雌激素受体β1上调p21基因表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的将雌激素受体(ER)β1真核表达质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对p21基因表达和细胞增殖能力的影响,探讨ERβ1在乳腺癌中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,流式细胞仪观察细胞凋亡率的变化;分别用实时聚合酶连锁反应(RT-PCR)、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、p21mRNA和蛋白表达的变化;细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。统计分析采用t检验和单因素方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、p21mRNA和p21蛋白水平明显增强(P0.010),细胞增殖能力明显减弱,细胞凋亡率从1.4%升至6.14%(t=-7.960,P=0.001)。结论 ERβ1可以通过上调p21基因抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖。     

雌激素受体β1对乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮间质转化影响的初步研究

目的将雌激素受体ERβ1真核表达质粒转染到人乳腺癌MDA-MB-231细胞中,观察外源性ERβ1基因转染MDA-MB-231细胞后对E-cadherin、Vimentin等基因表达和细胞上皮间质转化的影响,探讨ERβ1在乳腺癌发生发展中的生物学作用机制。方法应用脂质体法将ERβ1真核表达质粒转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞中,分别用实时荧光定量PCR、Western Blot检测转染前后细胞中ERβ1、E-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达的变化;并用细胞增殖曲线显示转染后细胞增殖能力的改变。所有数据以±s表示,多个样本均数间的比较用单因素方差分析,组间比较采用SNK法。细胞生长曲线变化采用重复测量方差分析。结果外源性ERβ1真核表达质粒转染组MDA-MB-231细胞较未转染组ERβ1、E-cadherin mRNA和蛋白水平明显增强（P〈0.010）,Vimentin mRNA水平明显减少（P〈0.010）,细胞增殖能力明显减弱。结论 ERβ1可能参与抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的上皮间质转化过程。     

沉默p65基因对人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞周期的影响

目的研究miRNA(microRNA)沉默p65基因后对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞周期分布的影响。方法用pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR载体构建p65 miRNA表达质粒,转染MDA-MB-231细胞,用RT-PCR检测转染前后各组细胞中p65 mRNA表达变化;凝胶电泳迁移率改变分析(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)实验研究转染前后细胞中NF-κB结合活性的变化;流式细胞术(Flow cytometry, FCM)观察转染前后细胞周期分布的变化;Westernblot法检测转染前后细胞周期相关因子cyclinD1、CDK4、p21蛋白表达的变化。结果p65 miRNA质粒明显下调MDA-MB-231细胞中p65 mRNA的表达水平,并显著抑制细胞中NF-κB的结合活性(P<0.05)。FCM结果显示,转染组细胞G₀/G₁期细胞比例显著增加,S、G₂/M期细胞比例明显下降(P<0.05);Western blot分析结果显示,沉默p65基因后细胞中cyclinD1蛋白表达下调,p21蛋白表达增加。结论p65 miRNA可以显著降低p65 mRNA的表达,诱导乳腺癌细胞发生G₀/G₁期阻滞,可能是通过降低cyclinD1蛋白,上调p21蛋白表达而实现的。     

Rab11通过NF-κB信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭

目的:探讨Rab11调控膀胱癌细胞增殖和侵袭的分子机制。方法:用Western blot方法检测膀胱癌BIU-87、T24、RT4、5637细胞系中Rab11的内源表达量。在BIU-87（Rab11低表达）和T24（Rab11高表达）细胞系中分别转染Rab11过表达质粒和Rab11 siRNA。用荧光素酶报告实验检测转染后细胞内的NF-κB信号通路的活性,通过Western blot技术分析与NF-κB信号通路相关蛋白p-IκB的变化情况。用NF-κB抑制剂Bay 11-7082处理转染Rab11过表达质粒的BIU-87细胞系,通过Western blot检测细胞系中细胞周期相关因子cyclin D1和侵袭相关因子MMP9蛋白的变化。结果:转染Rab11过表达质粒的BIU-87细胞系中NF-κB活性水平提高,p-IκB表达量显著提高;而敲除Rab11后NF-κB活性受到抑制,p-IκB的表达受到抑制,而p-IκB与NF-κB信号通路的活性呈正相关。NF-κB抑制剂Bay 11-7082阻遏了Rab11诱导cyclin D1和MMP9表达上调的过程。结论:Rab11通过NF-κB信号通路调控膀胱癌细胞的增殖和侵袭。     

