miR-214、miR-503在上皮性卵巢癌组织及血清外泌小体中表达的研究

目的 检测正常卵巢、化疗敏感上皮性卵巢癌(EOC)及化疗耐药EOC组织及血清外泌小体中p53相关miR-214、miR-503的表达差异,初探p53相关miRNA与EOC耐药的关系.方法 采用免疫荧光法检测正常卵巢、化疗敏感EOC及化疗耐药EOC组织中p53的表达;RT-PCR法检测血清外泌小体及上述3种组织中p53相关miR-214、miR-503表达的差异.结果 免疫荧光法发现,与正常组织相比,p53在EOC组织中荧光较弱,其中化疗耐药EOC组织与化疗敏感EOC组织间比较差异无统计学意义(P﹥0.05).与敏感组相比,耐药组血清外泌小体中miR-214上调3倍,miR-503下调3倍,与组织中变化一致.结论 p53相关miR-214及miR-503由外泌小体携带进入血液循环,并可能在EOC化疗耐药中发挥重要作用.     

miR-497-5p靶向调控CCNE1基因抑制胰腺癌细胞增殖

目的明确miR-497-5p在胰腺癌(PaCa)中的表达及临床意义,并探究其对PaCa细胞增殖的影响及机制。方法实时荧光定量PCR实验检测miR-497-5p的表达,卡方检验和Kaplan-Meier生存法分析miR-497-5p的表达与临床病理特征及预后的关系;CCK-8实验和流式细胞术检测过表达miR-497-5p对Capan-2和PANC-1细胞增殖和周期的影响,Spearman相关性检验分析miR-497-5p表达与G₁/S特异性细胞周期蛋白E1(cyclin E1,CCNE1)mRNA表达的关系;双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法验证miR-497-5p对CCNE1表达的调控作用。结果 miR-497-5p在癌组织中的表达显著低于癌旁正常组织(P<0.001),T3+T4期患者癌组织中miR-497-5p的表达显著低于T1+T2期癌组织(P<0.001);低表达miR-497-5p与较高的T分期相关(P=0.003);低表达miR-497-5p的患者5年总体生存率显著低于高表达者(P=0.036)。与对照组相比,miR-497-5p过表达组...     

miR-590-5p介导lncRNA SNHG1信号影响卵巢癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-590-5p在卵巢癌组织中的表达情况以及其对卵巢癌细胞增殖的影响及作用机制。方法:Real-time PCR和双荧光素酶实验确定miR-590-5p与lncRNA SNHG1之间的调控作用。Real-time PCR检测卵巢癌、癌旁组织以及卵巢癌细胞中miR-590-5p的表达。分别采用NC mimic或者miR-590-5p mimic转染两株卵巢癌细胞，CCK-8检测各组细胞的增殖情况。此外，Real-time PCR检测两株细胞中SOX2、RECK和YAP1的表达。结果:Real-time PCR结果显示下调SNHG1后miR-590-5p的表达显著升高。双荧光素酶结果显示转染miR-590-5p mimic和野生型SNHG1片段的细胞中荧光素酶的活性显著降低。此外，Real-time PCR结果显示miR-590-5p在卵巢癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织。CaOV3、OV-90细胞中miR-590-5p的表达水平明显低于其他卵巢癌细胞。转染miR-590-5p mimic显著上调了CaOV3、OV-90细胞中miR-590-5p的表达并且抑制了这两株细胞的增殖，同时抑制了两株细胞中SOX2、RECK和YAP1的表达。结论:miR-590-5p的低表达与卵巢癌的进展密切相关，miR-590-5p能够介导SNHG1信号并且通过对其下游靶基因的调控抑制卵巢癌细胞的增殖。     

