短发夹RNA沉默S100A4基因对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖和迁移力的抑制

目的观察靶向S100A4的shRNA对MCF-7细胞增殖和迁移力的影响。方法构建S100A4基因特异性shRNA表达载体,使用QRT-PCR和Western blot检测转染后MCF-7细胞中S100A4的表达水平,运用MTT法和流式细胞术检测转染后MCF-7细胞增殖水平和凋亡率的变化。将S100A4- shRNA表达载体转染入MCF-7细胞,G418筛选及克隆化培养,并运用划痕实验检测其迁移力的变化。结果经测序鉴定证实成功构建S100A4-shRNA表达载体。转染48h后,所构建的S100A4-shRNA表达载体能够有效抑制MCF-7细胞中S100A4的表达,并且可以显著降低MCF-7细胞增殖水平以及诱导细胞进入晚期凋亡;稳定转染S100A4-shRNA表达载体的MCF-7细胞形态无显著变化,但是迁移力明显下降。结论S100A4-shRNA表达载体能有效地抑制乳腺癌MCF-7细胞中S100A4的表达,从而降低细胞增殖水平和迁移力。     

二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响

目的:研究二甲双胍（Met）对体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移的影响并探讨其机制。方法:Ishikawa细胞经Met 作用后,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞法检测细胞凋亡及周期分布;划痕法和Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测胰岛素生长因子-1（IGF-1）的表达水平。结果:经Met处理后,Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭能力受到明显抑制,凋亡率显著增高;随着Met浓度地升高,IGF-1蛋白表达水平显著下降（P＜0.05,P＜0.01）。结论:Met可通过下调IGF-1蛋白的表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞产生抑制增殖、诱导凋亡和降低迁移及侵袭等作用。     

TNF-ɑ调控LRG1促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移

目的:研究TNF-α对乳腺癌MCF-7细胞中LRG1蛋白表达的调控及其对乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及相关分子机制。方法:MTT实验检测不同浓度TNF-α处理后MCF-7细胞活力;EdU实验、Transwell实验和划痕实验分别检测抑制LRG1表达后细胞增殖、侵袭以及迁移能力;Western blot检测细胞内MAPK信号通路中p-p38蛋白表达。结果:低浓度TNF-α处理乳腺癌MCF-7细胞,细胞活力增强;抑制LRG1表达后细胞增殖能力下降,侵袭细胞数、细胞迁移率以及p-p38蛋白表达均下降。结论:TNF-ɑ通过调控LRG1的表达促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、侵袭和迁移,这一过程可能通过激活p38MAPK信号通路来实现。     

甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的:研究甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:采用MTT法检测甲异靛对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制;流式细胞仪测定细胞凋亡率;光学显微镜观察细胞形态的变化;westernblot法测定caspase-3、PARP及bcl-2表达。结果:甲异靛能明显抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖。甲异靛诱导MCF-7细胞凋亡,呈现典型细胞凋亡的形态变化,并呈时间和剂量依赖性,凋亡率最高可达(68.40±4.87)%,在细胞凋亡过程中出现PARP分子断裂和bcl-2下调,未检测到caspase-3。结论:甲异靛能诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡抑制细胞增殖,其发生机制可能与下调bcl-2有关。     

多西紫杉醇诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的探讨多西紫杉醇(docetaxcel)诱导体外培养人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用及凋亡的分子机制。方法通过MTT比色法分析多西紫杉醇对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响;应用光镜、电镜观察细胞形态学的改变;Annexin-V/PI双染流式细胞术检测肿瘤细胞周期动力学和凋亡诱导率的影响;免疫组化方法检测凋亡相关基因bax、bc1-2的表达变化。结果多西紫杉醇可明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖,并可导致其形态学的改变;随着加药时间的增长,G2/M期细胞增多,G2/M期细胞和S期细胞的比值也随剂量呈递增关系;加药(IC50)48h后早期凋亡细胞明显增多,同时可上调bax和下调bc1-2的蛋白表达量。结论多西紫杉醇可明显抑制MCF-7肿瘤细胞的生长,诱导细胞凋亡。其分子机制可能与激活bax和抑制bc1-2等凋亡调控基因有关。     

