自然流产绒毛及蜕膜细胞凋亡的基因调控研究

目的应用流式细胞仪和免疫组织化学技术检测自然流产绒毛及蜕膜细胞凋亡及bax、bcl-2基因调控．探讨自然流产发病机制和基因调控机制，为进一步自然流产基因治疗研究提供理论依据。方法对20例自然流产病例和正常早孕吸宫流产病例的绒毛与蜕膜组织进行研究。常规光镜观察细胞形态学变化；DNA倍体分析检测细胞凋亡及其周期变化；免疫组化S-P法检测bcl-2／bax基因蛋白表达率比值。结果自然流产绒毛、蜕膜组织形态学结构均出现不同程度的退形性改变，自然流产中绒毛及蜕膜细胞凋亡率均较正常妊娠明显增高（P〈0．05）。蜕膜凋亡率尤其明显。自然流产的绒毛和蜕膜中抑凋亡基因bcl-2表达也较正常早孕时下降（P〈0．001），而促凋亡基因bax表达自然流产中显著增高（P〈0．001），结果与细胞凋亡的发生一致。结论细胞凋亡在胚胎的发育过程中起着重要作用，自然流产绒毛和蜕膜组织中大量的细胞凋亡是其形态学退变的重要原因，并进而阻碍了胚胎的发育。     

自然流产病例的绒毛与蜕膜细胞增殖和细胞凋亡的研究

目的　从细胞增殖与细胞凋亡的角度探讨自然流产的发生机制。方法　对 30例正常早孕吸宫流产病例和 30例自然流产病例的绒毛与蜕膜组织进行研究。常规光镜观察细胞形态学变化 ;免疫组织化学S P法检测增殖细胞核抗原 (PCNA)在细胞中的表达 ;用DNA缺口原位未端标记技术 (TUNEL)检测细胞凋亡 ;免疫组化S P法检测bcl 2 bax基因蛋白表达率比值。结果　自然流产绒毛组织形态学结构均出现程度不同的退行性改变 ,绒毛的细胞滋养细胞及蜕膜中增殖指数 (PI)较正常早孕时明显减少 (P <0 0 1) ,而合体滋养细胞中从未发生过增殖 ,PI为 0 ;与此相反自然流产绒毛的细胞滋养细胞、合体滋养细胞及蜕膜中凋亡指数 (AI)较正常早孕时明显增多 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,同时 ,早孕流产的绒毛及蜕膜中促 /抑凋亡基因bcl 2 bax表达率的比值也较正常早孕时下降 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,结果与细胞凋亡的发生一致。结论　细胞增殖和凋亡可能在孕卵发育过程中起着重要作用 ,绒毛和蜕膜组织中大量的细胞凋亡是其形态学退变的根本 ,并进而阻碍了孕卵的发育。     

不明原因早期自然流产患者绒毛和蜕膜组织中Bcl-2和Fas蛋白的表达

目的探讨Bcl-2和FAS蛋白在人不明原因早期自然流产绒毛和蜕膜组织中的表达及其意义。方法应用免疫组化SABC法和图像分析检测Bcl-2和FAS蛋白在孕5~9周绒毛和蜕膜组织中的分布和变化规律。结果 Bcl-2和Fas蛋白均主要分布于绒毛合体滋养层、细胞滋养层和蜕膜细胞的胞质内。Bcl-2蛋白在正常妊娠组的水平显著高于自然流产组（P（0.05）,Fas蛋白在自然流产组的水平显著高于正常妊娠组（P（0.05）。结论 Bcl-2和FAS蛋白在人不明原因早期自然流产过程中可能发挥重要作用。     

自然流产绒毛与蜕膜组织中细胞凋亡的研究

目的研究细胞凋亡在自然流产患者绒毛和蜕膜组织中的表达及其在自然流产中的作用。方法应用TdT介导的dUTP缺口原位末端标记技术（terminal deoxvnucleotidvl transferase-mediated dUTP-biotin nick endinglabeling,TUN-EL）检测40例早孕自然流产病例（研究组）和40例早孕人工流产病例（对照组）绒毛和蜕膜组织中细胞凋亡情况。结果凋亡指数在自然流产绒毛细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和蜕膜中分别为（24．54±3．21）％、（40．25±5．27）％和（56．14±4．56）％,早孕人工流产分别为（10．31±1．25）％、（15．65±5．45）％和（10．54±1．82）％,两组间差异有高度显著性（P〈0．01）。结论自然流产患者绒毛和蜕膜组织中细胞凋亡显著增加,其在自然流产的发生发展中起一定的作用。     