上皮性卵巢癌血清miR-1294及miR-4443的表达及其与预后的关系

目的:探讨上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）患者血清miR-1294及miR-4443的表达水平及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取我院2015年1月至2017年12月收治的106例EOC患者作为EOC组,另选取90例卵巢良性肿瘤患者作为良性组和60例正常健康女性作为对照组,检测血清miR-1294及miR-4443表达水平。以miR-1294及miR-4443的最佳截断值为标准将EOC患者分为高miR-1294组（n=33）、低miR-1294组（n=73）和高miR-4443组（n=36）、低miR-4443组（n=70）。EOC患者预后不良的危险因素应用单因素及多因素COX回归模型进行分析。结果:血清miR-1294表达水平（0.48±0.13 vs 1.16±0.57、1.21±0.62）在EOC组明显低于良性组和对照组（P均<0.001）。血清miR-4443表达水平（0.71±0.18 vs 1.36±0.64、1.45±0.70）在EOC组明显低于良性组和对照组（P均<0.001）。miR-1294和miR-4443高表达组的EOC患者临床分期、分化程度、淋巴结转移及腹膜转移与miR-1294和miR-4443低表达组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。Kaplan-Meier分析显示,EOC患者生存期短与miR-1294及miR-4443低表达有关（P<0.001）。多因素分析显示,EOC患者预后不良的独立危险因素为淋巴结转移［HR（95%CI）=1.885（1.206～4.118）］、腹膜转移［HR（95%CI）=3.106（2.315～6.226）］、miR-1294＜0.73［HR（95%CI）=2.614（1.865～5.512）］及miR-4443＜1.04［HR（95%CI）=1.975（1.508～4.903）］。结论:miR-1294及miR-4443的低表达与EOC患者生存期短有关,是EOC患者预后预测的生物标志物。     

miR-506和FGF2在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义

目的:检测上皮性卵巢癌组织微小RNA-506（miR-506）和成纤维细胞生长因子2（FGF2）表达情况,并探究其临床意义。方法:选取2011年3月至2012年12月本院收治的上皮性卵巢癌患者56例,选择同期因子宫良性病变在平煤神马医疗集团总医院接受全子宫双附件切除的患者56例（对照组）;采用实时定量PCR（qRT-PCR）法检测miR-506表达水平,采用免疫组化法检测FGF2表达水平,采用全自动化学发光免疫分析仪检测血清糖类抗原125（CA125）水平。结果:上皮性卵巢癌组织miR-506表达水平较正常卵巢组织显著降低（P＜0.05）,FGF2表达量显著高于正常卵巢组织（P＜0.05）,FGF2蛋白表达阳性率较正常卵巢组织显著升高;上皮性卵巢癌组织中miR-506、FGF2表达与患者临床分期、有无淋巴结转移、血清CA125水平有关（P＜0.05）,与患者年龄、组织学类型无关（P＞0.05）;miR-506高表达上皮性卵巢癌患者术后5年总生存率显著高于低表达者（P＜0.05）,FGF2高表达上皮性卵巢癌患者术后5年总生存率显著低于低表达患者（P＜0.05）;Pearson检验结果显示,卵巢癌肿瘤组织miR-506与FGF2表达水平负相关。结论:miR-506在上皮性卵巢癌组织中低表达,FGF2高表达,与患者临床分期、淋巴结转移、血清CA125水平有关,可能作为上皮性卵巢癌患者病情监测及预后的生物指标。     

肌成束蛋白-1在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

摘 要：［目的］ 研究肌成束蛋白-1（FSCN1）在上皮性卵巢癌组织中的表达及与预后相关性。［方法］ 选取2010年1月至2014年12月我院收治的120例卵巢肿瘤患者作为研究对象,包括80例上皮性卵巢癌,40例卵巢良性上皮肿瘤。采用免疫组化检测FSCN1在癌组织、癌旁组织和良性组织中的表达水平。免疫组化检测上皮间质转化（epithelial mesenchymal transformation,EMT）关键蛋白波形蛋白（vimentin）和E钙黏蛋白（E-cadherin）在卵巢癌组织中的表达水平。［结果］ FSCN1在卵巢癌组织中的高表达率（67.5%,54/80）明显高于癌旁组织（28.8%,21/73）和良性卵巢组织（12.5%,5/40） (χ2=41.02,P<0.001)。FSCN1表达水平与临床病理分期、淋巴结转移具有相关性（P=0.023;P=0.026）,FSCN1表达水平与Vimentin表达水平呈正相关（P=0.007）,而与E-cadherin表达水平呈负相关（P=0.006）。FSCN1高表达水平患者总生存率（27.5%）明显低于FSCN1低表达水平的患者（52.3%）（P=0.007）,FSCN1高表达是上皮性卵巢癌患者不良预后的独立风险因素（P=0.011）。［结论］ FSCN1在上皮性卵巢癌中高表达,且与卵巢癌的恶性程度密切和EMT相关,对于预测卵巢癌的预后具有一定的价值。     

