益肾化湿颗粒通过miR-339-5p靶向调控TGF-β1/Smad通路对慢性肾小球肾炎模型大鼠的肾脏保护作用及其机制研究

目的:探讨益肾化湿颗粒通过miR-339-5p靶向调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路对慢性肾小球肾炎模型大鼠的肾脏保护作用及其机制。方法:将SD大鼠分为假手术组、模型组、益肾化湿颗粒组、贝那普利组、益肾化湿颗粒+antagomir阴性对照(NC)组、益肾化湿颗粒+miR-339-5p antagomir组、益肾化湿颗粒+SRI-011381组。全自动生化分析仪检测大鼠24 h尿蛋白、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)水平；ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平；qRT-PCR检测肾组织中miR-339-5p表达；免疫组化检测大鼠肾组织中核因子E2相关因子2(NRF2)、血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达；HE、Masson染色分别检测大鼠肾组织病理变化、纤维化程度；Western blot检测肾组织中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7蛋白表达；验证miR-339-5p与TGF-β1的关系。结果:与假手术组比较，模型组大鼠肾功能异常，氧化应激增强，肾组织病理损伤及纤维化严重，炎性因子、TGF-β1、p-S...     

五味子苷B 调控miR-370-3p/CCL3轴对幼年肺炎小鼠免疫炎症因子水平的影响

目的:探讨五味子苷B(Sch B)在幼年肺炎小鼠的作用机制。方法:将90 只幼年雄性小鼠随机分为对照组、模型组、Sch B 低剂量组(Sch BL组)、Sch B 高剂量组(Sch BH组)、Sch BH+antagomir-NC 组、Sch BH+miR-370-3p antagomir组各15 只。Sch BL 组和Sch BH 组小鼠分别灌胃20、60 mg/ kg 的Sch B;Sch BH+antagomir-NC 组和Sch BH+miR-370-3p antagomir组,先将1 nmol 的 miR-370-3p antagomir、antagomir-NC 用20 μL 的磷酸盐缓冲液(PBS)溶解,在Sch B 灌胃后将miR-370-3p antagomir、antagomir-NC 质粒分别经尾静脉注射到小鼠体内;对照组和模型组给予等量生理盐水。每天1 次,持续给药7 d。测定各组小鼠肺组织的湿 干质量比;采用苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肺组织的病理形态;检测各组小鼠肺组织中炎症因子水平;流式细胞术检 测外周血T 淋巴细胞亚群;实时定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测肺组织中miR-370-3p 和CCL3 的mRNA 水平;双荧 光素酶实验验证miR-370-3p 与CCL3 的靶向关系。结果:与对照组相比,模型组幼鼠肺组织结构紊乱,肺泡壁变厚,出现大量炎 性细胞浸润,组织受损严重,肺组织湿干质量比、CD8+ 、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素( IL)-6、CCL3 mRNA 水平均升高, CD4+ 、CD4+/CD8+ 、miR-370-3p 水平均降低(P 均<0.05)。与模型组相比,Sch BL 组和Sch BH 组幼鼠肺组织中肺泡壁变薄,炎 性细胞浸润明显减少,损伤减轻,肺组织湿干质量比、CD8+、TNF-α、IL-6、CCL3 mRNA 水平均降低,CD4+、CD4+ / CD8+、miR-370-3p 水平均升高(P 均<0. 05)。加入miR-370-3p antagomir 进行回补实验,结果显示Sch B 对肺炎幼鼠免疫功能和炎症保护作用被 逆转,且CCL3 mRNA 水平升高(P<0. 05);双荧光素酶报告基因实验验证了miR-370-3p 与CCL3 存在靶向关系。结论:Sch B 能 够通过靶向调节miR-370-3p/ CCL3 轴来增强幼年肺炎小鼠免疫功能,并抑制炎症反应。     