ERK1/2 MAPK在赖氨匹林对MCF-7细胞增殖抑制中的作用

背景与目的:探讨赖氨匹林(Aspisol)在抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,对ERK1/2 MAPK信号转导通路的影响.材料与方法:采用免疫细胞化学方法测定MCF-7细胞中环氧合酶-2(COX-2)的表达.采用噻唑蓝(MTY)比色法检测Aspisol对MCF-7增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用Western blot分别检测ERKl/2、p-ERK]/2蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果:在MCF-7细胞中未检测到COX-2的表达.Aspisol对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,且具有剂量和时间依赖性(P＜0.01).Aspisol可诱导MCF-7细胞凋亡,并随着剂量的增大细胞的凋亡率升高(P＜0.05).Aspisol抑制MCF-7细胞pERK蛋白的表达(P＜0.05),但不影响总ERKI/2蛋白的表达(P＞0.05);Aspisol可促进Bax蛋白表达(P＜0.05),但抑制Beb2的表达(P＜0.05).结论:Aspisol影响ERKI/2 MAPK信号转导通路,调节凋亡相关蛋白表达是其抑制MCF-7细胞增殖的作用之一.     

甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的：研究甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：采用MTT法检测甲异靛对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制;流式细胞仪测定细胞凋亡率;光学显微镜观察细胞形态的变化;westernblot法测定caspase-3、PARP及bcl-2表达。结果：甲异靛能明显抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖。甲异靛诱导MCF-7细胞凋亡,呈现典型细胞凋亡的形态变化,并呈时间和剂量依赖性,凋亡率最高可达（68.40±4.87）%,在细胞凋亡过程中出现PARP分子断裂和bcl-2下调,未检测到caspase-3。结论：甲异靛能诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡抑制细胞增殖,其发生机制可能与下调bcl-2有关。     

沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探究沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:选用37例ccRCC组织及癌旁组织样本,通过提取样本总RNA并行逆转录及转染,利用qRT-PCR检测lncRNA TUG1在ccRCC组织、细胞系及癌旁组织中的表达,并通过CCK-8法、流式细胞检测法及划痕实验检测沉默lncRNA TUG1对ccRCC细胞A704、A498增殖、凋亡及迁移的影响,采用统计软件进行数据处理,探究lncRNA TUG1在ccRCC中的表达及临床意义。结果:qRT-PCR检测lncRNA TUG1表达情况,结果显示:lncRNA TUG1在ccRCC组织中的表达显著高于癌旁组织,在肾细胞癌细胞系A704和A498中的表达明显高于正常细胞系HK2,差异有统计学意义（P＜0.05）;CCK-8检测细胞增殖情况,结果显示:A704和A498细胞经转染干扰后细胞增殖活性较对照组显著降低（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可抑制细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡情况,结果显示:A704和A498细胞凋亡比例较空白对照组明显增多（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可促进细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移能力,结果显示:A704和A498细胞迁移能力较空白对照组降低（P＜0.05）,沉默lncRNA TUG1可抑制细胞迁移。结论:沉默lncRNA TUG1可诱导ccRCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移,可作为临床研究的新靶点。     

PI3K/Akt信号通路在RANKL诱导的MCF-7乳腺癌细胞迁移中的作用

目的 核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)能促进表达RANK的上皮癌细胞迁移至骨,与乳腺癌骨转移密切相关.本文探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphoinositide3-kinase/serine/threonine protein kinase PI3K/Akt)信号通路在RANKL诱导的乳腺癌MCF-7细胞迁移中的作用.方法 流式细胞仪检测MCF-7细胞表面RANK蛋白的表达;Transwell法测定RANKL刺激后MCF-7细胞迁移能力的改变;Western-blot检测MCF-7细胞RANKL刺激后p-Akt及Akt的表达.SPSS 16.0软件分析实验数据.结果 MCF-7细胞表达RANK 蛋白,RANKL诱导MCF-7细胞迁移能力显著增强,RANKL的圈套受体OPG可阻断RANKL诱导的细胞迁移.RANKL刺激后MCF-7细胞p-Akt表达在1、5分钟时一过性升高,PI3K抑制剂LY294002显著抑制RANKL诱导的细胞迁移.结论 PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的乳腺癌细胞系MCF-7迁移.     

