(CVB3)液200μL,连续3d;硒干预组小鼠在病毒对照组同样的处理后灌胃给予100 μg·kg^-1亚硒酸钠,每日1次,连续处理14d。接种CVB3的第15天处死小鼠,TUNEL法检测心肌细胞的凋亡情况,光镜下观察心肌病理变化,Western blotting法检测心肌细胞中Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表达水平。 结果: 与病毒对照组比较,硒干预组小鼠生存率明显升高(P<0.01)。硒干预组小鼠的心肌病理改变较病毒对照组减轻。硒干预组小鼠心肌细胞凋亡率低于病毒对照组(P<0.01)。与病毒对照组比较,硒干预组小鼠心肌细胞中p-Akt、Bcl-2蛋白表达水平增加,Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低,Bax/Bcl-2蛋白比值下降(均P<0.01)。 结论: 硒对CVB3感染导致的VMC小鼠心肌细胞有保护作用,其作用机制与硒通过活化心肌细胞的PI3K-Akt信号通路、调控其下游Bcl-2和Bax蛋白表达和抑制心肌细胞凋亡有关。     

内质网伴侣蛋白在小鼠病毒性心肌炎心肌细胞的表达及其与细胞凋亡的关系

目的:探讨内质网应激反应对于诱导病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的作用。方法:120只小鼠随机分成实验组和对照组实验组腹腔感染柯萨奇病毒B3(CVB3),分别于1、2、4周取心脏标本,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,RT-PCR检测心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78和GRP94的mRNA表达水平。结果:实验组存活小鼠内质网伴侣蛋白GRP78和GRP94的mRN表达水平均明显高于对照组(P<0.01,P<0.05),并且其变化趋势与心肌细胞凋亡数相似。结论:内质网应激反应可能对于诱导病毒性心肌炎的心肌细胞凋亡有一定作用。     

EXPRESSION OF PERFORIN AND FAS LIGAND IN INFILTRATING CELLS OF MURINE MYOCARDIUM INFECTED WITH COXSACKIEVIRUS B3

INTRODUCTIONViralmyocarditisnotonlycancausecongestiveheartfailure,buthasalsobeenstronglyimplicatedinpathogenesisofidiopathicdilatedcardiomyopathy.Manystudieshaveshownthatcellmediatedcytotoxicity(CMC)playsanimportantroleinpathogenesisofmyocardialdamageinviralmyocarditis(1).CMCdamagestargetsbytwoprimarymechanisms:performmediatedpathwayandFas/Fasligand(L)--mediatedpathway(2).Inthepresentstudy,tofurtherclarifytheeffectofCMConthedevelopmentofviralmyocarditis,wehavedetectedtheexpressionofpe…     

辛伐他汀对病毒性心肌炎小鼠心肌细胞L-型钙通道mRNA表达的影响

目的:研究辛伐他汀对柯萨奇B3病毒（CVB3）感染BALB/c小鼠后心肌细胞 L-型钙通道(LCCs)mRNA表达的影响,探讨辛伐他汀对病毒性心肌炎的治疗作用。方法：应用 CVB3 感染BALB/c小鼠制作病毒性心肌炎模型,辛伐他汀混悬液灌胃,按辛伐他汀剂量分为10 mg•kg^-1 组、30 mg•kg^-1 组及90 mg•kg^-1 组,并设正常对照组及病毒感染对照组,行心肌病理观察,采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测正常对照组、病毒感染组及辛伐他汀组心肌细胞LCCs　α₁亚单位mRNA 表达量。结果:病毒感染组小鼠心肌组织有局灶性或弥漫性以单核细胞为主的炎性细胞浸润,重者可见大片状心肌细胞坏死;辛伐他汀组心肌组织炎症细胞浸润及坏死灶明显减轻;正常对照组和病毒模型组心肌LCCs α₁亚单位的mRNA表达量分别为0.06±0.01和1.37±0.32,二者比较差异有显著性（P<0.05）;辛伐他汀10 mg•kg^-1、30 mg•kg^-1 及90 mg•kg^-1 组LCCs α₁ 亚单位的mRNA表达量分别为1.14±0.22、0.17±0.04和0.11±0.02,与病毒模型组比较差异有显著性（P<0.05）,其中以中、高剂量组下降最明显。结论:辛伐他汀可减轻病毒性心肌炎的病理损害,并以剂量依赖的方式抑制心肌细胞LCCs α₁ 亚单位的mRNA表达,发挥心肌保护功能,对病毒性心肌炎有一定的治疗作用。