反义核酸技术及其在卵巢恶性肿瘤治疗中的应用

随着分子生物学及基因工程的发展 ,基因治疗已成为研究热点。反义核酸技术的概念是根据碱基互补原理 ,使用与目标靶的遗传物质 (DNA或mRNA)特定互补的短核苷酸片段封闭基因表达的方法。由于反义核酸技术是从生命的最根本点核酸角度着眼 ,对疾病的治疗有突破性的进展。1　反义核     

反义核酸在肿瘤研究中的应用

利用反义核酸对肿瘤进行反义基因治疗是九十年代兴起的一项治疗肿瘤的新技术。反义核酸可用来调控肿瘤细胞某些异常基因的表达 ,阻断细胞内异常信号的传导 ,使瘤细胞进入正常分化轨道或引起瘤细胞凋亡。随着各国学者的深入研究 ,反义核酸技术已日趋成熟 ,目前已在不同水平 (细胞、动物和临床前期 )上对多种肿瘤使用了这项技术 ,并取得了可喜的成果。但是同时也存在着许多问题有待解决。1　反义核酸的种类及作用机制　　用于基因治疗的反义核酸大致分为三类 :一类是将特异的反义基因连到特定的表达载体上 (质粒、病毒 ) ,导入靶细胞直接转录…     

反义核酸类药物的药理学研究进展

反义核酸技术是 2 0世纪 80年代出现的一种以应用反义核酸类药物来抑制特定基因表达为目的的基因治疗技术。反义核酸类药物包括反义寡核苷酸和核酶。前者是人工设计合成的与特定基因互补的寡核苷酸 ,它能通过Ｗ Ｃ配对与特定基因结合来抑制其表达。核酶是具有ＲＮＡ裂解活性的ＲＮＡ。它能与与其互补的靶基因的ｍＲＮＡ进行反式结合并能对其进行定点切割。应用反义核酸类药物可以特异 ,高效的抑制某种基因的表达 ,有望成为较理想的基因治疗手段。然而反义核酸要想真正成为一种药物用于临床尚存在一些问题 ,如 :他们必须先找到靶细胞 ,然后通…     

反义寡核苷酸技术研究进展

反义寡核酸技术，是应用反义寡核苷酸类药物通过Waston-Crick碱基配对与细胞内核酸（DNA或RNA）特异结合形成杂交分子，从而在转录和翻译水平抑制特定基因表达的基因治疗技术，是一种新的药物开发方法。其机制是：①反义寡核苷酸与靶mRNA结合形成DNA-RNA杂合分子，可以激活RNase H。该酶可以切割杂合分子中的RNA链，导致靶mRNA降解。②不能激活RNase H活性的反义寡核苷酸可以通过空间位阻效应阻止核糖体结合来抑制靶mRNA的翻译：另外还可以通过封闭剪接位点有选择的促进蛋白某个可变剪接体的表达，从而纠正错误的剪接。     

反义寡核苷酸设计策略与学习记忆研究

反义核酸是指与体内某ＲＮＡ或ＤＮＡ序列具有互补顺序,并能通过碱基配对与互补链杂交,从而影响其转录或翻译过程的ＲＮＡ或ＤＮＡ片段。反义ＲＮＡ和ＤＮＡ的特异性源自反义序列和靶序列之间的碱基配对。反义核酸的长度可长可短,长的反义核酸一般都借助表达载体导入细胞,通过在细胞中进行转录而实现功能。反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ,ＯＤＮ）是短序列的单链ＤＮＡ,在体外通过化学合成,与细胞内特异的靶序列互补。ＯＤＮ比通过表达载体导入的方式应用广泛,而且由于它可以作为反义…     

反义寡核苷酸技术的进展及应用

随着分子生物学和遗传工程的发展,基因治疗应运而生,得到广泛的肯定,其中包括反义核酸技术,简称反义技术。那些能与特定的ＤＮＡ或ＲＮＡ以碱基互补配对的方式结合,并阻止其转录和翻译的短核酸片段,称为反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）。研究反义寡核苷酸作用机理和应用的技术叫反义技术。 反义技术概述 早在１９８４年,Ｊｏｈｎａｔｈａｎ Ｇ就报道了用反义ＲＮＡ抑制ＴＫ基因的表达取得了良好的效果~［１］。反义寡核苷酸抑制靶基因的作用途经包括：１．反义寡核苷酸与ＤＮＡ双螺旋形成三螺旋,…     

反义核酸技术及其在心血管研究中的应用

反义核酸技术及其在心血管研究中的应用北京医科大学生物化学教研室邱京欣，周爱儒北京医科大学生物化学教研室反义（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ）核酸是揩按照碱基互补配对原则，能够与互补链（靶基因或其表达的ｍＲＮＡ）特异结合，从而影响靶基因转录或翻译的ＲＮＡ或ＤＮＡ片...     

