miR -296-5p 对胰腺癌细胞体外生物学行为的影响

目的：探讨 microRNA -296-5p（miR -296-5p）对胰腺癌细胞体外生物学行为的影响。方法：分别转染 miR -296-5p 类似物（Agomir）及 miR -296-5p 拮抗物（Antagomir）至胰腺癌细胞系（AsPC -1、Panc -1和 Capan -2）,应用 CCK -8法、Annexin - V APC/7- AAD 法、细胞黏附实验、Transwell 侵袭迁移实验检测miR -296-5p 对胰腺癌细胞增殖、凋亡、黏附、侵袭和迁移能力的影响。结果：转染 miR -296-5p Agomir 后胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力显著降低,凋亡率和黏附能力增加;而转染 miR -296-5p Antagomir 后胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力增强,凋亡率和黏附能力降低。结论：体外实验证实 miR -296-5p 影响胰腺癌细胞体外生物学行为,抑制其转移。     

肿瘤相关巨噬细胞对胃癌MGC-803 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage，TAM）对胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养人单核细胞株THP-1，加入佛波酯（PMA）和IL-4 后，用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-12、IL-10 的水平。取对数生长期MGC-803 细胞和M2 型TAM，根据培养方式不同分为单独细胞培养组、非接触共培养组和接触共培养组，用MTT法、Transwell小室法分别检测MGC-803 细胞的增殖、迁移和侵袭能力，用AnnexinV-FITC/PI 双染流式细胞术检测MGC-803 细胞的凋亡和细胞周期变化，用qPCR、Western blotting 分别检测MGC-803 细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与PMA组相比，PMA+IL-4 组细胞上清液中IL-12 水平显著降低、IL-10 水平显著升高（均P<0.05），成功将THP-1细胞诱导分化为M2型TAM。与单独细胞培养组相比，非接触共培养组、接触共培养组（: 1）MGC-803细胞的增殖率显著升高（均P<0.05）；（2）细胞的迁移、侵袭数量升高（均P<0.05）；（3）细胞凋亡率显著降低（均P<0.05）；（4）S、G2 期细胞的数量升高、G1 期数量降低（均P<0.05）；（5）细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（均P<0.05）。结论：TAM可促进胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移和侵袭，解除细胞G1期阻滞，减少细胞凋亡，其机制可能与上调胃癌细胞MMP-9、MMP-2表达有关。     

miR-181b在前列腺组织中的表达及对前列腺癌细胞PC-3生物学功能的影响

目的:探讨miR-181b在前列腺癌组织中的表达及miR-181b对前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响。方法:收集27例前列腺癌手术标本及30例正常前列腺组织标本,提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181b的表达情况。选取人前列腺癌细胞株PC-3细胞为研究对象,转染miR-181b ASO。应用实时荧光定量PCR技术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞中miR-181b的表达情况;流式细胞术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞的凋亡变化情况;MTT实验及细胞生长曲线检测转染miR-181b ASO PC-3细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测转染miR-181b ASO PC-3细胞侵袭能力的影响。结果:miR-181b在前列腺癌组织中高表达。转染miR-181b ASO使PC-3细胞中miR-181b的表达降低;促进了PC-3细胞凋亡;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞株PC-3增殖能力的减弱;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞PC-3侵袭能力减弱。结论:miR-181b在前列腺癌组织中高表达,封闭前列腺癌细胞中miR-181b的表达,可以促进细胞凋亡及抑制细胞的增殖及侵袭,可能在前列腺肿瘤的基因治疗中起到积极作用。     

miR-181b在前列腺组织中的表达及对前列腺癌细胞PC-3生物学功能的影响

目的：探讨miR-181b在前列腺癌组织中的表达及miR-181b对前列腺癌PC-3细胞生物学功能的影响。方法：收集27例前列腺癌手术标本及30例正常前列腺组织标本,提取总微小RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181b的表达情况。选取人前列腺癌细胞株PC-3细胞为研究对象,转染miR-181b ASO。应用实时荧光定量PCR技术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞中miR-181b的表达情况;流式细胞术检测转染miR-181b ASO PC-3细胞的凋亡变化情况;MTT实验及细胞生长曲线检测转染miR-181b ASO PC-3细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测转染miR-181b ASO PC-3细胞侵袭能力的影响。结果：miR-181b在前列腺癌组织中高表达。转染miR-181b ASO使PC-3细胞中miR-181b的表达降低;促进了PC-3细胞凋亡;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞株PC-3增殖能力的减弱;miR-181b的表达降低导致前列腺癌细胞PC-3侵袭能力减弱。结论：miR-181b在前列腺癌组织中高表达,封闭前列腺癌细胞中miR-181b的表达,可以促进细胞凋亡及抑制细胞的增殖及侵袭,可能在前列腺肿瘤的基因治疗中起到积极作用。     

