新型维甲酸衍生物ATPR体外诱导消化系统肿瘤细胞分化的研究

目的观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯（ATPR）对胃癌细胞株SGC-7901、肝癌细胞株BEL-7402、结肠癌细胞株HT-29的生长和分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法,检测细胞的生长抑制率;分光光度法检测胃癌细胞分化标志酶碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶（LDH）活性和肝癌细胞分化标志酶LDH、谷酰转肽酶（γ-GT）活性;酶联免疫法检测肝癌细胞标志物甲胎蛋白（AFP）和结肠癌细胞标志物癌胚抗原(CEA)水平;流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果ATPR呈浓度依赖性抑制肿瘤细胞增殖;并使SGC-7901中ALP、LDH活性下降,BEL-7402中AFP、LDH、γ-GT水平下降,HT-29中CEA水平升高;G0/G1期细胞表达量增加,细胞周期进程受影响,细胞阻滞在G0/G1期。结论ATPR对上述三种实体瘤细胞株具有诱导分化的作用。     

人参皂甙 Rh2对人肝癌细胞 SMMC-7721的诱导分化作用

背景与目的:目前寻找低毒高效的分化诱导剂是肿瘤诱导分化治疗的关键.人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射等多种生物学活性,其主要的活性有效成分人参皂甙 Rh2( ginsenoside Rh2,G-Rh2)具有较强的抗癌活性,但其抗肿瘤机制还不十分清楚.因此,本研究探讨 G-Rh2对人肝癌细胞株 SMMC-7721的生长抑制作用及抗癌机制.方法:以 MTT法、光镜、电子显微镜观察 G-Rh2对 SMMC-7721细胞增殖、形态、超微结构的影响.用免疫组化染色和 ELISA法检测细胞浆中甲胎蛋白( alpha-fetoprotein, AFP)合成情况,酶促反应试剂盒检测细胞浆中碱性磷酸酶( alkaline phosphatase, ALP)和γ谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT)活性,放射免疫法检测细胞 AFP和白蛋白( albumin, Alb)分泌量,并观察 G-Rh2对以上指标的影响.结果: G-Rh2以时间依赖性和浓度依赖性抑制 SMMC-7721细胞增殖, 10 μ g/ml G-Rh2作用 6天抑制率达 50%;而 20 μ g/ml G-Rh2作用 4天抑制率近 50%.经 20 μ g/ml G-Rh2作用 4天,肝癌细胞形态及亚细胞结构向正常肝细胞方向逆转. 10 μ g/ml、 20 μ g/ml G-Rh2作用 SMMC-7721细胞后, AFP合成明显下降( P< 0.05),分泌量从 6.60± 0.30下降到 2.35± 0.06( P< 0.01);γ-GT及耐热型 ALP活性显著降低( P< 0.01); ALP活性及 Alb分泌量显著升高( P< 0.01).结论: G-Rh2具有诱导人肝癌细胞 SMMC-7721向正常细胞分化的作用.     

苦参碱诱导HepG2细胞分化相关代谢指征的变化

目的;研究苦参碱抑制HepG2细胞增殖的机制。方法：（0－1．5）g/L苦参碱作用HepG2细胞3天,免疫细胞化学和放免法检测AFP、PCNA、cAMP、cGMP量的改变;亲和层析法分离肝癌GGT（HSGGT）,酶动力法检测HSGGT和GGT酶活性。结果：反应细胞分化的指标cAMP升高,cAMP／cGMP比值升高。反应细胞增殖的指标AFP、PCNA、cGMP、GGT、HSGGT量均降低。结论：苦参碱在代谢水平上诱导了HepG2细胞分化,是苦参碱抑制HepG2细胞增殖的机制之一。     

羟基喜树碱诱导Bel-7402人肝癌细胞分化的研究

目的　探讨羟基喜树碱诱导Bel -740 2人肝癌细胞分化作用 ,为肝癌的分化治疗提供可借鉴的资料。方法　选用反映肝细胞恶变的甲胎蛋白 (AFP)的分泌量、γ -谷氨酰转肽酶 (γ -GT)和醛缩酶 (ALD) ,反映肝癌细胞分化的酶学指标酪氨酸 -α -酮戊二酸转氨酶 (TAT) ,鸟氨酸氨基甲酰转移酶 (OCT)和碱性磷酸酶 (ALP)作为观察肝癌细胞恶性表型逆转的指标。结果　Bel -740 2人肝癌细胞经 0 0 5mg/ml羟基喜树碱处理后 ,AFP分泌量明显低于对照组 ,γ -GT和ALD活力也明显低于对照组 ;相反 ,OCT、TAT和ALP的活力则明显高于对照组 ,差异均具有显著性 (P <0 0 5 )和 (P <0 0 1)。结论　证明羟基喜树碱是体外培养Bel -740 2人肝癌细胞有效的分化诱导剂     