阿利吉仑对急性心肌梗死大鼠心肌组织重构的影响

目的 探讨阿利吉仑对大鼠心肌梗死后左室重构的影响及作用机制.方法 60只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型对照组、培哚普利组和阿利吉仑组,每组15只.除假手术组外,其他3组均制作心肌梗死模型.培哚普利组和阿利吉仑组制作心肌梗死模型后分别给予培哚普利和阿利吉仑共8周.酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中高敏C-反应蛋白(hs-CRP),免疫组织化学方法 检测基质金属蛋白酶(MMP) 2、MMP-9、金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1和转化生长因子-β(TGF-β)的表达.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TGF-β、CollagenⅠ和Ⅲ mRNA的表达.Western blotting检测心肌组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TGF-β蛋白的表达.结果 培哚普利组和阿利吉仑组血清hs-CRP明显低于模型对照组(P<0.05).培哚普利组和阿利吉仑组MMP-2、MMP-9、TGF-β、Collagen Ⅰ和Ⅲ mRNA和蛋白的表达明显低于模型对照组(P<0.05),TIMP-1 mRNA的水平则高于模型模型对照组(P<0.05).结论 阿利吉仑通过下调MMP-2、MMP-9、TGF-β、Collagen Ⅰ和Ⅲ和hs-CRP表达、 上调TIMP-1表达发挥作用.阿利吉仑和培哚普利在减轻大鼠心肌梗死后左室重构无明显差别.     

miR-429对烧伤小鼠肺组织炎性反应和氧化应激的影响

目的 探讨miR-429对烧伤小鼠肺组织炎性反应和氧化应激的影响及可能的机制。方法 24只C57BL/6小鼠,按随机数表法分为对照组、模型组、阴性对照组和miR-429抑制剂组,每组6只。除对照组外,其他3组小鼠通过热水烫伤法构建小鼠烧伤模型。其中,miR-429抑制剂组和阴性对照组小鼠通过尾静脉分别注射等量的miR-429抑制剂miR-429 antagomir以及阴性对照miR-NC;对照组和模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液。qRT-PCR实验检测肺组织中miR-429的表达水平;ELISA法检测肺组织中肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)水平;HE染色评估肺组织病理变化;TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况;Western blotting检测肺组织中Nrf2和HO-1蛋白表达情况。结果 与对照组小鼠比较,模型组小鼠肺泡壁变宽,并出现明显的组织水肿和炎症细胞浸润;肺组织中凋亡细胞数量明显增多,且miR-429表达、TNF-α、IL...     

结缔组织生长因子在肺间质纤维化发病机制中的地位和作用

为了解结缔组织生长因子 (connective tissue growth factor,CTGF)在大鼠肺纤维化模型中的表达状况及其在肺纤维化发病机制中的作用 ,将 42只 Wistar大鼠随机分为模型组 (M组 )和对照组 (C组 ) ,M组气管内灌注博莱霉素 ,C组气管内灌注生理盐水。于灌注后第 7、14、2 8天每组分别处死大鼠 7只 ,制备大鼠肺组织切片。用免疫组化 SABC法分别检测两组大鼠肺组织中 CTGF及转化生长因子β1 (TGF-β1 )、 型胶原纤维 (Collagen )的蛋白在肺内的表达水平。结果显示 ,CTGF作为 TGF -β1 的下游因子 ,可能通过促进细胞外基质 (ECM)如胶原蛋白等合成而在博莱霉素诱导的肺纤维化形成过程中起重要作用     

瑞舒伐他汀调节miR-21表达对慢性牙周炎大鼠炎症反应的影响

摘要：目的:瑞舒伐他汀（RSV）调节微小RNA（miR）-21表达对慢性牙周炎大鼠炎症反应的影响。方法:通过丝线结扎并固定的方法复制慢性牙周炎大鼠模型。将造模后的50只大鼠随机分为模型组、RSV组、antagomir NC（抑制剂阴性对照）组、miR-21抑制剂（miR-21 antagomir）组、RSV+miR-21 antagomir组,另取10只大鼠正常饮水喂食并以生理盐水干预,作为对照组。经药物、miR-21抑制剂分组干预后,检测牙龈指标-附着丧失（AL）和牙龈指数（GI）;收集血清样本,检测各组大鼠血清中炎症因子指标白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-17（IL-17）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平;qRT-PCR法检测血清中miR-21表达情况;分离牙周组织,检测各组大鼠病理学变化及基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白表达。结果:模型组牙周组织炎性浸润、水肿等病理状况较为严重,miR-21表达、AL、GI、IL-1β、IL-17、TNF-α水平、MMP-1、MMP-9蛋白表达均较对照组增加（P<0.05）;与模型组相比,RSV组大鼠牙周组织病理状况逐渐缓解,AL、GI、IL-1β、IL-17、TNF-α水平、MMP-1、MMP-9蛋白表达较模型组均显著降低,miR-21表达增加（P<0.05）;antagomir NC组各指标与模型组相比差异无统计学意义（P>0.05）;与antagomir NC组相比,miR-21 antagomir组大鼠病理状况加重,AL、GI、IL-1β、IL-17、TNF-α水平、MMP-1、MMP-9蛋白表达均显著增加,miR-21表达降低（P<0.05）;RSV+miR-21 antagomir组大鼠病理状况较RSV组明显加重,AL、GI、IL-1β、IL-17、TNF-α水平、MMP-1、MMP-9蛋白表达均显著增加,miR-21表达降低（P<0.05）。结论:RSV可以降低炎症反应,改善慢性牙周炎大鼠牙周组织病理状况以及牙周指标,可能与提高miR-21表达有关。     

