肝细胞生长因子对结肠癌细胞SW620增殖、侵袭的影响

摘要：目的探讨肝细胞生长因子（Hepatocyte growth factor,HGF）对人结肠癌细胞株SW620的增殖和侵袭能力的影响。方法应用MTT法分析HGF对SW620细胞增殖的影响,确定最佳促增殖浓度;应用基底膜重建实验和电镜观察HGF对细胞侵袭能力的影响;应用PCR技术检测HGF对MMP-2 mRNA表达的影响。结果当HGF浓度≥10ng/ml时促进SW620增殖且呈质量浓度依赖性; HGF明显促进SW620 移行且呈质量浓度依赖关系;加入 HGF 后,SW620细胞内的微丝明显增多,MMP-2表达水平升高。结论HGF可以在体外促进人结肠癌细胞SW620的增殖和移行。     

YAP蛋白在结肠癌中的表达及其对SW480细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究YAP蛋白在结肠癌中的表达及临床意义, 并初步探讨其对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:免疫组化检测YAP蛋白在25例结肠癌组织及配对正常组织中的表达,并分析其与结肠癌临床病理特征之间的关系;用Real-Time PCR和 Western blot验证YAP-shRNA慢病毒载体转染效率;生长曲线实验和MTT法检测下调YAP表达对结肠癌细胞SW480增殖的影响;Transwell实验检测下调YAP表达对结肠癌细胞SW480侵袭的影响;Western blot检测下调YAP表达对CyclinD1、E-cadherin及Vimentin蛋白的影响。结果:YAP在结肠癌组织中的表达显著高于正常结肠组织（P＜0.05）,并且与淋巴结转移密切相关(P＜0.05);转染YAP-shRNA慢病毒载体的SW480细胞YAP的表达在mRNA 和蛋白水平明显降低（均P＜0.05）;下调YAP表达后结肠癌细胞增殖及侵袭明显减弱（均P＜0.05）;下调YAP 表达可抑制结肠癌细胞CyclinD1、E-cadherin及Vimentin蛋白的表达（均P＜0.05）。结论:YAP在结肠癌组织中高表达,且与淋巴结转移相关,下调YAP表达可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭能力,预示YAP在结肠癌恶性进展中具有重要的作用。     

透明质酸对人结肠癌细胞SW480增殖、粘附和侵袭能力的影响

背景与目的:透明质酸广泛存在于结肠癌间质中,本研究旨在探讨透明质酸(hyaluronan,HA)对体外培养的人结肠癌SW480细胞增殖、粘附和侵袭能力的影响.材料与方法:体外培养的SW480细胞被随机分为3组:对照组(无血清培养基培养)、HA1(HA为10 μg/ml)和HA2(HA为20 μg/ml)组,经培养不同时间后,以MTT实验和软琼脂细胞集落形成实验(soft agar clone formation assay)比较SW480细胞增殖能力,用平板粘附模型和Boyden chamber小室模型比较SW480细胞粘附和侵袭能力.结果:HA1和HA2组与对照组相比,细胞增殖数量、软琼脂细胞集落、粘附于平板和穿过Boyden chamber隔膜的细胞数皆显著增加(P＜0.05),且呈剂量依赖性.结论:HA能增强SW480细胞体外增殖、粘附和侵袭能力.     

槲皮素对人结肠癌SW480细胞体外侵袭能力的影响

目的：研究槲皮素对结肠癌SW480细胞的体外侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：结肠癌SW480细胞经槲皮素处理后用Transwell小室的方法检测其体外黏附、侵袭和运动能力。明胶酶谱分析法检测SW480细胞分泌的基质金属蛋白酶活性。结果：结肠癌SW480细胞经槲皮素处理后,体外侵袭、运动能力呈剂量依赖性下降,SW480细胞MMP-2及MMP-9的分泌下降（P〈0.05）。结论：槲皮素在体外剂量依赖性地抑制结肠癌SW480细胞的转移能力,这可能与槲皮素抑制MMP-2及MMP-9的分泌有关。     