丁酸钠对 Bel-7402 人肝癌细胞几种酶活性的影响

为了探讨丁酸钠对人肝癌细胞各种酶活性的影响，采用丁酸钠处理Ｂｅｌ－７４０２人肝癌细胞，测定其γ－谷氨酰转肽酶（γ－ＧＴ）、酪氨酸－α－酮戊二酸转氨酶（ＴＡＴ）、醛缩酶（ＡＬＤ）的比活力和细胞增殖速度。结果显示，２．５ｍｍｏｌ／Ｌ和５．０ｍｍｏｌ／Ｌ的丁酸钠能明显抑制人肝癌细胞增殖，并使肝癌标志酶γ－ＧＴ活性及反映肝细胞恶变或损伤的ＡＬＤ活性明显降低（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５），而使反映肝细胞分化的ＴＡＴ活性明显升高（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）。结果表明，丁酸钠能引起人肝癌细胞γ－ＧＴ、ＴＡＴ、ＡＬＤ明显改变，提示这几种酶可作为肝癌细胞分化诱导的酶学指标     

人脐带来源间充质干细胞向HepG2肝癌细胞原位移植瘤的归巢及分化

目的:观察人脐带来源的间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cell,HUMSC)向HepG2肝癌细胞原位移植瘤的归巢及分化.方法:二步法体外诱导HUMSC向肝细胞分化,通过Real-time PCR和Western blotting检测不同时间点HUMSC中肝细胞特异性基因甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)及白蛋白(albumin,ALB)mRNA和蛋白水平的变化;Transwell实验观察HUMSC在HepG2肝癌细胞条件培养基作用下的趋化现象;采用皮下-原位移植的方法建立BALB/c裸鼠的HepG2肝癌细胞原位移植瘤模型,利用慢病毒感染的方法将HUMSC标记CMV或AFP启动子驱动的fLuc,制备成MSC.CMVLuc或MSC.AFPLuc,并将其注射入荷瘤肝组织,IVIS成像系统观察MSC.CMVLuc向肿瘤部位的迁移归巢及MSC.AF-PLuc在肝癌微环境中向肝细胞分化.结果:HUMSC在体外诱导培养过程中出现细胞形态学变化证明其向肝细胞分化,同时诱导培养后AFP、ALB mRNA和蛋白的表达明显升高(均P＜0.05);HUMSC向HepG2肝癌细胞的趋化呈瘤细胞密度依赖性(P ＜0.01);MSC.CMVLuc注射后2d迁移并聚集于肝脏,注射后5d肝脏内发光信号进一步增强;MSC.AFPLuc肝内注射后24h已向肝细胞分化,注射第7天AFP启动子活性最强,注射第9天活性消失.结论:在小鼠体内外证明了HUMSC具有向肝脏归巢及分化的能力,为今后MSC应用于肝癌基因靶向治疗提供了一种新的策略.     

人肝癌HepG2细胞表达甲胎蛋白抑制AMD3100诱导凋亡的研究北大核心CSCD

目的研究CXCR4信号对人肝癌HepG2细胞增殖及甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)表达在肝癌细胞耐受诱导凋亡中的作用。方法 MTT法检测CXCR4信号的拮抗剂AMD3100对人肝癌细胞HepG2增殖的影响,并用Western blot分析AMD3100处理前后AFP、CXCR4的表达变化;用RNA干扰技术抑制AFP表达24 h后再给予AMD3100处理24 h,荧光显微镜观察HepG2细胞的形态学变化以及流式细胞术分析细胞的凋亡情况。结果 AMD3100对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显的抑制作用;AMD3100处理后HepG2细胞的CXCR4和AFP表达明显受到抑制;干扰AFP表达可协同AMD3100诱导HepG2细胞凋亡。结论 HepG2细胞通过表达AFP导致癌细胞耐受AMD3100诱导的凋亡。     