低分子量肝素对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预作用

目的探讨低分子量肝素(LMWH)对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预作用及可能的机制。方法 100只SD雄性大鼠随机分为健康对照组、肺纤维化模型组、地塞米松干预组和LMWH干预组,每组25只。各组分别于第1,3,7,14,28d各处死5只,收集肺组织行免疫组化测定肺组织转化生长因子-β1(TGF-β1),收集血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)行Elisa检测肺组织TGF-β1,收集肺组织检测羟脯氨酸含量。结果与模型组比较,2个干预组的肺组织TGF-β1的蛋白表达水平明显降低(P<0.05),血清和BALF的TGF-β1的蛋白表达水平明显降低(P<0.05),其中LMWH干预组较地塞米松干预组更为显著(P<0.05),与模型组比较,2个干预组的羟脯氨酸含量也明显降低(P<0.05),其中LMWH干预组较地塞米松干预组更为显著(P<0.05)。结论 LMWH具有与地塞米松相似的较强的抗纤维化效应,机制可能为通过下调细胞因子TGF-β1的表达来抑制肺纤维化。     

乌头碱调控miR-150-5p表达对心力衰竭模型大鼠心功能及心室重构的影响

目的 探究乌头碱对心力衰竭模型大鼠心功能及心室重构的影响及对miR-150-5p的调控作用。方法 将SPF级SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组、乌头碱组、乌头碱+antagomir-NC组、乌头碱+miR-150-5p antagomir组,每组15只。除假手术组外,其余组均利用结扎左前降支冠状动脉法建立心力衰竭大鼠模型。测定各组大鼠心功能指标左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室射血分数(LVEF);ELISA检测各组大鼠心肌损伤指标心肌肌钙蛋白I(CTnI)、脑钠肽(BNP)和N末端B型脑钠肽前体(NT-pro BNP)的水平;测定各组大鼠心脏和左心室质量指数;Masson染色观察各组大鼠心肌组织形态;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率;RT-qRCR检测各组大鼠心肌组织中miR-150-5p和细胞周期蛋白D2(CCND2)的表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-150-5p与CCND2的靶向关系;Western blotting检测心肌细胞中CCND2蛋白的表达。结果 与模型组相比,乌头碱组大鼠心功能指标LVEDD、LVESD、...     

TGF-β/Smads信号通路在姜黄素改善糖尿病大鼠心肌纤维化中的作用

目的探讨TGF-β/Smads信号通路在姜黄素改善糖尿病心肌纤维化中的作用。方法高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg~(-1)建立2型糖尿病大鼠模型,自由饮用300 mg·kg·d~(-1)姜黄素进行干预;天狼猩红染色检测各组大鼠心肌内胶原表达情况;免疫荧光检测各组大鼠心肌内CollagenⅠ和CollagenⅢ的表达情况;葡萄糖(5.5、20、25、30、35、50 mmol·L~(-1))刺激大鼠乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)24 h确定最佳高糖造模浓度;30 mmol·L~(-1)高糖加姜黄素(10、25、50、100、200μmol·L~(-1))刺激CFs 24h确定最佳姜黄素给药浓度;Western blot法检测细胞内CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、p-Smad2、Smad2、p-Smad3、Smad3、TβR-Ⅲ的蛋白表达水平。结果相比于正常组,糖尿病组大鼠心肌组织胶原出现明显沉积,CollagenⅠ和CollagenⅢ表达明显增多,给予姜黄素治疗后,糖尿病大鼠心肌组织胶原沉积明显减少,CollagenⅠ和CollagenⅢ表达明显减少;30 mmol·L~(-1)高糖刺激CFs 24 h可以明显促进细胞增殖(P<0.05);而10μmol·L~(-1)姜黄素可以明显抑制高糖诱导的CFs增殖(P<0.05);30 mmol·L~(-1)高糖诱导CFs24 h以后,CollagenⅠ、CollagenⅢ、TGF-β1、p-Smad2、pSmad3、TβR-Ⅲ的蛋白表达明显增多(P<0.05),给予25μmol·L~(-1)姜黄素以后,上述各蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论姜黄素可通过TGF-β/Smads信号通路改善糖尿病大鼠心肌纤维化,对糖尿病大鼠心肌具有保护作用。     

