MKK6过表达调控SIRT1影响食管癌细胞肿瘤行为学的体外研究

目的 向食管癌Eca109细胞中转染pcDNA3.1（+）/myc-His A-丝裂原活化蛋白激酶6（MKK6）重组过表达载体,观察过表达MKK6影响沉默信息转录调控因子（SIRT1）表达后肿瘤细胞增殖、凋亡以及侵袭力发生的变化,探讨p38-MAPK-SIRT1调节轴的存在性及其对Eca109细胞各项肿瘤行为学造成的影响。 方法 根据GenBank中MKK6基因的mRNA序列设计引物,构建MKK6过表达载体;将Eca109细胞分空载体转染组、MKK6过表达载体转染组、MKK6-SIRT1 ShRNA共转染组和MKK6-RES（白藜芦醇）组,相应处理后,采用Western blot测定各组Eca109细胞的SIRT1及MKK6表达水平,MTT法检测各组Eca109细胞的增殖活力,Transwell法观察各组Eca109细胞的侵袭力,流式细胞术检测各组Eca109细胞的凋亡情况。 结果 测序结果表明成功构建MKK6过表达载体;转染MKK6过表达载体可降低Eca109细胞的内源性SIRT1表达,减弱Eca109细胞的增殖活力,促其凋亡,同时可使Eca109细胞的侵袭力增强,以上各项改变均与SIRT1的表达水平有关。 结论 Eca109细胞内可能存在p38-MAPK-SIRT1调节轴,MKK6及其下游因子对SIRT1可能具有反馈调节作用,可引起Eca109细胞各项肿瘤行为学的变化。     

三氧化二砷诱导食管癌细胞凋亡及其对C-myc和TGF-β1表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对体外培养的人食管癌细胞ECA109生长的抑制和诱导细胞凋亡的作用.方法用MTT法检测药物效应,透射电镜及流式细胞仪观察As2O3处理ECA109细胞后细胞周期和细胞凋亡.细胞免疫化学观察As2O3处理ECA109细胞后,ECA109细胞TGF-β1及C-myc表达的变化.结果 （1）MTT法证实As2O3对ECA109细胞生长有抑制作用,并呈剂量-效应关系.（2）流式细胞仪分析As2O3处理ECA109细胞后细胞滞留于G2/M期,并可见凋亡峰.（3）透射电镜可见ECA109细胞出现典型的细胞凋亡及坏死形态学改变.（4）As2O3下调C-myc和TGF-β1表达.结论 As2O3对人食管癌细胞ECA109有抑制作用,其抑制作用可能通过下调C-myc基因表达,诱导食管癌细胞凋亡和坏死、阻抑细胞周期进程,抑制ECA109细胞增殖.同时通过下调TGF-β1表达阻止食管癌的恶性进程.     

食管癌患者外周血调节性T细胞与NKG2D表达及相关性分析

目的探讨NK细胞活化受体（NKG2D）及调节性T细胞（Treg cells）在食管癌患者外周血中表达水平及其临床意义。方法采用流式细胞术检测140例食管癌患者及51例健康者外周血NKG2D表达率、及调节性T细胞占CD4＋T百分比,分析研究各细胞表达与食管癌临床TNM分期及调节性T细胞与NKG2D相关性。结果食管癌外周血NKG2D表达小于健康者（P〈0.001）;调节性T细胞表达大于健康者（P〈0.001）。NKG2D与调节性T细胞呈负相关性（r=-0.346,P〈0.001）。NKG2D表达总变异的12%与调节性T细胞有关（R2=0.120）。结论食管癌患者外周血调节性T细胞、NKG2D表达均与临床TNM分期有关。调节性T细胞抑制了NKG2D介导的NK细胞抗肿瘤功能。     

