青藤碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡及其机制的实验研究

目的:探究青藤碱(SIN)诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡的作用机制。方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定SIN对肺癌NCI-H460细胞生长的影响;Western blot测定Bcl-2,Bax蛋白的表达;用SIN、PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂干预NCI-H460细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果:SIN对肺癌NCI-H460细胞生长有抑制作用,呈时间、浓度依赖性;SIN可以使NCI-H460细胞Bcl-2表达减低,Bax增强;SIN与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用后可协同增加NCI-H460细胞凋亡(P<0.05)。结论:SIN可以抑制肺癌NCI-H460细胞的生长,能改变其Bax,Bcl-2蛋白的表达,与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用可协同发挥促进肺癌细胞凋亡作用,可望成为新的肺癌治疗药物。     

青藤碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡及其机制的实验研究

目的：探究青藤碱（SIN）诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡的作用机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定SIN对肺癌NCI-H460细胞生长的影响;Western blot测定Bcl-2,Bax蛋白的表达;用SIN、PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂干预NCI-H460细胞,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果：SIN对肺癌NCI-H460细胞生长有抑制作用,呈时间、浓度依赖性;SIN可以使NCI-H460细胞Bcl-2表达减低,Bax增强;SIN与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用后可协同增加NCI-H460细胞凋亡（P〈0.05）。结论：SIN可以抑制肺癌NCI-H460细胞的生长,能改变其Bax,Bcl-2蛋白的表达,与PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路抑制剂联用可协同发挥促进肺癌细胞凋亡作用,可望成为新的肺癌治疗药物。     

石蒜碱诱导肺癌NCI-H460细胞凋亡作用及其机制

目的 通过研究石蒜碱在体外对人肺癌NCI-H460细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用,探讨石蒜碱抗肿瘤机制。方法 MTT法检测石蒜碱对NCI-H460细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡率,比色法检测凋亡因子相关因子Caspase 3活性。结果 石蒜碱能够有效抑制肺癌NCI-H460细胞增殖,IC₅₀为（5.79±0.11）μmol/L,对NCI-H460细胞的凋亡具有诱导效应,可增强肺癌Caspase 3的活性。结论 石蒜碱在体外能有效地抑制NCI-H460细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与激活Caspase 3的表达从而诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

文殊兰叶氯仿提取物诱导NCI-H460细胞凋亡的研究

目的研究文殊兰叶氯仿提取物（CE）对非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响。方法通过MTT法检测CE对NCI-H460细胞的生长抑制作用;采用Hoechst 33258荧光染色法检测CE作用后凋亡细胞形态的变化;通过免疫细胞化学检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;采用流式细胞术（FCM）检测CE作用后对细胞周期的影响。结果CE抑制NCI-H460细胞增殖,其24、48、72 h的IC50分别为：（36.22 ±3.04）、（41.21±2.50）、（62.55±3.47） mg/L;荧光染色显示,经CE作用后的细胞出现细胞核裂解,染色质浓缩,产生凋亡小体;免疫细胞化学法显示CE能增强促进凋亡蛋白Bax和降低抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达;FCM检测表明CE作用后的细胞被阻滞在G1/S期。结论CE在体外能有效地抑制NCI-H460细胞生长,其机制可能与改变细胞周期并诱导细胞凋亡有关。     

鸦胆子油乳抑制肺癌NCI-H460细胞的增殖及其机制

目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制。方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作用;吉姆萨染色后光学显微镜下观察NCI-H460细胞形态学改变;流式细胞仪测定NCI-H460细胞凋亡率;caspase-3酶活性试剂盒检测NCI-H460细胞caspase-3酶活性。结果:鸦胆子油乳可剂量和时间依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,80μg/ml鸦胆子油乳作用72h时的抑制率达(91.07±1.60)%。鸦胆子油乳作用后,NCI-H460细胞呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示,10、20和40μg/ml鸦胆子油乳作用48h后,NCI-H460细胞凋亡率分别为(45.23±4.30)%、(54.14±3.09)%和(61.57±7.28)%(P<0.01)。鸦胆子油乳可剂量依赖性上调NCI-H460细胞caspase-3酶活性,40μg/ml鸦胆子油乳时caspase-3酶活性为(1.07±0.07)μmol/μg,是对照组的4.97倍(P<0.01)。结论:鸦胆子油乳可能通过活化caspase-3诱导NCI-H460细胞凋亡,抑制NCI-H460细胞增殖。     

