DADS通过MAPK和PI3K/Akt 信号通路下调Mcl-1诱导白血病细胞凋亡*

目的:二烯丙基二硫（DADS）为天然植物大蒜中的提取物,能抑制多种肿瘤细胞生长,本文探讨丝裂原激活的蛋白激酶（MAPKs）、3- 磷酸肌醇激酶（PI 3K/Akt）信号通路和Bcl- 2 家族成员在DADS诱导的人白血病HL- 60细胞凋亡中的作用。方法:利用流式细胞术检测DADS 诱导的白血病细胞凋亡,Western blot研究MAPKs和PI 3K/Akt信号通路在DADS 诱导的人白血病HL- 60细胞凋亡中的变化及对Bcl- 2 家族凋亡相关蛋白表达的影响。结果:DADS呈浓度和时间依赖性地诱导人白血病HL- 60细胞凋亡,在此过程中ERK/MAPK 和PI 3K/Akt信号通路被抑制,而p38MAPK 信号通路被激活,ERK/MAPK 和PI 3K/Akt信号通路通过降低Mcl-1（myeloid cell leukemia-1）和升高Bax 的表达诱导人白血病细胞凋亡,而p38MAPK 则不是通过调控Mcl-1 和Bax 的表达诱导人白血病细胞凋亡,进一步利用RNA干扰技术沉默Mcl-1 基因可增加DADS对HL- 60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。结论:MAPK 和PI 3K/Akt信号通路通过下调Mcl-1 的表达参与了DADS诱导的HL- 60细胞凋亡作用。      

蛇床子素诱导HL-60细胞凋亡及其分子机制研究

目的 研究蛇床子素对急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制.方法 CCK8实验检测蛇床子素对HL-60细胞的增殖抑制作用,Hoechst染色观察药物8h作用后细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测HL-60细胞的Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western bolt检测HL-60细胞的活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达变化.结果 蛇床子素可明显抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡,抑制率最高达（90.7±4.5）％,F=138.46,P=0.000;总凋亡率为33.6％,F=27.75,P=0.006.诱导后Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调,Bax/Bcl-2比值升高（F=210.12,P=0.000）,活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达水平随药物作用时间延长而升高.结论 蛇床子素可抑制HL-60细胞增殖并诱导凋亡,其诱导凋亡机制与同时激活线粒体途径和死亡受体途径相关.     

血管内皮细胞生长因子影响难治性急性髓系白血病发生发展的作用研究

背景和目的:难治性白血病的发生发展机制非常复杂,近年来发现白血病患者骨髓过度表达血管内皮细胞生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF),但VEGF如何影响难治性白血病尚未明确。本研究探讨高表达VEGF对人急性髓系白血病细胞株HL-60增殖及三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡影响;观察难治性急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)中VEGF蛋白表达与疾病发展的相关性。方法:采用脂质体转染VEGF165cDNA入HL-60细胞,通过RT-PCR及ELISA方法鉴定转染克隆HL-60/VEGF165细胞中VEGFmRNA及蛋白的表达,MTT法、集落形成实验比较HL-60/VEGF165及转染pcDNA3.1-neo空载体的HL-60/neo细胞增殖活性,流式细胞仪观察三尖杉酯碱诱导的细胞凋亡。用ELISA法检测难治性与非难治性AML患者血浆中VEGF蛋白浓度。结果:HL-60/VEGF165细胞培养上清中VEGF蛋白浓度为(399.07±12.45)ng/L,高于HL-60/neo细胞(184.45±10.53)ng/L(P<0.01)。HL-60/VEGF165细胞与HL-60/neo细胞相比生长速度明显加快,集落形成能力明显增加,集落数分别为(157.00±17.00)/500细胞和(110.00±12.90)/500细胞(P<0.05);而细胞凋亡率减少,分别为(3.18±0.33)%和(6.61±0.50)%,三尖杉酯碱诱导HL-60/VEGF165细胞凋亡率低于HL-60/neo细胞。难治性AML患者血浆中VE     