启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨启膈散乙酸乙酯提取物对食管癌Eca9706细胞增殖和凋亡的影响。方法 按沙参∶丹参∶茯苓∶川贝母（去心）∶郁金∶砂仁壳∶杵头糠=6∶6∶2∶3∶1∶1∶1的比例配制启膈散,每克药物配10ml的比例加入95%乙醇溶液,用旋转蒸发仪浓缩药液,浓缩液与乙酸乙酯按体积比2∶1进行萃取,获取启膈散乙酸乙酯提取物。Eca9706细胞与浓度分别为12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μg/ml的启膈散提取物共培养,MTT法检测启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率。Eca9706细胞与35%抑制浓度（IC35）、50%抑制浓度（IC50）和70%抑制浓度（IC70）的启膈散提取物共培养,采用流式细胞仪检测启膈散提物对Eca9706细胞的凋亡率。结果 不同浓度启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。启膈散提取物对Eca9706细胞的抑制率与启膈散提取物浓度拟合曲线方程为Y=-1.835×10-5X2+0.006X+0.185,R2=0.996,概率法计算IC35为22.8μg/ml,IC50为81.8μg/ml,IC70为162.2μg/ml。显微镜下观察,随着启膈散提取物浓度的增加,细胞变圆、变小,贴壁细胞数目逐渐减少,细胞间隙增大,细胞碎片增多。IC35、IC50和IC70启膈散提取物对Eca9706细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义（P＜0.001）。激光共聚焦显微镜下显示,启膈散提取物作用于Eca9706细胞后,部分细胞膜呈绿色,提示早期凋亡;部分细胞膜呈绿色,且细胞核呈红色,细胞体积变小、变圆,形成凋亡小体,提示晚期凋亡细胞。结论 启膈散乙酸乙酯提取物可抑制食管癌Eca9706细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

阿司匹林对人食管癌细胞株Eca-109生长及凋亡的影响

目的 通过体外实验观察阿司匹林（ASA）是否有诱导人食管癌Eca-109细胞发生凋亡及增殖抑制的作用.方法 通过噻唑蓝（MTT）实验测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪（FCM）检测凋亡率;通过电镜、Hoechst 33258染色从形态上观察细胞凋亡.结果 （1）阿司匹林能抑制人食管癌Eca-109细胞的生长,并在一定剂量和时间范围内呈现剂量、时间依赖关系.（2）流式细胞仪（FCM）观察细胞的凋亡率随阿司匹林浓度的增大而增加.（3）电镜下凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩致密,并沿核膜边集.（4）Hoechst 33258染色后可见典型的细胞凋亡形态学变化.结论 阿司匹林对人食管癌Eca-109细胞具有增殖抑制作用,能诱导细胞凋亡,凋亡率随阿司匹林浓度的增大而增加.     

子痫前期产妇外周血中树突状细胞、Th1Th2细胞含量检测

目的：研究子痫前期产妇外周血中Th1Th2细胞含量以及树突状细胞表型。方法：将在本院确诊的60例子痫前期产妇纳入观察组,将同期进行产检的60例正常妊娠产妇纳入对照组,采用流式细胞仪检测外周血中Th1细胞、Th2细胞的含量以及树突状细胞表型,采用real-time PCR的方法检测外周血中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）的mRNA含量,采用酶联免疫吸附法检测外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10的蛋白含量。结果：观察组的Th1细胞含量、Th1/Th2细胞比例以及Th1类细胞因子TNF-α、IFN-γ的含量均高于对照组,Th2细胞含量以及Th2类细胞因子IL-6、IL-10的含量低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;树突状细胞表型：外周血中CD83＋、CD80＋以及CD86＋阳性的树突状细胞比例均高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：子痫前期产妇外周血中Th1细胞功能增强、Th2细胞功能减弱,且成熟树突状细胞的数目增多。     

术中输入浓缩红细胞对食管癌患者术后免疫功能的影响

目的：探讨食管癌患者术中输入浓缩红细胞对术后固有免疫及细胞免疫功能的影响。方法：采用流式细胞仪分别对65例食管癌患者术前、术后两周外周血NK细胞及T细胞含量进行测定;其中19例患者行术中输入异体浓缩红细月包4U（输血组）,46例患者未行术中输血（未输血组）,对两组进行术前及术后外周血NK细胞及T细胞含量的比较。结果：输血组与未输血组术前外周血NK细胞及T细胞含量比较差异无统计学意义（P〉0．05）：输血组术后外周血NK细胞及T细胞含量分别为（11．670±4．311）％、（53．340±5．911）％,明显低于未输血组的（18．340±5．594）％、（63．180±6．397）％,P〈0．05;并且明显低于输血组术前的（20．720±9．394）％、（61．500±10．048）％,P〈0．05。未输血组外周血NK细胞及T细胞含量术前术后比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：术中输入异体浓缩红细胞可导致食管癌患者术后外周血NK细胞及T细胞的水平降低,而手术对其无影响,进而使患者固有免疫及细胞免疫功能降低,影响术后恢复,故临床手术中应该尽量避免输注浓缩红细胞。     

