凋亡抑制蛋白XIAP与Survivin在儿童急性白血病中的表达

目的探讨凋亡抑制蛋白XIAP,Survivin在儿童急性白血病(AL)中的表达及其临床意义。方法54例AL患儿,其中初诊未治26例,治疗后完全缓解(CR)23例,复发5例。应用免疫组织化学方法检测其骨髓细胞XIAP,Survivin蛋白表达。对照组为10例非恶性血液病患儿。结果(1)XIAP,Survivin蛋白在初诊未治AL患儿骨髓中表达水平均高于缓解期(P<0.05,0.008)和对照组(P<0.05,0.008),与复发组相比均无显著性差异(P>0.05,0.008)。XIAP在缓解期仍高于对照组(P<0.05),Survivin在缓解期和对照组相比无显著性差异(P>0.008)。(2)初诊未治AL患儿XIAP,Survivin蛋白表达在急性淋巴细胞白血病(ALL)和急性髓细胞白血病(AML)组比较无显著性差异(P>0.05)。(3)初诊未治AL患儿XIAP,Survivin蛋白表达显著正相关(r=0.923,P<0.001)。结论(1)儿童AL XIAP,Survivin蛋白高表达,提示二者可能通过抑制肿瘤细胞的凋亡参与了AL的发生发展,为儿童AL的治疗提供了新思路。(2)XIAP,Survivin蛋白表达可能与AL的临床分型无关,有希望成为AL的诊断性指标。(3)初诊未治AL患儿XIAP,Survivin蛋白表达显著正相关,提示XIAP,Survivin在儿童AL的发生与发展中可能互相影响。     

急性白血病患儿血浆基质细胞衍生因子-1及其受体CXCR4表达的临床意义

目的探讨儿童急性白血病(AL)血浆基质细胞衍生因子-1(SDF-1)的水平和骨髓细胞表面CXCR4的表达及其临床意义。方法收集50例AL患儿、20例健康儿童和10例非恶性血液病患儿(对照组)。采用ELISA法分别检测AL患儿初诊时、缓解6个月、复发时和对照组儿童外周血浆SDF-1水平。用流式细胞仪检测50例AL患儿初诊时和10例非恶性血液病患儿骨髓细胞表面CXCR4的表达。结果1.AL初诊组和缓解组血浆SDF-1水平明显高于对照组(Pa<0.01),且初诊组高于缓解组(P<0.01);急性淋巴细胞白血病(ALL)组血浆SDF-1水平高于急性髓细胞白血病(AML)组(P<0.01);SDF-1水平在ALL和AML各亚型之间差异无统计学意义;复发的4例患儿,其血浆SDF-1水平在初诊时和复发时均高于缓解时(Pa<0.05);髓外浸润组SDF-1水平与非髓外浸润组比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.AL患儿骨髓细胞表面CXCR4的相对荧光强度明显高于对照组(P<0.01);ALL组高于AML组(P<0.01);CXCR4在ALL的L1组与L2组的表达,无统计学差异,但T-ALL组高于B-ALL组(P<0.05...     

同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病中的表达及其临床意义

目的：研究同源盒基因HOXA9在儿童急性白血病（AL）患儿骨髓单个核细胞中的表达,并探讨其临床意义。方法：采用RT-PCR方法检测46例不同时期AL患儿HOXA9 mRNA的表达水平,以15例特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿作为对照。结果：46例AL患儿（52份骨髓标本）HOXA9基因阳性表达率为63%,其中急性髓细胞白血病(AML)组阳性表达率（86%）明显高于急性淋巴细胞白血病（ALL）组（35%）及对照组（13%）（P<0.05）; AML组HOXA9 mRNA表达水平明显高于ALL组及对照组（P<0.05）。HOXA9在各型儿童AML中表达不同,mRNA相对表达水平依次为：M5型＞M4型＞M1和（或）M2型,而在M3型中未检测到表达。HOXA9在AML患儿高危组中的阳性表达水平较高。AML患儿初治组HOXA9基因阳性表达率及mRNA水平明显高于缓解组和对照组（P<0.05）,而缓解组与对照组比较差异无统计学意义;未缓解组HOXA9基因表达显著高于缓解组和对照组（P<0.05）。结论：HOXA9基因高表达与AL的发生相关;AML患儿HOXA9基因表达水平明显高于ALL患儿。HOXA9基因高表达者与白血病危险程度有关,且提示预后不良。因此,HOXA9基因有望成为儿童AL诊断、治疗及判断预后的一个靶点。     