芒柄花黄素对白血病HL-60细胞增殖、凋亡和miR-21/PTEN/AKT信号通路的影响

目的:探讨芒柄花黄素对白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:以不同浓度（0、12.5、25、50、100和200 μg/ml）芒柄花黄素处理HL-60细胞24、48和72 h后，采用MTT法检测细胞存活率，并计算出IC50以筛选出合适的作用浓度。采用流式细胞仪检测芒柄花黄素对HL-60细胞周期和凋亡的影响，实时荧光定量PCR检测芒柄花黄素对HL-60细胞中miR-21表达的影响，免疫印迹法检测芒柄花黄素对HL-60细胞中PTEN、AKT和p-AKT蛋白表达的影响。结果:与0 μg/ml处理组相比，25、50、100和200 μg/ml芒柄花黄素处理24 h后HL-60细胞的存活率明显降低（P<0.05）；同时，12.5、25、50、100和200 μg/ml芒柄花黄素分别处理48 h和72 h后HL-60细胞的存活率明显低于0 μg/ml处理组（P<0.05）；芒柄花黄素作用HL-60细胞24、48和72 h后的IC50值分别为146.50 μg/ml、120.10 μg/ml和89.00 μg/ml。50、100和150 μg/ml芒柄花黄素处理后HL-60细胞在G0/G1期的百分比、细胞凋亡率和PTEN蛋白的表达水平均逐渐升高，而细胞在S期和G2/M期的百分比、miR-21的表达水平以及p-AKT蛋白的表达水平均逐渐降低，且与0 μg/ml相比，差异均有统计学意义（P<0.05），但HL-60细胞中AKT蛋白的表达水平与0 μg/ml组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:芒柄花黄素可抑制白血病HL-60细胞增殖并诱导细胞凋亡，其作用机制可能与调控miR-21/PTEN/AKT信号通路有关。     

三七皂苷R1通过线粒体相关通路促进白血病细胞株HL-60凋亡

目的:观察三七皂苷(notoginsenoside) R1对白血病细胞株HL-60凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法:采用MTT法和流式细胞术(Annexin V-FITC双染法)分别检测三七皂苷R1(10、20、40及80 μmol/L)处理HL-60细胞12、24、36及48 h后HL-60细胞的凋亡情况,Western blotting检测HL-60细胞内Bcl-2、Bax及细胞色素C(cytochrome-C,Cyt C)蛋白的表达水平,JC-1染色法观察HL-60线粒体膜电位的变化.结果:MTT和流式细胞术检测显示三七皂苷R1浓度依赖性诱导HL-60细胞的凋亡,且细胞存活率随处理时间的增加而降低;与空白对照组相比,加入三七皂苷R1后细胞中Bcl-2蛋白表达显著减少[(0.45 ±0.03) vs (1.00 ±0.00),P＜0.05]、Bax蛋白表达显著增加[(1.72 ±0.08) vs (1.00±0.00),P＜0.05];Bcl-2/Bax比值减小[(0.21±0.01) vs (1.00±0.00),P＜0.05];线粒体膜电位降低[(0.56±0.09) vs (1.00±0.00),P＜0.05];胞质(cyto)中Cyt-C蛋白表达水平显著下降[(0.42±0.03) vs (1.00±0.00),P＜0.05].结论:三七皂苷R1可显著诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制可能是通过线粒体通路促进细胞的凋亡;本实验可为三七皂苷R1用于临床治疗白血病提供实验依据.     

脉冲磁场对高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡的影响

目的观察脉冲磁场(PMF)对高三尖杉酯碱(HHT)诱导白血病细胞凋亡的影响.方法以人早幼粒白血病细胞(HL-60)为实验对象,采用细胞计数、细胞形态学及流式细胞仪进行分析.结果HHT可诱导HL-60细胞凋亡,PMF能明显增加HHT诱导HL-60细胞凋亡.结论PMF通过对HL-60细胞周期的影响促进HL-60细胞凋亡从而增加对化疗药物的敏感性,表明PMF对治疗白血病具有潜在的应用价值.     