细胞外基质的力学表征对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响和机制

目的：初步探索细胞外基质力学表征对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响。方法：在不同力学性能的水凝胶上接种两种口腔鳞癌细胞CAL27和HSC3,通过光学显微镜观察细胞形态变化;利用免疫荧光观察层黏连蛋白β2（laminin β2,LAMB2）、Ⅵ型胶原α1（collagen type Ⅵ α1,COL6A1）以及E?钙黏蛋白（E?cadherin,CDH1）的表达定位以及表达水平;使用qPCR检测细胞多能性指标（SOX2、NANOG）、LAMB2、COL6A1、CDH1、整合素α6β4的亚基α6（integrin α6,ITGA6）和亚基β4（integrin β4,ITGB4）基因的表达水平。结果：不同力学性能的水凝胶会改变口腔鳞癌细胞的黏附性,高力学性能的水凝胶会增加细胞黏附效率。使用高力学性能水凝胶进行细胞培养时,细胞的生物学行为和细胞培养板培养的表型相似。在低力学性能水凝胶的作用下,CAL27细胞会形成紧密肿瘤细胞球,而HSC3细胞则会形成不紧密的细胞团块。使用低力学性能水凝胶进行细胞培养时,两种细胞中LAMB2和COL6A1都会高表达,并且LAMB2在细胞上的受体整合素α6β4表达也会增高。细胞多能性指标（SOX2、NANOG）和CDH1在CAL27细胞中会随水凝胶力学性能增加而降低,而HSC3细胞则相反。结论：细胞外基质的力学性能可以调节细胞黏附效率、细胞外基质合成、肿瘤细胞多能性和细胞间黏合等多种生物学行为。细胞外基质的力学性能可能是通过改变细胞外基质蛋白的表达来改变细胞的生物学行为,细胞生物学行为改变的差异还与细胞系有关。     

银杏叶提取物对6-OHDA诱导PC12细胞Bax和Bcl—2表达的影响

目的探讨银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract,GBE）对6-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OH—DA）诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制。方法经不同浓度GBE预处理体外培养的PC12细胞加入6-OHDA诱导多巴胺能神经元损伤模型,用4-甲基偶氮唑蓝（MTT）检测PC12细胞活力;流式细胞仪（FCM）测定PC12细胞凋亡百分比;采用免疫印迹法检测Bcl-2和Bax的表达水平。结果100μmolZL的6-OHDA处理PC12细胞24h,细胞活力较正常对照组明显降低（P〈0．01）;与模型组比较,GBE20,40μg/ml可明显减轻6-OHDA对PCI2细胞的毒性,GBE可使细胞活性增强,降低凋亡百分比。与正常对照组比较,模型组Bax表达升高,而Bcl-2表达降低（P〈0．05）。与模型组比较,GBE各剂量组Bax降低,而Bcl-2升高,且呈剂量依赖性（P〈0．05）。结论GBE对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡具有抑制作用,上调Bcl-2和下调Bax表达可能是其作用的机制之一。     

Survivin和CD44V6在食管癌组织中的表达及意义

目的探讨食管癌组织中Survivin和CD44V6蛋白的表达及其与各临床病理参数之间的关系。方法应用免疫组织化学染色（SABC法）检测61例食管鳞癌手术切除标本及26例癌旁组织的Survivin和CD44V6蛋白表达情况。结果①食管鳞癌组织Survivin高表达与浸润深度、淋巴结转移和患者生存期有明显相关性（P〈0．01）。②CD44V6在食管癌高表达,与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和患者生存期有明显相关性（P〈0．01）。③Survivin与CD44V6表达具有关联性。结论Survivin其表达阳性提示癌变的可能,可以作为判断食管癌恶性潜能的重要生物学指标。CD44V6蛋白的表达随着癌浸润深度的增加,淋巴结转移和患者的生存时间的缩短而增加,提示CD44V6高表达的肿瘤侵袭性较强,在一定程度上预示食管癌的预后较差。二者可能在食管癌的癌变中起协同作用。     

