EHF通过抑制Wnt/β-catenin通路活性下调胰腺癌细胞的干性

  目的  探索E26转化特异性同源因子（E26 transformation-specific homologous factor,EHF）调控胰腺癌细胞干性的机制。  方法  通过生信分析寻找介导EHF调控胰腺癌干性的信号通路。利用Western blot及RT-qPCR技术验证胰腺癌细胞中EHF表达与目标干性通路活性的相关性。利用ChIP及双荧光素酶实验验证EHF对靶基因的调控作用。阻断通路活性后,利用功能学实验分析目标通路在EHF调控胰腺癌细胞干性过程中的作用。  结果  生信分析发现Wnt/β-catenin通路参与EHF对胰腺癌干性的调控。构建EHF稳定过表达及稳定降表达的胰腺癌细胞系,通过Western blot及RT-qPCR技术证实胰腺癌细胞EHF的表达与Wnt/β-catenin通路的活性呈负相关,差异均具有统计学意义（均P<0.01）。EHF可通过结合β-catenin的启动子区直接抑制β-catenin的转录。通过流式细胞术、悬浮成球及软琼脂克隆形成实验证明,在利用XAV939阻断Wnt/β-catenin通路的活性后,由EHF敲低所引起的胰腺癌细胞干性上调可被有效抑制,差异均具有统计学差异（均P<0.01）。  结论  EHF通过抑制Wnt/β-catenin通路活性下调胰腺癌细胞的干性,靶向Wnt/β-catenin通路的小分子抑制剂有潜力成为治疗胰腺癌的药物。      

miRNA-143对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响及机制研究

目的 探讨miRNA-143对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响及机制.方法 实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织及宫颈癌C-33A、HeLa、CaSki细胞中miRNA-143的表达水平.将miR-NA-143 mimics、miRNA-143 inhibitor及HIF-1α-siRNA转染至HeLa细胞中,未转染的作为对照组.Western blot检测转染48 h后miRNA-143 mimics组、miRNA-143 inhibitor组和对照组的HIF-1α蛋白表达水平.将miRNA-NC+miRNA-143 mimics、Wt-HIF-1α+miRNA-143 mimics、Mut-HIF-1α+miRNA-143 mimics转染HeLa细胞,检测荧光素酶活性;后续实验分为对照组、miRNA-143 mimics组及HIF-1α-siRNA组,各组细胞转染48 h后,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Ki-67、cleaved caspase 3、β-catenin、cyclin D1蛋白表达水平.结果 宫颈癌组织中miRNA-143的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01),人宫颈癌CaSki细胞中的miR-NA-143表达水平高于人宫颈癌HeLa细胞和C-33A细胞(P<0.05).miRNA-143 mimics组的HIF-1α蛋白表达水平低于对照组,miRNA-143 inhibitor组的HIF-1α蛋白表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).Wt-HIF-1α+miRNA-143 mimics组的荧光素酶活性低于miRNA-NC+miRNA-143 mimics组和Mut-HIF-1α+miRNA-143 mimics组,差异均有统计学意义(P<0.05);而Mut-HIF-1α+miRNA-143 mimics组与miRNA-NC+miRNA-143 mim-ics组的荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05).miRNA-143 mimics和HIF-1α-siRNA组的细胞存活率及Ki-67、β-catenin、cyclin D1蛋白表达水平均低于对照组,细胞凋亡率及cleaved caspase 3蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miRNA-143在宫颈癌中低表达,miRNA-143可通过下调HIF-1α的表达及抑制Wnt/β-catenin信号通路,抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖并促进其凋亡.     

miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-1471对胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其机制。方法:体外培养人胶质瘤细胞U251,将miR-1471模拟物或阴性对照分别转染至细胞中,记为miR-1471组和阴性对照（NC组）,同时设置对照组。qRT-PCR检测转染效果。CCK8检测各组细胞增殖能力。Transwell实验检测各组细胞侵袭能力。划痕实验检测各组细胞迁移能力。qRT-PCR和Western blot检测转移黏附基因（metadherin, MTDH）及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白的表达。结果:与对照组和NC组比较,miR-1471组细胞增殖活性均显著降低（P＜0.05）,侵袭细胞数均显著减少（P＜0.05）,划痕间距明显较大,细胞中MTDH、Wnt1和β-catenin mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P＜0.05）。结论:miR-1471能抑制人胶质瘤细胞U251的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MTDH表达,抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

