钙结合蛋白S100A11促进结直肠癌进展的作用及其机制研究

目的:探讨钙结合蛋白S100A11调控结直肠癌(colorectal cancer, CRC)进展的作用及其机制。方法:利用GEPIA、UALCAN和HPA等数据库分析S100A11在CRC中的表达情况及其与CRC临床分期和预后的关系,并利用CRC细胞系/永生化肠上皮细胞进行验证,利用RNA干扰实验进一步分析S100A11对CRC细胞迁移及CRC生物学通路的影响。结果:数据库分析结果显示,与正常结直肠组织相比,S100A11在CRC组织中表达显著升高,并且S100A11与CRC的晚期分期及不良预后密切相关。RT-qPCR和Western blot结果也显示,S100A11在CRC细胞中表达升高。敲低S100A11能够有效抑制SW480细胞的迁移和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)过程。沉默CRC细胞中S100A11的表达后,利用转录组测序和生信分析,共筛选出149个差异表达基因,这些差异表达基因的功能网络富集结果主要涉及到炎症性肠病、黏着斑和PI3K-Akt信号通路等。结论:本研究发现高表达的S100A11是CRC转移的重要因素...     

SEL1L3通过对P53信号通路的影响促进结直肠癌细胞增殖

[目的]探讨SEL1L3对结直肠癌细胞增殖的影响及其分子机制。[方法]分析TCGA数据库中结直肠癌样本SEL1L3表达水平,免疫组织化学染色检测结肠癌组织中SEL1L3的表达水平,Western blot及qPCR检测结肠上皮细胞及结肠癌细胞中SEL1L3表达水平。携带GFP的SEL1L3特异性敲除慢病毒感染RKO细胞,Western blot及qPCR验证SEL1L3敲除效率;荧光显微镜、MTT及平板克隆检测细胞增殖能力,AnnexinⅤ检测细胞凋亡;细胞凋亡信号通路芯片检测SEL1L3敲除后相关基因的表达,并通过Western blot进行验证。CDX模型检测SEL1L3敲除后RKO细胞在裸鼠体内成瘤能力。[结果] TCGA数据库分析结果显示SEL1L3在结直肠癌中表达显著高于正常组织。免疫组织化学染色结果表明,SEL1L3在结肠组织中表达显著高于正常组织（6.580±1.103 vs 1.390±0.263,P<0.01）,结肠癌细胞中SEL1L3的表达也显著高于正常结肠上皮细胞;细胞增殖实验结果表明,SEL1L3敲除后,细胞增殖能力显著降低（P<0.01）。Anne...     

沉默S100P基因抑制肺腺癌细胞A549增殖、迁移和侵袭

目的:探讨肺癌组织及细胞中S100P基因表达对增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法:在GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据库和HPA数据库（Human Protein Atlas）得到肺癌数据,分析S100P 基因在不同分型肺癌组织与正常组织中差异表达。使用shRNA -S100P RNA下调肺癌细胞系中S100P基因表达水平;细胞的增殖活性使用MTS比色法检测;细胞周期变化运用流式细胞仪检测;细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移能力和侵袭能力。RT-qPCR与Western blot分别验证S100P表达及细胞周期、凋亡蛋白表达水平。结果:S100P基因在肺癌组织中表达水平明显高于正常组织(P＜0.01);不同分型的肺癌组织中S100P基因表达存在差异。与对照组相比,下调S100P使A549增殖、迁移和侵袭能力均降低。结论:S100P基因在肺癌中高表达且下调后可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力。     

下调S100A2表达对结肠癌细胞增殖、侵袭迁移和Wnt信号通路的影响

目的 探讨S100钙结合蛋白A2(S100A2)在结肠癌增殖和侵袭迁移中的作用及可能机制。方法 通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测S100A2在结肠癌组织和细胞系中的表达情况。选择SW480细胞并分为3组：对照组、siRNA-NC组(阴性对照)和siRNA-S100A2组(下调S100A2表达)。采用MTT、划痕实验和Transwell小室实验探究S100A2在结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移过程中的作用,qPCR和Western blotting检测干扰S100A2对Wnt1/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路的影响。结果 与癌旁组织(1.00±0.05)或正常结肠上皮细胞株NCM460(1.00±0.07)比较,S100A2在结肠癌组织(1.66±0.07)和细胞SW620(1.38±0.10)、HT29(1.62±0.13)、LoVo(1.94±0.14)和SW480(2.03±0.08)中均高表达,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA-S100A2组的细胞活力及Wnt1、β-catenin和基质金属蛋白酶7水平低于对照组和siRNA-NC组(P<0.0...     