E-cadherin和MMP-9在食管癌中的表达及其临床意义

目的 检测E-cadherin和MMP-9在人食管癌组织中的表达情况,探讨二者的相关性及其与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化 ElivisionTM plus法检测90例食管癌组织和45例癌旁组织中E-cadherin、MMP-9的表达情况.结果 在癌旁组织中E-cadherin、MMP-9的表达率分别为80.0%和0.0%,在食管癌组织中分别为57.8%和73.3%,差异有统计学意义（P＜0.05）;在食管癌组织中E-cadherin、MMP-9的阳性表达与肿瘤细胞分化程度、临床分期、淋巴结转移有关（P＜0.05）;且两者的表达呈负相关（P＜0.05）.结论 食管癌组织中E-cadherin呈低表达,MMP-9呈高表达; 二者对食管癌的发生、浸润、转移有相反的调节作用;联合检测可以预测食管癌的生物学行为.     

广西壮族食管癌患者FHIT基因表达及与Bcl-2表达的相关性研究

目的探讨FHIT基因在广西壮族食管癌发生、发展中的作用及其与Bcl-2表达的关系。方法应用免疫组化SP法检测FHIT基因和Bcl-2在广西壮族10例正常食管黏膜组织、80食管癌组织中的表达。结果FHIT基因在食管癌组织中的阳性表达显著低于正常食管黏膜组织（P〈0．01）;FHIT基因低表达与食管癌组织学类型无关（P〉0．05）,而与分化程度、浸润程度、有无淋巴结转移有关（P〈0．05）;食管癌中FHIT基因表达与Bcl-2蛋白表达有显著相关性（P〈0．05）。结论FHIT基因表达缺失在广西壮族食管癌中是频发事件,FHIT基因参与食管癌的发生发展,是一个候选抑癌基因。在广西壮族食管癌患者FHIT基因的表达与Bcl-2的表达密切相关,FHIT基因和Bcl-2广西壮族食管癌发生、发展中起协调作用。     

P53、CD44v6 和 CD24 在食管鳞癌中的表达及意义

目的 探讨P53、CD44v6和CD24在食管鳞癌中的表达及意义.方法 免疫组化法检测60例食管鳞癌标本及不同病变组织中P53、CD44v6和CD24的表达.结果 60例食管鳞癌标本中,P53、CD44v6和CD24的阳性表达与食管鳞癌的形成有关（P ＜0.01）;P53的表达与患者病理分级、浸润深度有关（P＜0.05）,而与淋巴结转移组织无关（P＞0.05）;CD44v6、CD24的表达与患者病理分级、浸润深度、淋巴结转移组织有关（P＜0.05或P＜0.01）.结论 P53、CD44v6和CD24可作为判断食管鳞癌预后的重要指标.     

食管鳞癌中细胞角蛋白13的表达及临床意义

目的研究细胞角蛋白13(CK13)在食管鳞癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学SP法检测51例临床手术切除的食管癌标本及相应的食管黏膜标本中CK13的表达。结果 CK13在正常食管黏膜的表达为86.3%(44/51)、食管癌为31.4%(16/51),差异有统计学意义(P<0.01);CK13在高分化、中低分化鳞癌阳性表达为10例(19.6%)、6例(0.8%),在Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期中阳性表达分别为11例(21.6%)和5例(4.2%);在未浸润外膜和浸润外膜的鳞癌组织中阳性表达分别为12例(23.5%)和4例(7.8%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CK13在食管癌呈低表达,检测CK13在食管癌中的表达有利于对食管癌患者的诊断和预后进行评估。     