血管内皮生长因子反义RNA对人脑垂体瘤细胞的作用

目的 :研究血管内皮生长因子 (VEGF)反义RNA对人脑垂体瘤细胞的抑制作用 ,探讨以VEGF反义RNA进行垂体瘤基因治疗的可行性。方法 :将VEGF反义cDNA、正义VEGFcDNA质粒转染垂体瘤细胞 ,通过Northern印迹杂交鉴定其表达 ,测定被转染细胞生长率 ,用原位杂交和免疫组化法检测VEGFmRNA及蛋白表达。结果 :经鉴定被转染的垂体瘤细胞有外源性VEGF反义基因的整合及表达 ,其VEGFmRNA及蛋白表达水平降低 ,但其生长速率无明显减慢。结论 :VEGF在垂体瘤血管形成及发生、发展中起重要作用 ,可能成为基因治疗垂体瘤的优选靶的之一。     

反义寡核苷酸技术的进展及应用

随着分子生物学和遗传工程的发展,基因治疗应运而生,得到广泛的肯定,其中包括反义核酸技术,简称反义技术.那些能与特定的DNA或RNA以碱基互补配对的方式结合,并阻止其转录和翻译的短核酸片段,称为反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide).研究反义寡核苷酸作用机理和应用的技术叫反义技术.     

反义核酸抑制RON基因表达对A549的体外作用

目的探讨针对人RON基因跨膜区段(RONm)反义核酸对肺癌细胞系A549活性和细胞增殖的抑制作用,研究以RONm为靶的肺癌基因治疗的可能性?方法将人RONm cDNA反向插入到真核表达载体pcDNA3.1中,转染肺癌细胞A549,利用ELISA检测细胞模型RON基因表达水平,同时利用MTT和细胞计数方法监测细胞生物学活性的变化.结果转染后的肺癌细胞RON基因表达量和细胞活性明显降低,并出现明显的细胞凋亡?结论RONm反义核酸明显抑制RON基因的表达,同时对肺癌细胞的生长有抑制作用,促进细胞凋亡?     

RON基因反义核酸真核表达载体的构建策略

目的 构建RON基因跨膜区段(RONm)的反义核酸真核表达载体。方法 用RT-PCR技术，从人肺癌细胞提取的总RNA克隆RONm eDNA序列。然后酶切鉴定与测序分析得到RONm的T载体，再将RONm反向插入peDNA3．1 中，酶切鉴定得到RONm反义真核表达载体。结果 用RT-PCR亚克隆RONm，测序结果与GenBank的RONm相应序列(X70040)一致，阅读框无改变。构建出正确的RONm反义真核表达载体。结论 成功构建RONm反义核酸真核表达载体，为进一步将RON基因反义核酸作为一种肺癌基因治疗方法的研究打下了分子生物学基础。     

半乳糖修饰的反义核酸在小鼠体内肝脏导向作用研究

半乳糖修饰的反义核酸在小鼠体内肝脏导向作用研究周永兴，郭军，姚志强，温守明，王升启，冯志华，张文彬，李光玉（唐都医院传染病科西安７１００３８空军总医院，军事医学科学院）关键词半乳糖受体；肝脏导向；反义核酸；基因治疗中图号Ｒ５１２．６国外曾有人将天然去...     

反义寡核苷酸在恶性肿瘤治疗中的作用及机制

反义（antisense）核酸技术的基本原理是根据Watson-Crick碱基互补配对规律和核酸杂交原理，设计出能与靶基因特定区域结合的互补寡核苷酸片段，与靶基因（DNA）或信使核糖核酸（mRN-A）的特定序列相结合，以影响靶基因的表达、抑制其功能，而其他基因的转录和表达则不受影响。封闭单个基因表达的反义的概念由Zamecnik和Stephenson首次描述，     

一种新的修饰型反义寡核苷酸抑制肿瘤细胞表达bcl-2的初步研究

目的：用新的修饰型吗呆代反义寡核苷酸（M－ODN）抑制肿瘤细胞bcl-2的表达，探讨发展新的抗肿瘤药物的可能性。方法：用吗啉代bcl-2反义寡核苷酸作用于K－562细胞，并与全硫代修饰的bcl-2反义寡核酸（S－ODN）为对比，MTT法观察细胞生长抑制率，流式细胞术观察细胞凋亡率。结果：吗啉代修饰型的bcl-2反义寡核苷酸在作用效率、持久性及低细胞毒性等方面均优于硫代修饰。结论：反义吗啉代寡核有望成为新的肿瘤基因治疗手段。     