Wnt10a及Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞增殖及其机制研究

目的:探讨Wnt10a及其Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌中的作用及其机制。方法:qPCR检测Wnt10a在正常宫颈细胞和不同宫颈癌细胞系中的表达,选取Wnt10a高表达细胞进行后续实验。构建Wnt10a过表达质粒,将细胞分为对照组、Wnt10a过表达组、LGK-974(Wnt抑制剂)组和Wnt10a过表达+LGK-974组。qPCR和Western blot检测细胞中Wnt10a mRNA和蛋白的表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达。结果:Wnt10a在C-33 A、Ca Ski、HeLa、HeLa 229宫颈癌细胞中的表达均显著高于正常宫颈细胞(P<0.05),且在C-33 A细胞中的表达水平最高。与对照组相比,Wnt10a过表达组细胞增殖能力、细胞中Wnt10a mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2、Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c...     

miR-181通过Wnt/β-catenin信号通路调控对B-ALL细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究miR-181在急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞中表达及其过表达对细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量PCR检测miR-181在急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中的表达水平,利用慢病毒转染技术使miR-181过表达,利用CCK-8实验检测过表达miR-181对人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181对Nalm-6细胞凋亡的影响,利用蛋白印迹实验检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白的表达水平。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常人相比,急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平显著下调;CCK-8检测细胞增殖结果显示,过表达miR-181显著抑制了人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,过表达miR-181显著促进了Nalm-6细胞的凋亡;Western blotting 结果显示,miR-181过表达,Wnt1、β-catenin、cyclin D1 和c-myc蛋白的表达均显著下调。结论:急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平下调,过表达miR-181抑制Nalm-6细胞增殖、促进Nalm-6细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号转导通路的受抑有关。     

桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路影响胶质瘤U251细胞增殖的实验研究

目的 探讨桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响.方法 体外培养人脑胶质瘤细胞U87,采用不同浓度桑根皮素(1、5、25、50、100μmol/L)作用于U87细胞,分别采用MTT法、细胞集落形成法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡活性.采用Western blotting法和细胞免...     

HBx对肝细胞中β-catenin表达的影响

目的:乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是一种反式作用因子,它通过增强各种转录和调控因子的表达影响肝细胞的增殖和凋亡.在原发性肝癌(HCC)的发生发展中发挥重要的作用.Wnt/β-catenin信号转导通路在胚胎发育和肿瘤发生中也发挥了重要的作用.本实验利用腺病毒表达系统,研究HBx与Wnt信号转导通路中主要信号分子β-catenin的相互作用及对它的影响,探讨HBV相关性肝癌的发生机制.方法:通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-GFP和Ad-GFP-HBx,采用表达有绿色荧光蛋白的腺病毒高表达载体系统将HBx基因有效转入人正常肝细胞L02细胞系.通过Western blot证实HBx在L02细胞中有效表达.RT-PCR、Western blot检测转染Ad-GFP-HBx的L02细胞中β-catenin表达的变化.结果:HEK293扩增腺病毒获得的Ad-GFP滴度为:1.5×109 pfu/ml,Ad-GFP-HBx的滴度为:1.0×108pfu/ml.Ad-GFP-HBx腺病毒感染细胞后能使HBx在L02细胞中有效表达,且感染Ad-GFP-HBx后HBx的表达显著增加L02细胞中β-catenin mRNA的表达量(P<0.05)和β-catenin蛋白的表达量(P<0.05).结论:HBx可以上调人正常肝细胞系L02细胞中β-catenin的表达,提示HBx可能通过调控β-catenin的异常表达激活Wnt信号通路.促进原发性肝癌的发生.Wnt信号传导主要取决于β-catenin在细胞内的水平,当β-catenin水平低下,Wnt途径关闭;当β-catellin水平升高时,Wnt途径开启,而Wnt信号的激活与肿瘤的发生密切相关.可见,HBx能增强β-catenin的表达,提示HBx可能是调控β-catenin的关键因子,而β-catenin的异常表达又能激活Wnt信号通路,最终导致肝癌的发生.这也间接证明了HBx在肝癌的发生发展中具有重要的作用,且该作用与Wnt信号中的关键分子β-catenin密切相关.     