急性白血病儿童黑色素瘤特异性抗原基因表达的意义

目的检测黑色素瘤特异性抗原(PRAME)基因在急性白血病儿童中的表达,并探讨其临床意义。方法用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测72例急性白血病(AL)患儿及20例对照者骨髓或外周血中PRAME基因mRNA的表达,并对PRAME基因mRNA表达阳性者进行动态检测。结果急性白血病患儿确诊时PRAME基因的阳性表达率为40.28%,其中45例急性淋巴细胞白血病患儿阳性表达率为40.0%,27例急性髓细胞白血病患儿中PRAME基因的阳性表达率为40.74%,两者之间无显著差异(P>0.05);而对照组均为阴性表达。PRAME基因的表达在白血病缓解期明显降低,当病情复发时PRAME基因的表达再次上升。结论PRAME基因在儿童AL中有较高水平表达,其动态变化与预后密切相关,可作为儿童AL微小残留病变的一个监测指标,对判断预后、指导治疗有重要意义。     

黑色素瘤特异性抗原基因在儿童急性白血病中的表达及初步应用

目的探讨急性白血病(AL)儿童骨髓及外周血单个核细胞(MNC)中黑色素瘤特异性抗原(PRAME)基因表达情况,以及用于微小残留病监测的临床意义。方法釆用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测31例初发、6例复发、10例完全缓解期AL儿童骨髓及外周血PRAME mRNA的表达情况,同时检测10例非血液系统恶性疾病患儿骨髓、5例正常成人外周血中PRAME mRNA的表达情况,分析该基因与疗效、预后之间的关系。结果 37例初发及复发AL病例中15例PRAME mRNA表达阳性(40.5%),其中在急性淋巴细胞白血病(ALL)组、急性髓系白血病(ANLL)组的阳性率分别为37.9%、50.0%,两组比较差异无显著性(P0.05)。在初发组及复发组的表达率分别为38.7%、50.0%,两组比较差异无显著性(P0.05)。10例完全缓解期及15例对照组病例中PRAME mRNA表达均阴性。PRAME基因表达阳性的患儿完全缓解率(CR)显著低于表达阴性的患儿(CR率分别为60.0%,90.99%,P=0.042)。随访1例初诊PRAME基因表达阳性的ALL患儿,经化学治疗达完全缓解后PRAME基因表达转阴。结论 PRAME基因可在AL患儿中呈阳性表达,并可随疾病的缓解情况逐渐降低或转阴。因此,PRAME基因作为儿童AL的一个重要基因标记物,动态监测其表达水平在评估疗效、判断预后、预测复发方面有一定的意义。     

c-kit受体在急性白血病患儿中表达的意义

目的 探讨c-kit受体(c-kit R,CD117)在急性白血病(AL)患儿中的表达,了解c-kit R表达在急性非淋巴细胞白血病(ANLL)中的诊断价值及其与ANLL的临床和生物学特征的关系.方法 采用流式细胞术(FCM)分别检测28例急性淋巴细胞白血病(ALL)和37例ANLL患儿骨髓单个核细胞(BMMNC)跨膜蛋白c-kit R 的表达;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测儿童AL中c kit R mRNA水平,并与非恶性血液病患儿36例BMMNC比较.结果 ALL患儿BMMNC中c-kit R表达率及其mRNA表达水平与对照组比较均无显著性差异(Pa＞0.05),而ANLL患儿的c-kit R表达率及其mRNA表达水平则均显著高于对照组和ALL患儿(x2=40.75,44.20 Pa＜0.01).ANLL患儿c-kit R表达率及其mRNA表达水平与外周血白细胞计数及肝脾大均无关(x2=0.011,0.084Pa>0.05),与其血清LDH水平增高有关(x2=6.257 P＜0.05).结论 c-kit R可作为AL患儿MIC分型诊断的髓系免疫表型依据,可用于鉴别髓系白血病.     

