miR-216b通过靶向调控蛋白激酶Cα基因的表达抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭

目的 明确miR-216b是否通过靶向调控蛋白激酶Cα(PKCα)基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.方法 构建PKCα 3'非编码区(UTR)-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告系统检测miR-216b对PKCα 3'UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-216b模拟物转染鼻咽癌细胞CNE2,采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测PKCα mRNA和蛋白的表达水平.将PKCαsiRNA转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验和Transwell侵袭实验观察PKCα基因表达下调对CNE2细胞增殖和侵袭的影响.将PKCα重组质粒与miR-216b模拟物共转染CNE2细胞,通过MTS细胞增殖实验检测CNE2细胞的增殖能力.结果 双荧光素酶报告检测结果显示,miR-216b能特异性地与PKCα mRNA的3'UTR结合,下调荧光素酶活性,其活性约为转染对照模拟物细胞的62.4％.过表达miR-216b的CNE2细胞中PKCα mRNA和蛋白的表达水平均降低,与对照细胞比较,分别降低49.1％和55.7％.siRNA干扰PKCα表达能抑制CNE2细胞的增殖和侵袭能力,能部分模拟miR-216b的抑瘤功能.过表达PKCα能部分逆转miR-216b对CNE2细胞的增殖抑制作用.结论 miR-216b通过靶向调控PKCα基因的表达来抑制鼻咽癌细胞的增殖和侵袭.     

沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察转移相关基因1（MTA1）基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨 MTA1基因在胃癌发生发展中的作用。方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰 RNA（siRNA） 转染到胃癌细胞株 SGC7901中。运用Real time PCR 和Western blot 技术检测SGC7901细胞内MTA1的 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MTA1 siRNA 可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在 mRNA 和蛋白水平上的表达（P﹤0.01）。CCK-8实验表明MTA1 siRNA 转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降。结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株 SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖。MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用。     

miRNA-124-3p通过靶向STAT3抑制鼻咽癌细胞生长和转移

目的:探讨miR-124-3p在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞的影响及其机制.方法:收集鼻咽癌组织标本90例和慢性鼻咽炎症组织标本85例,运用qRT-PCR方法检测组织标本和CNE1、CNE2、SUNE1、HONE1、5-8F、6-10B及C666-1鼻咽癌细胞株和永生化鼻咽上皮细胞NP69中miR-124-3p的表达,脂质体介导的转染方法下调高表达miRNA-124-3p的鼻咽癌细胞株CNE2,同时上调低表达miRNA-124-3p的鼻咽癌细胞株C666-1.CCK8法、流式细胞技术、细胞划痕实验、Transwell实验和Boyden小室检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的变化;生物信息学靶基因预测miRNA-124-3的靶基因并运用荧光素酶报告实验验证,Western Blotting检测细胞中STAT3及其下游的p-STAT3、CCND2和MMP2蛋白表达水平.结果:鼻咽癌组织中miRNA-124-3p表达水平与慢性鼻咽炎症组织相比明显下调(P ＜0.001);miRNA-124-3p的表达水平与肿瘤大小及范围、区域淋巴结受累情况及临床分期显著相关(均P＜0.001);7种鼻咽癌细胞与NP69细胞相比较,miRNA-124-3p的表达水平均显著低于NP69(均P＜0.05).miRNA-124-3p过表达后C666-1细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭均显著低于空白对照组和mimics NC组(均P＜0.05);miRNA-124-3p抑制后CNE2细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭均显著高于inhibitor NC组和空白对照组(均P＜0.05).转染miRNA-124-3p后C666-1细胞STAT3、p-STAT3、CCND2和MMP2的表达显著降低,抑制CNE2细胞的miRNA-124-3p表达后STAT3、p-STAT3、CCND2和MMP2的表达显著降低.结论:miR-124-3p可通过下调靶基因STAT3的表达,进而影响其下游的p-STAT3、CCND2和MMP2信号通路,从而促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭.     

siRNA沉默雄激素受体对人结肠癌HCT-8细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:利用小干扰RNA(siRNA)沉默人结肠癌HCT-8细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达,观察AR敲除对癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,初步探讨AR在结肠癌中的功能.方法:利用qRT-PCR和Western blot检测HCT-8细胞及正常人肠上皮细胞中AR的表达;siRNA转染HCT-8细胞沉默AR表达,利用qRT-PCR和Western blot检测转染效率;流式细胞术检测沉默AR后对HCT-8细胞周期的影响;CCK-8法检测沉默AR后对HCT-8细胞增殖的影响;Transwell实验检测沉默AR后对HCT-8细胞迁移及侵袭的影响.结果:AR在人结肠癌HCT-8细胞中高表达;siRNA能有效沉默HCT-8细胞中AR的mRNA及蛋白的表达.与对照组相比,沉默AR表达能够明显抑制HCT-8细胞的增殖、迁移和侵袭能力.结论:AR在人结肠癌HCT-8中高表达并能够促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.     