组织蛋白酶B和L在早期妊娠绒毛及蜕膜中的表达

目的 观察组织蛋白酶B（cathepsin B，CB）和L（cathepsin L，CL）在人早期妊娠绒毛及蜕膜中的表达．探讨它们在胚胎着床及发育过程中的作用。方法 研究组包括：正常早期妊娠行人工流产者30例、早期自然流产者25例、正常分泌期子宫内膜lO例和葡萄胎15例。应用免疫组织化学法检测CB和CL的表达。结果 CB、CL主要阳性表达于正常早期妊娠滋养层细胞和蜕膜细胞：CB在正常分泌期内膜．正常早期妊娠蜕膜、自然流产蜕膜中的阳性率表达分别为10％（1／10）、83.3％（25／30）、32．0％（8／25）；CL则分别为0、63.3％（19／30）、32．0％（8／25）；CB和CL在3组间的表达有显著性差异（P〈0．05）。CB在早期妊娠绒毛、自然流产绒毛、葡萄胎组织中表达强阳性率分别为10．0％（3／30）、0.66．7％（10／15）；CL则分别为26．7％（8／30）、4．0％（1／25）、80．0％（12／15）。CB和CL在3组间的表达有显著性差异（P〈0．05）。结论 CB和CL在正常和异常妊娠蜕膜和绒毛中的表达差异提示它们胚胎着床过程中可能起着很重要的作用。     

MMP-25在早孕绒毛和蜕膜中的表达及意义的研究

目的研究基质金属蛋白酶-25 (matrix metalloproteinase-25，MMP-25)在正常早期妊娠和自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达特点，探讨其在胚胎植入中的作用及其与自然流产的关系。方法采用半定量RT-PCR和免疫组化法检测60例正常早期妊娠和40例自然流产患者绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA及蛋白的表达。结果① MMP-25mRNA在正常早期妊娠的绒毛及蜕膜组织中均有表达，且绒毛组织中MMP-25mRNA表达水平随妊娠周数的增加逐渐上升，各孕周组间相比差异有统计学意义(P＜0.05)。自然流产组绒毛及蜕膜组织中MMP-25mRNA的表达明显低于正常妊娠组(P＜0.05)。② 正常妊娠组的绒毛组织中，MMP-25主要定位于细胞滋养细胞和合体滋养细胞，并且随妊娠周数增加表达逐渐增强，与RT-PCR结果吻合；自然流产组仅在合体滋养细胞中有表达，两组平均光密度分别为0.21±0.02和0.13±0.04，差异有统计学意义(P＜0.05)。蜕膜组织中MMP-25主要在腺上皮细胞表达，自然流产组的表达微弱，两组平均光密度分别为0.25±0.13和0.21±0.12，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论MMP-25表达变化与滋养细胞浸润能力相吻合，且蜕膜组织中呈阳性表达，推测其参与胚胎植入及胎盘形成过程中滋养细胞浸润活性调控及子宫内膜组织重构；自然流产患者MMP-25表达水平降低，造成滋养细胞浸润能力下降，可能与自然流产的发生有关。     

胚胎停止发育患者绒毛中细胞凋亡的表达意义

目的研究胚胎停止发育患者绒毛及蜕膜组织中细胞凋亡与细胞增殖的表达和临床意义。方法收集孕3个月以内胚胎停止发育患者绒毛、蜕膜组织和正常早孕绒毛、蜕膜组织各30例。用DNA末端缺口标记技术检测绒毛和蜕膜组织中的凋亡细胞,用免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原。结果①胚胎停止发育患者的绒毛及蜕膜组织中PCNA的阳性表达显著减少,与正常早孕对照组比较有显著性差异（P〈0．01）。②胚胎停止发育患者的绒毛及蜕膜组织内细胞凋亡指数显著增加,与正常早孕对照组比较差异有显著性（P〈0．05）。结论正常早孕和胚胎停止发育患者绒毛、蜕膜组织内均可见到PCNA阳性表达与凋亡细胞,细胞的增殖和凋亡的平衡与维持妊娠密切相关,平衡失调可能是引起胚胎停止发育的主要病理过程。     