P14ARF、E2F1对结直肠癌发生发展的影响

肿瘤抑制因子P14ARF通过p53-MDM2-P14ARF细胞周期调节系统使细胞老化或凋亡，对肿瘤的发生发展起重要的抑制作用；E2F1可以作为转录因子参与调节细胞周期，然而高表达的E2F1也能诱导许多类型的细胞凋亡，因此E2F1具有促使癌变和诱导凋亡双向性质；P14ARF和E2F1直接影响肿瘤的发生、发展和预后，这关系着患者治疗方案的选择，因而日益受到重视。本文章旨在探讨P14ARF、E2F1与人结直肠癌发生发展的关系，就其机制和影响综述如下。     

bFGF促进肝癌Bel-7402细胞增殖的信号转导机制

目的:分析肝癌细胞系Bel-7402中Ras-Raf-ERK1/2途径介导的bFGF对细胞周期素E(cyclinE)表达及细胞增殖的影响,以探讨肝癌细胞增殖的信号转导机制。方法:bFGF处理后用流式细胞术检测细胞增殖情况;Western印迹检测ERK1/2激酶的活化;RT-RCR方法检测cyclinE的基因表达。结果:FCM结果表明bFGF诱导细胞进入S期(27.49%±0.72%→42.45%±1.06%);bFGF时、量效依赖性地诱导Bel-7402细胞ERK1/2活性增高和cy-clinEmRNA表达。25ng/mlbFGF作用Bel-7402细胞10minERK1/2活性达高峰为对照组的3.84倍,作用8h后cyclinEmRNA表达达高峰为对照组的5.15倍;MEK1抑制剂PD98059可抑制bFGF的这些作用。结论:Ras-Raf-ERK1/2途径介导bFGF对cyclinEmRNA表达的诱导进而促进Bel-7402细胞的细胞周期进程,在肝癌增殖过程中bFGF信号转导发挥了重要的作用。     

中期因子诱导上皮间质转化促进结直肠癌细胞增殖和侵袭的分子机制

目的:探讨中期因子（midkine,MK）诱导肠癌细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）促进结直肠癌增殖和侵袭的分子机制。方法:MTT法检测MK对肠癌细胞增殖及侵袭的影响,倒置显微镜下观察其形态学变化,Western blot检测其EMT标志物、NF-κB(p65)、Zbe1和MMP-9蛋白表达变化。结果:在10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml和200ng/ml的MK作用下,SW480细胞的增殖率分别为:（106.33±4.57）%、（119.83±6.01）%、（148.52±8.31）%和(162.51±8.98)%,（F=70.954,P＜0.01）;HCT116细胞的增殖率分别为:(116.49±9.77）%、（129.79±2.31）%、（155.38±8.98）%和（158.11±6.75）%,（F=55.027,P＜0.01）。100ng/ml MK作用下,SW480细胞的侵袭数为每视野（40.34±2.52）个,而NF-κB信号通路抑制剂5μmol/L Bay11-7082预处理后的侵袭数为每视野（14.13±2.06）个,（F=41.391,P＜0.01）;HCT116细胞的侵袭数为每个视野（42.21±3.25）个,而Bay11-7082预处理后的细胞侵袭数为每视野（14.32±2.52）个,（F=69.206,P＜0.01）。MK诱导SW480和HCT116呈现梭形或长条形改变,E-cad蛋白表达下调,Vimentin、β-catenin、NF-κB (p65)和MMP-9蛋白表达上调,而Zbe1蛋白表达无明显变化。结论:MK通过上调NF-κB(p65)信号蛋白诱导肠癌细胞上皮间质转化,促进下游靶蛋白MMP-9表达上调,从而促进肠癌细胞增殖和侵袭。     