幽门螺杆菌感染诱导微小RNA?181c对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨幽门螺杆菌(Hp)感染诱导微小RNA-181c(miR-181c)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测Hp感染人正常胃黏膜GES-1细胞和胃癌细胞(BGC-823、SGC-7901、AGS)的miR-181c水平。采用脂质体向SGC-7901细胞转染miR-181c抑制物(Inhibitor组)或阴性对照序列(NC组),另取未转染的细胞为对照组;转染48 h后采用QPCR检测miR-181c水平,活细胞计数(CCK-8)法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞增殖活力、划痕愈合率和穿膜细胞数以评估细胞增殖、迁移和侵袭能力,QPCR和Western blotting检测Bcl-2、基质金属蛋白酶(MMP)-9和神经型钙黏蛋白(N-cad)水平。结果QPCR检测结果显示Hp感染后各细胞的miR-181水平较感染前均升高(P<0.05),GES-1、BGC-823、SGC-7901和AGS细胞Hp感染后的miR-181c水平分别为感染前的4.37、1.63、3.25和2.09倍。与对照组和NC组相比,Inhibitor组SGC-7901细胞的miR-181c水平和转染48、72 h后的增殖活力降低(P<0.05);Inhibitor组SGC-7901细胞的划痕愈合率和穿膜细胞数量分别为(21.679±3.762)%和(128.056±21.463)个,低于对照组的(65.004±2.309)%和(325.07±34.082)个及NC组的(65.675±2.914)%和(328.035±31.391)个,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组和NC组相比,Inhibitor组的Bcl-2、MMP-9和N-cad水平均降低(P<0.05)。对照组和NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。结论Hp感染可升高胃癌细胞的miR-181c水平,下调该miR-181c水平对增殖、侵袭和迁移具有明显抑制作用,为Hp感染的胃癌治疗提供了新的靶点。     

下调胰岛素样生长因子-1表达对人胃癌细胞增殖和侵袭及迁移的影响

目的 胰岛素样生长因子1(insulin like growth factor-1,IGF-1)作为体内重要的促有丝分裂原分子,可能与恶性肿瘤的转化及转移相关,但是目前有关IGF-1的表达与胃癌细胞迁移、侵袭的研究较少.本研究旨在研究IGF-1在胃癌组织中的表达,并探讨其表达对人胃癌HGC-27细胞体外增殖及侵袭、迁移能力的影响.方法 检测承德医学院附属医院2014-05-10-2016-05-10胃癌手术切除78例胃癌组织、30例癌旁正常组织及体外不同胃癌细胞系中IGF-1的表达情况.针对IGF-1基因序列,设计发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA)干扰序列并构建干扰载体,转染胃癌HGC-27细胞.荧光实时定量PCR及蛋白质印迹技术分别检测转染干扰载体后HGC-27细胞中IGF-1的表达情况.细胞增殖-毒性检测试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)、划痕实验及Transwell侵袭实验分别检测下调IGF-1对体外细胞HGC-27增殖及迁移、侵袭能力的影响.结果 免疫组织化学法检测显示,低分化胃癌组织中IGF-1阳性表达率为76％(29/38),高、中分化为53％(21/40),癌旁正常组织为27％(8/30).不同胃癌组织与癌旁组织中IGF-1的表达差异有统计学意义,x2=16.66,P＜0.01.并且其表达与胃癌的病理分期(x2=7.430,P=0.007)、组织分化(x2=4.618,P=0.032)等病理因素相关.体外不同胃癌细胞系中IGF-1均呈现高表达,但差异无统计学意义.利用干扰载体能够有效下调胃癌细胞HGC-27中IGF-1在mRNA及蛋白质水平的表达.与空载体转染对照组和野生型HGC-27细胞比较,IGF-1表达下调明显抑制胃癌细胞的体外增殖和侵袭、迁移能力.结论 IGF 1在体内胃癌组织及体外胃癌细胞中高表达,下调IGF-1的表达能够抑制人胃癌细胞HGC-27的增殖及体外侵袭、迁移能力.     