siRNA 抑制Sema4C 基因表达对人乳腺癌细胞恶性行为的影响*

目的:研究小干扰RNA（small interf ering RNA,siRNA ）抑制轴突导向蛋白分子（Semaphorin 4C,Sema4C）基因的表达对人乳腺癌细胞MDA-MB-231 体外迁移、侵袭及增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:根据Sema4C 基因设计序列特异性的siRNA（Sema4C-siRNA ）,在脂质体介导下转染MDA-MB-231 细胞,Western blot方法检测基因封闭效应,利用细胞划痕实验、Tran ?swell小室侵袭实验及CFSE流式细胞仪方法检测细胞转染前后迁移、侵袭及增殖能力的变化,Western blot检测磷酸化AKT（p-AKT ）在转染前后细胞中表达的变化。结果:转染Sema4C-siRNA 72小时后,乳腺癌MDA-MB-231 细胞株（MDA-MB-231/Si）Sema4C 蛋白表达明显下降,与未转染细胞MDA-MB-231 相比,MDA-MB-231/Si细胞体外迁移能力减弱,侵袭及增殖能力明显下降;p-AKT 表达水平在MDA-MB-231/Si细胞中明显降低。结论:Sema4C-SiRNA 转染人乳腺癌MDA-MB-231 细胞可下调细胞中Sema4C 蛋白表达水平,Sema4C-SiRNA 对MDA-MB-231 细胞的体外迁移、侵袭和增殖有抑制作用,这可能与p-AKT 的下调有关。      

miR-100抑制乳腺癌细胞迁移的作用和机制

目的:探究miR-100对乳腺癌细胞株MDA-MB-231迁移能力的调节与机制.方法:Real time-PCR检测人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-100的基础表达水平.应用脂质体法将 miR-100 mimic及阴性对照分别转染乳腺癌细胞株MDA-MB-231,通过real time-PCR检测转染后miR-100的表达水平,细胞划痕实验检测过表达miR-100对MDA-MB-231细胞迁移能力的影响,Western blot方法检测slug、snail和E-cadherin等EMT蛋白表达水平的变化.结果:miR-100在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达明显低于人正常乳腺上皮细胞MCF-10A.转染miR-100 mimic的乳腺癌细胞株MDA-MB-231的miR-100表达水平明显增高,细胞划痕实验显示过表达miR-100的MDA-MB-231细胞划痕愈合速度明显减慢.过表达miR-100的MDA-MB-231细胞E-cadherin蛋白表达水平明显增加,而slug和snail蛋白表达水平明显降低.结论:miR-100抑制乳腺癌细胞株MDA-MB-231的迁移能力与其上调E-cadherin,下调slug、snail蛋白表达,抑制EMT有关.     