miR-142-5p对人上皮性卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miR-142-5p靶向PTEN-PI3K/Akt信号调控人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的具体机制。方法:Real-time PCR检测miR-142-5p在人卵巢癌组织及各卵巢癌细胞系中的表达情况。利用MTT、细胞克隆形成实验观察miR-142-5p对SKOV3细胞增殖活力的影响;Caspase-3活力检测miR-142-5p对SKOV3细胞凋亡情况;信号通路抑制剂处理及Western blot检测miR-142-5p、PTEN与PI3K/Akt信号通路的关系及PI3K/Akt信号下游基因Akt、FOXO1、cyclin D1等的表达情况;Luciferase实验验证miR-142-5p和PTEN 3' UTR的结合。结果:人上皮性卵巢癌组织及其细胞系中miR-142-5p表达显著增加（P<0.05)。与对照组相比,SKOV3细胞转染miR-142-5p mimics后活细胞数量显著增加,增殖能力显著上升,细胞凋亡下降（P<0.05);与之相反的,转染miR-142-5p inhibitor后SKOV3细胞增殖能力下调,凋亡增加。信号通路抑制剂处理显示miR-142-5p过表达激活PI3K/Akt信号通路。Luciferase实验显示miR-142-5p与PTEN 3' UTR直接结合。与对照组相比,miR-142-5p mimics组PTEN表达显著降低,p-Akt蛋白表达则显著上调（P<0.05）,同时过表达PTEN后p-Akt表达则显著降低（P<0.05）。结论:miR-142-5p通过抑制PTEN基因表达活化PI3K/Akt信号通路,促进人上皮性卵巢癌组织及SKOV3细胞增殖存活,抑制细胞凋亡。     

miR-107靶向调控Dicer1促进卵巢癌细胞系侵袭转移

目的 检测microRNA-107 (miR-107)在卵巢癌中的表达水平,探讨其对卵巢癌细胞系侵袭转移的调控作用及分子机制.方法 qRT-PCR法比较卵巢癌组织、正常卵巢组织、卵巢癌细胞系和正常卵巢上皮细胞中miR-107表达差异,用生物信息学的方法特异预测出miR-107靶基因Dicer1后,通过双荧光素酶报告体系进行验证.上调miR-107表达后,Western blot检测Dicer1的表达变化;划痕实验、Transwell实验观察卵巢癌细胞运动和侵袭能力的改变;qRT-PCR及Confocal观察EMT相关分子E-cadherin、β-Catenin、N-cadherin、Vimentin、Fibronectin、ICAM-1、MMP-9的表达.结果 miR-107在上皮性卵巢癌组织的表达较正常卵巢组织显著升高(P＜0.05);双荧光素酶报告基因系统验证预测结果正确.上调miR-107后,Western blot结果显示Dicer1蛋白质水平被显著抑制,卵巢癌细胞系SKOV3细胞形态发生间质细胞样转变,间质标志分子β-Catenin、N-cadherin及MMP-9表达上升;体外实验表明卵巢癌细胞的运动和侵袭能力得到明显促进.结论 本研究表明miR-107促进卵巢癌侵袭转移的分子机制是通过下调miRNA加工机器Dicer1,从而介导卵巢癌细胞EMT的发生;抑制miR-107或恢复Dicer1水平可能成为上皮性卵巢癌治疗的有效手段.     

BRCA1与SIRT1在浆液性上皮性卵巢癌组织中的表达及意义

目的:本研究分别从蛋白质表达方面比较正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织与浆液性上皮性卵巢癌组织中乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1,BRCA1)与沉默信息调节因子1 (silent information regulator type 1,SIRT1)表达的变化,探讨BRCA1与SIRT1在浆液性上皮性卵巢癌发生过程中的作用及二者之间的相关性,为进一步明确浆液性上皮性卵巢癌的发病机制、早期诊断、预防及药物治疗奠定理论基础.方法:利用免疫组织化学法分别检测BRCA1和SIRT1在正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织与浆液性上皮性卵巢癌组织中蛋白的表达情况并进行统计学处理.结果:BRCA1蛋白在正常卵巢组织中的阳性表达率为93.33%,卵巢浆液性囊腺瘤组织为66.67%,卵巢浆液性囊腺癌组织为47.50%,各组间比较差异有显著性(P<0.05).SIRT1蛋白在正常卵巢组织中的阳性表达率为86.67%,卵巢浆液性囊腺瘤组织为50.00%,卵巢浆液性囊腺癌组织为40.00%,正常与恶性、良性与恶性组织间比较差异具有统计学意义(P<0.05),正常与良性组织间比较差异无统计学意义(P>0.05).卵巢浆液性囊腺癌组织中,BRCA1在不同年龄、淋巴结转移分组中,阳性表达率无统计学差异(P>0.05),在不同手术病理分期、组织学分级分组中,阳性表达率具有统计学差异(P<0.05).SIRT1在不同年龄、手术病理分期、淋巴结转移分组中,阳性表达率无统计学差异(P>0.05),在不同组织学分级中,阳性表达率具有统计学差异(P<0.05).BRCA1、SIRT1在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.664,P<0.001).结论:BRCA1、SIRT1的低表达与浆液性上皮性卵巢癌的发生、发展有关,SIRT1可能是BRCA1的下游靶分子,未来有可能成为诊断与治疗浆液性上皮性卵巢癌的新靶点.     