黄芩苷作用HL-60细胞前后c-myc基因表达的变化

 目的 研究中药黄芩苷（baicalin）对人髓系白血病细胞株HL-60细胞增生、凋亡的影响及探讨c-myc基因在其中的作用。方法 培养人髓系白血病细胞株HL-60细胞,应用MTT法绘制细胞生长曲线观察黄芩苷对HL-60细胞增生的影响;DNA凝胶电泳观察细胞凋亡;RT-PCR检测黄芩苷作用前后c-myc基因mRNA表达水平的变化;Western blot检测黄芩苷作用前后c-myc蛋白表达水平的变化。结果　细胞生长曲线结果示黄芩苷能明显抑制HL-60细胞增生,半数抑制浓度（IC50）约为20μmol／L,DNA 片段化的检出表明黄芩苷能有效诱导HL-60细胞凋亡;黄芩苷作用后HL-60细胞c-myc基因和蛋白的表达水平均下降,并且随作用时间延长,表达下降更明显。结论 黄芩苷能有效抑制HL-60细胞增生,诱导其凋亡,c-myc基因可能参与了黄芩苷抑制HL-60细胞增生和诱导凋亡的过程。     

抑制NF-κB通路增强蟾蜍灵诱导的HL-60细胞凋亡

目的:观察蟾蜍灵对HL-60细胞活力和凋亡的影响,对NF-κB通路的作用,探讨NF-κB通路在蟾蜍灵诱导HL-60细胞凋亡过程中的作用.方法:锥虫蓝染色检测细胞活力;流式细胞仪技术检测细胞凋亡和周期分布;采用Western Blot技术检测IKK的磷酸化.结果:蟾蜍灵以时间和剂量依赖性方式诱导HL-60细胞凋亡.24,48和72h抑制细胞活力的IC50浓度分别为26.3,7.8和2.0nmol/L.对照组HL-60细胞有pIKK表达,蟾蜍灵可诱导IKK的快速活化.NF-κB通路的特异性抑制剂Bay 11-7082增强蟾蜍灵的凋亡诱导作用.结论:蟾蜍灵可诱导HL-60细胞凋亡,促进IKK活化与NF-κB通路调节相关,而且与NF-κB通路抑制剂有协同作用.     

右旋柠檬烯诱导人白血病细胞凋亡作用机制的初步研究

目的:探讨右旋柠檬烯(d-limonene)诱导人白血病细胞凋亡的作用机制.方法:以人白血病细胞株K562和HL-60为研究对象,采用MTT法及锥虫蓝染色法检测d-limonene对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双重染色法检测其对细胞凋亡的影响,Western印迹法检测线粒体凋亡途径相关蛋白的表达.结果:d-Limonene作用后K562、HL-60细胞凋亡率呈时间及剂量相关性增加;且处理组Bcl-2/Bax比值下降,细胞质中细胞色素c表达增高,caspase-9表达以及caspase-3分裂明显增高.结论:d-limonene能够诱导人白血病细胞凋亡,线粒体凋亡途径的激活可能是其凋亡诱导的主要机制.     

葛根黄酮提取物对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

 目的 观察葛根黄酮提取物对HL-60细胞的影响及作用机制。方法 用MTT测定对HL-60细胞增殖的影响;用流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡情况;采用NBT比色法检测诱导HL-60细胞分化的能力;DNALadder检测HL-60细胞的凋亡特征及效果;用TUNEL检测体内诱导凋亡能力。结果 葛根黄酮提取物有较强抑制HL-60细胞生长和增殖能力,处理3d可出现明显的凋亡特征,凋亡率可达38.3%,其诱导分化能力弱,葛根黄酮提取物的主要成分葛根素和大豆甙元的诱导凋亡能力弱,但大豆甙元具有较强的诱导HL-60细胞分化的能力,葛根黄酮提取物有体内诱导凋亡抗肿瘤能力。结论 葛根黄酮提取物可通过诱导细胞凋亡抗人白血病HL-60细胞的生长。     

多西他赛诱导HL60细胞凋亡的实验研究

目的:探讨多西他赛诱导HL60细胞凋亡的作用机制。方法:应用形态学方法、流式细胞术、DNA凝胶电泳和Annexin V标记等方法检测细胞凋亡的发生,应用RT-PCR检测凋亡相关基因Fas、bcl-2和c-myc表达的变化。结果:多西他赛对HL60细胞的生长有明显的抑制作用。多西他赛使细胞分裂阻滞于G2M期,并诱导肿瘤细胞发生凋亡:具有典型的凋亡形态,细胞固缩,核染色质呈周边凝聚,形成凋亡小体,胞膜完整;DNA凝胶电泳呈凋亡特有的ladder带;FCM检测出现Sub-G1峰,0·1μmol/L多西他赛作用72h的apo%最高为33·46%;凋亡相关基因Fas转录水平比用药前增强,bcl-2和c-myc无明显变化;结论:多西他赛可诱导HL60细胞凋亡,可能主要与促进Fas基因表达有关。     