SIRPα对乳腺癌细胞MDA-MB-231黏附、侵袭和凋亡的影响

目的： 研究信号调节蛋白α（signal regulatory protein α, SIRPα）对乳腺癌细胞黏附、侵袭和凋亡的影响及其可能机制。 方法： Western blotting检测侵袭能力强的MDA-MB-231乳腺癌细胞和侵袭能力弱的MDA-MB-435乳腺癌细胞中SIRPα蛋白的表达。脂质体法将pcDNA3.0-SIRPα转染MDA-MB-231细胞后,RT-PCR检测MDA-MB-231细胞SIRPα mRNA的表达,TUNEL法检测细胞的凋亡,细胞侵袭实验观察细胞侵袭能力变化,黏附实验观察细胞黏附能力变化,Western blotting检测JNK和p-JNK蛋白的表达。EGF刺激MDA-MB-435细胞,免疫共沉淀检测MDA-MB-435细胞中SIRPα与SHP2的结合。 结果： 侵袭能力强的MDA-MB-231细胞不表达SIRPα,侵袭能力弱的MDA-MB-435细胞表达高水平SIRPα蛋白。pcDNA3.0-SIRPα转染可增强MDA-MB-231细胞的黏附,降低MDA-MB-231细胞的侵袭能力,并促进MDA-MB-231细胞的凋亡。pcDNA3.0-SIRPα转染抑制MDA-MB-231细胞JNK的磷酸化。EGF刺激可进一步上调MDA-MB-435细胞中SIRPα蛋白表达,并促进SIRPα与SHP-2蛋白的结合。 结论： SIRPα与乳腺癌细胞的黏附、侵袭能力相关,并可能通过抑制JNK磷酸化促进乳腺癌细胞凋亡。     

lncRNA 178030.2通过TRPS1对三阴性乳腺癌细胞紫杉醇耐药的影响与机制研究

目的:探讨lncRNA 178030.2通过TRPS1对三阴性乳腺癌细胞紫杉醇耐药的影响与机制。方法:采用逐步增加剂量间歇作用的方法诱导三阴性乳腺癌紫杉醇耐药细胞系并命名为MDA-MB-231/R。采用定量PCR和Western blot检测耐药细胞和亲本细胞中lncRNA 178030.2和TRPS1的表达;应用Lipofectamine 2000将lncRNA 178030.2高表达质粒pcmv-178030.2和对照质粒pcmv转染至MDA-MB-231细胞,分别为高表达组和对照组,定量PCR检测lncRNA 178030.2水平的变化,分别用定量PCR和Western blot检测TRPS1 mRNA及蛋白水平的变化;RIP实验检测lncRNA 178030.2是否与TRPS1相结合;MTT法检测MDA-MB-231细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000将lncRNA 178030.2小干扰RNA si178030.2和对照siNC转染至MDA-MB-231/R细胞,分别为干扰组和对照组,定量PCR检测lncRNA 178030.2水平的变化,分别用定量PCR和Western blot检测TRPS1 mRNA及蛋白水平的变化;MTT法检测MDA-MB-231/R细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。应用Lipofectamine 2000将TRPS1过表达质粒pcmv-TRPS1和对照质粒pcmv转染至MDA-MB-231细胞,分别为高表达组和对照组,分别用定量PCR和Western blot检测两组细胞中TRPS1 mRNA及蛋白水平的表达情况,然后再分别应用Lipofectamine 2000将lncRNA 178030.2高表达质粒pcmv-178030.2转染入两组细胞,MTT法检测MDA-MB-231细胞对紫杉醇的敏感性及细胞增殖。结果:成功构建在3 μg/ml紫杉醇中稳定生长的三阴性乳腺癌耐药细胞系MDA-MB-231/R。定量PCR结果显示:lncRNA 178030.2在紫杉醇耐药细胞系MDA-MB-231/R中的表达明显高于在其亲本细胞MDA-MB-231中的表达;定量PCR和Western blot显示:TRPS1 mRNA和蛋白在紫杉醇耐药细胞系MDA-MB-231/R中的表达明显低于在其亲本细胞系MDA-MB-231中的表达;与对照组相比,高表达lncRNA 178030.2组的MDA-MB-231细胞中TRPS1表达下降,细胞对紫杉醇的敏感性降低,细胞增殖增强,且lncRNA 178030.2确实可以与TRPS1相结合;与对照组相比,低表达lncRNA 178030.2组的MDA-MB-231/R细胞中TRPS1表达升高,细胞对紫杉醇的敏感性升高,细胞增殖减弱;在MDA-MB-231细胞中过表达TRPS1后再过表达lncRNA 178030.2,其促进紫杉醇耐药、促进细胞增殖的作用也明显减弱。结论:lncRNA 178030.2促进三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的紫杉醇耐药,促进细胞增殖,其发生机制可能与下调TRPS1的表达有关。     