LINC01503通过miR-342-3p/IGF2R轴促进上皮性卵巢癌的进展

目的：探讨LINC01503 在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达水平和生物学功能及其可能的作用机制。方法：收集2015年5月至2016 年5月间在河北医科大学第四医院妇瘤科手术切除并经病理学确诊的85 例EOC患者的肿瘤组织和输卵管组织。常规培养人EOC 细胞A2780、SKOV3、OVCAR3 和OV90 及正常人卵巢上皮细胞IOSE80,将si-LINC01503、si-NC 及miR-342-3p mimic、miR mimic NC分别转染至SKOV3和A2780 细胞,分别作为si-LINC01503 组、si-NC 组、miR-342-3p mimic 组和miR mimic NC组。qPCR 法检测EOC组织和细胞中LINC01503 的表达水平,Kaplan-Meier 法分析LINC01503 表达水平与患者生存的关系。双荧光素酶报告基因实验验证LINC01503/miR-342-3p/IGF2R轴相关分子间的靶向关系。平板克隆、划痕愈合和Transwell 实验分别检测敲低LINC01503 及转染miR-342-3p mimic 对A2780 和SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。WB法检测EOC细胞中LINC01503/miR-342-3p 通路对IGF2R蛋白表达的影响。构建A2780 细胞裸鼠移植瘤模型,观察敲低LINC01503 对移植瘤生长的影响。结果：EOC组织和细胞中LINC01503 表达水平分别显著高于输卵管组织和IOSE80 细胞（均P<0.01）,LINC01503高表达组患者术后PFS 和OS 均显著短于LINC01503 低表达组患者（均P<0.01）。敲低LINC01503、转染miR-342-3p mimic 均可抑制EOC 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）。敲低LINC01503 可下调IGF2R的表达（P<0.01）,这一现象可通过转染miR-342-3p inhibitor 挽救。敲低LINC01503 可抑制A2780 细胞裸鼠移植瘤的生长（P<0.01）。结论：在EOC 组织和细胞中呈高表达的LINC01503,与患者的不良预后密切相关,LINC01503可能通过吸附miR-342-3p影响IGF2R表达进而促进EOC的进展。     

miR-497 and miR-34a retard lung cancer growth by co-inhibiting cyclin E1 (CCNE1)

Cyclin E1, encoded by the CCNE1 gene, promotes G1/S transition, chromosome instability, and oncogenesis. Here, we show that miR-497 and miR-34a target the 3′-UTR of CCNE1. miR-497 and miR-34a are downregulated in cancer cells and their ectopic expression inhibited cell proliferation and colony formation in vitro, and inhibited tumor growth in a xenograft model. The effect of simultaneous overexpression of miR-497 and miR-34a on the inhibition of cell proliferation, colony formation, and tumor growth, and the downregulation of cyclin E1 was stronger than the effect of each miRNA alone. The synergistic actions of miR-497 and miR-34a partly correlated with cyclin E1 levels. When cells stably expressing CCNE1 were transfected with the Hi-miR-497/34a plasmid, there was no effect on colony formation, compared with that of cells transfected with either Hi-miR497 or Hi-miR34a. These results indicate cyclin E1 is downregulated by both miR-497 and miR-34a, which synergistically retard the growth of human lung cancer cells.     