苦参碱诱导大鼠肝卵圆细胞表型改变

背景与目的:在肝细胞癌发生过程中出现卵圆细胞不典型增生,阻断其恶变或诱导其向肝细胞方向分化是肝癌化学预防的重要途径,为寻找有效的卵圆细胞分化诱导药物,我们建立了大鼠卵圆细胞增殖模型,研究苦参碱对化学诱发肝癌模型中卵圆细胞表型的改变。方法:SD大鼠喂饲2-乙酰氨基芴加三分之二肝切除术建立卵圆细胞增殖模型,模型组、低剂量苦参碱组、高剂量苦参碱组、对照组,光镜、透射电镜观察卵圆细胞的超微结构;免疫组织化学方法检测造血干细胞标志Thy-1、甲胎蛋白(alphafetoprotein,AFP)表达的变化;酶组织化学方法检测γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase,γ-GT酶)、三磷酸腺苷酶(adenosinetriphosphatase,ATP酶)表达的变化。结果:超微结构显示高剂量苦参碱组卵圆细胞体积较模型组大,含有更多的粗面内质网等细胞器。Thy-1免疫组化表达指数模型组为8.15±2.64,低剂量苦参碱组为5.27±1.32,高剂量苦参碱组为3.83±0.35,对照组为1.63±0.22,高剂量苦参碱组显著低于模型组(P<0.05);AFP阳性细胞计数模型组为15.36±4.42,低剂量苦参碱组为9.75±2.41,高剂量苦参碱组为7.33±1.38,对照组为2.51±0.93,高剂量苦参碱组显著低于模型组(P<0.05);低剂量苦参碱对γ-GT阳性病灶抑制率为33.35%,高剂量苦参碱抑制率为55.37%,高剂量苦参碱组显著高于低剂量苦参碱组(P<0.05)。结论:苦参碱抑制卵圆细胞增生,使卵圆细胞的超微结构发生改变,降低Thy-1、AFP、γ-GT酶表达,表明苦参碱可诱导卵圆细胞表型改变。     

姜黄素抑制肝癌细胞系HepG2的增殖、侵袭及其机制

目的:探索姜黄素对肝癌HepG2细胞系增殖、侵袭能力的影响及其可能机制。方法:用不同浓度的姜黄素处理人肝癌HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖,采用Transwell 实验检测细胞的侵袭能力。分别提取细胞总mRNA及总蛋白,运用实时定量PCR（qRT-PCR）及Western blotting方法来检测姜黄素对HepG2细胞侵袭相关分子（MMP-2及MMP-9）及COX-2表达影响。结果:不同剂量的姜黄素均可以抑制肝癌HepG2细胞的增殖活性,与对照组相比差异显著（P＜0.05）;随着姜黄素浓度的增加,HepG2细胞的侵袭能力逐渐降低;姜黄素可以从mRNA及蛋白水平下调侵袭相关分子MMP-2、MMP-9的表达;姜黄素可以下调COX-2的mRNA及蛋白表达水平,与对照组相比差异有统计学意义。结论:姜黄素可以抑制肝癌HepG2细胞的增殖及侵袭能力,该作用可能与下调侵袭相关分子及COX-2的表达有关。     

钩藤酸E对人肝癌HepG2细胞的抑制作用及其机制研究

目的:通过体外实验研究钩藤酸E(UAE)抑制人肝癌细胞HepG2的细胞增殖作用,并进一步研究其作用机制.方法:MTT法考察钩藤酸E对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,通过电镜观察细胞微细结构变化,流式细胞术进一步验证细胞凋亡,并检测细胞周期变化.结果:研究发现UAE能抑制HepG2细胞增殖.电镜分析证实UAE引起细胞凋亡.流式细胞术检测细胞凋亡主要发生于G0/G1期.结论:钩藤酸E诱导人肝癌细胞HepG2的细胞增殖,诱导其发生凋亡.     