白藜芦醇通过线粒体凋亡通路调节肺癌H460细胞增殖与凋亡的研究

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)对肺癌H460细胞增殖与凋亡的影响并探讨其可能的机制.方法:分别用浓度为0、25、100、200 μmol/L的Res作用于H460细胞48 h后,采用CCK-8法检测Res对H460细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡率;JC-1试剂盒检测细胞内线粒体膜电位水平;ATP试剂盒检测细胞内ATP水平;Western blot法检测细胞内Bcl-2、Bax和Cytochrome c蛋白表达情况.结果:与对照组比较,CCK-8及流式结果显示Res可抑制H460细胞的增殖,并使其凋亡率升高(P＜0.01);JC-1及ATP检测结果显示Res可降低H460细胞内线粒体膜电位及ATP水平(P＜0.01),且在该浓度范围内呈剂量相关性;Western blot检测发现随着Res浓度的增加,Bcl-2蛋白的表达水平下降,而Bax和Cytochrome c蛋白的表达水平升高.结论:实验浓度的Res可抑制H460细胞的增殖并诱导其凋亡,这一作用的机制可能与Res激活了线粒体凋亡通路进而诱发H460细胞凋亡有关.     

PUMA通过线粒体途径诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

目的:研究p53上调凋亡调控因子(PUMA)对骨肉瘤细胞凋亡的影响及机制。方法:在骨肉瘤细胞F5M2中转染PUMA过表达载体,同时转染对照阴性载体,以qRT-PCR和Western blot法测定转染后细胞中PUMA表达情况,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,用JC-1法检测细胞线粒体膜电位,以Western blot法测定线粒体和胞浆中细胞色素C（Cyt C）蛋白表达情况,同时检测细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水 解酶3（Cleaved Caspase-3）、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（Cleaved Caspase-9）蛋白水平。结果:转染PUMA过表达载体后的F5M2细胞中PUMA mRNA和蛋白水平升高,而转染对照阴性载体对F5M2细胞中PUMA mRNA和蛋白水平没有影响。过表达PUMA后的F5M2细胞凋亡率升高,细胞线粒体膜电位下降,线粒体中Cyt C蛋白水平降低,胞浆中Cyt C蛋白水平升高,同时细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高,与未做转染的F5M2细胞比,差异有统计学意义（P<0.05）。转染对照阴性载体后的细胞凋亡率、线粒体膜电位、线粒体和胞浆中Cyt C蛋白水平、Cleaved Caspase-3蛋白水平、Cleaved Caspase-9蛋白水平与未做转染的F5M2细胞相比没有明显变化（P>0.05）。结论:PUMA通过促进线粒体中Cyt C释放,降低线粒体膜电位,激活Caspase-3诱导骨肉瘤细胞凋亡。     

鸦胆子油乳抑制肺癌NCI-H460细胞的增殖及其机制

目的:探讨鸦胆子油乳在体外对人大细胞肺癌NCI-H460细胞的抑制作用及其机制.方法:以不同质量浓度鸦胆子油乳(2.5、5.0、10、20、40、80μg/ml)处理NCI-H460细胞,24、48、72 h后收集细胞,MTT法检测鸦胆子油乳对NCI-H460细胞增殖的抑制作用;吉姆萨染色后光学显微镜下观察NCI-H460细胞形态学改变;流式细胞仪测定NCI-H460细胞凋亡率;caspase-3酶活性试剂盒检测NCI-H460细胞caspase-3酶活性.结果:鸦胆子油乳可剂量和时间依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,80μg/ml鸦胆子油乳作用72 h时的抑制率达(91.07±1.60)%.鸦胆子油乳作用后,NCI-H460细胞呈现典型凋亡形态学改变;流式细胞术检测结果显示,10、20和40 μg/ml鸦胆子油乳作用48 h后,NCI-H460细胞凋亡率分别为(45.23±4.30)%、(54.14 +3.09)%和(61.57±7.28)%(P＜0.01).鸦胆子油乳可剂量依赖性上调NCI-H460细胞caspase-3酶活性,40 μg/ml鸦胆子油乳时caspase-3酶活性为(1.07±0.07)μmol/μg,是对照组的4.97倍(P＜0.01).结论:鸦胆子油乳可能通过活化caspase-3诱导NCI-H460细胞凋亡,抑制NCI-H460细胞增殖.     