上调 ECRG4表达对鼻咽癌 CNE1细胞增殖、克隆形成和侵袭的影响

目的：研究 ECRG4对鼻咽癌细胞生物学行为的影响。方法：构建稳定表达 ECRG4的鼻咽癌细胞株CNE1、ECRG4c1和 ECRG4c2。MTT 实验、克隆形成实验和侵袭实验分别测定 ECRG4高表达对鼻咽癌细胞增殖能力、克隆形成能力和侵袭能力的影响。结果：成功构建 ECRG4高表达的鼻咽癌细胞,和对照细胞相比, ECRG4的高表达可以抑制 CNE1细胞的增殖能力、克隆形成能力和侵袭转移能力。结论：ECRG4的高表达抑制 CNE1细胞的增殖、克隆形成和侵袭转移能力。在鼻咽癌细胞中发挥抑癌基因功能。     

ALDH1A1基因表达沉默对鼻咽癌细胞的增殖抑制作用

目的：探讨干扰乙醛脱氢酶1A1（ALDH1A1）基因表达后对鼻咽癌5-8F和CNE2细胞生长、增殖的影响。方法：构建ALDH1A1 siRNA 表达质粒稳定转染鼻咽癌5-8F和CNE2细胞,Western blot 检测干扰ALDH1A1基因蛋白表达水平。MTT、平板克隆、裸鼠成瘤实验检测干扰ALDH1A1基因前后鼻咽癌5-8F和CNE2细胞的增殖、克隆及成瘤能力。结果：与空白组和阴性对照组相比,干扰ALDH1A1表达后5-8F和CNE2细胞增殖、克隆及肿瘤形成能力明显受到抑制。结论：干扰ALDH1A1基因表达,可抑制鼻咽癌细胞的生长、增殖、克隆及成瘤能力。     

siRNA 沉默artemin 蛋白对食管癌TE11细胞侵袭能力的影响

目的:通过siRNA 干扰技术沉默ARTN 基因在人食管癌细胞TE11中的表达,研究其对人食管癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:设计并合成3 条特异性针对ARTN 基因的siRNA ,构建了真核表达载体pSilencer 2.1-ARTN-siRNA,转染到TE11细胞中,经Real-time PCR和Western blot检测ARTN 在mRNA 和蛋白水平的表达;通过MTT 比色法、细胞划痕实验和Boyden小室侵袭实验观察转染pSilencer 2.1-ARTN-siRNA 后细胞增殖、迁移和侵袭能力的改变。结果:转染重组质粒pSilencer 2.1-ARTN-siRNA后人食管癌细胞TE11中ARTN 的mRNA 表达受到抑制,蛋白表达降低;通过体外实验表明,细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力均减弱。结论:siRNA 沉默ARTN 基因的表达可降低人食管癌细胞TE11的增殖、迁移和侵袭能力,ARTN 可能是食管癌的一个生物治疗靶点,有望成为治疗食管癌的新途径。      

ZNF488对电离辐射诱发的鼻咽癌细胞CNE1侵袭迁移能力的影响

[目的]研究ZNF488 siRNA对电离辐射诱发的鼻咽癌CNE1侵袭迁移能力的影响.[方法]采用qRT-PCR和Western blot检测ZNF488 siRNA转染效率.采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测电离辐射对鼻咽癌CNE1细胞侵袭迁移能力的影响.采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测沉默ZNF488后,电离辐射诱发的CNE1细胞侵袭迁移能力是否改变.[结果]在mRNA和蛋白水平,实验组(siZNF488组)表达量均明显低于对照组(siRNA-Ctrl 组),其中实验组ZNF488 mRNA水平为对照组的(0.54±0.12)倍(P=0.023).划痕实验证明电离辐射明显增强鼻咽癌CNE1细胞迁移能力;Traoswell侵袭实验检测到0Gy组侵袭细胞数为302.67± 18.77,4Gy组侵袭细胞数为371.67± 15.63,4Gy组侵袭细胞数为0Gy组(1.23±0.03)倍(P=0.006).沉默ZNF488后,电离辐射诱发的CNE1细胞侵袭迁移能力明显减弱,这一功能的实现与上皮间质转化(EMT)进程的逆转息息相关.[结论]ZNF488 siRNA通过逆转EMT进程抑制鼻咽癌细胞CNE1电离辐射诱发的侵袭迁移能力.     