Survivin在反复自然流产患者妊娠组织中的表达异常

目的 探讨反复性自然流产(RSA)患者绒毛及蜕膜组织中细胞凋亡抑制蛋白survivin的表达异常,及与反复性自然流产的相关性. 方法 应用免疫组化法检测26例RSA患者和20例正常早孕妇女绒毛及蜕膜组织内survivin在蛋白水平上的表达,并进行图像分析、比较、计算其平均阳性单位值(PU). 结果 Survivin在正常早孕及自然流产绒毛、蜕膜中均有表达,正常早孕组绒毛滋养细胞、蜕膜细胞survivin的表达分别为PU=15.12±2.05、PU=10.81±2.02,RSA组绒毛滋养细胞、蜕膜细胞survivin的表达分别为PU=8.86±2.31、PU=6.93±2.15,正常早孕组survivin的表达明显强于RSA组(P＜0.01),有显著性差异. 结论 凋亡抑制蛋白survivin在妊娠绒毛及蜕膜组织中低水平表达,可能是导致反复性自然流产的一个重要原因.     

基质金属蛋白酶诱导因子在先兆流产绒毛及蜕膜组织中的表达

目的探讨先兆流产时绒毛及蜕膜组织中细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（EMMPRIN）的表达情况。方法选取30例妊娠早期发生先兆流产的妇女,30例自愿行负压吸引术终止妊娠的早期正常妊娠妇女,在获取绒毛及蜕膜组织后应用免疫组织化学技术对EMMPRIN进行检测。结果（1）先兆流产组绒毛表达的EMMPRIN强于正常妊娠组,且增强部位为细胞滋养层柱细胞与合体滋养细胞。（2）EMMPRIN在先兆流产组、正常妊娠组蜕膜组织中均呈阳性表达,且二者表达的EMMPRIN无明显差异。结论发生先兆流产时合体滋养细胞、细胞滋养层柱所表达的EMMPRIN增强可能通过上调绒毛及蜕膜组织中基质金属蛋白酶（MMPs）的水平,降解细胞外基质（ECM）,使绒毛剥离、蜕膜组织剥脱。     

Stathmin在早期自然流产组织中的表达

目的探讨细胞周期调节蛋白Stathmin与早期自然流产发生的相关性。方法选择早期自然流产和早孕人工流产患者的绒毛和蜕膜组织各30例,采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组织化学法检测两组患者绒毛和蜕膜组织中Stathmin的表达。结果 Stathmin主要表达于胎盘绒毛和子宫蜕膜组织的细胞浆中,Stathmin在早期自然流产患者绒毛和蜕膜组织中的表达均显著低于早孕人工流产患者,其差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Stathmin可能与早期自然流产的发生相关。     

早期自然流产患者转化生长因子-β1的异常表达

目的探讨自然流产患者母胎界面转化生长因子-β1(TGF-β1)的异常表达。方法采用免疫组织化学技术半定量检测30例早期自然流产患者、25例正常妊娠妇女绒毛和蜕膜组织内TGF-β1表达强度。结果自然流产组合体滋养层细胞表达TGF-β1显著低于人工流产组(P<0.01)。结论早期自然流产患者绒毛合体滋养细胞层表达TGF-β1强度均较正常妊娠妇女显著下降,其低水平表达可能与自然流产相关。     

IVF-ET术后流产患者绒毛和蜕膜组织凋亡及相关调控蛋白的表达

目的:检测体外受精-胚胎移植(IVF-ET)术后早期自然流产患者绒毛和蜕膜组织凋亡及相关调控蛋白血管内皮生长因子(VEGF)、Bcl-2的表达,探讨其发病和基因调控机制。方法:采用免疫组织化学染色技术检测IVF-ET术后早期自然流产者(IVF-ET组)绒毛及蜕膜组织Bcl-2、VEGF的表达水平,并以同期正常早孕者(正常早孕组)的标本为对照。结果:VEGF主要表达于绒毛滋养细胞和血管内皮细胞胞浆。IVF-ET组VEGF表达明显低于正常早孕组,差异具有统计学意义(P<0.05)。Bcl-2主要在绒毛合体滋养细胞上表达。IVF-ET组滋养细胞及蜕膜细胞染色较浅,表达呈弱阳性,正常早孕组染色较深,表达强阳性,差异有统计学意义(P相似文献   