RNAi介导PEG10基因沉默对肝癌HepG2细胞Wnt/β-catenin信号通路及增殖的影响

目的 探讨PEG10基因对Wnt/β-catenin信号通路的影响在人肝癌发病机制中的作用,为肝癌的基因治疗提供新思路.方法 应用脂质体转染技术将靶向PEG10的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)转染HepG2细胞,利用半定量RT-PCR分别检测PEG10、β-catenin和Wnt1基因...     

沉默ACY-1基因表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:初步探索氨基酰化酶1（ACY-1）与结直肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭的关系以及作用机制。方法:小干扰RNA（siRNA）技术沉默结直肠癌细胞中ACY-1基因的表达,转染至SW480细胞中,分为对照组、si-NC组、si-ACY-1组,荧光实时定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹试验（Western Blot）检测转染效果;用四甲基偶氮唑盐微量（MTT）实验检测干扰ACY-1基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Transwell法检测细胞的侵袭,Western Blot检测Ki-67、Caspase-3、β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的蛋白水平。结果:Western Blot检测结果显示si-ACY-1组细胞中ACY-1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05）。干扰ACY-1表达显著抑制细胞的增殖（P<0.05）和Ki-67蛋白水平,促进其凋亡（P<0.05）,增加Caspase-3蛋白水平,降低细胞的侵袭能力（P<0.05）。si-ACY-1组细胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1的蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:沉默ACY-1抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭,诱导其凋亡,其作用与Wnt/β-catenin信号通路及其下游靶基因的激活有关,为结直肠癌的治疗提供新的治疗靶点。     

长程缺氧对结肠癌细胞增殖的影响

目的:体外观察长程缺氧环境对结肠癌细胞SW480和HCT116增殖能力的影响并探讨其可能的作用机制。方法:缺氧培养结肠癌SW480和HCT116细胞14～28d,采用MTT法和平板克隆法检测缺氧条件下2种结肠癌细胞增殖能力的改变;激光共聚焦显微镜下观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和Wnt/β-catenin信号通路关键因子β-catenin的表达;蛋白质印迹法检测HIF-1α和β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、Ser9被磷酸化的GSK-3β[phospho-glycogen synthase kinase-3β(Ser9),pGSK-3β(Ser9)]以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。以常氧下培养的这2种细胞作为对照。结果:细胞生长曲线和平板克隆检测结果均显示,长程缺氧适应后SW480和HCT116细胞的增殖能力较常氧下明显增强(P<0.01);激光共聚焦显微镜下观察发现,HCT116细胞在缺氧条件下HIF-1α的表达部位发生改变;蛋白质印迹法检测发现,与常氧组比较长程缺氧组细胞中HIF-1α(P<0.05)、β-catenin(P<0.05)和pGSK-3β(Ser9)(P<0.01)蛋白的表达均上调,而总GSK-3β的表达无明显变化,PCNA在缺氧条件下表达上调(与常氧组比较,在SW480细胞中P<0.05,在HCT116细胞中P<0.01)。结论:缺氧适应可促进结肠癌细胞SW480和HCT116的增殖,这可能是HIF-1α与Wnt/β-catenin信号转导通路共同作用的结果。     