抑制Bcl-2基因表达增强非小细胞肺癌NCI-H460细胞放射敏感性的研究

背景与目的:Bcl-2基因是一种重要的抑制细胞凋亡的基因,广泛存在于各种肿瘤细胞中.本研究利用短发夹RNA(shRNA)重组质粒抑制Bcl-2基因的表达,观察其对非小细胞肺癌NCI-H460的细胞凋亡和放射敏感性变化的影响.方法:将特异性抑制Bcl-2基因表达的干扰质粒Bcl-2/shRNA稳定转染NCI-H460细胞,获得H460-RNAi细胞,同时设转染含无义序列Neg-shRNA质粒的H460-Neg细胞及未转染的H460细胞为对照组,采用Western blot法,观察Bcl-2基因在蛋白表达水平的变化;X射线照射后,采用细胞形态学及克隆形成实验,检测RNA干扰对NCI-H460细胞凋亡和放射敏感性的影响.结果:H460-RNAi细胞的Bcl-2蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05);H460-RNAi细胞的凋亡率[(10.8±0.7)%]明显高于对照组(P<0.05),4 Gy X线照射48 h后的凋亡率[(24.9±1.4)%]明显高于对照组(P<0.05)及未照射组(P<0.05):H460-RNAi细胞的存活参数D0、Dq、N和SF2值分别为0.97、0.75、2.18和0.26,均低于其余两组,而H460细胞组与H460-Neg细胞组比较差异无统计学意义(分别为1.39、1.39、2.72、0.52和1.21、1.28、2.87、0.46).结论:Bcl-2/shRNA重组质粒可以有效抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞的Bcl-2基因的表达,增强NCI-H460的细胞凋亡及放射敏感性.     

奥沙利铂诱导人小细胞肺癌NCI-H446细胞凋亡的研究

目的：研究奥沙利铂对人肺癌细胞株NCI-H446生长抑制及诱导凋亡的作用并探讨其机制。方法：以不同浓度的奥沙利铂作用于NCI-H446细胞,应用采用噻唑蓝（MTT）法检测奥沙利铂对NCI-H446细胞生长的抑制作用。Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;分光光度法检测caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性。结果：奥沙利铂可抑制NCI-H446细胞的生长并具有时间和剂量依赖性,Hoechst 33258荧光染色可见典型的细胞凋亡特征,流式细胞仪检测到细胞阻滞于S期和sub-G1峰。经过奥沙利铂诱导,caspase-3、caspase-9活性被上调,较对照组明显升高（P〈0.05）,caspase-8活性未见明显改变（P〉0.05）。结论：奥沙利铂具有抑制肺癌细胞株NCI-H446增殖及诱导凋亡作用,此作用可能通过激活内源性凋亡途径实现。     

Stomatin‐like protein 2 inhibits cisplatin‐induced apoptosis through MEK/ERK signaling and the mitochondrial apoptosis pathway in cervical cancer cells

Stomatin‐like protein 2 (STOML2 or SLP‐2) is an oncogenic anti‐apoptotic protein that is upregulated in several types of cancer, including cervical cancer. However, the mechanisms responsible for the SLP‐2 anti‐apoptotic function remain poorly understood. Here, we show that siRNA‐mediated SLP‐2 suppression decreases growth of human cervical cancer HELA and SIHA cells, and increases cisplatin‐induced apoptosis through activation of MEK/ERK signaling and suppression of the mitochondrial pathway. The inhibition of the mitochondrial pathway is mediated by increasing the mitochondrial Ca²⁺ concentration and mitochondrial membrane potential, thereby downregulating p‐MEK and p‐ERK levels, upregulating the Bax/Bcl‐2 ratio, increasing cytochrome C release from mitochondria into the cytosol, and upregulating levels of cleaved‐caspase 9, cleaved‐caspase 3, and cleaved poly ADP‐ribose polymerase (PARP). Overexpression of SLP‐2 using adenovirus‐STOML2 has the opposite effect: it upregulates p‐MEK and p‐ERK and downregulates the Bax/Bcl‐2 ratio and levels of cleaved‐caspase 9 to caspase 9, cleaved‐caspase 3 to caspase 3, and cleaved‐PARP to PARP in cisplatin‐treated cells. These data show that SLP‐2 inhibits cisplatin‐induced apoptosis by activating the MEK/ERK signaling and inhibiting the mitochondrial apoptosis pathway in cervical cancer cells.     

TRAIL联合吉西他滨对肺癌NCI-H460细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察吉西他滨(gemcitabine)联合TNF相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对人肺癌细胞NCI-H460增殖和凋亡的影响。方法:MTT法检测NCI-H460细胞的增殖,流式细胞术检测NCI-H460细胞的凋亡。结果:吉西他滨和TRAIL单用或联用均可浓度(0.001~10μg/ml)和时间(24、48、72 h)依赖性抑制NCI-H460细胞的增殖,两药联用比单用时抑制率更高,3组药物作用72 h时对肿瘤的抑制率分别为14.9%~77.5%、23.4%~74.8%、22.3%~80.5%;作用72 h时两药单用和联用对细胞增殖抑制的IC50分别为0.085 3、0.098 2、0.043 5μg/ml。两药联用对NCI-H460细胞增殖的抑制效果还与用药顺序以及两药比例有关,吉西他滨作用24 h后再加TRAIL比TRAIL作用24 h后再加吉西他滨对NCI-H460的抑制效果更好,吉西他滨与TRAIL联用的比例为1∶0.3时对NCI-H460细胞增殖的抑制率最大。吉西他滨和TRAIL联用时NCI-H460细胞的凋亡率显著高于两药单用的凋亡率(49.04%vs29.33%、25.69%,P<0.01)。结论:吉西他滨与TRAIL联用可协同抑制肺癌细胞NCI-H460的增殖、促进细胞凋亡。     