CXCR4在儿童急性白血病的表达及临床意义

目的探讨儿童急性白血病(AL)骨髓细胞表面CXCR4的表达及其临床意义。方法采用流式细胞术分别检测43例初诊未治急性白血病患儿(实验组)和10例非恶性血液病患儿(对照组)骨髓细胞表面CXCR4的表达情况。结果1.急性白血病患儿骨髓细胞表面CXCR4的相对荧光强度明显高于对照组(P<0.05)。2.ALL组CXCR4的相对荧光强度明显高于AML组(P<0.05)。3.髓外浸润组患儿初诊时CXCR4的相对荧光强度明显高于非髓外浸润组。(P<0.05)。4.实验组患儿CXCR4的相对荧光强度与外周血白细胞计数(WBC)呈正相关关系,相关系数为0.58(P<0.05)。结论1.CXCR4在儿童急性白血病初诊时为高水平表达,提示它可以作为急性白血病的一种检测指标。2.CXCR4的表达在ALL明显高于AML,说明它与急性白血病的类型具有一定相关性。3.急性白血病患儿骨髓细胞表面CXCR4的高表达与髓外浸润密切相关,并且和初诊时高白细胞计数有关。     

急性白血病患儿骨髓细胞环氧合酶-2和survivin表达及其意义

目的探讨环氧合酶-2(COX-2)和survivin蛋白在儿童急性白血病(AL)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学链霉亲和素-生物素-过氧化物酶(SABC)法检测2006年6～11月收治42例AL患儿骨髓细胞中COX-2和survivin的表达,对照组为10例非恶性血液病且骨髓正常儿童。结果AL患儿COX-2和survivin表达阳性率分别为52.4%和45.2%,与对照组比较差异有显著性(Pa<0.05)。其中32例急性淋巴细胞白血病(ALL)COX-2和survivin的表达阳性率分别为46.9%和40.6%,与对照组比较差异有显著性(Pa<0.05)。ALL高危组和中低危组COX-2阳性表达率分别为54.5%和42.8%,二组比较差异无统计学意义(Pa>0.05)。AL42例COX-2与survivin表达均为阳性16例,均为阴性17例,COX-2和survivin蛋白表达呈正相关(r=0.579P<0.001)。COX-2阴性组初次完全缓解率高于阳性组(93.3%和66.7%),差异有显著性(P<0.05)。结论1.COX-2蛋白在儿童AL中表达增高;2.COX-2与抗凋亡因子survivin共同参与AL发展,二者可能起协同作用;3.COX-2高表达可能与儿童AL预后有关。     

急性白血病患儿骨髓血管内皮生长因子与增殖细胞核抗原的表达及其意义

目的探讨增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF)在儿童急性白血病(AL)中的表达及其意义。方法采用S-P免疫组织化学方法,检测59例AL患儿骨髓细胞PCNA和VEGF表达,比较不同类型白血病、初治组与复发难治组、治疗缓解组与未缓解组间的表达差别。选择同期住院15例非白血病患者正常骨髓作为对照组。结果PCNA、VEGF在AL患儿中表达均明显高于对照组(t=5.59,6.67 P均<0.05);PCNA在初治ALL中表达显著高于ANLL(t=2.681 P<0.05),VEGF表达无差异(t=0.970 P>0.05);初治组与复发难治组、缓解组与未缓解组两者表达均有显著性差异(P均<0.05)。结论PCNA和VEGF在儿童AL中存在高表达,以不同机制参与AL发生、发展,与疾病预后有关。     