维生素E琥珀酸酯诱导HER-2过表达乳腺癌细胞凋亡机制的研究

目的:探讨维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)对HER-2过表达乳腺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法:MTT法测定VES对乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞增殖的抑制作用，应用Western blot法筛选HER-2过表达乳腺癌细胞系，同时检测VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-453细胞中的表达水平，划痕实验与侵袭实验观察VES对乳腺癌细胞体外迁移能力的影响，流式细胞术检测VES对乳腺癌细胞凋亡的作用。结果:VES处理后GSK-3、NF-κBp65、caspase 9蛋白在乳腺癌MDA-MB-453细胞中的表达明显高于在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达，VES作用于HER-2低表达乳腺癌细胞使其迁移及侵袭能力明显增强，却能够抑制HER-2高表达乳腺癌细胞的迁移及侵袭。VES以直接杀伤方式作用MDA-MB-231细胞，而对MDA-MB-453则以诱导细胞凋亡方式杀伤，VES使HER-2高表达乳腺癌MDA-MB-453细胞发生G1/G0期阻滞。结论:VES促进乳腺癌细胞凋亡是通过影响多条信号传导途径完成的，VES作用于不同HER-2表达乳腺癌细胞其迁移及侵袭能力明显不同，其机制与细胞表面蛋白表达有关。     

高迁移率族蛋白B1激活NF-κB/αvβ3而增加A549细胞迁移与侵袭能力

背景与目的:高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)在多种肿瘤中高表达,在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用。本研究旨在探讨HMGB1促进肺癌A549细胞侵袭的分子机制。方法:肺癌A549细胞经HMGB1,NF-κB抑制剂6-amino-4-quinazoline(QNZ)或Bortezomib(Bort)处理后,划痕实验和Transwell小室体外侵袭实验检测肿瘤细胞的迁移及侵袭能力;NF-κB荧光素酶报告基因实验检测NF-κB活性;Real-time RT-PCR和Western blot检测A549细胞NF-κB和整合素αvβ3表达。结果:HMGB1能增强A549细胞迁移和侵袭能力,增加NF-κBp65蛋白的表达,同时增强A549细胞NF-κB活性,Real-time RT-PCR和Western blot检测结果发现HMGB1上调肿瘤细胞αvβ3表达。NF-κB抑制剂QNZ或Bort消除HMGB1促进A549细胞迁移及侵袭,增强NF-κB表达和活性以及αvβ3表达的效应。结论:HMGB1通过激活A549细胞NF-κB上调αvβ3表达促进A549细胞迁移与侵袭行为。     

微小RNA-148a抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的作用机制

目的:研究微小RNA-148a(miR-148a)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达,探讨上调miR-148a的表达对其迁移的影响及机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-148a的表达水平.应用脂质体法将miR-148a mimic及阴性对照分别转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测转染效率;细胞划痕实验检测转染前后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化;Western blot方法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白Slug、Snail和E-cadher-in表达水平的变化.结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-148a的表达水平明显降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-148a转染组中miR-148a的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-148a后,MDA-MB-231细胞迁移能力明显下降,Slug和Snail蛋白表达明显降低,E-cadherin蛋白表达明显增加.结论:miR-148a可通过调控Slug、Snail及E-cadherin蛋白的表达抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的迁移能力.     