布地奈德早期干预对急性哮喘模型大鼠转化生长因子-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨布地奈德早期干预对急性哮喘模型大鼠转化生长因子-β1(TGFβ-1)/Smad信号传导通路影响。方法30只健康雄性清洁级Wistar大鼠随机均分成正常对照组(C组)、哮喘模型组(A组)和布地奈德组(B组)等3组,每小组10只,用卵白蛋白(OVA)制备哮喘大鼠模型,通过早期布地奈德混悬液雾化吸入方式对急性哮喘模型大鼠进行干预,用双抗体夹心ELISA法测定血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1浓度,免疫组化方法检测肺组织TGF-β1以及磷酸化Smad2/3(P-Smad2/3)、Smad7蛋白表达水平。结果C组的血清、BALF中TGF-β1浓度分别低于A组和B组,B组血清、BALF中TGF-β1浓度较A组下降;A组肺组织P-Smad2/3蛋白表达较C组和B组增高,而Smad7蛋白表达下降。结论布地奈德早期干预可抑制急性哮喘大鼠体内TGFβ-1和P-Smad2/3的过度表达及上调Smad7,从而阻断TGFβ-1的胞内信号转导,可在一定程度上减轻急性哮喘大鼠气道炎症和抑制气道重塑的发生发展。     

吡非尼酮通过miRNA-425-5p调控TGF-β/Smad通路对大鼠心肌纤维化的影响

目的 探讨吡非尼酮通过调控miRNA-425-5p及转化生长因子（TGF）-β/Smad通路改善心肌梗死大鼠心肌纤维化程度的作用。方法 将60只雄性SD大鼠分为3组：假手术组（不结扎冠状动脉）、模型组、吡非尼酮组（吡非尼酮0.3 g/kg灌胃）。造模4周后采用心脏多普勒超声评价各组大鼠心脏功能; 酶联免疫吸附试验检测血浆中白细胞介素6（IL-6）、Ⅰ型胶原蛋白α2（COL1α2）、Ⅲ型胶原蛋白α1（COL3α1）的水平;采用Masson染色法评价大鼠心肌纤维化程度,使用Image-Pro Plus 6.0分析各组心肌胶原容积分数;Western blot检测心肌组织中TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平;实时荧光定量PCR（qPCR）检测心肌组织中TGF-β1和miRNA-425-5p表达水平。同时在体外分离、培养乳鼠心肌成纤维细胞,分为对照组（不加任何物质）、miRNA-425-5p mimic组（加入转染miRNA-425-5p mimic）、吡非尼酮组（加入1.5 g/L的吡非尼酮）。采用qPCR检测各组miRNA-425-5p和TGF-β1 mRNA表达水平。结果 模型组大鼠与假手术组相比心脏左心室舒张末期内径（LVEDd）、左心室收缩末期内径（LVESd）增大,左心室射血分数（LVEF）、左心室短轴缩短率（FS）降低（P<0.05）;Masson染色及定量分析结果显示心肌纤维化加重;炎性因子IL-6、COL3α1、COL1α2水平明显升高（P<0.05）;心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达升高,miRNA-425-5p表达水平降低（均P<0.05）。吡非尼酮组与模型组相比,LVEDd、LVESd缩小,LVEF、FS升高（P<0.05）,Masson染色及定量分析结果示心肌纤维化程度减轻,血浆炎性因子IL-6、COL3α1、COL1α2水平明显降低（P<0.05）;心肌组织TGF-β1、Smad2、Smad3蛋白表达水平降低,miRNA-425-5p表达水平升高（均P<0.05）。体外细胞实验结果表明,miRNA-425-5p mimic组与对照组相比,miRNA-425-5p表达水平升高,TGF-β1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。吡非尼酮组与对照组相比,miRNA-425-5p表达水平升高,TGF-β1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。结论 吡非尼酮可通过调节miRNA-425-5p表达水平调控TGF-β/Smad信号通路,减轻心肌纤维化,改善心肌梗死后心力衰竭大鼠心脏功能。     