蜕膜与绒毛组织中血管内皮生长因子及血小板活化因子受体的表达与早期自然流产相关性

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）与血小板活化因子受体（PAF-R）在正常早期妊娠及早期自然流产患者蜕膜及绒毛组织中的表达,探讨其与早期自然流产的相关性。方法选取2008年1月至2009年12月在我院妇产科就诊的60例患者作为研究对象,分为正常早孕人流组（A组）、先兆流产组（B组）、稽留流产组（C组）各20例;采用免疫组化技术对VEGF、PAF-R在三组蜕膜及绒毛组织中的表达进行组织学检查及定量分析。结果 （1）三组蜕膜及绒毛组织中VEGF、PAF-R均有阳性表达。（2）VEGF表达量：A组〉B组〉C组（P〈0.05）。（3）PAF-R表达量：A组〉B组〉C组（P〈0.05）。结论早期自然流产患者存在VEGF、PAF-R表达水平的降低,VEGF、PAF-R表达水平的改变可能是导致早期自然流产的重要原因。     

Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达的研究

目的：探讨Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中的表达及其对妊娠结局的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术和免疫印迹法检测15例自然流产患者和20例正常早期妊娠妇女绒毛Jagged1 mRNA和蛋白的表达水平。结果自然流产组患者Jagged1mRNA表达水平（0．0623±0．0007）,低于正常早期妊娠妇女（0．0315±0．0065）,差异有统计学意义（P＜0．05）;Western－blot检测显示,早期自然流产患者Jagged1蛋白的表达水平低于正常早期妊娠妇女,但差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 Jagged1蛋白在早期自然流产患者绒毛组织中表达呈下调趋势,可能与母胎界面血管发育及滋养细胞缺氧有关,从而导致自然流产。     

CyclinB1与早期自然流产的相互关系

目的 探讨细胞周期调节蛋白CyclinB1与早期自然流产发生的相关性.方法 选择早期自然流产和正常早孕人流患者绒毛和蜕膜组织各30例,采用逆转录-聚合酶链反应法检测两种组织中CyclniB1的表达.结果 CyclinB1在早期自然流产组绒毛和蜕膜组织中的表达量显著低于正常早孕人流组绒毛和蜕膜组织中的表达量,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论 CyclinB1可能与早期自然流产的发生相关.     

GM-CSF及其受体与早期自然流产的关系研究

目的：探讨母胎界面局部细胞因子GM-CSF及其受体与早期自然流产的发生的关系．方法采集2009年8月至2011年12月间来云南省第三人民医院进行人工流产及自然流产病例的绒毛及脱膜组织各30例,用放射免疫法检测2组外周血中绒毛膜促性腺激素（HCG）含量,利用免疫组织化学和Western blot检测绒毛及脱膜组织中巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）及其受体（GM-CSFR）表达情况．结果自然流产组HCG值与人工流产组相比明显下降（P〈0.05）．绒毛及脱膜组织中GM-CSF和GM-CSFR 2组均有表达．与人工流产组相比,绒毛组织中,自然流产组的 GM-CSFR增加（P〈0.05）,GM-CSF的表达上调,但无统计学意义（＞0.05）．脱膜组织中,自然流产组的GM-CSF和GM-CSFR均增加（P〈0.05）．结论在脱膜组织中,适量的GM-CSF和GM-CSFR浓度维持妊娠的继续,浓度过高则不利于妊娠,可能是自然流产的原因之一．     