下调 ZNF139表达对子宫内膜癌细胞 RL95-2增殖和凋亡的影响及其机制

目的：观察 ZNF139表达下调后子宫内膜癌细胞增殖及凋亡变化,并探讨其作用机制。方法：West-ern blot 及 qRT - PCR 检测子宫内膜癌细胞株中 ZNF139蛋白及 mRNA 表达,采用小干扰 RNA（siRNA）转染RL95-2细胞,对 ZNF139表达进行沉默,MTT 检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡,Western blot 及 qRT -PCR 检测凋亡相关基因水平。结果：各细胞株中 ZNF139蛋白及 mRNA 均有表达,RL95-2细胞中表达最高（F =9.345,P ﹤0.05;F =12.269,P ﹤0.01）。MTT 显示,在72h 及96h,siZNF139转染后 RL95-2细胞增殖能力下降（F =12.452,P ﹤0.05;F =14.378,P ﹤0.05）;流式细胞术显示,siZNF139转染后 RL95-2细胞凋亡率升高（F =27.084,P ﹤0.01）;Western blot 显示,在 siZNF139组,凋亡相关基因 MMP -7、p - Akt1及 PI3KCA 蛋白及 mRNA 表达水平低于 MOCK 组及 siNC 组（F =16.342,P ﹤0.05;F =14.651,P ﹤0.05;F =11.269,P ﹤0.05;F =12.342,P ﹤0.05;F =16.173,P ﹤0.05;F =9.672,P ﹤0.05）,Akt 蛋白及 mRNA 水平高于 MOCK 组及 siNC 组（F =15.136,P ﹤0.05;F =11.758,P ﹤0.05）。结论：下调 ZNF139表达可通过调控 MMP -7表达及 PI3K/ Akt 信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进其凋亡,ZNF139可作为子宫内膜癌靶向治疗的靶向候选基因。     

Inhibition of Growth and Induction of Differentiation ofSMMC-7721 Human Hepatocellular Carcinoma Cells byOncostatin M

Oncostatin M (OSM) is a multifunctional cellular regulator acting on a wide variety of cells, which haspotential roles in the regulation of gene activation, cell survival, proliferation and differentiation. Previousstudies have shown that OSM can induce morphological and/or functional differentiation and maturation ofmany tumor cells. However, the action of OSM on the induction of differentiation of human hepatocellularcarcinoma (HCC) has not been reported. Here, we investigated the effects of different concentrations of OSMon human HCC cell line SMMC-7721 growth, proliferation, cell cycling, apoptosis and differentiation in vitro.Cell growth was determined via MTT assay, proliferation by cell cycle analysis, apoptosis by flow cytometry,morphology by transmission electronic microscopy, and cell function by detection of biochemical markers.Our results demonstrated that OSM strongly inhibited the growth of SMMC-7721 cells in a dose-dependentmanner, associated with decreased clonogenicity. Cell cycle analysis revealed a decreased proportion of cells inS phase, with arrest at G0/G1. The apotosis rate was increased after OSM treatment compared to the control.These changes were associated with striking changes in cellular morphology, toward a more mature hepaticphenotype, accompanied by significant reduction of the expression of AFP and specific activity of γ-GT, withremarkable increase in secretion of albumin and ALP activity. Taken together, our findings indicate that OSMcould induce the differentiation and reduce cell viability of SMMC-7721 cells, suggesting that differentiationtherapy with OSM offers the opportunity for therapeutic intervention in HCC.     

BEL-7402 人肝癌细胞分化指标的研究

 目的　探讨肝癌细胞分化的特异指标。方法　用公认的细胞分化诱导剂维甲酸 (RA)、丁酸钠 (SB)和肝细胞毒剂四氯化碳处理 BEL- 740 2人肝癌细胞 ,观察细胞增殖、软琼脂集落形成率、核质比例和各项生化指标的变化。结果　 1 0 μmol/L RA、2 .5mmol/L SB和 1 mmol/L CCl4 均显著抑制肝癌细胞增殖 ,并使其软琼脂集落形成率明显减少 (P<0 .0 5) ,但 RA和 SB处理后 ,细胞核质比例明显减小 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5) ,鸟氨酸氨基甲酰转移酶 (OCT)、酪氨酸 -α-酮戊二酸转氨酶 (TAT)和碱性磷酸酶 (ALP)比活力明显升高 ,AFP分泌量和 -谷氨酰转肽酶 ( - GT)比活力明显下降 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5) ,而 CCl4 对核质比例和上述生化指标的影响则与 RA和 SB相反。结论　细胞核质比例、AFP分泌量、TAT、OCT和 ALP比活力可作为判断肝癌细胞分化的有用指标 ,其变化与毒性反应有明显的区别。     

虎杖苷逆转人结肠癌细胞株HT-29奥沙利铂耐药性及机制

目的:探讨虎杖苷对结肠癌耐药细胞株HT-29奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药性的逆转作用并探讨其可能的作用机制。方法:采用逐步增加药物浓度的方法建立奥沙利铂耐药结肠癌细胞株HT-29/OXA。MTT和CCK-8法测定虎杖苷对HT-29/OXA细胞的耐药性逆转作用,流式细胞术检测细胞凋亡、周期变化,qRT-PCR 检测各组细胞LRP(lung resistance protein)和P-gp(P-glycoprotein)mRNA表达水平,Western blot 检测各组细胞LRP和P-gp蛋白的表达水平。结果:虎杖苷使HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的敏感性增加,耐药性得到部分逆转(P＜0.05)。联合应用对结肠癌耐药细胞株HT-29/OXA生长增殖具有明显抑制作用并且能够通过改变细胞周期引起凋亡(P＜0.05)。作用后LRP mRNA和P-gp mRNA表达水平降低,同时下调了LRP和P-gp 蛋白表达(P＜0.05)。结论:虎杖苷部分逆转HT-29/OXA细胞对奥沙利铂的耐药性,其机制与降低细胞内LRP基因从而导致P-gp 的表达降低有关。     