γ-分泌酶抑制剂在肺纤维化上皮间质转化中的作用

目的 检测体外转化生长因子（TGF）-β1诱导肺纤维化上皮间质转化（EMT）的形成情况并检测Notch信号特异性抑制剂γ-分泌酶抑制剂（DAPT）对其影响及可能机制。方法 将A549细胞分成对照组（RPMI 1640完全培养基培养）、TGF-β1组（在含有10 μg/L TGF-β1的RPMI 1640培养基中培养）、TGF-β1+DAPT组（在含有10 μg/L TGF-β1和2 μmol DAPT的RPMI 1640培养基中培养）、DAPT组（在含有2 μmol DAPT的RPMI 1640培养基中培养）。通过倒置显微镜观察细胞形态,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测肺泡上皮细胞特异性蛋白E-钙黏合素以及间质细胞特异性蛋白α-肌动蛋白（α-SMA）mRNA相对表达水平,Western blot检测E-钙黏合素以及α-SMA蛋白表达水平。结果 倒置显微镜检查示,对照组细胞呈多边形,铺路石样,细胞间连接紧密;TGF-β1组细胞呈梭行,纺锤状,细胞间连接减少;TGF-β1+DAPT组仅有少量细胞呈梭形,多数细胞形态与对照组相似;DAPT组细胞形态大致同对照组。与对照组相比,TGF-β1组α-SMA蛋白及mRNA表达增加,而E-钙黏合素蛋白及mRNA表达减弱（P<0.05）;与TGF-β1组比较,TGF-β1+DAPT组α-SMA蛋白及mRNA表达水平降低,而E-钙黏合素蛋白及mRNA表达水平增加（P<0.05）;DAPT组与对照组2指标的蛋白与mRNA相对表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论 TGF-β1可诱导肺上皮间质转化,而Notch信号抑制剂DAPT能够阻断、部分或全部逆转这一过程。     

LncRNA MIAT靶向调节miR-128-3p对心房颤动大鼠心室重构和心肌纤维化的影响

目的 探讨保守的长链非编码RNA心肌梗死相关转录本（LncRNA MIAT）靶向调节miR-128-3p对心房颤动（AF）大鼠心室重构和心肌纤维化的影响。方法 通过舌下静脉注射氯化钙-乙酰胆碱混合液,诱导构建AF大鼠模型,以随机数字表法将其平均分为模型组、LncRNA MIAT siRNA质粒组（MIAT组）、miR-128-3p siRNA质粒组（miR-128-3p组）、LncRNA MIAT siRNA质粒+miR-128-3p siRNA质粒组（MIAT+miR-128-3p组）、空载质粒组,每组12只。另12只大鼠舌静脉注射等剂量生理盐水,作为对照组。分组干预处理后,检测大鼠心房肌电生理水平,比较各组有效不应期（ERP）和90%动作电位时程（APD90）;计算各组大鼠左心室质量指数;天狼星红染色检测大鼠心肌组织纤维化程度,比较各组心肌胶原容积分数（CVF）;使用试剂盒测量各组大鼠血清白细胞介素（IL）-18、IL-6、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;实时荧光定量PCR检测各组大鼠心肌组织miR-128-3p表达;双荧光素酶报告基因试验检测LncRNA MIAT对miR...     

舒芬太尼减轻大鼠肝缺血再灌注损伤的机制研究

目的 探讨舒芬太尼预处理减轻大鼠肝缺血再灌注损伤(HIRI)的作用机制。方法 48只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为：假手术组(S组)、HIRI组(IR组)、舒芬太尼预处理+HIRI组(SF组)、转化生长因子β₁(TGF-β₁)抑制剂+舒芬太尼预处理+HIRI组(SB组)、TGF-β₁激动剂+舒芬太尼预处理+HIRI组(SRI组)和二甲基亚砜(DMSO)+HIRI组(DMSO组),每组8只,于造模完成后4 h取材。HE染色观察肝组织的形态变化;收集腹主动脉血测定各组丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;制备10%肝组织匀浆,测定各组丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平;TUNEL法检测肝细胞凋亡率;Western blot法检测肝组织TGF-β₁及Smad2/3、p-Smad2/3、p38、p-p38蛋白表达水平。结果 与S组相比,其余各组损伤程度加重,ALT、AST、MDA水平及肝细胞凋亡率升高(P<0.05),SOD水平降低(P<0.05),IR组、SF组、...     