长链非编码RNA AFAP1-AS1通过PTEN/p-AKT信号通路调控结直肠癌细胞增殖的分子机制研究

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肌动蛋白纤维相关蛋白1-反义RNA1(Actin filament-associatedprotein1-antisenseRNA1,AFAP1-AS1)调控结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)细胞增殖的分子机制。方法收集2014年7月—2018年6月深圳市第二人民医院消化内科和胃肠外科诊治的38例正常人及38例CRC患者的粪便标本,用Real time-PCR检测lncRNA AFAP1-AS1表达,同时检测人正常结肠上皮细胞株NCM460、人结直肠癌细胞株SW620和HCT116中lncRNA AFAP1-AS1的表达;将靶向siRNA转染到CRC细胞株SW620和HCT116中抑制AFAP1-AS1的表达;通过MTT测定si-AFAP1-AS1转染对CRC细胞增殖的影响;应用免疫印迹检测Cleaved caspase 3、Bcl-2、Bax、p-AKT、total-AKT和PTEN的水平。结果与正常人相比,CRC患者粪便中AFAP1-AS1的表达显著上升(P<0.01);与NCM460细胞相比,SW620和HCT11...     

LASP1基因对人结直肠癌LOVO细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的 探讨LASP1基因表达对人结肠癌（LOVO）细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响及其作用机制。方法 分别构建LASP1过表达质粒和LASP1干扰质粒转染LOVO细胞,qRT-PCR验证LASP1mRNA转染结果。MTT法、Tunel染色分别检测细胞增殖活性和细胞的凋亡情况,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。Westernblot测定细胞LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达。结果 质粒转染成功。LASP1过表达的LOVO细胞的增殖、迁移和侵袭能力增加,细胞凋亡率降低,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达升高（P<0.01）。而敲减LOVO细胞中LASP1的表达后,细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱,细胞凋亡率增加,细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达降低（P<0.01）。结论 LASP1可正向调控FAK/AKT信号通路,促进LOVO细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。     

CTHRC1增强结直肠癌细胞侵袭能力促进结直肠癌转移的机制研究

  目的  探讨胶原三股螺旋重叠蛋白1（collagen triple helix repeat containing 1,CTHRC1）对结直肠癌细胞生物学特性的影响及可能的调控机制。  方法  采用实时定量PCR技术检测上调或抑制miR-520d-5P的表达,探讨其对基因CTHRC1的调控作用,双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与基因CTHRC1的3'UTR区之间是否相互结合。采用Western blot法检测6株不同结直肠癌细胞系及临床结直肠癌配对标本中基因CTHRC1的蛋白表达水平。构建稳定转染基因CTHRC1的结直肠癌细胞系;CCK-8、Transwell等方法检测稳定转染目的基因后结直肠癌细胞的增殖、侵袭能力的变化。  结果  在配对结直肠癌患者组织中发现,正常组织中miR-520d-5P的表达高于癌组织（P < 0.001）,基因CTHRC1的表达趋势相反（P < 0.001）,且两者的表达呈负相关。通过miR-520d-5P模拟类似物mimics及抑制物inhibitor的瞬时转染实验发现其对基因CTHRC1的蛋白表达有负向调节作用。双荧光素酶实验验证miR-520d-5P与CTHRC1的3'UTR之间存在相互结合。稳定转染基因CTHRC1后,细胞的增殖能力下降,但侵袭能力提高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。在配对结直肠癌标本中,原发癌组织中基因CTHRC1的蛋白表达水平高于正常组织（P=0.003）。  结论  miR-520d-5P对基因CTHRC1蛋白表达具有负调控作用。基因CTHRC1可以增强结直肠癌细胞的侵袭能力,抑制结直肠癌细胞的增殖能力,且与miR-520d-5P具有临床相关性。      

Galectin-3 induces cell migration via a calcium-sensitive MAPK/ERK1/2 pathway

The presence and level of circulating galectin-3 (Gal-3), a member of the galectin family, is associated with diverse diseases ranging from heart failure, immune disorders to cancer metastasis and serves as a biomarker of diagnosis and treatment response. However, the mechanisms by which exogenous Gal-3 affects pathobiology events remain elusive. In the current study, we found that exogenous Gal-3 slightly delays, while prolonging tyrosine phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) in HeLa cells through a calcium-sensitive and PKC-dependent signaling pathway. The activation was dependent on the sugar-binding properties of Gal-3, since the antagonist lactose could inhibit it. The sugar-binding motif of Gal-3 was required for the activation of ERK1/2. The activation of ERK1/2 was necessary for the initiation and induction of cell migration associated with the phosphorylation of paxillin. All the results presented in this study suggest a novel calcium-sensitive and PKC-dependent pathway through which circulating Gal-3 promotes cell migration and activating the ERK1/2. Taken together, the data depicted here propose a biological function and a target for the diseases'' associated circulating Gal-3.     