miR -450a -5p 对人卵巢癌 SKOV3细胞生物学行为的影响

目的:研究miR-450a-5p对体外培养的人浆液性卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、周期、凋亡机制的影响,分析miR-450a-5p对人卵巢癌SKOV3细胞肿瘤生物学行为的影响。方法:运用Hiperfect转染试剂介导的转染法将miR-450a-5p mimics转染人卵巢癌SKOV3细胞,设阴性对照组(NC组)及空白对照组(blank组)。采用MTT法、Transwell迁移及侵袭实验、划痕实验、流式细胞术,分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力、周期及凋亡。结果:MTT实验:miR-450a-5p mimics组细胞增殖活性与NC组、blank组无明显差异(P>0.05)。Transwell迁移及侵袭实验均显示转染miR-450a-5p mimics后,细胞的迁移及侵袭能力明显减弱(P<0.05)。划痕后miR-450a-5p mimics组细胞迁移能力较NC组、blank组降低(P<0.05)。流式细胞术:转染miR-450a-5p mimics后,mimics组细胞周期明显被阻滞于G1期(P<0.05)。miR-450a-5p mimics组、NC组、blank组凋亡结果无明显差异(P>0.05)。结论:过表达miR-450a-5p可能对人卵巢癌细胞系SKOV3的侵袭及迁移能力存在负性调控,可能将SKOV3细胞周期阻滞于G1期。     

长链非编码RNA FAM201A靶向miR-488-3p对胃癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)序列相似性家族201-成员A(family with sequence similarity 201-member A,FAM201A)靶向mi R-488-3p对胃癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响。方法:选取2014年1月至2017年1月间于莱阳中心医院确诊并进行胃癌根治性切除手术(术前均未经过放疗和化疗治疗)的胃癌患者的肿瘤组织标本和配对的非癌性黏膜标本63例,采用q RT-PCR检测63例胃癌组织和与其对应的癌旁组织中FAM201A及mi R-488-3p的表达水平。构建抑制FAM201A表达的MGC803胃癌细胞株。四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。用不同辐射强度(0、2、4、6和8 Gy)射线照射抑制FAM201A表达的MGC803细胞,克隆形成实验检测细胞存活分数,绘制单击多靶模型拟合曲线。双荧光素酶报告基因实验和q RT-PCR验证FAM201A和mi R-488-3p的靶向关系。结果:与癌旁...     

miR-133在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞恶性行为的影响

目的 探讨microRNA-133（miR-133）在胃癌组织及细胞系中的表达情况,并探讨其对胃癌细胞凋亡和侵袭的影响。方法 采用实时定量PCR（qPCR）检测64例胃癌组织及对应癌旁组织中的miR-133水平,分析miR-133表达与临床病理参数（性别、年龄、肿瘤位置、临床分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移）的关系,并检测其在胃癌细胞株AGS、SGC-7901、MKN-1、MKN-45、MGC-803和BGC-823及正常胃黏膜细胞GES-1细胞的表达情况,同时选取miR-133水平最低的胃癌细胞并转染过表达miR-133的真核重组质粒pCDNA3.1+miR-133,转染后分别采用流式细胞仪PI/Annexin V双染法及Transwell法检测miR-133对细胞凋亡和侵袭能力的影响。结果 胃癌组织的miR-133相对表达量为0.347±0.024,低于癌旁组织（P＜0.05）,且其表达与临床分期、分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关均有关（P＜0.05）;与GES-1细胞相比（其miR-133表达水平设为1.00）,胃癌细胞的miR-133水平均较低（P＜0.05）,且MKN-45的表达水平最低;与对照组和空转染组相比,过表达组转染48、96 h后的细胞凋亡水平均升高,且穿膜细胞数均降低（P＜0.05）。结论miR-133在胃癌组织和细胞中均为低表达,上调miR-133水平可抑制胃癌细胞的侵袭并诱导凋亡。     

miR - 187 影响结肠癌 LOVO 细胞恶性生物学行为的研究简

目的：探讨miR-187对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭转移等恶性生物学行为的影响。方法：应用miR-187mimics转染结肠癌LOVO细胞,利用MTT实验、流式细胞术和Transwell实验观察miR-187对结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡、侵袭转移的影响。结果：与对照细胞相比,MTT显示转染miR-187的LOVO细胞增殖速度变快,流式细胞术表明miR-187mimics转染可以减少LOVO细胞的凋亡,Transwell实验证实转染miR-187mimics可以促进LOVO细胞迁移,增强LOVO细胞的侵袭转移能力。结论：miR-187促进结肠癌LOVO细胞的恶性增殖、抑制凋亡、促进侵袭和转移,提示miR-187在结肠癌的恶性生物学进程中可能发挥重要作用。     