LINC01936在乳腺癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭特性的影响

摘 要：［目的］ 研究LINC01936在乳腺癌中的表达及其对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。［方法］ 从UCSC XENA数据库中获取LINC01936在1 099例乳腺癌组织和292例非配对癌旁组织及112例配对样本中的表达数据。用LINC01936-pcDNA3.1或pcDNA3.1质粒转染人乳腺癌MCF-7细胞,获得过表达LINC01936的MCF-7细胞和对照 MCF-7细胞。使用cell counting kit-8(CCK-8) 细胞增殖实验测定LINC01936对MCF-7细胞增殖的影响。采用Transwell实验和细胞划痕实验测定细胞迁移和侵袭能力。通过细胞黏附实验检测黏附能力。荧光Hoechst33342染色法用于评价LINC01936对细胞凋亡的影响。Western blot和免疫荧光法用于检测NF-κB的蛋白水平。［结果］ 生物信息学分析表明,LINC01936在乳腺癌组织中低表达。CCK-8检测显示,LINC01936抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05）。Transwell实验及细胞划痕实验表明,转染LINC01936过表达质粒后,MCF-7细胞迁移和侵袭能力下降。细胞黏附实验表明,LINC01936减弱乳腺癌细胞的黏附能力（P<0.05）。荧光染色分析表明,LINC01936过表达促进MCF-7细胞的凋亡。Western blot和免疫荧光显示,LINC01936促进NF-κB的表达。［结论］ LINC01936可能通过促进NF-κB的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进细胞凋亡。     

CisoDGR 多肽对乳腺癌 MCF －7细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的：探讨 CisoDGR 多肽对乳腺癌 MFC －7细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法：采用 MTT 法检测 CisoDGR 多肽对乳腺癌 MCF －7细胞的抑制率;流式细胞术检测 CisoDGR 多肽对 MCF －7细胞凋亡的影响;Western blot 法检测 Caspase －3、Bcl －2蛋白的表达。结果：CisoDGR 多肽能明显抑制乳腺癌 MCF －7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并存在一定的时－效及量－效关系。其对凋亡的诱导作用可能与 Caspase －3蛋白表达增加及 Bcl －2蛋白表达下降有关。结论：CisoDGR 多肽具有抑制 MCF －7细胞增殖,诱导 MCF －7细胞凋亡的作用,其作用机制可能与 Caspase －3、Bcl －2蛋白的表达变化有关。     

Atorvastatin Inhibits Viability and Migration of MCF7 Breast Cancer Cells

Objective: Atorvastatin is commonly used as a lipid lowering drug. The emerging interest in  statins as anticancer agents is based on their pleiotropic effects on cancer cells. Among the statins, atorvastatin, and in cancers, breast malignancies have received less attention in preclinical investigations. In order to enhance the efficacy of cancer treatment,  adjuvant, less expensive therapeutic strategies have been recently noticed. In this case, we investigated the in-vitro effect of atorvastatin on viability and migration of MCF7 breast cancer cell line. Methods: We tested the cytotoxicity of atorvastatin on breast cancer cells survival by MTT assay. Annexin-V / PI staining and then flow cytometry of cancer cells in addition to quantitative real-time PCR tests quantified the apoptosis and necrosis of cancer cells. We figured out the impact of atorvastatin on cancer cell migration capability through scratch-wound healing assay and transwell migration examination. Inverted light microscope and fluorescent imaging displayed the morphological changes following treatment of MCF7 cells with atorvastatin. Result: We resulted that atorvastatin can trigger MCF7 cancer cells to undergo necrosis and caspase-dependent apoptosis based on the viable/dead cell number, mitotic cell cycle, gene expression, and morphological assays. The results were dose- and time-dependent and the half- maximal inhibitory concentration of atorvastatin for cancer cells’ viability inhibition was 9.1 μM/L(nM/mL). Moreover, the migration of MCF7 cells were inhibited in the treated group as we figured out in two- and three-dimensional migration methods. Conclusion:In-vitro inspection of drug-cancer cell interactions paves the way  for future in-vivo research studies. These in-vitro results revealed that atorvastatin has anti-viability and anti-migration effects on breast cancer cells.     