小檗碱和XAV939联合应用可抑制骨肉瘤细胞MG-63的迁移与凋亡

目的：探讨小檗碱（BBR）联合XAV939 对骨肉瘤MG-63细胞迁移与凋亡的影响及其可能的机制。方法：培养MG-63细胞,分别加入20~120 μmol/L 的BBR 和5~60 μmol/L 的XAV939,通过CCK-8 法测定BBR 和XAV939 的细胞毒性,采用Chou-Talalay 分析法计算两药的联合指数,确定后续实验的干预剂量;将MG-63细胞随机分为空白对照（NC）组、BBR组、XAV939 组和BBR+XAV939 联合组,采用划痕愈合实验、Transwell 小室法检测BBR 与XAV939 单独或联合处理对MG-63 细胞迁移能力的影响,Hoechst 33258 染色、JC-1染色及Annexin Ⅴ-FITC/PI 双染流式细胞术检测对细胞线粒体膜电位和凋亡的影响,免疫荧光法检测BAX蛋白的表达,WB法检测对细胞中MMP-2表达的影响,qPCR 法检测对MMP-2基因表达的影响。结果：BBR和XAV939以剂量依赖方式抑制MG-63细胞的增殖,选定30 μmol/L BBR、7.5 μmol/L XAV939用于后续实验。与NC组相比,BBR（30 μmol/L）、XAV939（7.5 μmol/L）及BBR+XAV939 联合处理细胞24 h 后,MG-63 细胞迁移能力显著降低、凋亡细胞显著增加（均P<0.05）,线粒体膜电位下降（P<0.01）,MMP-2的基因表达和MMP-2、BAX蛋白水平均降低（均P<0.05）,并且,联合组的效应明显强于单药处理且（P<0.05 或P<0.01）。结论：BBR和XAV939 单独或联合应用可以抑制骨肉瘤MG-63 细胞的迁移、促进凋亡,其机制可能与迁移相关蛋白MMP-2的表达降低,凋亡相关蛋白BAX的水平增加有关。     

HECA通过Wnt通路抑制肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:拟在通过影响肝细胞癌HepG2细胞株中HECA基因表达变化,观察与HECA基因相关联的Wnt通路上重要调节分子的变化,讨论此通路影响肝癌细胞增殖能力状况及其相关作用机理。方法:HECA慢病毒感染肝癌细胞株HepG2,细胞株中稳定上调HECA,用HECA siRNA转染HepG2细胞株下调HECA,在HECA表达上调的细胞株中用qPCR检测Wnt通路中β-catenin、TCF4、CDK2、CDK9、Cyclin A和Cyclin K的mRNA表达水平的变化,用Western blot检测qPCR结果中差异明显的β-catenin、TCF4蛋白表达水平的变化,应用FH535抑制剂处理HECA过表达的HepG2细胞,进一步验证HECA基因与Wnt通路的关系,利用Western blot检测HECA的表达水平,用MTT、划痕、克隆形成以及Transwell实验检测对肝癌细胞侵袭、迁移、增殖能力的影响。结果:qPCR法以及Western blot法对其相关基因表达水平进行测定,结果显示在HepG2细胞株内HECA过表达后,与HECA相关联的Wnt通路重要调节分子中β-catenin、TCF4的表达水平显著降低;FH535抑制剂处理HECA过表达的HepG2细胞,Western blot实验结果显示FH535处理过的过表达组HECA水平更高,细胞功能实验也表明FH535处理过的过表达HECA组,其细胞增殖及侵袭能力下降最明显。结论:HECA基因抑制肝细胞癌增殖及侵袭的分子机制可能为:HECA通过Wnt/β-catenin这一经典通路内β-catenin与TCF4的结合活性降低而发挥作用。     

β-catenin拮抗因子Chibby对人喉癌细胞Hep-2增殖凋亡的影响

背景与目的:Wnt信号通路与肿瘤的发生、发展密切相关,Chibby是该信号通路β-catenin的拮抗因子,通过对β-catenin的拮抗,阻止异常Wnt信号,从而可能抑制肿瘤的发生、发展。该研究旨在探讨Chibby对喉癌细胞Hep-2增殖凋亡的影响。方法:采用基因工程技术,构建重组质粒plv-cs2.0-Chibby,经酶切鉴定及序列测定后,转染293FT细胞进行病毒包装、扩增,该重组慢病毒感染喉癌细胞Hep-2后,经puromycin筛选后建立稳定表达Chibby的Hep-2细胞系。采用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,realtime qPCR)及蛋白质印迹法(Western blot)检测重组慢病毒感染Hep-2细胞后Chibby的表达情况,MTT比色法检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞周期的变化,TUNEL检测细胞的凋亡情况。结果:重组质粒酶切后得到与理论大小相符的基因片段,序列测定与GenBank公布的一致。重组慢病毒感染Hep-2细胞后Chibby的表达水平显著提高(P<0.01)。与对照组及plv-cs2.0组相比较,plv-cs2.0-Chibby组细胞的增殖能力明显减弱(P<0.05);细胞滞留在G1期,而S期细胞明显减少(P<0.05);同时促使了Hep-2细胞的凋亡(P<0.05)。结论:Chibby过表达后抑制了喉癌细胞Hep-2的增殖能力,促使了喉癌细胞的凋亡,为喉癌的基因治疗奠定了基础。     