芦荟大黄素对结肠癌细胞株SW620 FasL基因表达和侵袭能力的影响

目的：在体外通过细胞培养，初步研究芦荟大黄素对人结肠癌SW620细胞FasLmRNA表达及对其侵袭能力的影响，为中药抗肿瘤提供实验依据。方法：根据MTT法得到芦荟大黄素对SW620细胞的半数有效抑制浓度（IC50），确定药物作用浓度．SW620细胞分别经芦荟大黄素不同浓度（0．5IC50、IC50）作用后，应用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测芦荟大黄素作用前后人结肠癌SW620细胞FasL mRNA的变化；应用Transwell细胞侵袭试验检测芦荟大黄素对SW620细胞侵袭能力的影响。结果：芦荟大黄素处理后较处理前SW620细胞FasLmRNA表达水平均明显高于对照组；而且FasLmRNA表达水平随芦荟大黄素作用浓度增加显著上调，芦荟大黄素不同浓度组比较均有显著性差异；随芦荟大黄素作用浓度升高，SW620细胞侵袭能力明显增强，不同浓度组比较均有显著性差异。结论：芦荟大黄素在一定时间内均可上调人结肠癌SW620细胞FasL mRNA的表达，而且这种上调作用在一定范围内呈剂量依赖性，可使结肠癌细胞的侵袭能力增强。     

上调Twist基因对人结肠癌SW480细胞增殖凋亡及侵袭能力的影响

目的:上调人结肠癌SW480细胞株中Twist基因的表达,观察其对细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法:将高表达Twist基因的质粒和空载质粒稳定转染SW480细胞,分别命名为转染组和对照组,MTT法、细胞划痕实验和Matrige1侵袭实验分别检测肿瘤细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的变化。FCM检测细胞周期及凋亡情况。将肿瘤细胞接种至裸鼠皮下,对比转染前后肿瘤细胞的成瘤情况。结果:从第4天开始,转染组SW480细胞生长速度明显高于对照组(P<0.05):转染组SW480细胞的增殖指数(PI)和S期细胞比例[(61.279±1.709)%,(33.171±3.154)%]均高于对照组[(26.142±1.518)%,(14.112±2.137)%](P<0.05);转染组的细胞凋亡率(6.83I±1.624)%低于对照组(12.223±1.733)%(P<0.05);划痕24 h及48 h时后转染组细胞迁移率[(40.06±5.56)%,(75.77±8.06)%]均高于对照组[(25.25±2.65)%,(35.37±6.79)%](P<0.05);Matrige1侵袭实验结果显示转染组侵袭细胞个数明显高于对照组(p<0.05);将两组细胞分别接种裸鼠,16 d左右可见肿瘤结节,转染组肿瘤体积及瘤重均大于对照组(P<0.05)。结论:上调Twist基因可提高SW480细胞体外增殖、迁移和侵袭能力,降低SW480细胞凋亡率。     

miR-34a对结肠癌细胞SW480增殖、迁移和侵袭能力的影响及机制探讨

目的 探讨miR-34a对结肠癌细胞株SW480增殖、侵袭和迁移能力的影响及可能的作用机制。方法将miR-34a过表达慢病毒、空病毒载体转染SW480细胞,未做处理细胞作为空白对照组。Real-time PCR检测各组细胞内miR-34a的表达;CCK8法检测细胞增殖能力;划痕实验、Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot实验检测细胞内E-cadherin和Vimentin蛋白表达。结果 与空病毒载体组及空白对照组相比,转染组细胞中miR-34a的表达增高,且细胞增殖效率、侵袭和迁移能力降低(P＜0.05),miR-34a使E-cadherin蛋白表达增加、Vimentin蛋白表达降低。结论 miR-34a可抑制结肠癌细胞SW480增殖、侵袭和迁移能力,并能影响E-cadherin和Vimentin的表达,miR-34a有望成为干预结肠癌转移和复发的分子靶点。     