lncBRM对乳腺癌细胞生长的影响及作用机制

目的  探讨Brahma相关长链非编码RNA （long non-coding RNA for association with Brahma,lncBRM）对人乳腺癌细胞系（MCF-7、MDA-MB-453）生长、迁移和侵袭的影响及可能的作用机制。方法 采用RT-PCR实验检测lncBRM在不同乳腺癌细胞（MCF-7、 ZR-75-30、BT474、MDA-MB-231和MDA-MB-453）和正常人乳腺上皮细胞株MCF 10A中的表达;利用siRNA在MCF-7、MDA-MB-453细胞中敲低lncBRM,分别转染si-lncBRM质粒（si-lncBRM组）和空载质粒（si-Ctrl组）,采用CCK-8实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Transwell小室实验检测细胞侵袭和迁移能力,采用Western blot检测迁移相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达水平,并采用miRDB数据库预测lncBRM靶点。结果 lncBRM在不同乳腺癌细胞中的表达水平均高于正常人乳腺上皮细胞株MCF 10A （P<0.01）。si-Ctrl组比较,敲低lncBRM可抑制MCF-7、MDA-MB-453细胞增殖能力（P<0.05）,提高细胞凋亡率（P<0.01）,细胞侵袭和迁移细胞数目较少（均P<0.01）;同时E-cadherin表达明显上调,而N-cadherin表达下调（均P<0.01）。miRDB数据库预测发现lncBRM和68个miRNAs存在结合位点,敲低lncBRM导致评分最高的前5个miRNA中的4个（miR-4646-5p、miR-204-3p、miR-204-5p和miR-6832-3p）表达上调。结论 lncBRM可能通过调控miRNAs的表达而抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移并诱导其凋亡。     

氧化苦参碱对人乳腺癌 MCF -7 细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的：了解中药苦参的有效成分氧化苦参碱对人乳腺癌细胞系MCF-7肿瘤细胞的增殖及其相关的调控机制的干预作用.方法：以乳腺癌细胞株（MCF-7）为研究对象,利用MTT法检测氧化苦参碱的体外杀伤活性;RT-PCR法、Western blot法、流式细胞技术、细胞免疫荧光计数检测基因、蛋白表达水平,对其相关调控基因的表达水平进行检测.结果：氧化苦参碱对体外培养的MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用;可以诱导乳腺癌 MCF-7细胞凋亡,而且这种生长抑制及促进凋亡的作用可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路的活性来实现.结论：氧化苦参碱可以通过抑制Wnt/β-catenin信号转导通路的活性来抑制人乳腺癌MCF-7细胞系的增殖,促进其凋亡.     

环氧化酶-2抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响

目的 探讨环氧化酶-2抑制剂nimesulide(NIM)对雌激素受体(ER)阴性(MDA-MB．231)和阳性(MCF-7)人乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响。方法 应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率，透射电镜观察细胞形态与超微结构，AnnexinV法检测细胞的凋亡。结果 NIM以时间、剂量依赖性方式抑制MDA-MB-231(COX-2阳性)、MCF-7(COX-2阴性)细胞生长，阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导细胞的凋亡，MDA—MB-231细胞对NIM的作用更为敏感。NIM对COX-2表达阴性的MCF-7细胞同样具有抑制增生、诱导凋亡的作用。结论 NIM对ER阳性和ER阴性乳腺癌细胞均有抑制增生、诱导凋亡的作用。NIM的抗肿瘤作用存在环氧化酶．2依赖性与非依赖性两种途径。     