钙结合蛋白S100A2对肝癌细胞生长增殖的抑制作用

目的 探讨钙结合蛋白S100A2对肝癌细胞生长增殖的抑制作用。方法 构建绿色荧光蛋白－S100A2融合基因的重组表达载体,经脂质体介导转入QGY7701肝癌细胞中进行表达,应用荧光显微镜直接观察融合蛋白的表达和定位;通过肿瘤细胞集落形成实验,观察外源性S100A2表达对体外培养细胞增殖能力的影响;以流式细胞仪分析S100A2对肿瘤细胞增殖周期的影响;通过裸鼠接种实验,观察S100A2对肿瘤细胞在体内增殖能力的影响。结果 绿色荧光蛋白－S100A2融合蛋白表达、定位在胞浆和胞核,而单一的绿色荧光蛋白（载体对照）则只定位在胞浆中;细菌在液体和半固体培养基中培养的细胞集落形成率,实验组（QGY7701／A2）明显低于载体对照组（QGY7701／pc）和细胞对照组（QGY7701）;细胞周期分析显示,实验组细胞有G1和G2期阻制,DNA合成量明显减少;实验组裸鼠体内移植瘤重量明显低于两个对照组。结论 外源性S100A2可抑制QGY7701肝癌细胞在体外的集落形成和在裸鼠体内的增殖能力,并对细胞周期有阻滞作用。     

S100P sensitizes ovarian cancer cells to carboplatin and paclitaxel in vitro

Objective

To investigate the relationship between the S100P and the sensitivity of ovarian cancer to chemotherapeutics.

Method

We established stable cell lines of ovarian cancer cells, SKOV3 and OVCAR3, that overexpress human S100P. We also transiently transfected the parent cell lines with S100P-targeted siRNA for down-regulation of S100P expression. The sensitivity of all transfected and untransfected cell lines to carboplatin and paclitaxel was detected by MTT assay.

Results

For both cells, IC_50s decreased to carboplatin and paclitaxel (p < 0.05), with overexpression of S100P compared to untransfected cells. Alternatively, with down-regulation of S100P by siRNA, the IC₅₀ to carboplatin and paclitaxel increased in each case (p < 0.05), which was significantly higher compared to untransfected cells.

Conclusion

Changes in expression levels of S100P in SKOV3 and OVCAR3 cells results in variable susceptibility to carboplatin and paclitaxel. These data suggest that S100P contributes to chemosensitivity to carboplatin and paclitaxel in ovarian cancer cells.     

S100P在胃癌中的下调表达及意义

目的探讨S100P在胃癌组织中的表达情况及与胃癌临床病理参数间的关系。方法选取93例胃癌石蜡组织标本及相对应的部分冻存胃癌组织及其配对正常组织为研究对象,应用免疫组织化学、RT-PCR、Western Blot方法检测S100P在胃癌及癌旁组织中的表达。结果免疫组织化学分析表明,胃癌中S100P蛋白主要定位于胞质和胞核,在52.7% (49/93)的胃癌组织和几乎所有的正常胃黏膜中可检测到表达,与正常胃黏膜相比,胃癌组织中的表达明显下调,其下调表达与患者肿瘤的侵袭深度(P=0.006)及肿瘤的大小相关(P=0.001)。同时,S100P在核酸和蛋白水平的表达具有相关性（P=0.030）,不能够作为独立的预后因素（P=0.347）。结论S100P在胃癌组织中表达下调,其表达与肿瘤的侵袭转移及肿瘤大小相关,并可以作为判断患者预后的辅助指标。     