转染NF-κB抑制物基因对食管癌细胞系生物活性的影响

目的:将NF-κB抑制物基因pcDNA3/mI κBα S32A/S36A转染食管癌细胞株EC1,观察对NF-κB因子活性及对细胞生长的影响.方法:采用脂质体转染法将pcDNA3/mI κBα S32A/S36A质粒转染入EC1细胞进行瞬时表达,检测其对EC1细胞的影响,用Western blot和RT-PCR方法检测转染前后NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA表达水平的变化.结果:与转染pcDNA3.0质粒和未转染质粒组比较,转染pcDNA3.0/mI κBα S32A/S36A质粒EC1细胞的生长速度受到明显抑制,P＜0.05.转染pcDNA3/mI κBα S32A/S36A质粒的EC1细胞,在0、24、48、96小时未见NF-κB p65、NF-κB p50蛋白和mRNA表达,而转染pcDNA3.0质粒EC1细胞可见核内NF-κB p65和NF-κB p50蛋白表达.结论:转染NF-κB抑制物基因IκBα后可抑制EC1细胞的生长,并抑制细胞NF-κB p65、NF-κBp50基因的表达,该结果提示调节NF-κB的表达可能是食管癌基因治疗的靶点.     

沉默CD44表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖与侵袭的影响

目的:探索乳腺癌细胞MDA-MB-231及MCF-7中CD44分子的表达水平差异及沉默CD44对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平;设计并合成CD44的siRNA片段(CD44-siRNA)转染乳腺癌细胞,利用qRT-PCR、Western blot技术检测细胞中CD44基因表达水平的变化;MTT检测MDA-MB-231细胞增殖;Transwell侵袭实验检测MDA-MB-231细胞的迁移与侵袭能力变化。结果:CD44在侵袭性乳腺癌细胞MDA-MB-231中的表达高于非侵袭性乳腺癌细胞MCF-7,CD44-siRNA下调了 MDA-MB-231细胞中CD44 mRNA与蛋白水平的表达,并抑制了细胞的增殖和侵袭转移能力。结论:CD44-siRNA能够下调CD44的表达,并有效抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及其侵袭迁移力。     

HCV C 蛋白调控肝门部胆管癌细胞中NF-κB活性的研究

目的探讨HCV C蛋白在肝门部胆管癌细胞中对核转录因子κB(NF-κB)调控作用.方法利用稳定表达HCV C蛋白的QBC939细胞株(QBC939 HCV C ),通过NF-κB报道基因分析法、凝胶迁移率分析(EMSA)检测HCV C蛋白增强肝门部胆管癌细胞NF-κB的DNA结合活性和反式激活活性.RT-PCR、Western blot检测HCV C蛋白对核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)mRNA及p50、p65、IκBα蛋白表达及IκBα蛋白磷酸化的影响.结果①EMSA结果显示QBC939HCV C 细胞系中NF-κB相对信号密度明显比QBC939细胞高.②将pNF-κB-lun表达质粒转染稳定表达HCV C蛋白胆管癌细胞系中,通过单光子检测仪检测荧光素酶活性,结果显示QBC939HCV C 细胞中活化NF-κB为12.8倍,而QBC939细胞中NF-κB为2.6倍.③RT-PCR显示IκBα mRNA在QBC939 HCV C 细胞和QBC939细胞中的表达无明显差异;Western blot结果显示稳定表达HCV C蛋白的QBC939 HCV C 细胞株的胞核中的p50、p65蛋白高水平表达,而未转染HCV C蛋白的QBC939细胞仅检测出极低水平的p50、p65蛋白.在QBC939HCV C 细胞胞浆中IκBα蛋白低水平表达,QBC939细胞高水平表达,但IκBα蛋白磷酸化水平则相反.结论HCV C蛋白通过增加IκBα降解激活的NF-κB在肝门部胆管癌的发生中起重要作用.     