组织蛋白酶B和L在早期妊娠绒毛及蜕膜中的表达

目的 观察组织蛋白酶B(cathepsinB,CB)和L(cathepsinL,CL)在人早期妊娠绒毛及蜕膜中的表达,探讨它们在胚胎着床及发育过程中的作用。方法 研究组包括:正常早期妊娠行人工流产者30例、早期自然流产者25例、正常分泌期子宫内膜10例和葡萄胎15例。应用免疫组织化学法检测CB和CL的表达。结果 CB、CL主要阳性表达于正常早期妊娠滋养层细胞和蜕膜细胞。CB在正常分泌期内膜、正常早期妊娠蜕膜、自然流产蜕膜中的阳性率表达分别为10%(1/10)、83.3%(25/30)、32.0%(8/25);CL则分别为0、63.3%(19/30)、32.0%(8/25);CB和CL在3组间的表达有显著性差异(P<0.05)。CB在早期妊娠绒毛、自然流产绒毛、葡萄胎组织中表达强阳性率分别为10.0%(3/30)、0、66.7%(10/15);CL则分别为26.7%(8/30)、4.0%(1/25)、80.0%(12/15)。CB和CL在3组间的表达有显著性差异(P<0.05)。结论 CB和CL在正常和异常妊娠蜕膜和绒毛中的表达差异提示它们胚胎着床过程中可能起着很重要的作用。     

妊娠维持与细胞凋亡

目的：探讨细胞凋亡在妊娠维持中的作用。方法：采用凝胶电泳技术及Ｓ－Ｐ免疫组化技术,对２０例早期妊娠避免失败者（Ａ组）及１０例自然流产者（Ｂ组）的绒毛及蜕膜组织,进行ＤＮＡ片段分析、ｐ５３基因产物（Ｔｐ５３）、Ｆａｓ－配体（Ｆａｓ－Ｉ）蛋白基因产物表达检测。     

基因组DNA甲基化水平与不明原因早期自然流产的相关性

目的探讨基因组DNA甲基化水平与人不明原因早期自然流产的关系并从mRNA表达量上研究DNMT1、DNMT3A和
DNMT3B在自然流产绒毛DNA甲基化中的作用。方法收集45例核型正常自然流产绒毛组织及其中33例母亲外周血和44例
核型正常人工流产绒毛组织及其中34例母亲外周血,采用高效液相色谱法（HPLC）测定基因组DNA甲基化水平并用荧光定量
PCR法检测其中33例人工流产绒毛和30例自然流产绒毛DNMT mRNA的表达。结果（1）自然流产绒毛组DNA甲基化水平
低于人工流产绒毛组（P<0.01）;（2）自然流产母亲组和人工流产母亲组间DNA甲基化水平差异无统计学意义（P>0.05）;（3）自
然流产绒毛组DNMT1和DNMT3A mRNA的表达低于人工流产绒毛组（P<0.05）;（4）自然流产绒毛组DNMT3B mRNA的表达
与人工流产绒毛组差异无统计学意义（P>0.05）。结论（1）人类早期自然流产中确实存在着绒毛组织基因组DNA甲基化的不
足;（2）自然流产绒毛中DNA甲基化的不足可能与DNMT1和DNMT3A表达降低有关。
     

TNF-α的表达及sTNF-R水平与早期自然流产相关性的研究

目的：研究肿瘤坏死因子（TNF－α），可溶性肿瘤坏死因子受体（sTNER)I和Ⅱ与早期流产的关系。方法：对孕3mo内20例正常妊娠、20例第1次自然流产（spontaneous abortion,SA)和15例反复自然流产（recurrent spontaneous abortion,RSA)妇女的绒毛和蜕膜组织应用免疫组织化学SP法检测TNF－α，应用双抗体夹心ELISA法检测上述妇女血清中sTNFRI与sTNFRⅡ。结果：（1）SA及RSA绒毛细胞滋养层和蜕膜中TNF－α的表达均明显高于对照组；合体滋养层中TNF－α的表达SA与对照组无显著性差异，而RSA显著低于对照组（P＜0．05）；（2）SA与对照组比较，sTNFRI差异有显著性（P＜0．05），sTNFRI与sTNFRⅡ在RSA中的水平较SA均有显著差异（P＜0．01）。结论：TNF－α、sTNFR与自然流产的发生发展有关。因某些病理情况引发的蜕膜中TNF－α表达增加可能是自然流产发生的一个原因，而sTNFR水平的升高则可能具有自我保护和自我稳定的生理意义。