三倍体丹参的培育及其可持续利用研究

目的 建立三倍体丹参培育及其可持续利用的方法。方法 应用“基因组多倍化与杂交相结合”的方法,将二倍体白花丹参人工诱变成同源四倍体（4x＝32）,然后与栽培或野生二倍体（2x＝16）丹参进行杂交,转育成三倍体（3x＝24）丹参。结果 4x♀×2x♂或2x♀×4x♂均能获得三倍体丹参,三倍体丹参具有多倍体和杂交种双重优势,根条数增加94.23%,根部鲜质量增加215.33%,主要药物成分隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮II^A、丹酚酸B均达到或超过《中国药典》2010年版规定的水平。三倍体丹参杂交一代通过无性繁殖成为永久杂种,长期保持不变。结论 三倍体丹参的培育是我国丹参种质资源遗传改良、新品种选育和杂种优势可持续利用的重要途径。     

高山红景天同源四倍体诱导与鉴定研究

目的 获得高山红景天同源四倍体无性体系。方法 秋水仙素诱导种子加倍,通过多次组培再生进行嵌合体分离,采用气孔大小与密度测量、染色体计数和流式细胞学分析进行倍性鉴定。结果 秋水仙素质量分数与处理时间对种子萌发率、幼苗死亡率及诱变率均有十分明显的影响,0.2%秋水仙素处理露白种子72 h的萌发率、幼苗死亡率及诱变率分别为18.2%、73.6%、68.7%;倍性变异植株气孔明显增大,气孔密度变小;正常二倍体染色体数目为2n＝2x＝26,四倍体染色体数为 2n＝4x＝52,发现非整倍体的存在;倍性变异植株经3次再生纯化后获得纯合四倍体无性系,流式细胞学检测无嵌合体存在。结论 秋水仙素处理高山红景天种子获得同源四倍体具有可行性。     

移栽与摘除首花对灯盏细辛种子生产的影响

目的 探讨移栽与摘除首花对灯盏细辛种子生产的影响。方法 采用移栽和摘除首花的正交试验设计,每3 天采种1次,测定每批种子的产量、千粒质量和发芽率。采种后测定植株地上部分产量和药用成分量。结果 移栽处理的种子成熟期延长了12 d,种子产量、千粒质量、发芽率比直播分别提高了2.33倍、26.2%和2.03倍,二者存在显著性差异（P＜0.05）。与不摘除首花植株相比,摘除首花处理的种子的产量、千粒质量、发芽率分别提高了19.4%、8.4%和58.8%,同样存在显著性差异（P＜0.05）。移栽与摘除首花具有交互作用,但无统计学意义的显著性。采种后,“直播×摘除首花”处理的植株地上部分有较高产量和药用成分。结论 移栽和摘除首花能有效地提高灯盏细辛种子产量和质量。     

大孔吸附树脂分离纯化灯盏花提取物中灯盏花甲素和灯盏花乙素的研究

目的 建立质量分数高于99.0%灯盏花乙素的吸附树脂法分离工艺。方法 根据灯盏花乙素、灯盏花甲素结构特征,综合调控树脂的疏水性和氢键作用力,达到树脂的高吸附选择性。结果 MA比例为45%的酰胺基树脂ac-3吸附选择性最佳。以灯盏花提取物为原料,可分离得到质量分数高达99.4%的灯盏花乙素。结论 兼具疏水性和氢键作用力相互协同作用的酰胺基树脂,可高选择性的吸附灯盏花甲素,达到分离纯化灯盏花乙素的目的。该分离工艺操作简单,成本低廉,适于工业化生产。     

转双价抗虫基因 Bt-CpTI 提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性

目的 将外源苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因 CryIA(c) 和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 CpTI 共同转入四倍体菘蓝以获得鳞翅目昆虫小菜蛾抗性。方法 构建了以 CaMV 35S 为启动子,新霉素磷酸转移酶 (Npt-Ⅱ) 为选择标记,带有 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因的植物表达载体 pGBI121S4ABC 并转入根癌农杆菌 LBA4404。采用叶盘法遗传转化四倍体菘蓝。转基因再生植株经 PCR 和 Southern 杂交检测,并进行抗小菜蛾实验。结果 T₀ 代转化四倍体菘蓝的双基因阳性转化率达到 16.67%。Southern 杂交检测结果表明外源 CryIA(c) 基因和 CpTI 基因均已经随机整合到转基因菘蓝的基因组中。与野生对照相比,转基因四倍体菘蓝对小菜蛾显示出明显抗性。结论 转双价抗虫基因 Bt-CpTI 是提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性的有效手段。     