NFATc1可能通过调节RhoA/ROCK信号通路影响乳腺癌细胞的增殖与凋亡

目的:检测NFATc1在乳腺癌患者癌及癌旁组织的表达,并探讨其表达对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:收集于我院就诊的39例乳腺癌患者癌及癌旁组织,采用RT-PCR技术、免疫印迹及免疫组化染色技术检测NFATc1在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达状况。利用小干扰RNA（siRNA）构建NFATc1稳定敲除的MCF7及MDA-MB-231细胞系。利用CCK-8试剂盒及克隆形成实验检测NFATc1敲除对乳腺癌细胞增殖的影响,同时利用Ki67染色检测对照组和NFATc1敲除组乳腺癌细胞中Ki67阳性细胞的比例。此外,采用流式细胞学技术检测NFATc1基因敲除对乳腺癌细胞凋亡的影响,最后利用免疫印迹技术分析各组细胞RhoA/ROCK信号通路的表达状况。结果:NFATc1在乳腺癌患者癌组织中的mRNA及蛋白表达显著增高（P＜0.05）。流式细胞学结果表明NFATc1 siRNA干预能够显著促进两组乳腺癌细胞系的凋亡（P＜0.05）。此外,Ki67染色、CCK-8实验及克隆形成实验结果表明NFATc1敲除后两种乳腺癌细胞系的增殖能力明显下降（P＜0.05）。免疫印迹结果揭示,NFATc1敲除能够明显抑制癌细胞中RhoA/ROCK信号通路的激活（P＜0.05）。结论:NFATc1可能通过调控RhoA/ROCK信号通路进而促进乳腺癌细胞增殖,有望成为治疗乳腺癌的新靶点。     

BCYRN1对乳腺癌细胞MCF7和小鼠移植瘤增殖和转移的影响

目的 研究RNA干扰lncRNA BCYRN1对乳腺癌细胞MCF7和小鼠移植瘤的增殖和转移的影响。 方法 BCYRN1 siRNA和siRNA scramble（对照组）分别转染乳腺癌细胞MCF7。CCK-8检测细胞增殖;蛋白印迹法检测细胞中蛋白的表达;划痕实验分析细胞运动能力;免疫组织化学法检测肿瘤组织中蛋白的表达。 结果 与对照组相比,细胞增殖倍数明显降低（P=0.02）;且细胞增殖核抗原-67（antigen identified by monoclonal antibody, Ki-67）和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclearantigen, PCNA）表达显著减弱（P=0.03）。BCYRN1 siRNA处理后,乳腺癌MCF7细胞运动能力减弱,血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）和基质金属蛋白酶9（matrixmetalloprotein 9, MMP-9）表达受到抑制（P=0.04）。体内实验表明,BCYRN1 siRNA组小鼠肿瘤的体积明显小于对照组（P=0.03）,且BCYRN1 siRNA可以抑制MCF7小鼠移植瘤肿瘤组织Ki-67和MMP-9的表达。 结论 BCYRN1 siRNA可以抑制乳腺癌细胞MCF7和小鼠的增殖和转移     

下调FAM111B对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨下调FAM111B对乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF7细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法:构建siR-FAM111B慢病毒载体,转染乳腺癌MDA-MB-231和MCF7细胞,qRT-PCR检查转染组与对照组FAM111B mRNA表达,Western blotting法检测各组细胞FAM111B蛋白表达。用CCK-8法检测细胞的增殖能力。流式细胞术检测Annexin-V/PI双染各组细胞的凋亡情况。Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果:siR-FAM111B成功转染MDA-MB-231和MCF7细胞,转染后应用qRT-PCR和Western blotting检测,结果显示,FAM111B mRNA与蛋白水平均下调。siR-FAM111B能抑制两种细胞的增殖。Annexin-V/PI双染结果显示,下调FAM111B诱导两种细胞凋亡。Western blotting结果显示,下调FAM111B可以促进两种细胞Bax的表达,抑制Bcl-2的表达。结论:下调FAM111B能够抑制乳腺癌细胞的增殖,通过调节线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡。     