儿童急性白血病Notch1和Jagged1的基因表达

目的：探讨儿童急性白血病（AL）骨髓或外周血单个核细胞中Notch1和Jagged1基因表达及其在AL发病中的可能作用。方法：收集2009年2月至2011年7月初诊的47例AL患儿和20例正常或非恶性血液病儿童（对照组）骨髓或外周血单个核细胞,采用二步法半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测骨髓或外周血中Notch1和Jagged1基因表达情况。47例AL患儿中,急性淋巴细胞白血病（ALL）32例,其中B-ALL 26例,T-ALL 6例;急性髓细胞白血病（AML）15例。结果：ALL组及AML组Notch1基因阳性率高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。T-ALL患儿Notch1 基因表达水平高于B-ALL患儿,差异有统计学意义（P<0.01）。ALL组及AML组Jagged1基因阳性率与对照组比较差异无统计学意义,但ALL组及AML组Jagged1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Notch1在儿童不同类型ALL中的表达有明显差异,T-ALL 患儿中的Notch1表达明显高于B-ALL患儿;在儿童AL细胞中,普遍存在Notch1信号的活化;Notch1在AML儿童中异常表达,提示Notch1在AML儿童中也起着重要作用。Jagged1在ALL及AML儿童中异常表达,但需要收集更多资料论证。     

凋亡抑制蛋白1和促凋亡蛋白第2个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂在急性淋巴细胞白血病患儿中的表达

目的 通过检测细胞性凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)和促凋亡蛋白第2个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(Smac)在儿童ALL中的表达,分析和探讨二者的关系及临床意义.方法 采用病例对照研究,研究对象为48例ALL患儿.其中初治组23例,缓解组21例,复发组4例;对照组为12例骨髓象正常的非恶性血液病患儿.应用SP免疫组织化学方法分别检测各组患儿骨髓中c-IAP1、Smac蛋白表达情况.采用SPSS 12.0软件进行统计分析.结果 c-IAP1蛋白在初治组骨髓中阳性表达率为60.9%,缓解组阳性表达率为28.6%,复发组阳性表达率为75.0%,对照组阳性表达率为16.7%.Smac蛋白在初治组骨髓中阳性表达率为 56.5%,缓解组阳性表达率为19.0%,复发组阳性表达率为75.0%,对照组阳性表达率为16.7%.c-IAP1、Smac蛋白在初治组ALL患儿骨髓中表达水平均分别高于缓解组(P<0.008)和对照组(P<0.008);初治组和复发组两因子比较,差异均无统计学意义(Pa＞0.05);复发组中c-IAP1、Smac表达水平均高于对照组(Pa＜0.008).结论 c-IAP1、Smac可能参与了儿童ALL的发生与发展.     

急性白血病患儿骨髓细胞血管内皮生长因子及其受体表达

目的探讨儿童急性白血病（AL）骨髓细胞血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（Flt,KDR）表达差异,分析其与儿童AL临床特征关系及化疗前后变化。方法采用S-P免疫组织化学方法检测53例AL患儿治疗前后及对照组骨髓VEGF/Flt-1,KDR表达情况,其中急性淋巴细胞白血病（ALL）33例,急性髓系白血病（AML）20例;对照组21例为骨髓像正常非恶性血液病患儿,抽取骨髓肝素抗凝,应用梯度离心法分离单个核细胞。结果VEGF、Flt-1、KDR在AL患儿骨髓中表达水平高于对照组,AML组表达高于ALL组。化疗后完全缓解（CR）40例患儿,其VEGF、Flt-1、KDR的表达在化疗后较化疗前显著性降低;化疗后未获得CR患儿的表达在化疗前后无显著性。AL患儿VEGF的表达与骨髓中幼稚细胞百分比、外周血幼稚细胞百分比呈正相关。骨髓VEGF、Flt-1、KDR表达水平在不同年龄、性别、有无髓外浸润无差异。高表达VEGF组缓解率低于低表达组。结论VEGF、Flt-1、KDR在儿童AL中高表达,提示可能与儿童AL的发生过程、发展、疾病预后有关。     