AMPKg在NSCLC组织中表达及对A549细胞增殖迁移机制探讨

目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)亚基γ(AMPKg)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况和对NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移的影响及机制。方法选取2010-01-01-2014-01-01新疆医科大学附属肿瘤医院120例NSCLC患者临床和病理资料。免疫组化法检测NSCLC癌组织及癌旁组织AMPKg的表达,根据免疫评分分为高表达组和低表达组。采用NSCLC A549细胞株进行实验,慢病毒转染抑制NSCLC细胞中AMPKg的表达,分为shCtrl组(转染空病毒组)和shAMPKg组(慢病毒shRNA-AMPKg组)。细胞增殖实验、划痕实验和Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力。蛋白质印迹法检测蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(Akt/mTOR)信号通路相关分子变化。KaplanMeier绘制生存曲线,Log-rank检验AMPKg高表达和低表达组别总生存率的差异,单因素和多因素Cox风险回归模型分析影响NSCLC预后的独立危险因素。结果 120例NSCLC患者中,AMPKg阳性率为58.3%(70/120)。AMPKg的异常表达与NSCLC患者病理类型(χ²=7.792,P=0.005)和TNM分期(χ²=15.664,P<0.001)相关。单因素Cox分析中病理类型(HR=1.945,95%CI:0.521~1.548,P=0.046)、TNM分期(HR=1.677,95%CI:1.267~2.351,P=0.002)和AMPKg表达(HR=2.438,95%CI:1.706~4.581,P<0.001)是影响NSCLC患者预后的危险因素。多因素Cox分析中,TNM分期(HR=1.522,95%CI:1.032~2.166,P=0.004)和AMPKg表达(HR=2.093,95%CI:1.103~3.537,P=0.031)是影响NSCLC患者预后的主要独立危险因素。中位生存期AMPKg高表达组(38.6个月)低于低表达组(59.3个月),χ²=20.020,P<0.001,AMPKg高表达的患者预后较差。细胞实验结果显示抑制AMPKg表达后,shAMPKg组细胞增殖能力在第4天(F=83.070,P<0.001)、第5天(F=81.200,P<0.001)降低。shAMPKg组细胞划痕愈合率为(84.80±6.31)%,小于shCtrl组(78.08±6.53)%,t=6.106,P=0.003。shAMPKg组和shCtrl组A549细胞迁移数分别为(96.84±39.86)个和(423.30±31.91)个,差异有统计学意义,t=11.070,P=0.004。shAMPKg组细胞和shCtrl组A549细胞侵袭数分别为(119.23±21.76)个和(561.67±15.67)个,差异有统计学意义,t=28.580,P<0.001。Akt/mTOR信号通路中shAMPKg组p-mTOR、p-AKT、EIF4G蛋白表达减少。结论高表达AMPKg可能预测NSCLC患者的疾病进展和不良预后,AMPKg促进NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能通过调节Akt/mTOR信号通路影响NSCLC的进展,提示AMPKg可能是NSCLC的一种潜在分子标志物。     

Differential regulation of MAP kinase cascade in human colorectal tumorigenesis

Hyper-activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) has recently been reported in several human cancers and activation of MAPK in those cancers may be associated with carcinogenesis through aberrant cell proliferation. To understand the roles of the MAPK pathway in colorectal tumorigenesis, we examined the status of extracellular signal-regulated protein kinases (ERK1/2) in 21 colorectal tumour specimens and compared it with that of paired normals. The specific MAPK activities were two- to tenfold lower in 71% (15 out of 21 cases) of colorectal tumours compared to those in paired normals. The individual MAPK kinase (MEK) correlated with MAPK activities (P = 0.006). Reduction of the MAPK and MEK activities in colorectal tumours was also observed in adenomas. These results suggested that down-regulation of the MAPK cascade may be caused by early genetic event(s) and that it may be related to the loss of normal growth control. Although MAPK activities were down-regulated both in adenomas and carcinomas, activities of the MAPKs in carcinomas were higher than those of paired adenomas. These results suggested that MAPK activities may be increased in the adenoma-to-carcinoma sequence and that it may play a role in the tumour progression. Observation of the differential regulation of MAPK activities in colorectal tumorigeneis suggested roles for the MAPK pathway in both positive and negative controls of cell growth.     

大肠癌S－100~＋树突状细胞和预后的关系

用Ｓ－１００蛋白质抗体对７１例不同预后的大肠癌患者原位癌组织进行ＡＢＣ免疫组化染色。结果表明术后生存期≥５年者癌组织Ｓ－１００＋树突状细胞ＤＣ）数量明显高于术后生存期＜５年者（Ｐ＜０．００１）。在具有同一种病理因素的患者中，生存期不同者其癌组织ＤＣ数量差异有显著性。揭示癌组织ＤＣ数量可作为估计患者预后的指标之一。