射频消融术对原发性肝癌患者甲胎蛋白和Th1、Th2细胞因子的影响

目的:观察原发性肝癌患者经射频消融(RFA)治疗后外周血甲胎蛋白(AFP)和Th1、Th2细胞因子的变化,探讨射频消融术对原发性肝癌患者治疗效果与免疫功能间的关系。方法:应用射频消融治疗仪治疗原发性肝癌46例,采用化学发光方法检测AFP值,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测患者在射频消融前和治疗后14天、28天外周血Th1细胞因子[白介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF-α)、干扰素(IFN)-γ]及Th2细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)的表达。结果:原发性肝癌患者射频消融治疗前外周血AFP值明显高于健康志愿者(P<0.05),Th1细胞因子降低,Th2细胞因子升高,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。射频消融术后,大部分患者外周血AFP值明显降低,Th1细胞因子升高,Th2细胞因子降低,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Th1、Th2细胞因子的水平状态在原发性肝癌射频消融治疗后与AFP的变化存在相关性,可能对肝癌的预后有一定指导意义。     

miR-206抑制 SDF-1/CXCR4信号活化诱导的乳腺癌细胞迁移和增殖

目的：研究 miR-206在乳腺癌细胞中的作用及其机制。方法 MDA-MB-231细胞分别转染miRNA-NC和 miR-206 mimic 后,荧光显微镜观察转染效率。同时,细胞添加不同剂量（20 ng·mL -1和40 ng·mL -1）基质细胞衍生因子1（SDF-1）处理,利用 Transwell 法检测细胞迁移,噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,qRT-PCR 法检测细胞中 CXC 趋化因子受体4（ CXCR4）mRNA 表达水平,Western blot 检测细胞中CXCR4蛋白表达水平。结果 miRNA-NC 组和 miR-206 mimic 组细胞转染效率分别为（83.4±6.3）％和（87.6±8.3）％。与对照组比较,SDF-1显著促进细胞迁移和增殖（P ﹤0.05）。miR-206 mimic 转染明显抑制细胞迁移和增殖（ P ﹤0.05）。SDF-1处理促进细胞中 CXCR4 mRNA 和蛋白的表达水平（ P ﹤0.05）。miR-206 mimic 转染则抑制 CXCR4蛋白表达水平（P ﹤0.05）,但不影响 CXCR4 mRNA 表达（P ﹥0.05）。结论 miR-206通过抑制 CXCR4表达拮抗 SDF-1诱导乳腺癌细胞迁移和增殖作用。     

ESO联合DDP对肝癌HepG2细胞增殖的抑制效应及其机制

目的： 探讨海洋生物口虾咕乙酸乙酯提取物（ethyl acetate extract of Squilla Oratoria , ESO）联合顺铂（cisplatin,DDP）对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制效应及其机制。 方法： MTT法测定不同浓度ESO和DDP 单独或联合处理对HepG2细胞增殖的抑制作用,并计算联合效应指数（CI）;流式细胞术检测ESO对细胞周期和细胞凋亡的影响,Western blotting检测HepG2细胞Survivin、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。建立裸鼠皮下HepG2细胞移植瘤模型,并观察ESO和DDP单用或联用对移植瘤的抑制效应。 结果： ESO能有效地抑制HepG2细胞的生长（呈浓度依赖性）,促进细胞凋亡,将细胞周期阻滞在S期;与DDP联合用药时,对HepG2细胞增殖的抑制呈现出协同效应,凋亡率明显增加（ P <0.05）。ESO可下调Survivin和Ｂcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达,且呈浓度依赖性（ P <0.05）。裸鼠成瘤抑制实验发现,随着ESO浓度的增大,肿瘤增长的速度减慢,以联合用药组抑制作用更为明显。 结论： ESO可通过细胞周期阻滞及促细胞凋亡作用抑制HepG2细胞增殖;与顺铂联合用药,能对HepG2细胞增殖产生协同抑制效应。