PTEN在食管癌中的表达及临床意义

目的探讨第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（phosphataseandtensinhomologydeleted。nchr。mosometen,PTEN）在食管癌组织中的表达及其临床相关性。方法应用免疫组织化学方法检测PTEN基因在68例食管癌组织和相应手术远端正常食管组织的表达情况。结果食管癌中PTEN蛋白表达率为67．6％,癌旁正常组织的阳性表达率为100％,差异显著（p〈0．05）。PTEN的表达与肿瘤分化程度,淋巴结转移及浸润深度相关。结论从蛋白水平证明PTEN基因表达的降低与食管癌的发生、发展及临床病理特征有关。     

食管鳞癌中Ezrin及E—Cadherin蛋白的表达与浸润转移的关系

目的探讨Ezrin和E—Cadherin蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其与食管鳞癌浸润转移之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测55例食管鳞癌组织中Ezrin和E—Cadherin蛋白的表达。结果Ezrin高表达与食管鳞癌淋巴结转移、浸润深度关系密切（P〈0．05）;E—Cadherin表达下调与食管鳞癌淋巴结转移、浸润深度关系密切（P〈0．05）;食管鳞癌中Ezrin和E—Cadherin蛋白表达呈负相关（P〈0．05）。结论Ezrin蛋白高表达和E—Cadherin蛋白低表达在食管鳞癌的浸润转移过程中起着重要作用,提示二者在该过程中可能起着协同作用。     

应用锥形束CT验证食管癌患者放射治疗时的摆位误差

目的：利用锥形束CT（CBCT）验证对进行放射治疗的食管癌患者在每次摆位过程中的误差进行分析,为医生勾画靶区时从临床靶区（CTV）外扩到计划靶区（PTV）所需的距离提供参考数据。方法：对我科治疗的43例食管癌患者进行CBCT验证,对摆位误差进行分析。结果：根据摆位误差数据计算,食管上段肿瘤外扩大小为2.6-3.9 mm,食管中下段肿瘤外扩大小为2.9-4.7 mm。结论：摆位误差在医生勾画靶区时CTV外扩到PTV的距离范围内。     

紫杉醇联合顺铂治疗晚期食道癌的临床观察

目的观察紫杉醇联合顺铂治疗晚期食道癌的临床价值。方法对经病理活检证实的56例晚期或复发的食道癌患者,给予紫杉醇135mg／m^2,静滴,第1天;顺铂75-80mg／m^2,静滴,分为第1～3天,21天为1个周期。每例患者至少化疗2个周期以上。结果全组完全缓解1例,部分缓解24例,稳定26例,进展5例,总有效率44．6％。最常见的毒副反应是骨髓抑制和脱发,Ⅲ～Ⅳ度白细胞减少占19．6％,Ⅲ度血小板减少占7．1％,脱发占87．5％,但无Ⅲ度以上脱发发生。结论紫杉醇联合顺铂治疗晚期食道癌缓解率高,毒副反应轻,患者可耐受,可在临床推广应用。     

食管鳞状细胞癌组织中FAK和Paxillin蛋白的表达

目的 探讨FAK和桩蛋白（Paxillin）在食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中的表达及其意义。方法 应用免疫组化SP法检测59例ESCC、27例癌旁不典型增生组织及36例正常食管黏膜组织中FAK和Paxillin蛋白的表达。结果 ESCC、癌旁不典型增生组织及正常黏膜组织中FAK蛋白的阳性表达率依次降低,分别为79.7%（47/59）、59.3%（16/27）和19.4%（7/36）,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;ESCC、癌旁不典型增生组织及正常黏膜组织中Paxillin蛋白的阳性表达率亦依次降低,分别为71.2%（42/59）、55.6%（15/27）和36.1%（13/36）,组间比较差异有统计学意义（P<0.05）;FAK和Paxillin蛋白表达均与ESCC的分化程度、浸润深度和淋巴结转移密切相关（P<0.05）。ESCC组织中FAK蛋白与Paxillin呈正相关关系（γ＝0.442,P<0.05）。结论 FAK和Paxillin蛋白表达与ESCC的发生、发展和转移密切相关,联合检测FAK及Paxillin蛋白可望成为ESCC早期诊断和预后判断的生物学标记之一,并且也将为治疗提供了新的靶点。