Huaier aqueous extract inhibits proliferation of breast cancer cells by inducing apoptosis

Aqueous extract of Trametes robiniophila murr (Huaier) has been commonly used in China for cancer complementary therapy in recent years; however, the mechanisms of its anticancer effects are largely unknown. In the present study, we aim to investigate its inhibitory effect on both MCF‐7 and MDA‐MB‐231 cells, and explore the possible mechanisms of its anticancer effect. Cell viability and motility were measured by MTT and invasive assays, migration and scratch assays in vitro, respectively. The distribution of cell cycle, PI‐Annexin‐V staining and Rhodamine 123 assay were analyzed by flow cytometry, and western blot were used to test the apoptotic pathways. We found that Huaier extract could strongly inhibit cell viability of MCF‐7 and MDA‐MB‐231 cells in a time‐ and dose‐dependent manner; however, MDA‐MB‐231 cells showed more susceptibility to the treatment. Furthermore, cell invasiveness and migration were also suppressed with exposure to Huaier extract. We also indicated that Huaier could induce G0/G1 cell‐cycle arrest, p53 accumulation and activation selectively in MCF‐7 cells. Inspiringly, the PI‐Annexin‐V staining assay and western blot analysis confirmed cell apoptosis executed by caspase‐3. Decreased mitochondrial membrane potential by Rhodamine 123 assay and down‐regulation of Bcl‐2 and up‐regulation of BCL2‐associated X protein (BAX) indicated that Huaier induced apoptosis through the mitochondrial pathway. Caspase activation during Huaier‐induced apoptosis was confirmed by pan‐caspase inhibitor, Z‐VAD‐fmk. As expected, the inhibitor decreased Huaier‐induced apoptosis in both cell lines. Based on our findings, Huaier can induce cell apoptosis in both ER‐positive and ER‐negative breast cancer cell lines and is an effective complementary agent for breast cancer treatment. (Cancer Sci 2010; 101: 2375–2383)     

miR-4728-3p通过PI3K/AKT信号通路调控DOT1L基因抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-4728-3p通过调控类端粒沉默干扰体-1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)基因对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:使用乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231及人正常乳腺细胞MCF-10A。转染MCF-7和MDA-MB-231细胞随机分为NC组(转染miR-4728-3p-NC)和敲低组(转染miR-4728-3p-inhibitor)。利用RT-qPCR技术检测不同的细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量改变情况。集落克隆形成实验和EDU实验可以同时检测体内各个细胞异常增殖的情况;TUNEL荧光标记检测法和流式细胞术实验可以同时检测不同组癌细胞的凋亡变化;划痕实验和Transwell实验可以同时检测到在各个细胞内因不同处理而可能产生的细胞迁移率和侵袭力的改变;Western blot检测与细胞凋亡状态相关细胞蛋白以及与细胞通路凋亡相关细胞蛋白p-AKT和p-PI3K相对表达的含量。结果:在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231以及SKBR3中发现miR-4728-3p和DOT1L的表达高于人正常乳腺细胞MCF-10A(P＜0.05)。转染细胞miR-4728-3p后,与NC组细胞进行实验比较,发现敲低组细胞中miR-4728-3p和DOT1L的表达量明显降低,且敲低组细胞的增殖能力明显减弱,细胞凋亡率明显升高,细胞迁移能力大大降低。敲低组的细胞凋亡活性蛋白相对表达明显发生变化。其中p-AKT与p-PI3K蛋白均被抑制激活。RT-qPCR和Western blot实验验证DOT1L是miR-4728-3p的下游靶向基因。结论:敲低miR-4728-3p可以下调DOT1L的表达从而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞增殖,同时使乳腺癌细胞侵袭和迁移能力减弱。