丙谷胺抑制人结肠癌细胞株SW480增殖的机制研究

目的 探讨丙谷胺在胃泌素促进人结肠癌细胞株SW480中的作用及其机制。方法 采用噻唑氮蓝（MTT）比色分析法,^3H－肌醇掺入法,Ca^2 荧光测定技术和γ－^32P－ATP掺入法,在体外观察丙谷胺（PGL）对5肽胃泌素（PG）促人结肠癌细胞株SW480增殖的影响。结果 PG＋PGL组的SW480活细胞数（viable cell count,VCC)降低,与对照线相比（P＜0．01）,与PG组相比（P＜0．01）;PG＋PGL细胞胞内三磷酸肌醇（inositol-1,4,5-triphosphate,IP3)、Ca^2 浓度降低,与PG组相比（P＜0．01）,与对照组相比（P＞0．05）;PG＋PGL组膜蛋白激酶C（protein kinase C,PKC)。结论 本研究提示丙谷胺可能通过肌醇质脂信号通路抑制胃泌素促进人结肠癌细胞株SW480的增殖,为结肠癌的抗信息传导治疗提供实验依据。     

黄芪甲苷对人结肠癌SW480细胞系增殖和凋亡的影响

目的 探讨黄芪甲苷对人结直肠癌SW480细胞系增殖和凋亡的影响。方法 药物细胞毒性实验检测黄芪甲苷对SW480细胞存活率的影响，测得IC50为168 μmol/L；以不同浓度黄芪甲苷处理SW480细胞。细胞计数试剂盒检测细胞增殖倍数；蛋白质印迹法检测细胞中Ki67、PCNA、bcl-2、Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达水平；Hoechst染色法检测细胞凋亡情况。结果 黄芪甲苷浓度大于20 μmol/L时，细胞存活率明显降低。与对照组相比，黄芪甲苷加药组细胞增殖倍数明显降低，黄芪甲苷低剂量组Ki67的表达量没有显著变化，黄芪甲苷中、高剂量组细胞中Ki67和PCNA的表达量显著降低；黄芪甲苷干预后，凋亡细胞比率显著升高，bcl-2的表达水平显著降低，而bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的表达量显著上升；且随着黄芪甲苷浓度的增加，效果越明显。结论 黄芪甲苷能抑制人结肠癌SW480细胞增殖，诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇对人结肠癌SW480瘤株作用的研究

目的研究白藜芦醇对人结肠癌细胞株SW480生长和细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法采用光镜及电子显微镜观察用药前后细胞形态结构的改变;采用四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,采用流式细胞术测定细胞周期。结果白藜芦醇呈时间和剂量依赖性抑制人结肠癌细胞株SW480的生长并诱导凋亡,IC50为80μmol/L;白藜芦醇使SW480处于S期细胞增多。结论白藜芦醇能有效的抑制人结肠癌细胞株SW480的生长并诱导其凋亡;白藜芦醇对结肠癌可能是一种有效的化学治疗和化学预防药物。     

siRNA沉默雄激素受体对人结肠癌HCT-8细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:利用小干扰RNA(siRNA)沉默人结肠癌HCT-8细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)的表达,观察AR敲除对癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,初步探讨AR在结肠癌中的功能.方法:利用qRT-PCR和Western blot检测HCT-8细胞及正常人肠上皮细胞中AR的表达;siRNA转染HCT-8细胞沉默AR表达,利用qRT-PCR和Western blot检测转染效率;流式细胞术检测沉默AR后对HCT-8细胞周期的影响;CCK-8法检测沉默AR后对HCT-8细胞增殖的影响;Transwell实验检测沉默AR后对HCT-8细胞迁移及侵袭的影响.结果:AR在人结肠癌HCT-8细胞中高表达;siRNA能有效沉默HCT-8细胞中AR的mRNA及蛋白的表达.与对照组相比,沉默AR表达能够明显抑制HCT-8细胞的增殖、迁移和侵袭能力.结论:AR在人结肠癌HCT-8中高表达并能够促进癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力.     