灯盏花素自微乳化释药系统的制备及特性研究

目的 研究灯盏花素自微乳化释药系统的处方及特性。方法 通过溶解度试验、处方配伍和伪三相图的绘制,筛选油相、表面活性剂、 助表面活性剂的最佳搭配和配比。并对灯盏花素自微乳化释药系统的理化性质、体外溶出度和大鼠在体肠吸收情况进行了测定。结果 灯盏花素自微乳化最终优化处方为：Maisine 35-1、Cremophor RH40、PEG400、TEA比例为25∶40∶35∶7。灯盏花素自微乳化释药系统的粒径为88.6 nm,在1 h时体外溶出率达到97.8%,约是灯盏花素原料药的8.0倍,是灯盏花素片剂的5.1倍。大鼠在体肠吸收灯盏花素自微乳化释药系统的肠壁通透系数分别是灯盏花素原料的3.4倍,灯盏花素片剂的3.3倍。结论 所制备的灯盏花素自微乳化释药系统促进了灯盏花素的溶出和吸收,为灯盏花素的新制剂开发提供了实验依据。     

四倍体菘蓝基因组DNA甲基化的甲基化敏感扩增多态性分析

目的 分析四倍体菘蓝Isatis indigotica基因组DNA甲基化水平和模式。方法 采用甲基化敏感扩增多态性（methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP）方法,对四倍体菘蓝基因组DNA的甲基化水平和模式进行分析。结果 筛选36对MSAP选择性引物进行扩增,共得到1 733条清晰的条带。二倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为24.05%,四倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为23.70%。检测到83个（4.86%）CCGG位点在四倍体菘蓝基因组中发生了DNA甲基化模式的改变,其中37个（2.13%）位点发生了超甲基化,36个（2.08%）位点发生了去甲基化。结论 二倍体和四倍体菘蓝在CCGG位点上存在胞嘧啶甲基化状态的改变。     

高效液相色谱法测定接骨片中阿魏酸和芍药苷

目的 分析四倍体菘蓝Isatis indigotica基因组DNA甲基化水平和模式。方法 采用甲基化敏感扩增多态性（methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP）方法,对四倍体菘蓝基因组DNA的甲基化水平和模式进行分析。结果 筛选36对MSAP选择性引物进行扩增,共得到1 733条清晰的条带。二倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为24.05%,四倍体菘蓝基因组胞嘧啶甲基化水平为23.70%。检测到83个（4.86%）CCGG位点在四倍体菘蓝基因组中发生了DNA甲基化模式的改变,其中37个（2.13%）位点发生了超甲基化,36个（2.08%）位点发生了去甲基化。结论 二倍体和四倍体菘蓝在CCGG位点上存在胞嘧啶甲基化状态的改变。     

RP-HPLC法同时测定石榴皮提取物阴道泡腾片中安石榴苷和鞣花酸

目的 建立RP-HPLC法同时测定石榴皮提取物阴道泡腾片中安石榴苷和鞣花酸的方法。方法 色谱柱为Phenomenex Gemini C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为甲醇-乙腈-0.2%三氟乙酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.8 mL/min,检测波长280 nm。结果 安石榴苷在0.098～0.610 mg/mL（r＝0.999 1）、鞣花酸在0.011～0.060 mg/mL（r＝0.999 8）有良好的线性关系;平均回收率分别为102.0%、100.4%（n＝9）,RSD均小于1.5%。结论 本方法简便、准确、专属性强,为石榴皮提取物阴道泡腾片的质量控制建立了方法。     

高效毛细管电泳法测定小白蒿不同加工品中5种黄酮类成分

目的 建立高效毛细管电泳（HPCE）法同时测定蒙药小白蒿不同加工品中5种黄酮类成分的方法。方法 小白蒿经不同加工工艺处理后,用HPCE法分别测定其中5种黄酮类成分,并对其进行比较。结果 回归方程分别为5,7,3′-三羟基-4′-甲氧基黄酮Y＝0.114 3 X＋0.032 7,r＝0.999 8;5,3′-二羟基-6,7,4′-三甲氧基黄酮Y＝0.100 9 X＋0.048 5,r＝0.999 6;槲皮素Y＝0.055 5 X＋0.026 8,r＝0.999 6;5,7,3′-三羟基-6,4′-二甲氧基黄酮Y＝0.113 2 X－0.016 1,r＝0.999 3;木犀草素Y＝0.097 9 X－0.029 5,r＝0.999 4。5种黄酮类成分分别在1.00～40.00、10.00～200.00、5.00～100.00、1.00～40.00、1.00～40.00 μg/mL线性关系良好。平均回收率分别为98.44%、97.75%、97.73%、97.98%、98.07%;RSD分别为1.60%、1.03%、1.57%、0.94%、1.20%。结论 不同加工工艺对小白蒿中5种黄酮类成分有一定影响;以5种黄酮类成分为分析指标,小白蒿最佳加工工艺为60 ℃加热干燥。     