棕榈酰化修饰的NOD2在失血性休克动物模型中的作用

目的 探讨核苷酸结合寡聚化结构域2（NOD₂）在失血性休克及缺血再灌注时对肺损伤的作用及机制。方法 10只NOD₂基因敲除SD大鼠,经失血性休克模型制备后设为对照组（复苏初期予以生理盐水）。30只普通SD大鼠经失血性休克动物模型制备后,按随机数字表法分为3组：空白组（复苏初期予以生理盐水）、棕榈酰化修饰酶（PAT）抗体组（anti-PAT组,复苏初期予以PAT抗体）及NOD₂抗体组（anti-NOD₂组,复苏初期予以NOD₂抗体）,每组10只。经复苏24 h采集血液标本后将其处死并采集肺组织。在实验开始、休克初期及再灌注后2 h分别进行血气分析。检测肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-1β、IL-6及肺组织丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）水平。免疫印迹法检测肺组织胞核高迁移率族蛋白B（HMGB1）、棕榈酰化转移蛋白（ZDHHC5）及NOD₂表达水平。荧光显微镜及光镜下观察肺组织病理切片。结果 240 min时空白组氧分压[p（O₂）]明显低于其他3组（P<0.05）;30 min及240 min时空白组乳酸水平高于其他3组（P<0.05）。空白组TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA及MPO水平最高（P<0.05）,且对照组低于anti-PAT组和anti-NOD₂组。空白组HMGB1、NOD₂和ZDHHC5表达量最高（P<0.05）,且对照组HMGB1和NOD₂表达量低于anti-PAT组和anti-NOD₂组（P<0.05）。空白组棕榈酰化修饰的NOD₂的免疫荧光表达量明显高于对照组、anti-PAT组及anti-NOD₂组。空白组较对照组、anti-PAT组及anti-NOD₂组肺泡内皮及肺泡组织破坏明显,炎性细胞浸润明显。结论 在失血性休克及缺血再灌注动物模型中,NOD₂在ZDHHC5的调控下产生棕榈酰化修饰的NOD₂,从而促使TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA及MPO的释放,损伤肺组织。     

2型糖尿病肾病患者血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达特点及临床意义

目的 探讨2型糖尿病肾病（DN）患者血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达特点及其对DN的诊断价值。方法 将157例2型糖尿病患者根据尿白蛋白与肌酐比率（UACR）分为正常白蛋白尿（NA）组49例、微量白蛋白尿（MA）组41例、大量白蛋白尿（DN）组67例。收集临床资料,采用实时定量聚合酶链反应检测血清miR-27b-3p、miR-342-3p表达,全自动生化分析仪检测血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）,双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测尿液Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原肽（PCⅢ）。分析DN发病的影响因素以及miR-27b-3p、miR-342-3p对DN的诊断价值。结果 与NA组比较,DN组和MA组HbA1c、UACR、尿Ⅳ-C、尿LN、尿PCⅢ水平均增加,而miR-27b-3p、miR-342-3p表达均降低（P<0.05）,DN组BUN、Scr水平增加、估算肾小球滤过率（eGFR）水平降低（P<0.05）。较高水平的尿PCⅢ是DN的危险因素,而较高水平的miR-27b-3p、miR-342-3p、eGFR是DN保护因素（P<0.0...     