结肠癌细胞系SW480对不同化疗药物化疗敏感性的研究

Objective:The aim of this study was to investigate the sensitivity of chemotherapeutic agents 5-FU,cisplatin(DDP) or TAXOL on colon cancer cell line SW480 with different methods,to find out the best examine time period for further study of chemotherapeutic sensitivities.Methods:The SW480 cell was treated with 5-FU(200μg/mL),DDP(150μg/mL) or TAXOL(50μg/mL) respectively for 4h,8h or 12h.MTT assay was used to examine the cell survival rate,Annexin V/PI assay was used to analysis the apoptosis rate,Western Blot...     

姜黄素抑制结肠癌SW480细胞的增殖及其机制

目的:研究姜黄素对人结肠癌SW480细胞增殖以及survivin、caspase-3和p-Akt表达的影响。方法:用不同浓度姜黄素(5～40μmol/L)作用SW480细胞24、48和72 h,MTT法检测姜黄素对SW480细胞生长的抑制作用,Western blotting法检测SW480细胞中survivin、caspase-3和p-Akt蛋白的表达。结果:姜黄素以剂量(5～40μmol/L)和时间(24～72 h)依赖的方式抑制SW480细胞的增殖(P<0.01),40μmol/L姜黄素作用72 h对SW480细胞生长的抑制率可达(75.86±3.93)%。姜黄素抑制SW480细胞中p-Akt、survivin蛋白的表达、促进caspase-3蛋白的表达,均呈时间和剂量依赖性;40μmol/L姜黄素作用SW480细胞48 h后p-Akt和survivin蛋白表达显著减少[(0.204±0.025)vs(0.367±0.035),P<0.01;(0.208±0.014)vs(0.385±0.034),P<0.01],caspase-3蛋白表达显著增加[(0.371±0.028)vs(0.127±0.023),P<0.01]。结论:姜黄素抑制SW480细胞增殖,其机制可能与抑制Akt磷酸化、下调survivin和上调caspase-3蛋白的表达有关。     

七氟烷通过抑制PI3K磷酸化抑制结肠癌SW480 细胞的增殖和侵袭以及裸鼠移植瘤的生长

目的：探讨七氟烷（sevoflurane）通过调控PI3K磷酸化对结肠癌SW480 细胞增殖和侵袭以及裸鼠移植瘤生长的影响及其机制。方法：采用七氟烷处理结肠癌SW480 细胞,将细胞随机分为对照组、0.5%七氟烷组、1.0%七氟烷组和2.0%七氟烷组进行后续实验。用克隆形成实验检测SW480 细胞的增殖能力,RT-PCR 检测细胞中MDM2、survivin mRNA表达水平,Transwell小室法检测细胞的侵袭能力,Western blotting 检测细胞中MDM2、survivin、VEGF、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白的表达水平。并加入PI3K激活剂740 Y-P 进行验证。建立裸鼠SW480 细胞移植瘤模型,称取肿瘤质量,免疫组化检测移植瘤组织中MDM2 和VEGF阳性表达率。结果：与对照组和低剂量组比较,1.0%和2.0%七氟烷组SW480 细胞的克隆形成率显著降低（均P<0.01）;细胞中MDM2 mRNA和蛋白水平显著升高（均P<0.01）,survivin mRNA和蛋白水平显著降低（均P<0.01）;SW480 细胞侵袭数显著降低（P<0.01）,VEGF、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT 蛋白水平显著降低（均P<0.01）。740Y-P 可逆转七氟烷对SW480 细胞增殖、侵袭及PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达的影响。2.0%七氟烷组小鼠移植瘤质量显著降低（P<0.01）,瘤组织中MDM2 阳性表达率显著升高（P<0.01）、VEGF阳性表达率显著降低（P<0.01）。结论：七氟烷抑制结肠癌SW480 细胞的增殖和侵袭以及裸鼠移植瘤的生长,其作用机制可能是通过抑制PI3K磷酸化实现的。     