SOX11抑制食管癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的探讨转录因子SOX11在食管癌组织和细胞系中的表达及对人食管癌细胞EC109增殖和迁移的影响,并初步探讨其作用机制。方法 qRT-PCR和免疫组织化学法分析SOX11在食管癌组织、细胞系(EC109、KYSE150、KYSE410和KYSE510)及正常食管上皮细胞HEEC的表达;分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-SOX11质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至EC109细胞系,qRT-PCR验证SOX11的过表达;CCK-8实验和Transwell实验分析SOX11对细胞增殖和迁移能力的影响;qRT-PCR及Western blot验证SOX11对细胞增殖和迁移的相关标志物表达分析。结果与食管上皮组织相比,SOX11 mRNA和蛋白在食管癌组织中的表达明显下调;SOX11的蛋白表达下调与肿瘤分级(P=0.014)、T分期(P=0.036)、淋巴结转移(P=0.014)相关;同时与食管上皮细胞相比,SOX11 mRNA在食管癌细胞中表达下调,差异具有统计学意义(P<0.001);与对照组相比,实验组24、48、72 h细胞活性受...     

MiR-448 suppresses cell proliferation and glycolysis of hepatocellular carcinoma through inhibiting IGF-1R expression

BackgroundMicroribonucleic acids (miRNAs) have been shown to play important roles in hepatocellular carcinoma (HCC) progression. MiR-448 has frequently been shown to be a tumor suppressor, and is abnormally expressed in HCC tumor tissues. However, little is known about the role of miR-448 in HCC development. In this article, the regulatory role of miR-448 on insulin-like growth factor 1 receptor (IGF-1R) in modulating hepatoma cell viability and glycolysis was investigated.MethodsThe expression of miR-448 profiles in clinical tumor tissues and cell lines was examined using quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR). HepG2 and Huh7 cells were transfected with miR-448 mimics, inhibitors, and scramble sequences. Cell viability and apoptosis were determined by a Cell Counting Kit-8 assay and a flow cytometry analysis. IGF-1R, a potential target of miR-448, was selected following a bioinformatic analysis, and the regulatory effects of miR-448 on IGF-1R expression was confirmed by luciferase reporter assay, qRT-PCR, and western blot. Glucose uptake, lactate production, and adenosine triphosphate (ATP) generation were detected by corresponding kits.ResultsDecreased miR-448 expression was observed in both HCC patients’ tumor tissues and hepatoma cells in vitro. The overexpression of miR-448 in HepG2 and Huh7 cells decreased cell viability and increased apoptosis. Additionally, the overexpression of miR-448 or the knockdown of IGF-1R lowered the level of glucose uptake, lactate production, and ATP generation, while the knockdown of miR-448 increased glycolysis. Further, aberrantly expressed miR-448 downregulated IGF-1R levels, while the inhibition of miR-448 resulted in the upregulation of IGF-1R in both HepG2 and Huh7 cells. In addition, miR-448 interacted with the wild-type 3''untranslated regions (3''UTRs) of IGF-1R, but had no effect on the mutant 3''UTRs. The expression of IGF-1R was increased in HCC patients’ tumor tissues and serum, and was inversely correlated with miR-448 expression.ConclusionsThe increased expression of miR-448 appears to downregulate the expression of IGF-1R by interacting with the 3’UTR in HCC progression. These findings highlight its role as a potential target for HCC therapy.     