Lycorine hydrochloride induces reactive oxygen species-mediated apoptosis via the mitochondrial apoptotic pathway and the JNK signaling pathway in the oral squamous cell carcinoma HSC-3 cell line

Poor drug efficacy is a prominent cause of oral squamous cell carcinoma (OSCC) treatment failure. Although increased efforts in developing OSCC therapeutic strategies have been achieved in recent decades, the 5-year survival rate of patients with OSCC remains poor and effective drugs to treat OSCC are lacking. The aim of the present study was to investigate the apoptotic effect caused by lycorine hydrochloride (LH) and to identify its mechanism in the OSCC HSC-3 cell line. The findings demonstrated that LH effectively induced HSC-3 cell apoptosis and cell cycle arrest at the G₀/G₁ phase, resulting in the inhibition of cell proliferation. Furthermore, it was found that LH increased reactive oxygen species (ROS) production, triggered mitochondrial membrane potential (MMP) disorder, enhanced the protein expression levels of Bax, Bim, cleaved caspase-9, caspase-3 and poly(ADP-ribose) polymerase 1 and decreased Mcl-1 expression. The protein expression levels of important members of the JNK signaling pathway, including phosphorylated (p)-JNK, p-mitogen-activated protein kinase kinase 4 and p-c-Jun, were significantly increased in LH-treated cells, accompanied by an increase in ROS. However, N-acetyl cysteine (NAC), a potent antioxidant, reversed the upregulated mRNA expression of c-Jun, as well as the enhanced ROS production, the disorder of MMP and the apoptosis of HSC-3 cells induced by LH. These results suggested that LH may induce HSC-3 cell apoptosis via the ROS-mediated mitochondrial apoptotic pathway and the JNK signaling pathway, which indicated that LH may be a potential drug candidate for anti-OSCC therapy.     

秦皮乙素对人肺癌H460细胞体外增殖与凋亡的影响

目的 探讨秦皮乙素对人肺癌H460细胞体外增殖与凋亡的影响.方法 将体外培养人肺癌H460细胞分为4组:空白对照组、秦皮乙素0.2 mg/ml组、秦皮乙素0.4 mg/ml组、秦皮乙素0.8 mg/ml组.给药干预48 h后,MTT法观察细胞增殖抑制率;流式细胞仪分析细胞凋亡率和周期;比色法检测Caspase-3的活性.结果 不同浓度的秦皮乙素均能抑制人肺癌细胞H460的体外增殖,并使细胞阻滞于S期,Caspase-3的活性上升,上述结果均呈剂量依赖性.结论 秦皮乙素能抑制人肺癌H460细胞的体外增殖,并能诱导H460细胞的凋亡,具有良好的抗肿瘤作用.     

AKT信号通路在克唑替尼诱导的EML4-ALK阳性肺癌细胞凋亡迁移中的作用及机制研究

目的 探讨AKT信号通路在克唑替尼诱导的EML4-ALK阳性肺癌细胞凋亡迁移中的作用及机制研究.方法 培养人肺癌细胞株H2228,CCK8实验检测20、40、80、160、320、640 nmol/L的克唑替尼作用于细胞48 h后对细胞增殖的影响,计算半抑制浓度(IC50);300 nmol/L克唑替尼处理细胞24、48、72 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室检测细胞迁移数;Western Blot检测Bcl-xL、Bcl-2、Bim、AKT、p-AKT蛋白表达.结果 克唑替尼能明显抑制人肺癌细胞株H2228增殖(P﹤0.01),根据IC50值选择300 nmol/L克唑替尼为研究对象;克唑替尼能明显促进细胞凋亡,抑制细胞迁移(P﹤0.01);克唑替尼能下调Bcl-xL、Bcl-2、p-AKT蛋白表达,上调Bim蛋白表达(P﹤0.01).AKT蛋白表达水平在克唑替尼作用的各个时间点间比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).结论 克唑替尼通过AKT信号通路抑制人肺癌细胞株H2228迁移,并通过调节Bcl-xL、Bcl-2、Bim蛋白表达促进细胞凋亡.