下调FAM111B对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨下调FAM111B对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:构建siR-FAM111B慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231和MCF7细胞,qRT-PCR检查转染组与对照组FAM111B mRNA表达,Western blotting法检测各组细胞FAM111B蛋白表达。用CCK-8法检测细胞的增殖能力。流式细胞术检测Annexin-V/PI双染各组细胞的凋亡情况。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:siR-FAM111B成功转染MDA-MB-231和MCF7细胞,转染后应用qRT-PCR和Western blotting检测,结果显示,FAM111B mRNA与蛋白水平均下调。siR-FAM111B能抑制两种细胞的增殖。Annexin-V/PI双染结果显示,下调FAM111B诱导两种细胞凋亡。Western blotting结果显示,下调FAM111B可以促进两种细胞Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:下调FAM111B能够抑制乳腺癌细胞的增殖,通过调节线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。     

ERβ表达载体的构建及其在肿瘤细胞中的功能研究

目的 构建ERβ表达载体,探讨其在肿瘤细胞株中的表达及功能。方法 利用常规PCR技术扩增人全长ERβ编码序列,并将其克隆到真核表达载体pCDNA3中,得到重组质粒pCDNA3-ERβ。用Western blot和体外翻译方法检测ERβ的表达情况。将pCDNA3-ERβ分别转染SV4O病毒转化的胚胎肾细胞293T、乳腺癌细胞MDA-MB-435、MDA-MB-436、SKBR3和前列腺癌细胞PC-3,用含雌激素应答元件的报告基因系统检测ERβ在这些不同细胞中的功能。结果 经酶切鉴定,证实重组质粒pCDNA3-ERβ含有目的基因ERβ。Western blot检测表明,转染pCDNA3-ERβ的细胞表达了相对分子量为63000的ERβ蛋白。体外翻译进一步证实该表达载体翻译了ERβ蛋白。报告基因系统检测表明,ERβ在不同肿瘤细胞中的表达均激活了雌激素应答的ERE和C3报告基因的表达。结论pCDNA3-ERβ在肿瘤细胞中既可表达,又具有功能活性,为进一步研究ERβ在肿瘤细胞中的作用奠定了基础。     

RNA干扰CYP1B1基因沉默抑制多不饱和脂肪酸诱导的人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖

目的:探讨小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)介导的细胞色素P450 1B1(cytochrome P-4501B1,GYP1B1)基因沉默对二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和花生四烯酸(arachidonic acid,AA)作用下乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响.方法:应用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测经EPA和AA处理后MDA-MB-231细胞的增殖情况.采用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术干扰CYP1B1的表达,随后应用荧光实时定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR,RFQ-PCR)和蛋白免疫印迹法检测转染效率,以及siRNA干扰后EPA和AA作用下MDA-MB-231细胞中CYP1B1和儿茶酚氧位甲基转移酶(catechol-O-methyltransferase,COMT)mRNA和蛋白的表达情况.采用CCK-8法检测siRNA干扰后EPA和AA作用下MDA-MB-231细胞的增殖情况.结果:EPA处理组的MDA-MB-231细胞数明显少于对照组,而AA处理组的MDA-MB-231细胞则明显多于对照组(P＜0.05).转染CYP1B1 siRNA的MDA-MB-231细胞中,CYP1B1 mRNA和蛋白的表达均有所下降,而COMT mRNA和蛋白的表达水平则有所上升.CYP1B1 siRNA转染的MDA-MB-231细胞的增殖能力下降,且EPA处理组的MDA-MB-231细胞数明显多于阴性对照组(P＜0.05).结论:CYP1B1基因沉默能够抑制MDA-MB-231细胞的增殖,逆转EPA对细胞增殖的抑制作用.EPA可能通过调节CYP1B1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖.     