miR-139-5p通过靶向Notch1抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖与侵袭

目的：探讨miR-139-5p靶向Notch1抑制上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞增殖和侵袭的作用机制。方法：选取2018年1月至2018年12月在河南省南阳市中心医院妇科手术切除的24例EOC患者的癌和相应的癌旁组织标本,以及人卵巢癌细胞系SKOV3、ES2、HEY-T30和人卵巢上皮细胞株IOSE80,用qPCR检测EOC组织和细胞系中miR-139-5p和Notch1 mRNA的表达。将过表达miR-139-5p载体、重组质粒pLV-Notch1转染至SKOV3细胞,并设置空白对照组（Ctrl组）和阴性对照组（NC组）,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-5p与Notch1 3’-UTR靶向关系,用CCK-8、Transwell、划痕愈合实验分别检测细胞的增殖、侵袭和迁移能力,用Western blotting检测细胞中增殖和迁移相关蛋白的表达。结果：与癌旁组织和IOSE80细胞比较,EOC组织和细胞系中miR-139-5p表达显著降低、Notch1 mRNA表达显著升高（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果证实,Notch1是miR-139-5p的靶基因。与NC组比较,miR-139-5p mimic组3 d时SKOV3细胞的增殖、侵袭、迁移能力和Notch1、NICD、Cyclin D1、Cyclin A1、Snail1、β-catenin及N-cadherin表达水平均明显降低（均P<0.01）,E-cadherin表达水平明显升高（P<0.01）;同时过表达Notch1可逆转miR-139-5p抑制SKOV3细胞增殖、侵袭与迁移的作用。结论：miR-139-5p可靶向Notch1抑制EOC细胞的增殖、侵袭和迁移能力,可能与其下调NICD、Cyclin D1、Cyclin A1、Snail1、β-catenin、N-cadherin而上调E-cadherin的表达水平有关。     

人上皮性卵巢癌组织中PFTK1的表达及其对细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响

目的:研究PFTAIRE蛋白激酶1（PFTAIRE protein kinase 1,PFTK1）在人上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）组织中的表达,以及PFTK1基因的沉默对人卵巢癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。方法: 随机选取我院2015年6月至2016年11月收治的25例EOC患者为研究对象,采用Western blot检测癌组织以及癌旁组织中PFTK1蛋白的表达情况。选取PFTK1高表达的人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,转染PFTK1-siRNA后,采用流式细胞仪检测PFTK1基因的沉默对SKOV3细胞周期的影响,采用细胞迁移和侵袭实验（Transwell）检测SKOV3细胞迁移、侵袭能力的变化,采用平板克隆形成实验检测SKOV3细胞增殖能力的变化。结果:Western blot检测结果显示,EOC患者癌组织中的PFTK1蛋白表达量显著高于癌旁组织（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果显示,PFTK1-siRNA组细胞出现明显的生长抑制,细胞多停滞在G0/G1期,与对照组相比差异显著（P＜0.01）;细胞迁移和侵袭实验（Transwell）结果显示,PFTK1-siRNA组细胞的迁移和侵袭能力与对照组比较显著下降,且差异均显著（P＜0.01）;平板克隆形成实验结果显示,PFTK1-siRNA组细胞增殖能力显著降低,与对照组相比差异显著（P＜0.01）。结论:PFTK1在人EOC癌组织中呈现高表达状态;PFTK1基因沉默后,EOC细胞株SKOV3的细胞迁移、侵袭及增殖能力均受到不同程度的抑制,这将为基因治疗人卵巢癌提供一定的理论依据。     

miR-144-3p靶向zeb1调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡

目的:探讨miR-144-3p是否通过靶向E盒锌指结合蛋白1（zeb1）调控卵巢癌细胞SKOV3的增殖和凋亡。方法:qRT-PCR检测miR-144-3p在卵巢癌细胞和正常人卵巢上皮细胞中的表达差异。在卵巢癌细胞SKOV3中转染miR-144-3p mimics,MTT法测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中cyclinD1、p27、C-caspase-3蛋白表达。生物信息学软件预测miR-144-3p的靶基因可能为zeb1,荧光素酶报告系统鉴定其靶向关系。在卵巢癌细胞SKOV3中共转染miR-144-3p mimics、pcDNA3.1-zeb1,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:miR-144-3p在卵巢癌细胞中的表达水平低于正常人卵巢上皮细胞。转染miR-144-3p mimics后的卵巢癌细胞SKOV3增殖能力下降,细胞周期被阻滞在G1期,细胞凋亡增多,细胞中cyclinD1蛋白表达减少,p27、C-caspase-3蛋白表达增加。miR-144-3p靶向调控zeb1表达。pcDNA3.1-zeb1可以逆转miR-144-3p mimics对卵巢癌细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:miR-144-3p靶向zeb1抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖并诱导细胞凋亡。