MS-275抑制肠癌细胞增殖与侵袭及其机制的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)MS-275对肠癌增殖及侵袭的影响。方法:采用MTT法检测MS-275对肠癌细胞Caco-2增殖的抑制作用,用Transwell实验检测MS-275对肠癌细胞Caco-2侵袭能力的影响,蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶-7(MMP-7)蛋白表达量的变化。结果:经MS-275处理后,Caco-2细胞的增殖活性明显降低,8μmol/L的MS-275处理细胞48h,其对细胞活性抑制率高达54.50%,与对照组比较,差异有统计学意义,P<0.01;经MS-275处理后,Caco-2细胞侵袭能力明显降低,8μmol/L的MS-275处理细胞24h,细胞侵袭率降低至15.70%,与对照组细胞相比较,差异有统计学意义,P<0.01;MMP-7的蛋白表达随着MS-275的浓度升高而降低,其中8μmol/L的MS-275处理细胞24h,与对照组相比,MMP-7蛋白表达量降低至18.00%,差异有统计学意义,P<0.01。结论:MS-275能有效抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖活性;MS-275能有效抑制结肠癌细胞Caco-2中MMP-7蛋白表达量;MS-275通过抑制MMP-7蛋白的表达能有效抑制结肠癌细胞Caco-2的侵袭能力。     

单壁碳纳米管对结肠癌细胞系SW480生物学行为影响研究

目的 单壁碳纳米管(single-walled carbon nanotubes,SWCNT)作为一维纳米材料具有良好的稳定性与光吸收能力且易倍修饰等特点,已被广泛用于癌症治疗、药物转运等领域.本研究探讨SWCNT对结肠癌细胞系SW480细胞增殖、凋亡和侵袭能力影响,为单壁碳纳米管临床应用提供帮助.方法 低、中和高浓度SWCNT分别与结肠癌细胞系SW480共孵育.CCK-8检测SW480细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力以及共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscope,CLSM)观察SWCNT在SW480细胞内的定位;同时分析相关机制.结果 随着SWCNT浓度升高,SW480细胞存活力和细胞侵袭数量依次显著降低,高浓度SWCNT组细胞存活率[(21.43±2.44)％]和侵袭细胞数量(58.34±4.11)最低,显著低于其他组,F值分别为157.094和203.749,多组间差异分析及两两比较均为P＜0.05.随SWCNT浓度升高,SW480细胞凋亡比例依次显著升高,高浓度SWCNT组细胞凋亡率高达(74.26±6.89)％,显著高于其他组,F=115.752,多组间差异分析及两两比较均为P＜0.05.而随SWCNT浓度的升高,G1期受阻SW480细胞比例依次显著增加,高浓度组最高,F=21.293,多组间差异分析及两两比较均为P＜0.05.CLSM显示,SWCNT与SW480细胞线粒体共定位,SWCNT处理后SW480细胞线粒体出现断裂.结论 SWC-NT能够抑制SW480细胞分裂、增殖及迁移,促进细胞凋亡同时引起线粒体断裂.     

辛二酰苯胺异羟肟酸对结肠癌HCT116和SW480细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的:研究辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对结肠癌细胞系HCT116和SW480增殖、周期和凋亡的影响,并对其分子作用机制进行初步探讨.方法:将不同浓度SAHA分别处理结肠癌HCT116和SW480细胞后,MTT法检测SAHA对HCT116和SW480细胞增殖的影响,流式细胞仪检测HCT116和SW480细胞周期和细胞凋亡率,罗丹明(rhodamine) 123和二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测HCT116和SW480细胞线粒体跨膜电位(Aψm)和活性氧(ROS)水平,Real-time PCR和Western blotting法检测乙酰化组蛋白3(Ac-H3)、p21、CyclinD1、Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白的表达水平.结果:SAHA作用于HCT116和SW480细胞48 h后,细胞增殖被抑制、细胞周期G1期比率升高、凋亡率升高(均P＜0.05),线粒体跨膜电位显著下降、细胞内ROS产生增多(均P＜0.05).与对照组比较,SAHA处理组p21和Bax mRNA增多、Cyclin D1和Bcl-2 mRNA表达量减少(均P＜0.05),相关蛋白Ac-H3、p21和Bax增多,CyclinD1和Bcl-2减少(均P＜0.05).结论:SAHA抑制结肠癌HCT116和SW480细胞增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,其机可能与调节p21、CyclinD1和Bcl-2家族基因的表达、促进组蛋白乙酰化有关.