长链非编码RNA ARAP1-AS1在肾透明细胞癌中的表达及作用研究

背景与目的：长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）ARAP1-AS1在多种肿瘤中异常表达,但其在肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC）中的作用尚不清楚。探讨ARAP1-AS1在ccRCC中的生物学作用。方法：通过GEPIA数据库分析ARAP1-AS1在ccRCC组织中的表达及其与临床病理学特征及患者生存率的关系。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测ccRCC组织及邻近的非肿瘤组织中ARAP1-AS1的表达水平。将患者分为ARAP1-AS1高表达组和低表达组,分析ARAP1-AS1的表达水平与患者临床病理学特征之间的关系,并进行生存分析。通过细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）实验、transwell迁移实验及侵袭实验检测ARAP1-AS1对ccRCC细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达变化。采用BALB/c裸小鼠移植瘤模型分析ARAP1-AS1对ccRCC细胞体内成瘤能力的影响。结果：GEPIA数据库分析结果显示,ARAP1-AS1在ccRCC中高表达,且与患者肿瘤高分期及较差的生存率相关（P均<0.05）。RTFQ-PCR显示,ARAP1-AS1在ccRCC组织及细胞系中高表达,ARAP1-AS1的高表达与肿瘤大小和分期相关（P均<0.05）。ARAP1-AS1高表达患者的总生存率较差（P<0.05）。沉默ARAP1-AS1的表达可以抑制ccRCC细胞增殖、迁移和侵袭（P均<0.05）。沉默ARAP1-AS1可以降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平（P均<0.05）。沉默ARAP1-AS1可使ccRCC细胞体内成瘤能力减弱,并使Ki-67增殖指数降低。结论：ARAP1-AS1可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进ccRCC的进展。     

姜黄素联合KLF8-siRNA干扰对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的:探讨姜黄素联合KLF8-siRNA干扰对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制.方法:采用脂质体法将KLF8-siRNA干扰序列转染至体外培养的A549细胞中,RT-PCR和Western blot检测转染效果.实验分为NC组(转染阴性对照)、KLF8-siRNA组(转染KLF8-siRNA)、Cur组(...     

抑癌基因DKK2抑制儿童肾母细胞瘤细胞增殖的机制研究

目的 探讨WNT信号通路调控因子DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的表达,及对儿童肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法 通过RT-PCR、qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验分析DKK2在儿童肾母细胞瘤细胞系和组织中的相对表达;将DKK2过表达的SK-NEP-1细胞设定为实验组(DKK2组),空白对照质粒组设定为对照组(Vector组),分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-DKK2质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至SK-NEP-1细胞系,RT-PCR和免疫蛋白印迹实验验证DKK2的过表达;通过CCK-8实验和细胞克隆实验分析DKK2对细胞增殖的影响;流式细胞周期和凋亡实验验证DKK2过表达对细胞增殖的作用机制;裸鼠成瘤实验验证DKK2体外对细胞增殖的影响;通过qRT-PCR、WB及免疫组化分析DKK2对细胞增殖抑制的作用机制。结果 与正常肾上皮组织相比,DKK2 mRNA在儿童肾母细胞瘤细胞和组织中的中表达明显下调,差异具有统计学意义(P＜0.001);与对照组相比(100%),转染后24、48、72h实验组细胞活性受到明显的抑制(P＜0.05),同时实验组细胞克隆形成明显受到抑制(31.11±2.14)%(P＜0.05);流式细胞实验发现,与对照组相比,实验组细胞明显阻滞于G₁期(P＜0.001),实验组中细胞凋亡率明显升高(P＜0.001);与对照组相比,过表达DKK2后裸鼠肿瘤和体积大小明显降低(P＜0.001);过表达DKK2后,active-β-catenin及下游的基因受到了明显抑制。结论 DKK2在人皮肤肾母细胞瘤组织中表达下调,可能通过拮抗Wnt/β-catenin信号通路参与肾母细胞瘤的机制。     

红花多糖对胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨红花多糖对胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭的影响及其分子机制。方法:以不同浓度（0、0.16、0.32和0.64 mg/ml）红花多糖作用于MGC-803细胞48 h后,分别采用MTT法、克隆形成实验、流式细胞仪和Transwell法检测细胞的增殖能力、克隆形成能力、周期分布情况和侵袭能力,Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin、c-Myc、CyclinD1、VEGF和MMP-9的表达情况。采用0.32 mg/ml红花多糖和Wnt/β-catenin信号通路抑制剂VXAV939单独或联合处理MGC-803细胞48 h后,进一步观察细胞的增殖和侵袭情况。结果:与对照组（0 mg/ml）相比,0.16、0.32和0.64 mg/ml红花多糖处理组细胞增殖率、克隆形成率、侵袭细胞数和细胞内β-catenin、c-Myc、CyclinD1、VEGF、MMP-9蛋白的表达水平均显著降低,而细胞在G0/G1期所占百分比显著升高（P＜0.05）。使用VXAV939后,红花多糖对MGC-803细胞的上述作用进一步加强。结论:红花多糖可抑制胃癌MGC-803细胞增殖和侵袭并诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。