儿童急性淋巴细胞白血病及阿霉素所致Jurkat细胞凋亡时WAVE1表达研究

目的：初步探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVE1）在急性淋巴细胞白血病（ALL）发病中可能的作用及意义。方法：运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量法和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测40例ALL初治患儿、15例化疗完全缓解半年、4例复发、10例非白血病患儿BMMCs中WAVE1 mRNA和蛋白的表达水平。以不同浓度阿霉素处理Jurkat细胞：①采用MTT法测细胞增殖;②采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;③采用RT-PCR和Western blotting检测WAVE1表达。结果：ALL初治和复发患儿BMMCs均有WAVE1 mRNA和蛋白的表达,对照和缓解组BMMCs中mRNA和蛋白低表达或无表达,初治和复发组的WAVE1 mRNA和蛋白的表达表达水平显著高于化疗后缓解组和对照组（P<0.01）。阿霉素明显抑制Jurkat细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应（P<0.05）;阿霉素作用24 h后,细胞凋亡随药物浓度增增高而增加,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);细胞WAVE1 mRNA和蛋白表达水平随阿霉素处理浓度的增高而降低,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论：WAVE1在ALL患儿BMMCs中高表达;WAVE1可能与儿童ALL病程相关,它可能成为动态检测儿童ALL病情的一个新指标。     

细胞外信号调节激酶-1、细胞周期蛋白D1表达与儿童急性白血病关系研究

目的探讨细胞外信号调节激酶_1(ERK1)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的表达与儿童急性白血病(AL)的关系。方法50例儿童AL(AL组)和26例AL完全缓解(AL_CR组)患儿为病例组,23例非肿瘤性疾病患儿为对照组,采用超敏SP免疫组织化学法,检测各组骨髓细胞中ERK1、cyclinD1的表达情况。结果AL组ERK1、cyclinD1阳性率分别为68.00%和56.00%,明显高于AL_CR组(3.85%,3.85%)和对照组(0,0)(P<0.01);高危AL患儿中阳性率分别为90.91%、86.36%,明显高于标危AL患儿(P<0.01);16例AL患儿化疗前ERK1、cyclinD1阳性率分别为75.00%、68.75%,化疗缓解后阳性率均为0(P<0.01);AL组中ERK1、cyclinD1表达相同(χ2=2.5,P>0.05)。结论AL患儿ERK1、cyclinD1表达率较高,可作为近期疗效的观察指标;ERK1与cyclinD1过度表达相同,可能在AL发生发展过程中有协同作用。     

儿童急性白血病患儿骨髓细胞中血管内皮生长因子及其受体的表达

目的探讨血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VFGF)及其受体(vascu-larendothelialgrowthfactor-receptorVEOFR)在儿童急性白血病(acuteleukemia,AL)骨髓中的表达,分析其在化疗前后的变化。方法采用SP免疫组化方法检测53例急性白血病患儿治疗前后以及对照组骨髓中VEGF/VEGFR(包括Flt-1和KDR两种)的表达。光学显微镜下观察阳性细胞数,并判定其染色强度,计算二者之积,结果用任意单位(arbitraryunits,AU)值表示。统计分析采用t检验、方差分析、卡方检验,用SPSS11.0计算机软件进行分析。结果VEGF、FIt-1、KDR在急性白血病患儿骨髓中表达水平(AU=5.35±3.51,2.25±1.05,4.53±2.14)高于对照组(AU=3.36±1.85,1.12±0.85,1.90±1.12)(P<0.01).化疗后获得完全缓解(CR)的40例患儿,其VEGF、Fit-1、KDR的表达在化疗前为5.28±3.41,2.17±1.08和4.61±2.08,获CR后为3.02±1.78,1.18±0.96和2.50±1.15,差异有显著性(P<0.05)化疗后未获得CR患儿VEGF、Flt-1、KDR的表达在化疗前后无显著性(P>0.05)。骨髓中VEGF、Flt-1,KDR的表达水平在不同年龄、不同性别、有无髓外浸润无差异(P>0.05)。结论VEGF、Flt-1,KDR在儿童急性白血病中。表达增高,提示VEGF,Flt-1,KDR在儿童急性白血病的发生过程中起着重要作用。VEGF、Fit-1、KDR在儿童急性白血病化疗后均有明显的降低,提示VEGF可以作为评价儿童急性白血病化疗反应的指标。