反义核酸技术及应用

反义核酸技术是用人工合成的或生物合成的特定互补的DNA或RNA片段阻断从基因到蛋白的信息流 ,以达到抑制或阻断基因表达的生物新技术。利用核酸分子杂交原理将反义寡核苷酸 (antisenseoligonucleotide,ASON)作为外源性基因表达抑制物结合到靶mRNA序列上阻止其翻译成蛋白[1 ] 。具有杂交特异性和选择性调节基因的表达的特点[2 ] ,这一技术不仅已成为常用的实验室研究方法 ,还广泛的应用于研究病毒、肿瘤、寄生虫和遗传性疾病的预防和治疗 ,具有重要的应用前景。对于人类基因的研究 ,人们采用分子克隆、分子杂交、PCR技术等一系列研究…     

反义技术治疗肿瘤的临床进展

反义技术是根据核酸间的碱基互补原理 ,用生物合成或人工合成的互补反义核酸或其化学修饰物与细胞内的特定核酸结合以抑制或封闭其表达。在肿瘤治疗方面 ,人们以癌变过程中的不同突变基因为靶位 ,设计了许多反义抗肿瘤药物 ,其中部分已进入临床试验阶段。作者对已进入临床试验阶段的反义抗肿瘤药物进行综述     

反义技术在体外净化中的应用

随着分子生物学的迅速发展 ,以基因治疗为主的新技术、新方法被广泛地引入自体造血干细胞移植物的体外净化。笔者介绍反义技术在体外净化中的一些研究进展。1　反义技术用于体外净化的作用原理大多数肿瘤是异常基因表达、正常基因表达下调或过度表达的结果。反义核酸的策略是将与癌基因或异常表达的正常基因互补的反义核苷酸 (DNA或 RNA)导入肿瘤细胞 ,与肿瘤细胞内相应的 DNA或 RNA结合 ,阻断癌基因转录和表达 ,从而阻止肿瘤细胞生长。例如 ,大多数慢性粒细胞白血病 (CML)患者存在有染色体易位 ,并表达为具有 CML 特异性的 bcr/abl…     

p53水平对端粒酶逆转录酶表达的调节作用

目的研究野生型P53表达水平对端粒酶逆转录酶(HTERT)表达的调节作用。方法采用针对P53的反义核酸转染HEPG2细胞和稳定表达PPUR/U6/HTERT的HEPG2细胞,野生型P53表达质粒转染HEPG2细胞,以WESTERN-BLOT验证其对靶基因的抑制或增强作用,然后再用WESTERN-BLOT检测HTERT的表达水平。结果P53反义核酸和野生型P53表达质粒能明显降低或增强P53的表达,降低P53的表达对HTERT的表达无明显影响;而P53表达增加则可抑制HTERT的表达。结论P53与HTERT之间存在相互作用,野生型P53对HTERT的表达起负调节作用。     

反义技术在造血系统疾病研究中的应用

<正> 反义技术是根据碱基互补的原理,用人工合成或生物体生成的与目标靶的DNA或RNA序列特定互补的短核苷酸片段,抑制或封闭基因表达的技术方法。反义技术能够较好地抑制和封闭目的基因的表达,干扰复制、转录和翻译,为肿瘤的基因治疗和基因功能的研究提供了强有力的工具。1978年,Zamecnik和Stephenson首次发现反义RNA能抑制Rous肉瘤病毒在培养细胞中的增殖,展示了反义核酸作为基因水平治疗药物的潜力。1990年美国的基因工程新闻将反义技术列为9O年代十大热点生物技术之一。反义技术在临床应用方面取得了重大进展,目前已有4种反义     

基因治疗在脊柱外科的应用

自从 1990年美国国立卫生研究院 (ＮＩＨ)首次成功地进行腺苷脱胺酶缺乏症的基因治疗以来 ,基因治疗已成为当前生物医学中进展最快的领域之一 ,其基本原理是把编码目的基因的核酸序列 (ＲＮＡ或ＤＮＡ)通过基因转移的技术插入适当的受体细胞内 ,使被转移的细胞成为特定蛋白的加工厂 ,表达其蛋白质产物 ,改变该细胞本身的代谢并影响其邻近细胞 ,发挥生物学活性 ,从而纠正或补偿因基因缺陷或异常所引起的疾患。随着对人类基因结构及其功能研究的深入 ,基因治疗的研究也日益深入和广泛 ,基因治疗的含义已经不是严格的指用一个正常基因移植取代…