白藜芦醇通过BRD4调控Wnt/β-catenin通路逆转胶质瘤细胞替莫唑胺耐药的机制研究

目的 探究白藜芦醇（RES）逆转胶质瘤细胞替莫唑胺（TMZ）耐药的作用是否与通过溴结合域蛋白4（BRD4）调控Wnt/β-链蛋白（β-catenin）通路有关。方法 取人神经胶质瘤TMZ低敏细胞株（U138）、高敏细胞株（U251）、耐药株（T98G）,Western blot法检测3种细胞株中BRD4、Wnt3a、β-catenin、TMZ耐药蛋白（MGMT）蛋白表达。取T98G细胞株分为对照1组（添加100 μmoL/L TMZ）、RES1组（添加50 μmoL/L RES）、RES+TMZ（添加100 μmoL/L TMZ和50 μmoL/L RES）组,用CCK-8法、流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;Western blot法检测各组BRD4、Wnt3a、β-catenin、MGMT蛋白表达。为分析BRD4过表达对TMZ耐药性的影响,在添加100 μmoL/L TMZ的基础上,转染BRD4过表达质粒（pcDNA BRD4）或加入50 μmoL/L RES分别作为pcDNA NC组、pcDNA BRD4组、RES2组、RES+pcDNA BRD4组。为验证BRD4对Wnt3a/β-catenin通路的调控作用,在添加100 μmoL/L TMZ的基础上,加入BRD4抑制剂JQ1和Wnt3a/β-catenin通路激活剂LiCl,分为对照2组、JQ1组、JQ1+LiCl组。将T98G细胞接种于裸鼠左肩胛区,给予RES、TMZ和（或）JQ1治疗,检测瘤体中Ki67,BRD4、MGMT及Wnt3a/β-catenin蛋白表达。结果 与U251细胞相比,U138、T98G中BRD4、Wnt3a、β-catenin及MGMT表达均依次升高（P<0.05）。与对照1组相比,RES干预可抑制T98G细胞BRD4、Wnt3a/β-catenin、MGMT蛋白表达及增殖,促进凋亡,逆转细胞的耐药性（P<0.05）。pcDNA BRD4可逆转RES的抗增殖、促凋亡等上述作用。BRD4抑制剂JQ1可抑制T98G细胞BRD4、Wnt3a/β-catenin、MGMT蛋白表达及增殖,促进凋亡（P<0.05）;LiCl可逆转JQ1的抗增殖、促凋亡作用。RES单独或与JQ1联合治疗,可激活TMZ对瘤体内Wnt3a/β-catenin通路、MGMT表达和细胞增殖的抑制作用（P<0.05）。结论 RES可能通过下调BRD4,进而抑制Wnt3a/β-catenin通路活化,实现对胶质瘤T98G细胞TMZ耐药性的逆转。     

内毒素血症通过下调HNF4α表达加剧肝损伤

目的 探讨内毒素血症下调肝细胞核因子4α（HNF4α）表达介导肝损伤进展的机制。方法 144只BALB/c小鼠采用随机数字表法分组进行以下实验：（1）四氯化碳（CCl₄）诱导小鼠急性肝损伤。对照组和0.5 mL/kg、1.0 mL/kg、2.0 mL/kg CCl₄组。（2）筛选脂多糖（LPS）干预小鼠的剂量。对照组和0.1 mg/kg、0.5 mg/kg、2.5 mg/kg LPS组。（3）LPS干预CCl₄（1.0 mL/kg）诱导急性肝损伤模型小鼠。对照组、CCl₄组、0.1 mg/kg LPS+CCl₄组、0.5 mg/kg LPS+CCl₄组。每组12只。诱导24 h后处死小鼠,采用酶速率法检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）,重氮法检测总胆红素（TBil）水平;Western blot法检测肝组织HNF4α、胱天蛋白酶3剪切体（Cleaved caspase-3）蛋白表达;原位末端标记法检测肝细胞凋亡情况。结果 0.5、1.0、2.0 mL/kg CCl₄组的血清ALT、TBil及肝组织HNF4α、Cleaved caspase-3蛋白表达水平高于对照组,且呈剂量依赖性增高。2.5 mg/kg LPS组血清ALT、TBil及肝组织Cleaved caspase-3蛋白表达水平高于对照组和0.1、0.5 mg/kg LPS组,肝组织HNF4α蛋白表达水平低于对照组和0.1、0.5 mg/kg LPS组（P<0.05）。CCl₄组和0.1、0.5 mg/kg LPS+CCl₄组的血清ALT、TBil,肝组织HNF4α、Cleaved caspase-3蛋白表达水平及肝细胞凋亡指数均高于对照组（P<0.05）;0.1、0.5 mg/kg LPS+CCl₄组的血清ALT、TBil,肝组织Cleaved caspase-3蛋白表达水平及肝细胞凋亡指数高于CCl₄组,HNF4α蛋白表达水平低于CCl₄组（P<0.05）。结论 内毒素血症通过下调HNF4α表达增加肝细胞凋亡,可能是其介导肝损伤进展的机制之一。