体外siRNA靶向抑制PI3Kp85α基因对人胃癌AGS细胞株的作用

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）技术沉默PI3Kp85α基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 设计3条靶向抑制PI3Kp85α基因的siRNA片段（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3）,分别转染人胃癌AGS细胞,并设阴性对照组及空白组。Western blotting检测siRNA序列对PI3Kp85α蛋白表达的影响。利用MTT实验、划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测下调PI3Kp85α水平对AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 转染siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3的AGS细胞中PI3Kp85α蛋白水平均低于阴性对照组及空白组（P＜0.05）。转染siRNA-3的AGS细胞PI3Kp85α蛋白表达降低最明显,抑制率达80％,故选择siRNA-3进行后续实验。转染24h后,PI3Kp85α siRNA转染组细胞增殖能力明显低于对照组细胞（P＜0.05）。24h体外划痕实验显示,PI3Kp85α siRNA转染组的划痕愈合能力明显低于对照组（P＜0.05）。Transwell实验显示,PI3Kp85α siRNA转染组细胞的细胞穿膜数明显低于对照组（P＜0.05）。结论 通过siRNA能明显下调PI3Kp85α蛋白在胃癌细胞AGS中的表达,并抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。     

RNA干扰CTSL表达抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移

目的：构建组织蛋白酶L基因(cathepsin L, CTSL)RNAi的真核表达载体,探讨干扰CTSL基因表达对卵巢癌细胞侵袭和转移的影响。方法：设计并合成4对CTSL小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染卵巢癌A2780细胞,RT-PCR检测各转染细胞CTSL的表达,筛选沉默效果最好的siRNA序列。设计并合成CTSL-shRNA序列,与psilence4.1-CMV-neo载体连接,构建psilence4.1-CTSL表达载体。psilence4.1-CTSL转染A2780细胞,获得稳定转染克隆A2780-CTSL。RT-PCR和Western blotting验证CTSL基因干扰效果,MTT法和集落形成实验检测A2780细胞的增殖,流式细胞术检测A2780细胞周期,Transwell侵袭小室实验检测A2780细胞体外侵袭和迁移能力。结果：筛选出干扰效果最好的siRNA-CTSL-1202序列,并成功构建相应的CTSL-shRNA表达载体psilence4.1-CTSL。稳定转染psilence4.1-CTSL能沉默A2780细胞中CTSL的表达。沉默CTSL基因后可抑制A2780细胞的侵袭和转移,但不影响A2780细胞的增殖、细胞周期和黏附活性。结论：成功构建CTSL基因siRNA的真核表达载体,RNA干扰CTSL基因表达可抑制卵巢癌细胞的侵袭和转移。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

Clinico-Pathological Study of 50 Cases of Tumours of Larynx

Otoacoustic emissions have been advocated in the management of otitis media with effusion. However, otoacoustic emissions cannot differentiate different types of hearing loss. This study was conducted to find factor that can differentiate otitis media with effusion from other common causes of hearing loss in children. Children were enrolled in the study and divided in four groups consisting of 25 ears each after pure tone and impedance audiometry: (1) Otitis media with effusion group, (2) Normal ear group, (3) Sensory-neural hearing loss group, (4) Chronic suppurative otitis media group. Otoacoustic emissions were recorded and results were analyzed statistically. The normal hearing group had significant difference from other groups but total band reproducibility of transient evoked otoacoustic emissions did not show any statistical difference in the cases groups. In distortion product otoacoustic emissions, group 1 showed significant difference from group 3 and group 1 had significant difference from all other groups at 4 kHz. The study did not find any factor that differentiates otitis media with effusion from other diseases. Although, distortion product otoacoustic emissions can indicate otitis media with effusion but impedance audiometry should be the main tool in the management of otitis media with effusion.     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。