Bcl-2反义寡核苷酸诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的：探讨bcl-2反义寡核苷酸诱导ＨＬ－６０细胞的凋亡。方法：将人工合成的bcl-2反义寡聚脱氧苷酸片段与ＨＬ－６０,细胞共培养,在作用的第０天、３天、５天通过免疫组化法（ＡＰＡＡＰ法）检测细胞内bcl-2蛋白表达水平的变化,通过流式细胞仪分析细胞凋亡的情况。结果：bcl-2反这寡核苷酸可下调ＨＬ－６０细胞内bcl-2的蛋白表达水平,其作用与其浓度和时间呈正相关,同时可诱导细胞凋亡,而bcl-2反义寡核苷酸及对照无此作用。     

拓扑异构酶I抑制剂诱导白血病HL60/VCR耐药细胞凋亡的研究

目的　研究拓扑异构酶I抑制剂 (topotecan ;TPT)对白血病耐药细胞HL6 0 /VCR诱导凋亡的作用。方法　瑞氏 吉姆萨染色和吖啶橙 /溴化乙啶 (AO/EB)染色进行形态观察 ,采用TUNNEL、流式细胞仪检测细胞周期和AnnexinV观察TPT对HL6 0 /VCR细胞的抑制效应和促凋亡作用。WesternBlot检测bcl 2、活化的caspase 3和P糖蛋白 (Pgp)的表达变化。 结果　经TPT处理后的HL6 0 /VCR细胞 ,在光镜和AO/EB染色中均可见到典型的凋亡细胞形态学改变 ,并具有时间和剂量依赖性 ;AnnexinV染色后能检测到早期凋亡细胞 (2 6 .8% ) ,细胞周期显示 :G1期细胞比例增高 ,S期减低 ,并有 2 1.8%凋亡峰 ;TUNNEL能检测到 (6 2 .2± 3.5 ) %的阳性细胞 ;伴有活化的caspase 3的表达和bcl 2的下调 ,而Pgp的表达在细胞凋亡前后无变化。结论　TPT能诱导白血病耐药细胞凋亡 ,该过程伴有caspase 3的活化和bcl 2的表达下调。     

miR-203a-3p靶向AKT2增强骨肉瘤细胞的放射敏感性

目的:研究miR-203a-3p对骨肉瘤MG-63细胞凋亡和放射敏感性的影响及潜在作用机制.方法:qRT-PCR检测AKT2 mRNA的表达水平及不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后MG-63细胞中miR-203a-3p的表达水平,克隆形成实验检测不同放射剂量处理后细胞存活分数,流式细胞术测定MG-63细胞凋...     

白杨素对甲状腺癌细胞SW579增殖和侵袭的影响

目的:检测白杨素对甲状腺癌SW579细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法:利用MTT实验和Transwell实验检测细胞增殖和侵袭。Western blot技术检测相关蛋白变化。结果:白杨素可以明显抑制SW579细胞增殖和侵袭。白杨素处理后的细胞中E-cadherin表达增高,而N-cadherin表达降低。结论:白杨素能够通过EMT抑制SW579细胞侵袭。     

Bcl-2反义肽核酸诱导HL60细胞凋亡

目的　探讨不同结构的反义药物对HL6 0细胞系生物学活性的影响。方法　应用细胞计数、细胞形态观察和流式细胞术观察并比较反义肽核酸和反义寡核苷酸对白血病细胞HL6 0生物学活性的影响。结果　 10 μmol/L靶向bcl mRNA蛋白编码区的反义肽核酸能有效地抑制HL6 0细胞的生长、下调bcl 2蛋白的水平及诱导细胞凋亡。 10μmol/L同样靶点的反义肽核酸和反义寡核苷酸作用HL6 0细胞 72小时 ,细胞凋亡的百分率分别为 17.8± 1.5 3 ,13.17± 1.12 ,统计学上有显著性差异。结论　反义Bcl 肽核酸能诱导HL6 0细胞的调亡 ,比反义寡核苷酸有更好的反义作用。     