Gab2通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的上皮-间质转化

背景与目的：越来越多的证据显示,Grb2协同结合蛋白2(Grb2 binding protein-2,Gab2)与肿瘤的侵袭转移相关,但Gab2与乳腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系尚不清楚。本研究旨在探讨Gab2对乳腺癌EMT标志物的影响,明确Gab2在乳腺癌侵袭和转移中的作用机制。方法：采用免疫组织化学染色法检测80例乳腺癌组织中Gab2及EMT标记物上皮性钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达情况并分析其相关性,用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测乳腺组织Gab2的表达情况,采用小干扰RNA(siRNA)技术降低乳腺癌细胞系MDA-MB-231中Gab2的表达,采用划痕实验检测表皮生长因子(epithelial growth factor,EGF)刺激后转染细胞的侵袭能力变化,用Western blot检测敲低Gab2后MDA-MB-231细胞中E-cadherin及vimentin的表达情况,同时检测p-GSK-3β的表达情况、转录因子Snail转核情况。结果：Gab2在乳腺癌组织中的表达与E-cadherin的表达呈负相关,而与vimentin的表达呈正相关(P<0.05);乳腺癌组织中Gab2的表达量明显高于正常乳腺组织;siRNA质粒转染后,SiGab2/MDA-MB-231细胞组中Gab2蛋白的表达量明显降低,结果显示转染成功,划痕实验显示细胞的侵袭能力减弱,表明Gab2影响乳腺癌细胞系的侵袭能力;敲低Gab2后,MDA-MB-231细胞中的E-cadherin的表达明显升高,而vimentin的表达明显降低;GSK-3β的磷酸化受到抑制,而Snail在敲低Gab2的细胞核中的表达明显下调。结论：Gab2可以通过GSK-3β/Snail信号通路促进乳腺癌的EMT,从而促进乳腺癌的侵袭和转移。     

人乳腺癌细胞雌激素受体基因的去甲基化及其表达

目的探讨人乳腺癌雌激素受体（ER）基因启动子的去甲基化和ER蛋白表达功能恢复的关系。方法用甲基化特异性PCR（MSP）和亚硫酸氢盐基因组测序方法检测乳腺癌细胞ER基因启动子的甲基化状态;用RT-PCR方法从mRNA水平检测ER和孕激素受体（PR）基因的表达;用Western blot方法从蛋白水平探测ER基因的表达;MTT方法检测重新表达ER蛋白的功能。结果在ER阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231中,ER基因启动子甲基化的水平较高,而ERmRNA和ER蛋白均不表达。MDA-MB-231细胞用去甲基化剂5-杂氮-2’-脱氧胞嘧啶（5-AZA-2＇-deoxyC）处理,可以恢复该细胞系ERmRNA和ER蛋白的表达,同时伴有ER基因启动子甲基化水平的降低以及PR基因的表达。MDA-MB-231细胞经去甲基化逆转ER表达后,应用三苯氧胺治疗,乳腺癌细胞增殖受到明显抑制（P〈0．05）。结论人乳腺癌ER基因的失活与其基因启动子高甲基化关系密切。去甲基化剂5-AZA-2＇-deoxyC能较好地降低MDA-MB-231细胞DNA甲基化,并有效激活功能性ER基因的再表达,为ER基因阴性的乳腺癌患者接受内分泌治疗提供了新的途径和理论基础。     

姜黄素对乳腺癌MDA-MB-231细胞NOTCH1 和NF-κB表达的影响

 目的 检测姜黄素作用于乳腺癌细胞后NOTCH1和核转录因子-κB（NF-κB）的变化,了解姜黄素抑制乳腺癌细胞增殖的可能机制。 方法 不同剂量（1.25,5.0,20.0μmol/L）姜黄素分别处理乳腺癌MDA-MB-231细胞24,48,72h,MTT法检测细胞增殖 改变。RT-PCR和Western blot检测NOTCH1、NF-κB mRNA和蛋白质表达。 结果 MTT显示,20μmol/L姜黄素处理72h,乳腺癌细胞抑制率为（52.0±0.42）%,与余组比较差异具有统计学意义;PCR结果显示随着剂量和时间的增加,NOTCH1和NF-κB的OD值逐渐下降, Western blot的结果与PCR一致。 结论 姜黄素可下调乳腺癌细胞NOTCH1及NF-κB表达,并呈现剂量和时间依赖性,提示姜黄素具有抑制乳腺癌细胞增殖的作用。