四倍体平贝母的诱导及鉴定

目的 运用组织培养技术诱导平贝母四倍体。方法 采用不同质量浓度（200、500、1 000、2 000 mg/L）秋水仙素和不同的诱导时间（12～72 h）处理平贝母愈伤组织。结果 离体培养条件下,平贝母激素自养型培养材料在秋水仙素诱导下得到四倍体,四倍体染色体4n＝44,四倍体植株出现明显的多倍体特征。结论 500 mg/L秋水仙素处理24 h为最佳组合,可以诱导四倍体平贝母以平贝母子球做鉴定材料,获得较好的结果。     

短葶飞蓬总黄酮含量的生态生物学分析

目的：为研究短葶飞蓬总黄酮含量在个体器官间,个体间,不同地区和不同生境种群间的变化规律。方法：测定了云南邱北,昆明等8个地区,大理苍山不同海拔条件下生长和栽培的短葶飞蓬植株体内总黄酮含量。结果：不同地区生长的短葶飞蓬总黄酮含量不同,同一地区,总黄酮含量有随海拔升高而上升的趋势。植株地上部分茎,叶和花的总黄酮含量高于地下部分根的,生长在同一生境的短葶飞蓬不同个体总黄酮含量也有差异。结论：短葶飞蓬体内总黄酮含量的高低是基因和环境条件共同作用的结果。     

灯盏花注射液治疗老年脑梗死的临床观察

目的 评价灯盏花注射液治疗脑梗死患者的临床疗效。方法 采用随机，对照的原则，分成治疗组，对照组，前组应用灯盏花注射液，后组应用丹参注射液，共用14天为1疗程，结果 治疗组疗效明显优于对照组。结论 灯盏花注射液治疗脑梗死疗效肯定，安全。     

光强和光质对灯盏花生长与总黄酮量影响的研究

目的光强和光质对灯盏花生长与总黄酮量的影响。方法用遮阳网形成的不同光强以及不同颜色塑料膜下形成的不同光质的光照条件生境下,种植灯盏花试管苗至开花,取样测定生物量和黄酮的量。结果全光照和遮光20%生境中的植物生物量和黄酮的量明显高于遮光50%生境的植株;与无色塑料膜相比,黄、红、紫和蓝色塑料膜下平均植株的生物量均下降;无色和有色塑料膜下,蓝色膜下植株的黄酮量最高,而无色塑料膜下植株的黄酮产量最高。结论光强和光质影响灯盏花生长与总黄酮量,灯盏花在全阳光照射下植株有最高的生物量积累和黄酮产量。     

短葶飞蓬总黄酮含量变化研究

目的 研究短葶飞蓬总黄酮含量与生长发育和月份变化的关系，环境与遗传因素对总黄酮含量的决定作用。方法 测定同一月份不同生长发育期、同一生长发育期不同月份短葶飞蓬的总黄酮含量的器官分布，阳生和阴生生境下短葶飞蓬的总黄酮含量，不同花色短葶飞蓬的总黄酮含量。结果 短葶飞蓬的总黄酮主要分布于地上部分，而地上部分的总黄酮含量以盛花期员高，谢花期最低。4～6月盛花期短葶飞蓬各器官的总黄酮含量月份变化不显著。光照强度对短葶飞蓬总黄酮含量影响不大。短葶飞蓬的花色不能作为总黄酮含量的选择标记，遗传因素对个体间总黄酮含量差异起重要作用。结论 通过遗传育种提高短葶飞蓬总黄酮含量的前景是广阔的。     

灯盏花素对肾缺血再灌注过氧化物酶体损伤的保护作用

目的:研究肾缺血再灌注对过氧化物酶体的损伤及灯盏花素的保护作用。方法:采用大鼠肾缺血再灌注模型,观察灯盏花素对缺血再灌注肾组织过氧化物酶体中SOD、GSH-PX、CAT活力及MDA含量的影响。结果:灯盏花素用药组过氧化物酶体中SOD、GSH-PX、CAT活力显著高于缺血再灌注组,MDA含量显著低于缺血再灌注组(P<0.01)。结论:灯盏花素在肾缺血再灌注中对过氧化物酶体的损伤有明显的保护作用。