Embelin 通过上调死亡受体 DR4 / DR5 mRNA 表达增加 HL - 60 细胞对 TRAIL的敏感性

目的：探讨Embelin增加HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的敏感性及可能的作用机制.方法：TRAIL 1、5、10、50及100 ng/ml分别处理HL-60细胞6、12、24及48h,MTT法绘制细胞生长曲线;TRAIL 10 ng/ml±亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,Annexin V/PI复染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测24h时Caspase-3、8及9的表达;亚细胞毒浓度的Embelin处理HL-60细胞6、12、24及48h,实时荧光定量PCR检测DR4及DR5 mRNA 的表达.结果：TRAIL对HL-60 细胞具有增殖抑制作用.亚细胞毒浓度的Embelin联合10 ng/ml TRAIL作用于HL-60细胞时细胞凋亡率较单独应用TRAIL时增加,相应的Caspase-3、8及9的表达也随之增加.结论：亚细胞毒浓度的Embelin可以增加HL-60细胞对TRAIL的敏感性,其机制可能与上调DR4及DR5 mRNA表达并进而启动凋亡途径有关.     

腺病毒介导野生型p53基因对人白血病细胞系HL-60、K_(562)生长的抑制作用

目的探索肿瘤抑制基因ｐ５３对人白血病细胞系的生长抑制作用和促凋亡作用。方法选用含野生型ｐ５３基因的重组腺病毒载体,体外感染人白血病细胞系ＨＬ－６０、Ｋ５６２。通过细胞生长曲线,ＤＮＡ检测及流式细胞仪分析检测转染细胞的增殖受抑制和细胞凋亡的发生。结果ＰＣＲ检测转染后ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞ｐ５３ｃＤＮＡ表达。转染后Ａｄ／ｐ５３病毒对ＨＬ－６０细胞和Ｋ５６２细胞的生长有抑制作用。随着Ａｄ／ｐ５３病毒浓度加大,ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞的ＯＤ值越低即生长抑制程度越大。经Ａｄ／ｐ５３病毒转染的ＨＬ－６０和Ｋ５６２细胞均有明显的细胞凋亡峰出现,对照细胞则无。细胞周期分析无明显异常发现。结论重组腺病毒载体介导的野生型ｐ５３基因在体外对人白血病细胞系ＨＬ－６０和Ｋ５６２的生长有抑制作用,能导致细胞凋亡的发生。     

端粒酶反义脱氧核苷酸与多糖对HL-60细胞的影响

目的　研究人类端粒酶反义脱氧核苷酸及其与梁金菇多糖协同作用对HL 6 0细胞凋亡及端粒酶活性的影响。方法　端粒酶反义脱氧核苷酸单独或与梁金菇多糖协同处理HL 6 0细胞后 ,分别用涂片法、流式细胞仪法和电镜检测两种药物处理后对细胞凋亡的影响 ,以TRAP Elisa法检测对端粒酶活性的影响。结果　端粒酶反义核酸单独或与梁金菇多糖协同处理HL 6 0均可提高细胞的凋亡率并抑制端粒酶活性 ,两者协同处理效果更显著。结论　端粒酶反义核酸可降低细胞的端粒酶活性并诱导细胞调亡 ,梁金菇多糖则可加强这种作用。     

多胺生物合成抑制诱导HL60细胞凋亡相关基因的克隆及表达

目的克隆多胺生物合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（ＤＦＭＯ）诱导ＨＬ６０细胞凋亡的相关基因,分析该基因表达及诱导凋亡的活性。方法采用差示杂交法筛选目的基因克隆;以Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、形态观察、流式细胞光度法（ＦＣＭ）分析及ＤＮＡ电泳梯形图,分别证明转染细胞中该基因表达及凋亡诱导。结果成功地克隆了ＤＦＭＯ诱导ＨＬ６０细胞凋亡的相关基因ｄＦ４,并证明了ｄＦ４在转染细胞中的表达及其诱导凋亡的活性。结论提示本研究克隆的ｄＦ４基因可能是与调控ＨＬ６０细胞凋亡有关的基因。