miR-542-5p对卵巢癌细胞SKOV3恶性生物学行为的影响

目的:探讨miR-542-5p对卵巢癌细胞系SKOV3的增殖、迁移、侵袭、凋亡等恶性生物学行为的影响。方法:应用miR-542-5p mimics和mimics阴性对照 (mimics NC)分别转染卵巢癌细胞SKOV3。采用MTT实验、划痕试验、Transwell实验和流式细胞术检测过表达miR-542-5p对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。结果:过表达miR-542-5p后,SKOV3细胞的增殖能力较阴性对照和正常SKOV3细胞明显降低（P<0.05）;Transwell实验和划痕实验显示,过表达miR-542-5p后,细胞的迁移和侵袭能力较阴性对照组明显下降（P<0.05）;流式细胞术结果显示,过表达miR-542-5p后,SKOV3细胞的凋亡率较阴性对照组升高,而对细胞周期无影响。结论:过表达miR-542-5p可以抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外增殖、迁移和侵袭能力,诱导细胞凋亡。提示miR-542-5p在卵巢癌恶性生物学进程中可能发挥重要作用。     

miR-187通过抑制胃癌细胞凋亡影响胃癌多药耐药

目的:探讨miR-187对胃癌多药耐药的影响。方法:应用qPCR检测miR-187在胃癌SGC7901细胞和SGC7901ADR细胞中的表达。miR-187 mimics转染上述细胞,MTT检测转染后细胞对多种化疗药物的敏感性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:SGC7901ADR细胞中miR-187的表达明显高于SGC7901细胞。MTT实验显示转染miR-187 mimics后胃癌细胞对化疗药物的敏感性均明显降低(P＜0.05)。流式细胞检测表明miR-187 mimics转染可以减少SGC7901细胞的凋亡(P＜0.05)。结论:miR-187通过抑制胃癌细胞凋亡参与胃癌多药耐药,可能成为逆转胃癌多药耐药的新靶点。     

微小RNA-148a抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的作用机制

目的:研究微小RNA-148a(miR-148a)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达,探讨上调miR-148a的表达对其迁移的影响及机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-148a的表达水平.应用脂质体法将miR-148a mimic及阴性对照分别转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测转染效率;细胞划痕实验检测转染前后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化;Western blot方法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白Slug、Snail和E-cadher-in表达水平的变化.结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-148a的表达水平明显降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-148a转染组中miR-148a的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-148a后,MDA-MB-231细胞迁移能力明显下降,Slug和Snail蛋白表达明显降低,E-cadherin蛋白表达明显增加.结论:miR-148a可通过调控Slug、Snail及E-cadherin蛋白的表达抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的迁移能力.     

miR-204在胃癌生长中的作用及机制

目的:探讨microRNA-204(miR-204)在胃癌中的表达,研究miR-204在胃癌细胞增殖中的作用和机制。方法:采用RT-PCR方法检测胃癌组织、胃癌细胞中的miR-204相对表达量;分析miR-204的表达与临床病理参数的关系;瞬时转染上调胃癌SGC7901细胞中miR-204的表达量,CCK8检测转染前后细胞增殖能力的变化;Western blot检测转染前后SGC7901细胞中Bcl-2表达的变化。结果:胃癌组织中miR-204相对表达量（1.94±0.78）明显低于正常胃组织（4.01±1.47）（P＜0.01）;同样,人胃癌细胞株中miR-204表达水平明显低于正常胃上皮细胞（P＜0.01）。胃癌组织中miR-204的表达水平与肿瘤的大小、远处转移和TNM分期明显相关（P＜0.05）。CCK8结果显示,miR-204 mimics转染后SCG7901细胞的增殖率较转染前明显下降（P＜0.05）,Western blot结果显示胃癌细胞中Bcl-2的表达水平较转染前明显下调（P＜0.05）。结论:miR-204在胃癌组织中低表达且与其恶性生物学行为相关,上调miR-204可通过下调Bcl-2的表达抑制胃癌细胞的增殖。     

miR-204通过下调Bcl-2表达抑制人视网膜母细胞瘤细胞生长

目的:探讨miR-204在人视网膜母细胞瘤中的表达、临床意义及其分子机制。方法:实时定量PCR检测miR-204在视网膜母细胞瘤及瘤旁组织中的表达并分析其与临床病理特征的关系。检测miR-204在视网膜母细胞瘤细胞系中的表达,并用miR-204模拟物转染Y79细胞,MTT及流式细胞仪检测Y79细胞的增殖、凋亡情况,RT-PCR、Western blot法检测Bcl-2 mRNA、蛋白的表达。结果:miR-204在视网膜母细胞瘤组织中的表达水平显著低于对应瘤旁组织。miR-204低表达与神经浸润、分化程度密切相关。miR-204可显著抑制Y79细胞的增殖并促进其凋亡,下调Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平。结论:miR-204在人视网膜母细胞瘤组织中表达下调,并与临床病理相关,miR-204抑制Y79细胞增殖、促进凋亡的作用可能与下调Bcl-2有关。